Con el avance de la medicina moderna, es posible realizar diagnósticos más profundos si se sospecha determinadas patologías en un paciente. Uno de los métodos informativos de la investigación de laboratorio es el análisis ELISA, que se realiza mediante la extracción de sangre venosa. Es decir, en general nada cambia para el paciente. Pero el analizador ELISA asistente de laboratorio lleva a cabo una técnica compleja para examinar el biomaterial recolectado. Entenderemos qué son las pruebas ELISA y cuáles son las sutilezas de utilizar el método ELISA como método de diagnóstico en el material siguiente.
¿Qué es un inmunoensayo enzimático?
La producción de anticuerpos es provocada por los propios antígenos que han penetrado en el cuerpo humano. Al entrar en la “batalla” por la salud del cuerpo, los anticuerpos parecen marcar antígenos, que es lo que ve el técnico de laboratorio al examinar la sangre. Es decir, en el biomaterial recolectado es posible rastrear no solo la presencia de infección, sino también sus rastros después de que el cuerpo se haya recuperado por completo.
Por lo tanto, al prescribir una prueba inmunoabsorbente ligada a enzimas a un paciente, el médico tratante puede rastrear la duración de la infección, el grado de su progresión o identificar la presencia de inmunidad a una infección en particular.
El proceso de diagnóstico ELISA se ve así:
- La sangre venosa extraída se convierte en suero sanguíneo en el laboratorio;
- Luego, el técnico de laboratorio utiliza una bandeja especial con células, cada una de las cuales ya contiene todos los antígenos necesarios. Basta con verter suero sanguíneo en cada célula y controlar la reacción de las inmunoglobulinas (anticuerpos) a los antígenos. La presencia de la reacción "deseada" se indica mediante un cambio en el color del material que se está probando. Posteriormente, el auxiliar de laboratorio estudia la densidad óptica del medio en estudio.
- Ascariasis y enterobiasis (lombrices intestinales y oxiuros);
- triquinosis;
- Opistorquiasis en formas agudas y crónicas;
- giardiasis;
- Amebiosis;
- Toxoplasmosis;
- Leishmaniasis en cualquier forma.
Importante: el inmunoensayo enzimático puede ser tanto cualitativo como cuantitativo. En el primer caso, el ayudante de laboratorio sólo confirma o niega la presencia de la sustancia deseada en la sangre. En el segundo caso, el resultado del análisis indica su concentración en el cuerpo del paciente.
Desventajas del método.
Con todas las ventajas de este método de diagnóstico, vale la pena comprender que un análisis de sangre inmunoabsorbente ligado a enzimas no es una forma de encontrar la causa de la enfermedad de un paciente, sino solo un método para confirmar el diagnóstico propuesto por el médico tratante. Y dado que la investigación es bastante costosa, debe utilizarse con prudencia. En este caso, los resultados del estudio deben ser interpretados únicamente por un especialista calificado.
Decodificando los resultados
Después de haber descubierto la abreviatura ELISA y qué es ─ descubierto, vale la pena pasar a interpretar los resultados. Es importante entender aquí que si el análisis se realizó cualitativamente, el resultado solo será positivo o negativo. Es decir, el diagnóstico confirma las sospechas del médico sobre un determinado diagnóstico o las refuta. En este caso, el formulario contendrá los símbolos “+” o “-”, respectivamente.
Importante: un resultado negativo de la prueba no siempre indica la ausencia de infección. El hecho es que los anticuerpos contra los antígenos se pueden formar dentro de los 14 días posteriores a la infección y es probable que aún no se hayan formado.
Si se realiza un análisis cuantitativo, se determina el tipo de anticuerpos, su cantidad y etapa de actividad. En particular, durante este diagnóstico se determinan los anticuerpos (inmunoglobulinas) IgG e IgM, que se forman durante diferentes períodos de progresión de la infección. Los resultados más comunes en este caso son:
- Aumento de IgM y ausencia total de IgG. Esta imagen indica una infección reciente y la fase aguda de la patología.
- Aumento de la actividad de ambos tipos de inmunoglobulinas (IgM e IgG). Habla de un curso crónico y prolongado del proceso infeccioso.
- Actividad de IgG y ausencia total de IgM. La infección se produjo hace al menos seis meses y ahora el virus se encuentra en una fase crónica prolongada.
- Falta de anticuerpos IgG e IgA. El resultado es indeterminado.
- Ausencia de anticuerpos IgM, IgA e IgG. Indica una falta de inmunidad a una determinada infección.
- La actividad de los anticuerpos IgG, IgM e IgA indica una exacerbación del proceso crónico.
Además de identificar los tipos de anticuerpos, el asistente de laboratorio también indica su cantidad en una columna especial del formulario en relación con el volumen de sangre. Recuerde, una vez que comprenda qué es el método ELISA, no interprete los resultados usted mismo. Los resultados obtenidos sólo pueden ser interpretados con precisión por el médico tratante, dependiendo del diagnóstico esperado en función del cuadro clínico del paciente.
El desarrollo de la medicina moderna en el mundo del diagnóstico nunca deja de sorprender con sus logros, y ahora el médico no necesita hacer suposiciones sobre un diagnóstico probable, basándose únicamente en signos indirectos. La creación e introducción en el mundo de la investigación de laboratorio de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) permite determinar de forma rápida y precisa no solo la presencia de un patógeno, sino también muchas otras características de la enfermedad.
Historia de la creación y desarrollo de ELISA.
Este método de análisis de sangre comenzó a utilizarse en la medicina práctica a mediados del siglo pasado, alrededor de los años 60. Su objetivo inicial fue la investigación científica en el campo de la histología, que se limitaba a la búsqueda y estudio de la estructura antigénica celular de especies biológicas. El análisis de sangre ELISA se basa en la interacción de antígenos relacionados (AG) y anticuerpos específicos (AB), con la formación de un complejo “antígeno-anticuerpo” determinado por una enzima.
Este fenómeno llevó a los científicos a decidir que el método puede usarse para reconocer compuestos proteicos de diversas clases que se forman en el suero sanguíneo cuando un patógeno ingresa al cuerpo. Debido a su participación directa en el funcionamiento del sistema inmunológico, estos compuestos se denominaron inmunoglobulinas (IG) y el descubrimiento se convirtió en el mayor avance en el diagnóstico de laboratorio.
Sin embargo, este método altamente sensible comenzó a usarse activamente solo en los años 80 y solo estaba disponible en instituciones médicas altamente especializadas. Las primeras estaciones y centros de transfusión de sangre, instituciones de venereología y tratamiento de enfermedades infecciosas pudieron utilizar analizadores inmunoenzimáticos. Esto se debió a la rápida propagación de la "plaga del siglo XX": el SIDA, y se requirieron medidas diagnósticas y terapéuticas urgentes.
Posibilidades de la técnica.
El ámbito de aplicación del análisis de sangre ELISA es bastante amplio; por el momento es imposible imaginar lo complicada que sería la búsqueda de la causa de muchas enfermedades. Esta investigación se utiliza actualmente en casi todos los campos de la medicina, incluso en la oncología. Aunque sea difícil de entender para los desinformados, en algunos casos se llevó a cabo y fue posible salvar la vida de los pacientes al detectar el tumor en sus primeras etapas.
¡Importante! ELISA es un análisis de sangre que muestra marcadores característicos de determinados procesos malignos, lo que permite detectar la enfermedad en un momento en el que ningún otro método puede hacerlo.
En los centros de diagnóstico modernos, los exámenes de laboratorio no solo están representados por marcadores tumorales, sino que también están equipados con un impresionante arsenal de paneles para realizar este diagnóstico. Con su ayuda, es posible identificar muchas condiciones patológicas, como desequilibrios hormonales y procesos infecciosos de diversos orígenes.
Además, realizar e interpretar un análisis de sangre ELISA permitirá rastrear el efecto de los medicamentos en el cuerpo de una persona enferma e incluso de un animal. Este último es muy utilizado en clínicas veterinarias, ayudando a mantener la salud de nuestras mascotas o comederos, asegurando un suministro estable de carne, lácteos y huevos, fundamentales en la dieta.
Así, como resultado de recolectar tan solo unos pocos mililitros de sangre venosa y diagnosticarla mediante el método ELISA, el médico, habiendo descrito los materiales de investigación, podrá determinar:
- estado hormonal, incluidas sustancias biológicamente activas de las glándulas reproductiva y tiroides, así como de las glándulas suprarrenales;
- la presencia de infecciones bacterianas y virales (hepatitis B y C, sífilis, herpes, clamidia, tuberculosis, mico y ureaplasmosis, VIH, TORCH) y otras enfermedades de esta naturaleza;
- signos de actividad vital de patógenos del proceso patológico, que terminó con la recuperación y pasó a la etapa de formación de anticuerpos (respuesta inmune).
Estos complejos son mucho más fáciles de reconocer y eliminar por las células inmunitarias. Los efectos residuales en forma de anticuerpos en muchos casos quedan contenidos en la sangre de por vida, lo que prácticamente reduce a cero el riesgo de reinfección.
Tipos de inmunoglobulinas
Existen varios tipos de anticuerpos y cada uno de ellos participa en la respuesta inmune en una etapa determinada. Por ejemplo, las inmunoglobulinas de clase M (IgM) son las primeras que se forman en respuesta a la entrada de un antígeno en el organismo. Sus tasas más altas se observan en los primeros días de la enfermedad.
Tipos de inmunoglobulinas utilizadas en ELISA
Luego, el sistema inmunológico libera IG de clase G (IgG) en el plasma, que son responsables de la destrucción completa de los antígenos y la recuperación del paciente. Posteriormente, continúan en la sangre, preparando así al sistema inmunológico para una exposición repetida a un patógeno idéntico. Así funciona la vacunación. Cuando se introducen antígenos debilitados de microorganismos patológicos, muchas inmunoglobulinas aparecen y permanecen circulando en el plasma.
Los principales objetos de interés para el diagnóstico de laboratorio son las clases de Ig M, G y A. Según el nivel de concentración, se puede determinar la etapa de la enfermedad y averiguar qué enfermedades infecciosas ha tenido una persona en su vida. Por ejemplo, puedes comprobar si hay antecedentes de varicela o rubéola. Para saber si un determinado tipo de AT o AG está presente en el cuerpo del paciente o la concentración de cualquier hormona, el médico no necesita prescribir múltiples pruebas de laboratorio; basta con escribir una derivación para ELISA.
La esencia de la técnica.
La metodología de investigación se basa en varias opciones (directas e indirectas, competitivas y no competitivas) para la realización de las tareas asignadas, cada una de ellas destinada a fines específicos. Este enfoque permite una búsqueda específica y, en el menor tiempo posible, identificar la causa de una patología particular. Para detectar Ig de diferentes categorías de clase, se utiliza una placa de 96 pocillos (panel de poliestireno) y en sus pocillos se ubican proteínas recombinantes absorbidas. Desempeñan el papel de antígenos y en la etapa inicial se encuentran en la fase sólida.
Cuando entran en un pozo con plasma sanguíneo, los antígenos o anticuerpos identifican el objeto por su dirección y forman un complejo (AG - AT). Esta formación se fija mediante un compuesto enzimático (conjugado), que posteriormente se manifestará como un cambio de coloración del agujero. ELISA se realiza utilizando sistemas de prueba específicos fabricados en laboratorios especializados y equipados con un conjunto completo de reactivos.
Este análisis se puede realizar utilizando lavadoras y espectrómetros de lectura, pero requieren mano de obra. Por supuesto, para un asistente de laboratorio es mucho más cómodo y rápido realizar todas las manipulaciones con instrumentos totalmente automatizados. Al usarlos, el personal del laboratorio se libera de una gran cantidad de actividades monótonas: lavado, instilación y otros trabajos de rutina, pero no todas las instituciones médicas pueden permitirse equipos tan costosos.
Por lo tanto, muchos hospitales e instituciones de diagnóstico continúan realizando ELISA a la antigua usanza, utilizando máquinas semiautomáticas.
La interpretación de los materiales de investigación es responsabilidad exclusiva de un especialista en diagnóstico de laboratorio; solo él puede informar los resultados sobre los detalles y sutilezas del curso de la enfermedad. En este caso, el médico debe tener en cuenta la posibilidad de obtener respuestas falsas negativas o falsas positivas.
Materiales de decodificación
El resultado de un diagnóstico por inmunoensayo de alta calidad debe ser una conclusión inequívoca: si se encontró o no el microorganismo deseado en una muestra de sangre determinada. El análisis cuantitativo indicará el nivel de concentración y se puede expresar de dos maneras: un valor numérico o el número de signos "+".
Indicadores analizados
El proceso de investigación examina cuidadosamente las principales inmunoglobulinas involucradas en la respuesta inmune, tales como:
- IgM: la detección de esta clase significa el desarrollo de una forma aguda de una enfermedad infecciosa. Un resultado negativo en la búsqueda de IgM puede ser evidencia de la ausencia del patógeno deseado o de la transición de la enfermedad a un curso crónico.
- IgA es la definición de esta clase, en ausencia de IgM en la mayoría de los casos, una señal de una forma crónica o latente de desarrollo de una enfermedad infecciosa.
- IgM e IgA (presencia simultánea): los resultados positivos para ambos tipos indican el pico de la forma aguda de la patología.
- IgG – su presencia indica la transformación de la enfermedad en una forma crónica o recuperación y la formación de inmunidad al agente determinado.
La aparición y acumulación de una determinada clase de IG se produce en diferentes etapas temporales. Así, por ejemplo, la IgM aparece primero, aproximadamente 5 días después de la exposición al patógeno. Las IG permanecen en la sangre durante aproximadamente 5 a 6 semanas y luego desaparecen gradualmente. En este momento, están disponibles para su determinación mediante ELISA. Aproximadamente 3-4 semanas después del inicio de la enfermedad aparece IgG, que posteriormente puede permanecer durante varios meses. Pero no siempre pueden detectarse en el análisis.
La IgA se forma en la sangre en un período de 2 a 4 semanas, estando el 20% de ella contenida en el suero y el 80% en las secreciones de las membranas mucosas. Como regla general, estas inmunoglobulinas desaparecen en 2 a 9 semanas, lo que indica la destrucción del patógeno y la recuperación del paciente. Si ELISA aún muestra la presencia de IgA, esto indica la transición del proceso a una forma crónica.
Opciones para los resultados del análisis.
Dependiendo de los datos recibidos, las respuestas de ELISA se pueden emitir en un formulario en forma de tabla con una lista completa de todos los AT y AG y una indicación de una reacción positiva o negativa. En determinadas situaciones se mostrará un valor cuantitativo: muy positivo, positivo, débilmente positivo o negativo. La segunda opción indica la cantidad de AT contenida en la muestra de sangre que se está estudiando.
Opciones para interpretar materiales ELISA
Además de los valores anteriores, el proceso ELISA examina otro parámetro cuantitativo: el índice de avidez AT, calculado como porcentaje. Muestra cuánto dura la enfermedad, es decir, cuanto mayor es el indicador, más tarda en desarrollarse la patología.
Método ELISA alternativo
El análisis de sangre por inmunoensayo enzimático es un diagnóstico bastante conocido y común. Es posible que algunas personas nunca hayan oído hablar de ella, pero existe una versión aún menos conocida de esta prueba, en la que se toma una muestra que no es de sangre. Esta técnica se denomina análisis de sangre oculta en heces y, en muchos casos, permite evitar procedimientos agotadores adicionales, que también van acompañados de sensaciones desagradables.
La prueba ELISA para detectar sangre oculta (moléculas de hemoglobina) permite detectar hemorragias del sistema digestivo, incluso pequeñas, cuyos signos, como dicen, no se pueden detectar a simple vista en las heces del paciente. El inmunoensayo enzimático de sangre oculta en heces humanas en poco tiempo puede mostrar úlceras pépticas, poliposis, diverticulosis y tumores, que en las primeras etapas no se acompañan de síntomas específicos.
Hoy en día, se han creado miles de variedades de sistemas de pruebas de diagnóstico inmunoabsorbentes ligados a enzimas, que brindan la capacidad de detectar AT y AG de una enorme lista de patologías. Por tanto, este análisis se utiliza en casi todas las ramas de la medicina, para cualquier categoría de edad. Y su absoluta inocuidad permite su uso tanto durante el embarazo como para diagnosticar pacientes debilitados.
5.1 Esencia y clasificación de ELISA.
ELISA apareció a mediados de los años 60 y se desarrolló inicialmente como un método para identificar antígenos en una muestra histológica, así como para visualizar líneas de precipitación en pruebas de inmunodifusión e inmunoelectroforesis, y luego comenzó a usarse para la determinación cuantitativa de antígenos y anticuerpos en fluidos biológicos. En el desarrollo del método participaron E. Engvall y R. Pählman, así como, de forma independiente, W. Van Weeman y R. Schurs.
Arroz. 6 Principio básico de ELISA:
identificar antígenos; 2) para detectar anticuerpos
El método se basa en la unión específica de un anticuerpo a un antígeno, con uno de los componentes conjugado con una enzima como resultado de la reacción con el sustrato cromogénico correspondiente, se forma un producto coloreado, cuya cantidad se puede determinar; espectrofotométricamente (Fig. 6).
El descubrimiento de la posibilidad de inmovilizar antígenos y anticuerpos en diversos portadores manteniendo su actividad de unión ha permitido ampliar el uso de ELISA en diversos campos de la biología y la medicina.
La aparición de anticuerpos monoclonales contribuyó al mayor desarrollo de ELISA, lo que permitió aumentar su sensibilidad, especificidad y reproducibilidad de los resultados.
Teóricamente, ELISA se basa en datos de la inmunoquímica y la enzimología química modernas, el conocimiento de las leyes fisicoquímicas de la reacción antígeno-anticuerpo, así como en los principios fundamentales de la química analítica. La sensibilidad de ELISA y el tiempo que lleva están determinados por varios factores principales: las características cinéticas y termodinámicas de la reacción antígeno-anticuerpo, la proporción de reactivos, la actividad de la enzima y la resolución de sus métodos de detección. En general, la reacción antígeno-anticuerpo se puede describir mediante un esquema simple:
+[AG]↔[ATAG]
La variedad de objetos de estudio, desde compuestos de bajo peso molecular hasta virus y bacterias, así como una gama inusualmente amplia de tareas asociadas con la variedad de condiciones para el uso de ELISA, determinan el desarrollo de un número extremadamente grande de variantes de este método.
Cualquier versión de ELISA contiene 3 etapas obligatorias:
1. la etapa de reconocimiento del compuesto de prueba por un anticuerpo específico del mismo, que conduce a la formación de un complejo inmunológico;
2. la etapa de formación de la conexión del conjugado con el complejo inmune o con los sitios de unión libres;
3. etapa de conversión de la etiqueta enzimática en una señal grabada. La clasificación de los métodos ELISA se basa en varios enfoques:
1. Según el tipo de reactivos presentes en la primera etapa de ELISA, se distinguen métodos competitivos y no competitivos.
A) En un ELISA competitivo, en la primera etapa, el sistema contiene tanto el compuesto analizado como su análogo, marcado con una enzima y compitiendo con él por sitios de unión específicos.
B) Los métodos no competitivos se caracterizan por la presencia en el sistema en la primera etapa únicamente del compuesto analizado y de centros de unión específicos para él.
2. Todos los métodos ELISA se dividen en homogéneos y heterogéneos.
Si las tres etapas de ELISA se realizan en solución y entre las etapas principales no hay pasos adicionales para separar los complejos inmunes formados de los componentes que no reaccionaron, el método pertenece al grupo de los homogéneos.
La base del ELISA homogéneo, utilizado generalmente para la determinación de sustancias de bajo peso molecular, es la inhibición de la actividad de la enzima cuando se combina con un antígeno o anticuerpo. La actividad enzimática se restablece como resultado de la reacción antígeno-anticuerpo.
Cuando un anticuerpo se une a un antígeno que contiene una etiqueta enzimática, la actividad enzimática se inhibe en un 95% con respecto al sustrato de alto peso molecular, lo que se debe a la exclusión estérica del sustrato del centro activo de la enzima. A medida que aumenta la concentración de antígeno, se unen más anticuerpos y quedan más conjugados antígeno-enzima libres, capaces de hidrolizar el sustrato de alto peso molecular. El análisis se realiza muy rápidamente, una determinación requiere 1 minuto. La sensibilidad del método es bastante alta. Se puede utilizar para determinar una sustancia al nivel de picomoles.
Los métodos heterogéneos se caracterizan por el análisis en un sistema de dos fases con la participación de una fase portadora sólida y una etapa obligatoria de separación de los complejos inmunes de los componentes que no han reaccionado (lavado), que se encuentran en diferentes fases (los complejos inmunes formados están en el fase sólida y los complejos sin reaccionar están en solución). Los métodos heterogéneos en los que la formación de complejos inmunes en la primera etapa ocurre en la fase sólida se denominan métodos en fase sólida.
Los métodos se clasifican como homogéneos-heterogéneos si la etapa 1: la formación de complejos específicos ocurre en solución y luego se usa una fase sólida con un reactivo inmovilizado para separar los componentes.
3. Según el principio de determinación de la sustancia problema:
A) Determinación directa de la concentración de una sustancia (antígeno o anticuerpo) por el número de sitios de unión que interactúan con ella. En este caso, la etiqueta enzimática se ubicará en el complejo AG-AT específico formado. La concentración del analito será directamente proporcional a la señal registrada.
B) Determinación de la concentración de una sustancia por la diferencia entre el número total de sitios de unión y los sitios de unión libres restantes. En este caso, la concentración del analito aumentará y la señal registrada disminuirá, por lo que en este caso existe una dependencia inversa de la magnitud de la señal registrada;
5.2 Características de los componentes utilizados en ELISA.
Enzimas.
Las etiquetas enzimáticas tienen un efecto catalítico extremadamente poderoso; una molécula de enzima puede reaccionar con una gran cantidad de moléculas de sustrato. Por tanto, una enzima presente en cantidades mínimas puede identificarse y cuantificarse mediante la formación de productos y la reacción que cataliza. Otra ventaja de utilizar enzimas como marcadores se debe a la presencia en la molécula de numerosos grupos funcionales (residuos sulfhidrilo, carboxilo, tirazina, etc.), a través de los cuales se pueden unir covalentemente moléculas de ligando.
Los marcadores enzimáticos utilizados en ELISA deben tener las siguientes propiedades:
– alta actividad y estabilidad de la enzima en condiciones analíticas, cuando se modifica y se conjuga con anticuerpos u otras proteínas;
– la presencia de sustratos sensibles y la simplicidad del método para determinar los productos o sustratos de la reacción enzimática;
– la capacidad de adaptar los sistemas de sustrato para un mayor fortalecimiento;
– ausencia de la enzima y sus inhibidores en el fluido biológico en estudio.
En ELISA se pueden utilizar al menos 15 enzimas diferentes. Las más utilizadas, de acuerdo con los requisitos anteriores, son la peroxidasa de rábano picante (HRP), la fosfatasa alcalina (ALP) y la β-D-galactosidasa. Los tres son estables y catalizan reacciones muy sensibles. Además, los productos resultantes de las reacciones catalizadas por estas enzimas, dependiendo del sustrato utilizado, pueden detectarse no sólo mediante métodos colorimétricos, sino también mediante métodos fluorescentes. Otras enzimas se utilizan con mucha menos frecuencia. Esto se explica por su menor actividad específica en comparación con PC y AP.
Sustratos.
La elección del sustrato está determinada principalmente por la enzima utilizada como etiqueta, ya que la reacción enzima-sustrato es muy específica.
Requisitos básicos para el sustrato:
– garantizar una alta sensibilidad del método para detectar la enzima en el conjugado;
– formación de productos de reacción enzima-sustrato bien reconocibles (por ejemplo, coloreados);
– el sustrato debe ser seguro, económico, accesible y cómodo de utilizar.
Más a menudo se utilizan sustratos cromogénicos que, cuando se destruyen, forman una sustancia coloreada. El uso de sustratos de alta energía (fluorescentes, quimioluminiscentes) es prometedor. El uso de tales sustratos permite teóricamente aumentar la sensibilidad de ELISA en dos órdenes de magnitud.
Formación de un conjugado.
Un conjugado es un antígeno o anticuerpo marcado con una etiqueta enzimática. La formación de un conjugado es una de las etapas importantes de ELISA.
Al formar un conjugado, el método óptimo para introducir un marcador enzimático se selecciona de modo que ambos componentes del conjugado conserven su actividad biológica: la enzima, la capacidad de interactuar con el sustrato, y el antígeno o anticuerpo, la antigenicidad y la actividad de unión al antígeno. , respectivamente. La presencia de un antígeno marcado y altamente purificado permite el uso de métodos competitivos. En este caso, en la etapa final es posible medir la actividad del conjugado no asociado a los anticuerpos inmovilizados, lo que evita el procedimiento de lavado y hace más conveniente el análisis. Sin embargo, los antígenos son diversos en sus propiedades y estructura fisicoquímicas, lo que significa que es imposible desarrollar métodos universales para obtener un conjugado con un antígeno. En este caso, obtener un conjugado antígeno-enzima es una tarea compleja aparte. La preparación de anticuerpos marcados para ELISA es metódicamente más accesible.
La conjugación de la enzima con proteínas inmunoquímicamente activas se lleva a cabo mediante varios métodos: reticulación química, unión covalente de la molécula de enzima a Ag o AT y formación de compuestos a través de enlaces no covalentes, por ejemplo, cuando la conexión entre la enzima y Ag o AT se lleva a cabo de forma inmunológica, mediante la interacción antígeno-anticuerpo.
Los más utilizados son los métodos covalentes para preparar conjugados. La elección de la reacción de unión está determinada por el tipo de grupos funcionales disponibles en las moléculas de proteína dadas. Como reactivos para introducir la enzima en las moléculas de antígenos y anticuerpos se utilizan glutaraldehído, peryodato de sodio, etc.
Existen métodos de uno y dos pasos para obtener conjugados utilizando glutaraldehído. Se pueden formar conjugados de varios tamaños con actividad enzimática reducida (15 - 60% de la enzima libre). El conjugado resultante de gran tamaño puede dificultar estéricamente la determinación de la sustancia problema. Los conjugados con un peso molecular relativamente bajo constan de un fragmento Fab y una molécula de enzima.
Como resultado de una síntesis en dos etapas, que consiste en la producción paso a paso de una enzima primero modificada con un agente reticulante, su aislamiento y luego su posterior interacción con un antígeno (anticuerpo), se obtienen moléculas de un Se forman composiciones homogéneas que contienen 1-2 moléculas de enzima por molécula de inmunoglobulina y mantienen una alta actividad enzimática e inmunológica. Sin embargo, el número de estos conjugados formados es pequeño (para la peroxidasa de rábano picante es del 5 al 10%).
La mayor aplicación práctica se ha encontrado en el método de obtención de conjugados de inmunoperoxidasa, basado en la oxidación del componente carbohidrato de la enzima con peryodato de sodio (la unión de la peroxidasa al conjugado alcanza el 70-90% de la cantidad inicial de enzima).
Un conjugado confiable debe tener las siguientes propiedades:
Alta fuerza del anticuerpo y alta afinidad por el antígeno para que pueda usarse en alta dilución y así reducir la unión no específica;
Especificidad suficiente en la dilución de trabajo;
El predominio de las formas monoméricas sobre las poliméricas, porque las formas poliméricas tienden a adherirse de manera no específica al plástico, lo que resulta en un alto nivel de reacción de fondo;
La relación molar óptima entre enzima y anticuerpos (la relación óptima es aproximadamente 1:1);
Actividad enzimática suficiente del conjugado. Esta propiedad está determinada principalmente por las condiciones de conjugación y la proporción de moléculas de enzima y anticuerpos en el conjugado.
5.3 Métodos ELISA heterogéneos.
Los ELISA heterogéneos (o ELISA en fase sólida) incluyen métodos en los que el analito está presente en dos fases. Para separar los componentes de una reacción inmunoquímica se utiliza una fase sólida (un vehículo insoluble, generalmente plástico) con anticuerpos o antígenos inmovilizados, que se lava en cada etapa para eliminar los componentes intermedios y que no han reaccionado.
La inmovilización se puede llevar a cabo mediante la unión covalente de anticuerpos (antígenos) a un portador activado mediante enfoques químicos, así como mediante adsorción física de anticuerpos (antígenos) en la superficie de polímeros sólidos (por ejemplo, placas de poliestireno). En la literatura extranjera, esta dirección se denomina prueba ELISA o ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.
ELISA no competitivo para determinar antígenos utilizando el ejemplo del uso de anticuerpos específicos marcados con enzimas y anticuerpos inmovilizados.
Se agrega una solución que contiene el antígeno que se está analizando al portador con anticuerpos inmovilizados. Durante el proceso de incubación, se forma un complejo antígeno-anticuerpo específico. Luego, el portador se lava de los antígenos no unidos y se agregan anticuerpos marcados: un conjugado. En este caso, la cantidad de conjugado unido es directamente proporcional a la cantidad de antígeno en la muestra de prueba.
Después de la incubación secundaria y la eliminación del exceso de conjugado, se agrega un sustrato cromogénico para la enzima utilizada, que cambia de color bajo la acción de la enzima, es decir, se produce una reacción enzimática con la coloración de la solución en los pocillos. El grado de coloración es directamente proporcional a la cantidad de anticuerpos específicos marcados con la enzima, la enzima y, en consecuencia, el antígeno en estudio. Las mediciones de la densidad óptica de la solución en los pocillos a una determinada longitud de onda (según el sustrato utilizado) se realizan mediante espectrofotómetros especiales adaptados para lectores de microplacas. Una evaluación cuantitativa de la concentración de antígeno en la muestra se determina comparando los resultados con una curva de calibración de la dependencia de la densidad óptica de la solución de la concentración de la solución de antígeno estándar.
Figura 7.
Dado que en la etapa de identificación de un inmunocomplejo específico, el antígeno se asocia con moléculas de anticuerpos inmovilizados y marcados, en la literatura este método a menudo se denomina método "sandwich" (del inglés sandvich) o método ELISA de dos sitios (de el ensayo inglés de dos sitios).
Este método se puede utilizar para analizar sólo aquellos antígenos que tienen al menos dos determinantes antigénicos en su superficie. Es inaceptable para el análisis de una gran cantidad de antígenos monovalentes (compuestos medicinales, pesticidas, etc.).
El suero problema se añade al antígeno inmovilizado. Después de la incubación y el lavado de los anticuerpos no unidos, se añaden anticuerpos secundarios marcados que son específicos de los anticuerpos que se analizan. Después de la incubación secundaria y la eliminación del exceso de anticuerpos secundarios marcados, el contenido de la etiqueta enzimática en el soporte es proporcional a la concentración de anticuerpos específicos en el suero.
Este esquema es uno de los ELISA más comunes para la detección de anticuerpos, ya que permite la detección de anticuerpos contra diversos antígenos.
ELISA competitivo heterogéneo para la determinación de antígenos utilizando el ejemplo del uso de antígeno marcado y anticuerpos inmovilizados.
A los anticuerpos inmovilizados en el soporte se les añade una solución que contiene el antígeno que se está analizando y una concentración fija del conjugado antígeno-enzima. Después de la incubación, el portador se lava del antígeno libre y marcado no unido y se registra la actividad enzimática en el portador, que es inversamente proporcional a la concentración del antígeno que se está determinando.
5.4 Método ELISA homogéneo.
El inmunoensayo enzimático homogéneo (HELISA) es el tipo de ELISA metodológicamente más simple. Cuando se realiza, uno de los participantes en la reacción inmune (generalmente un antígeno de bajo peso molecular) se marca con una enzima y se monitorea el progreso de la formación del complejo antígeno-anticuerpo, registrando los cambios en la actividad enzimática.
Tal violación de la actividad enzimática puede ocurrir debido a la separación espacial de la enzima y el sustrato, o debido a cambios conformacionales en la molécula de enzima que acompañan a la formación del complejo inmunológico. HIFA tiene una serie de ventajas significativas sobre otros métodos inmunoquímicos. En primer lugar, alta expresión (todo el análisis con HIFA lleva minutos e incluso fracciones de minutos).
Arroz.8 Opciones de inmunoensayo enzimático homogéneo(A - el efecto de separación de la enzima (F) y el sustrato (C) debido a impedimentos estéricos durante la interacción del antígeno (Ag) y el anticuerpo (Ab); B - el efecto de un cambio en la conformación del enzima durante la formación del complejo antígeno-anticuerpo).
En segundo lugar, el método es de un solo paso y no requiere pasos de lavado que requieran mucho tiempo y mano de obra. Y finalmente, en tercer lugar, el método requiere volúmenes mínimos (8-50 μl) y cantidades de muestra biológica o clínica. Sin embargo, el método HIFA tiene un inconveniente extremadamente importante: a partir de él, es posible crear sistemas de pruebas de diagnóstico solo para antígenos de bajo peso molecular. Sólo en este caso el anticuerpo, al interactuar con el antígeno, puede proteger o modificar eficazmente la molécula de enzima asociada con este antígeno. Es en este sentido (a pesar de la aparente simplicidad y las ventajas obvias sobre otros métodos, se crearon herramientas de diagnóstico basadas en HIFA para detectar solo hormonas, péptidos, sustancias medicinales y narcóticas y algunas proteínas de bajo peso molecular).
5.5 “Sandwich”: una variante de ELISA para detectar antígenos.
Los antígenos detectados mediante esta variante de ELISA deben tener múltiples epítopos capaces de unirse a anticuerpos o tener epítopos repetidos y espacialmente separados de la misma especificidad.
Al realizar esta versión de ELISA, se incuban con la muestra de prueba anticuerpos policlonales o monoclonales altamente específicos adsorbidos en la fase sólida. Después del procedimiento de lavado, se añaden a los pocillos anticuerpos marcados con enzimas (conjugados) contra el mismo antígeno y luego se llevan a cabo todas las demás etapas de la reacción. La eficacia de la formación de un complejo específico en cada etapa del análisis depende de la constante de unión de la reacción antígeno-anticuerpo.
ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas, ELISA) entró en la vida de la medicina práctica en algún momento de los años 60 del siglo pasado. Su tarea inicial fue la investigación histológica con fines científicos, que se reducía a la búsqueda e identificación de la estructura antigénica de las células de un organismo vivo.
El método ELISA se basa en la interacción de antígenos específicos (AT) y relacionados (AG) con la formación de un complejo “antígeno-anticuerpo”, que se detecta mediante una enzima. Este hecho llevó a los científicos a pensar que el método puede usarse con fines de diagnóstico para identificar inmunoglobulinas específicas de diversas clases involucradas en la respuesta inmune a una infección en particular. ¡Y fue un gran avance en el diagnóstico de laboratorio clínico!
El método comenzó a utilizarse activamente sólo a principios de los años 80, y luego principalmente en instituciones especializadas. Los primeros analizadores de inmunoenzimas estaban equipados con centros y estaciones de transfusión de sangre, enfermedades infecciosas y hospitales de venereología, ya que el formidable SIDA, nacido en el continente africano, apareció en nuestro horizonte e inmediatamente se unió a las “viejas” infecciones, requirió medidas inmediatas de diagnóstico y búsqueda. de medicamentos terapéuticos que le afecten.
Ámbito de aplicación del método ELISA
Las posibilidades del inmunoensayo enzimático son realmente amplias. Ahora es difícil imaginar cómo se puede prescindir de este tipo de investigaciones, que se utilizan literalmente en todas las ramas de la medicina. Parece, ¿qué puede hacer ELISA en oncología? Resulta que sí se puede. Y mucho. La capacidad del análisis para encontrar marcadores característicos de ciertos tipos de neoplasias malignas subyace a la detección temprana de un tumor, cuando aún no se puede determinar mediante ningún otro método debido a su pequeño tamaño.
El diagnóstico de laboratorio clínico (CDL) moderno, además de los marcadores tumorales, cuenta con un importante arsenal de paneles ELISA y los utiliza para diagnosticar diversas condiciones patológicas (procesos infecciosos, trastornos hormonales) y monitorear medicamentos para identificar su efecto en el cuerpo del paciente. y, por cierto, no sólo humano. Actualmente, el inmunoensayo enzimático se utiliza mucho en los servicios veterinarios, porque “nuestros hermanos pequeños” también son susceptibles a muchas enfermedades, que en ocasiones sufren mucho.
De este modo, ELISA, por su sensibilidad y especificidad, puede determinar a partir de una muestra de sangre extraída de una vena:
- Estado hormonal (hormonas tiroideas y suprarrenales, hormonas sexuales);
- La presencia de infecciones virales y bacterianas (VIH, B y C, clamidia, sífilis y, así como muchas otras enfermedades causadas por microorganismos patógenos);
- Rastros de la actividad vital de los microorganismos que iniciaron el proceso infeccioso, que finalizó con éxito y pasó a la etapa de formación de una respuesta inmune a este patógeno. Estos rastros, es decir, anticuerpos, en muchos casos permanecen circulando en la sangre durante toda la vida, protegiendo así a la persona de una reinfección.
¿Cuál es la esencia de ELISA?
El método de inmunoensayo enzimático permite determinar no solo la presencia del patógeno en sí (análisis cualitativo), sino también su contenido cuantitativo en el suero sanguíneo del paciente.
La dosis viral o bacteriana influye significativamente en el curso del proceso infeccioso y su resultado, por lo que el análisis cuantitativo juega un papel importante en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades en diversas formas y etapas.
Sin embargo, conociendo los estudios de inmunoensayo enzimático como método ELISA, ni siquiera pensamos en cómo logra abarcar una gama tan amplia de microorganismos que habitan nuestro planeta, muchos de los cuales representan una amenaza directa para la salud y la vida de humanos y animales. Pero el hecho es que ELISA tiene muchas opciones (no competitivas y competitivas, directas e indirectas), cada una de las cuales resuelve su propio problema y, por tanto, permite una búsqueda específica.
Para identificar inmunoglobulinas de una clase particular, se utiliza un panel (placa) de poliestireno tradicional de 96 pocillos, en cuyos pocillos se concentran las proteínas recombinantes absorbidas en la fase sólida. Los anticuerpos o antígenos que ingresan al pozo con suero sanguíneo encuentran un objeto "familiar" y forman un complejo con él (AG - AT), que, fijado por un conjugado enzimático, se manifestará por un cambio en el color del pozo cuando leyendo los resultados.
El inmunoensayo enzimático se realiza mediante sistemas de prueba de cierta especificidad, fabricados en laboratorios especiales y equipados con todos los componentes reactivos necesarios. La investigación se puede realizar utilizando lavadoras (“lavadoras”) y espectrofotómetros de lectura, que en su mayoría implican trabajo manual. En máquinas totalmente automáticas, que liberan al asistente de laboratorio de las monótonas instilaciones, lavados y otras tareas rutinarias, por supuesto, es más rápido y cómodo trabajar, pero no todos los laboratorios pueden permitirse ese lujo y seguir trabajando a la antigua usanza: en máquinas semiautomáticas.
La interpretación de los resultados de ELISA es competencia del médico especialista en diagnóstico de laboratorio y también debe tenerse en cuenta la propiedad inherente de casi todas las reacciones inmunoquímicas de dar respuestas falsamente positivas o falsas negativas.
Vídeo: inmunoensayo enzimático moderno.
Resultados de ELISA usando el ejemplo de la sífilis
El inmunoensayo enzimático es adecuado para detectar todas las formas. y, además, se utiliza en estudios de detección. Para realizar el análisis se utiliza la sangre venosa del paciente extraída en ayunas. El trabajo utiliza comprimidos con cierta especificidad (clases AB A, M, G) o anticuerpos totales.
Teniendo en cuenta que los anticuerpos en la sífilis se producen en una secuencia específica, ELISA puede responder fácilmente a la pregunta de cuándo ocurrió la infección y en qué etapa del proceso, y la interpretación de los resultados obtenidos se puede presentar de la siguiente forma:
- IgM indica la duración del proceso infeccioso (puede aparecer durante la exacerbación de enfermedades inflamatorias crónicas);
- IgA afirma que la infección ocurrió hace más de un mes;
- La IgG indica que la infección está en pleno apogeo o que se ha realizado recientemente un tratamiento, lo que se determina fácilmente mediante una anamnesis.
Al realizar pruebas de sífilis, los pocillos negativos (y el control negativo) permanecerán incoloros, mientras que los pocillos positivos (y el control positivo) mostrarán un color amarillo brillante debido al cambio de color del cromógeno agregado durante la prueba. Sin embargo, la intensidad del color no siempre coincide con la del control, es decir, puede ser ligeramente más pálido o ligeramente amarillento. Estos son resultados dudosos que, por regla general, están sujetos a un nuevo examen con una consideración obligatoria de los indicadores cuantitativos obtenidos en el espectrofotómetro, pero en general, el color es directamente proporcional a la cantidad de complejos inmunes (Ags y AT asociados). .
El más interesante de los inmunoensayos enzimáticos es el ELISA del VIH.
El análisis es quizás más interesante que otros para una amplia gama de la población, porque todavía no es posible decir con seguridad que muchos problemas sociales han desaparecido (prostitución, drogadicción, etc.). Desafortunadamente, el VIH no sólo afecta a estos sectores de la sociedad humana; puede infectarse en diversas circunstancias no relacionadas con la inmoralidad sexual o el uso de drogas. Pero si es necesario hacerse una prueba de VIH, no debe temer que todos los que le rodean sepan de su visita a dicho laboratorio. Ahora las personas infectadas por el VIH están protegidas por la ley y quienes tengan dudas pueden acudir a oficinas anónimas donde podrán solucionar el problema sin temor a la publicidad y la condena.
El método de inmunoensayo enzimático utilizado para diagnosticar la infección por VIH es uno de los estudios estándar más importantes, pero requiere condiciones especiales, ya que el tema es muy delicado.
Tiene sentido realizar ELISA VIH después del contacto sexual, transfusión de sangre, otros procedimientos médicos que sugieran infección y al final del período de incubación (“ventana seronegativa”), pero hay que tener en cuenta que este período de tiempo es no constante. Puede finalizar en 14-30 días, o puede durar hasta seis meses, por lo que se considera que el valor promedio es un intervalo de 45 a 90 días. La sangre para el VIH se dona de la misma manera que para otras infecciones: de una vena con el estómago vacío. Los resultados estarán listos en función de la acumulación de material en el laboratorio y su carga de trabajo (de 2 a 10 días), aunque lo más habitual es que los laboratorios den respuesta el mismo día o el siguiente.
¿Qué puede esperar de sus resultados de VIH?
ELISA para la infección por VIH detecta anticuerpos contra dos tipos de virus: VIH-1 (más común en Rusia y otros países de Europa y Asia) y VIH-2 (más común en África occidental).
La tarea del ELISA VIH es buscar anticuerpos de clase G, que se detectan en todos los sistemas de prueba, pero más tarde, y anticuerpos de clase A y M, detectados en kits de prueba recombinantes de nueva generación, que permiten encontrar anticuerpos. en las primeras etapas (período de incubación - "ventana seronegativa"). Puede esperar las siguientes respuestas del ELISA:
- Resultado positivo primario: la sangre debe ser analizada nuevamente con un sistema de prueba del mismo tipo, pero si es posible de una serie diferente y por otra persona (asistente de laboratorio);
- Repetido (+) implica una nueva extracción de sangre del paciente con un examen similar al análisis primario;
- Otro resultado positivo está sujeto a un análisis de referencia, en el que se utilizan kits de prueba altamente específicos (2-3 unidades);
- Un resultado positivo en ambos (o tres) sistemas se envía para inmunotransferencia (el mismo ELISA, pero realizado individualmente utilizando kits de prueba de especificidad particularmente alta).
La conclusión sobre la infección por VIH se llega únicamente sobre la base de la inmunotransferencia. La conversación con la persona infectada se lleva a cabo de forma totalmente confidencial. La divulgación de secretos médicos en Rusia, así como en otros países, está sujeta a sanciones penales.
Las pruebas de clamidia y citomegalovirus que utilizan el método de inmunoensayo enzimático también han ganado especial popularidad, debido a que permiten determinar el momento de la infección, el estadio de la enfermedad y la eficacia de las medidas de tratamiento.
Durante la aplicación también se puede observar la aparición de anticuerpos de diversas clases. en diferentes fases del estado patológico provocado por un agente infeccioso:
- La IgM puede detectarse ya siete días después de la infección;
- IgA indica que la infección ha estado viviendo en el cuerpo durante más de un mes;
- La IgG confirma el diagnóstico de clamidia y ayuda a controlar el tratamiento y determinar su eficacia. Cabe señalar que los anticuerpos de clase G permanecen y circulan en el cuerpo independientemente de la duración de la enfermedad, por lo tanto, para interpretar correctamente el análisis, es necesario tener en cuenta los valores de referencia (normas), que, por cierto , son diferentes para cada CDL: teniendo en cuenta la marca del sistema de prueba y la especificidad de los reactivos incluidos en el set. Los valores normales se ingresan en el formulario al lado del resultado de ELISA.
En cuanto a, aquí es un poco diferente: Los anticuerpos de clase M aparecen después de aproximadamente un mes a un mes y medio, es decir, el resultado positivo (IgM+) se vuelve en la fase de infección primaria o durante la reactivación de una infección latente y permanece así de 4 meses a seis meses.
La presencia de anticuerpos de clase G es característica de la aparición de una infección aguda primaria o de una reinfección. El análisis indica que el virus está presente, pero no proporciona información sobre en qué etapa se encuentra el proceso infeccioso. Mientras tanto, determinar el título normal de IgG también causa dificultades, ya que depende completamente del estado inmunológico de una persona en particular, que, sin embargo, se establece mediante la identificación de inmunoglobulinas de clase G. Dado este comportamiento de los anticuerpos, al diagnosticar CMV, surge la necesidad. evaluar la capacidad de los anticuerpos de clase G para interactuar con el CMV, para luego “neutralizarlo” (avidez AT). En la etapa inicial de la enfermedad, la IgG se une muy mal a los antígenos virales (baja avidez) y solo entonces comienza a mostrar actividad, por lo que podemos hablar de un aumento en la avidez de los anticuerpos.
Podemos hablar mucho de las ventajas del inmunoensayo enzimático, porque este método ha logrado resolver muchos problemas de diagnóstico utilizando únicamente sangre venosa. No hay necesidad de largas esperas, preocupaciones y problemas con la recopilación de material para la investigación. Además, se siguen mejorando los sistemas de prueba ELISA y no está lejano el día en que la prueba dé un resultado 100% fiable.
Vídeo: película educativa de la Universidad Médica Estatal de Moscú que lleva su nombre. Sechenov sobre los conceptos básicos de ELISA
Cuando se prescribe una prueba para realizar una prueba ELISA para sífilis. Métodos de diagnóstico de laboratorio. Resultados del análisis: cómo determinar la norma y las desviaciones. Costo del inmunoensayo enzimático.
Como regla general, cada vez que vas a una clínica, los médicos prescriben varias pruebas. Esto les permite identificar infecciones y enfermedades que padece una persona. ELISA, o el llamado ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas, es una excelente manera de evaluar el sistema inmunológico del cuerpo e identificar la infección y el estadio de la enfermedad mediante la presencia de anticuerpos.
Entonces, ¿a quién se le prescribe esta prueba y qué es un inmunoensayo enzimático? Los médicos prescriben esta prueba si una persona presenta las siguientes enfermedades:
- Una erupción en el cuerpo es una reacción alérgica.
- Virus: herpes, citomegalovirus.
- Enfermedades de transmisión sexual: sífilis, tricomonas.
- Patología asociada al cáncer.
- Neurosífilis.
Además de las enfermedades enumeradas, se prescribe un análisis para determinar el nivel de la hormona en la sangre. Según los resultados, se evalúa la calidad de la terapia. Probablemente todo el mundo sepa qué es la sífilis, pero no tiene idea de su magnitud ni de cuántas personas infectadas caminan a nuestro alrededor.
Actualmente, la sífilis es la enfermedad más común. Este es un treponoma que afecta al cuerpo humano. Como resultado, todos los órganos internos del paciente se ven afectados.
Esta es una infección muy peligrosa y, a menudo, sucede que no se manifiesta durante mucho tiempo. Por tanto, una persona puede ser portadora y propagadora durante mucho tiempo, sin saber que está enferma.
Método de diagnóstico de laboratorio.
La medicina no se detiene; las pruebas modernas se han diferenciado significativamente de los antiguos métodos de estudio del cuerpo. Aunque cumplieron su función a la perfección, en ocasiones tuvieron que esperar semanas y meses para obtener resultados. Naturalmente, esto no fue beneficioso para la persona infectada. ¿Qué espera un resultado? Un enfermo lo experimentó él mismo.
Las pruebas clásicas (detección de sífilis mediante el método de Wasserman, el método de Kahn) comenzaron a perder posiciones y fueron reemplazadas por pruebas como ELISA.
Este es el método más moderno para detectar infecciones en humanos. El resultado se descifra utilizando una computadora. Esto le permite determinar con mayor precisión un resultado positivo o negativo.
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Durante la decodificación, se busca anticuerpos contra enfermedades específicas. Y como resultado del análisis, se pudo identificar la infección cuando el resultado fue positivo. El uso de ELISA para detectar sífilis implica el uso de inmunoglobulinas de tres clases:
- G, M, A – para el diagnóstico son los más importantes.
- Se producen en una persona infectada estrictamente en una secuencia determinada.
- El estadio de la infección se determina rápidamente.
Resultados de ELISA: análisis normales y positivos.
Si habla de una prueba ELISA para la sífilis, en este caso es difícil decir qué es normal o anormal. El resultado suele ser negativo o positivo. Además, existen títulos que determinan la cantidad de anticuerpos en la sangre.
Hay muchas sutilezas al descifrar el análisis; si muestra un resultado positivo, el análisis deberá repetirse varias veces para excluir el método de una reacción falsa positiva.
Como ya se ha escrito, existen muchas sutilezas a la hora de descifrar el análisis y solo el médico tratante puede determinar el resultado. Demos ejemplos en la tabla de los resultados que se pueden mostrar en el inmunoensayo enzimático:
No se desespere si el análisis arroja un resultado positivo. Como regla general, se realizan análisis y pruebas adicionales de varias maneras para hacer un diagnóstico más preciso.
Costo del inmunoensayo enzimático
Como regla general, el costo de este análisis depende directamente del análisis en sí y de la detección de una infección específica. Determinar marcadores de infección de varios tipos cuesta de 200 a 350 rublos. Y dicho análisis se lleva a cabo en dos días.
ELISA es el método más popular y moderno para diagnosticar el cuerpo. El método ha demostrado ser eficaz para detectar infecciones y determinar el período exacto de infección.
Teniendo en cuenta la política de precios, podemos decir que el análisis está disponible para todos y con cualquier presupuesto. Permite al médico tratante obtener una imagen completa de la infección de una persona. Demostró su valía en acción y no defraudó a los médicos. Al mismo tiempo, después de recibir el análisis, el médico tratante pudo reaccionar rápidamente y prescribir el tratamiento de manera oportuna.