הגדרה של צבירה. תגובת צבירה

צבירה היא תופעה של הדבקה של חיידקים או חלקים מתאי חיידקים התלויים בתמיסת מלח, עם היווצרות של פתיתים או גרגרים קטנים המשקעים. יש אגלוטינציות ספציפיות ולא ספציפיות. אגלוטינציה ספציפית מתרחשת בהשתתפות שלושה מרכיבים: אגלוטינוגן (תרחיף תאים), אגלוטינינים (הנמצאים בסרום חיסון המתקבל לאחר החדרת חיידקים ממין זה לגוף החי או האדם) ומלחים (), בתמיסה איזוטונית שלהם התגובה מתבצעת בדרך כלל.

הגדרת התגובה: דילולים בסרום של 1:50 מוכנים במבחנות; 1: 100; 1: 200; 1: 400; 1: 800; 1: 1000 ומעלה. לכל מבחנה מתווספת אותה כמות של תרחיף מיקרוביאלי. רישום ראשוני של התגובה מתבצע 2 שעות לאחר הנחת הצינורות ב- t° 37°; סופית - למחרת לאחר שמירת הצינורות בטמפרטורת החדר. תוצאות התגובה נבדקות ללא נשק, באמצעות זכוכית מגדלת או אגלוטינוסקופ - מכשיר שבו בודקים תרחיף של חיידקים והגושים או הפתיתים שנוצרו דרך עינית נעה באור משודר. תוצאת תגובה חיובית מצוינת בדרך כלל על ידי הדילול הגבוה ביותר של סרום שבו התרחשה אגלוטינציה בולטת. תגובה חיובית עם הסרום של המטופל בדילול של 1:200 ומעלה (עם עלייה לאחר מכן בטיטר) היא בעלת ערך אבחנתי.

עם תגובת צבירה מואצת (לפי נובל), 0.1 מ"ל של תרחיף מיקרוביאלי בן חמישה מיליארד מעורבב עם נפח שווה של סרום הבדיקה בדילול של 1: 10; 1:20; 1: 40 ו-1: 80 ו-3-5 דקות לאחר הוספת 0.8 מ"ל של תמיסה 0.85%, התגובה נלקחת בחשבון. כדי לקבוע את סוג החיידק, מבוצעת תגובת אגלוטינציה עם קבוצה של סרה אצילה, שכל אחת מהן התקבלה על ידי חיסון בעל חיים עם סוג מסוים של חיידק.

לתגובת צבירה משוערת, מורחים טיפת תרחיף של החיידק הנבדק וטיפה של סרום אגלוטי ספציפי (1:10) על שקף זכוכית; 1:20 מערבבים את שתי הטיפות ולאחר מספר דקות נצפית את התוצאה.

צמיחת דם היא הדבקה ושקיעה של תאי דם אדומים, חיידקים ותאים אחרים הנושאים אנטיגנים.

התהליך מתרחש בהשפעת אגלוטינינים, שהם חומרים ספציפיים. חומרים אלו הם לקטינים או נוגדנים.

סוגים אפשריים של אגלוטינציה בעת קביעת קבוצת הדם

צבירה יכולה להיות ספציפית או לא ספציפית. במקרה הראשון, התגובה מתרחשת בהשתתפות שלושה מרכיבים:

• אנטיגנים;
• נוגדנים;
• אלקטרוליטים (השתמש בתמיסה איזוטונית).

כל סוגי האגלוטינציה האפשריים משמשים לקביעת קבוצת הדם, אך זה לא המקרה היחיד.

לאיזו מטרה משתמשים בו?

תגובת צמיחת הדם משמשת לזיהוי הגורם הגורם למחלה זיהומית. במקביל הוא שוקע ומתגלה בקלות במשקעים. נעשה שימוש בתהליך זה, כאמור לעיל, וזה מה שנדון בהמשך.

מהן התכונות?

תאי דם אדומים מכילים אנטיגנים מסוג A ו-B. הם נקשרים לנוגדנים ά ו-β, בהתאמה. קבוצות דם ותגובות צבירה:

• 1, 0 (ά, β) - אין אנטיגנים על פני השטח של אריתרוציטים;
• 2, A (β) - אנטיגן A ונוגדן β קיימים;
• 3, B (ά) - מכיל אנטיגן B ונוגדן ά;
• 4, AB (00) - שני אנטיגנים קיימים, נוגדנים נעדרים.

ראוי לציין כי האנטיגנים כבר נצפים בעובר. באשר לנוגדנים, הם מופיעים לאחר הלידה, בחודש הראשון לחיים.

התאימות של אנשים תלויה בסוג הדם. זו הסיבה לדחיית העובר על ידי גוף האם. במילים אחרות, יש לה נוגדנים לאנטיגנים בדם של הילד שטרם נולד. במקרה זה, מתרחשת אי התאמה. בנוסף, יש לקחת בחשבון את סוג הדם במהלך העירוי.

הֲכָנָה

קבוצות דם ותגובות אגלוטינציה הם מושגים תואמים המשמשים לעתים קרובות ברפואה.

חשוב לעקוב אחר הוראות מסוימות לפני הבדיקה. עליך להימנע זמנית משימוש במזונות ותרופות מסוימות. זה יעזור להפוך את התוצאות מדויקות יותר. ההמלצות שיש לעקוב אחריהם נקבעות על ידי הרופא. העובדה היא שלמעבדות שונות ייתכן שלא יתקבל אותו טווח של ערכים, כלומר, הם מעט שונים.

תנאים למבחן

על מנת שסוג הדם ייקבע בצורה מדויקת, חשוב לבחור את הציוד המתאים. אלה כוללים:

• ופיפטה;
• מוטות זכוכית;
• סרומים isohemagglutinating סטנדרטיים;
• לוחות חרס יבשים, המחולקים ל-4 מגזרים.

ישנן גם דרישות לתנאי הבדיקה:

• תאורת יום;
• טמפרטורת החדר מעל +16 ˚С;
• שימוש בנפחי דם וסרום ביחס של 1:10;
• תוצאות אמינות מתקבלות תוך 5 דקות.

למעלה התנאים והכלים הבסיסיים. צבירה דם יכולה להתבצע במספר דרכים, ולכל אחת מהן דרישות אינדיבידואליות.

שיטות

שיטות אפשריות לקביעת קבוצת דם באמצעות אגלוטינציה:

• שיטה סטנדרטית;
• תגובה צולבת;
• שימוש בזוליקלונים;
• שיטת אקספרס באמצעות ערכת "כרטיס קבוצת אריטרוסט".

שיטה סטנדרטית

צבירה דם מודגמת באמצעות תאי הדם האדומים של המטופל. נעשה שימוש גם בסרה סטנדרטית המכילה אנטיגנים ידועים.

מניחים טיפה אחת של ארבעה סרומים על צלחת שטוחה. לאחר מכן, באמצעות מוטות זכוכית, מוסיפים לו את הדם של המטופל לבדיקה. במקרה זה, נוח להשתמש בטיפות עיניים. היחס צריך להיות 1:10. סרום ודם מעורבבים בזהירות. ניתן להשלים הערכה תוך חמש דקות.

פענוח תוצאות הבדיקה בשיטה פשוטה

לאחר הזמן שצוין, נצפה ניקוי בטיפות הסרום. בחלקם ניתן לראות שהתרחשה צבירה של תאי דם אדומים (פתיתים קטנים), אצל אחרים היא נעדרת.

האפשרויות הבאות קיימות:

• אין תגובה בכל דגימות הסרום - קבוצה 1;
• קרישה התרחשה בכל מקום למעט מדגם 2 - קבוצה 2;
• אין תגובה רק במדגם השלישי - קבוצה 3;
• צבירה התרחשה בכל מקום - קבוצה 4.

לפיכך, העיקר להפיץ את הסרום בצורה נכונה. ואז פענוח התוצאה לא יהיה קשה. אם צפיפות הדם חלשה, מומלץ לחזור על הבדיקה. במקרה של פתיתים קטנים, הם נבדקים במיקרוסקופ.

תגובה צולבת

לפעמים אי אפשר לקבוע במדויק את סוג הדם בשיטה פשוטה. אגלוטינציה במקרה זה מתבצעת בשיטת התגובה הצולבת. בניגוד לגרסה הראשונה של הבדיקה, כדוריות דם אדומות סטנדרטיות חשובות כאן. דמו של המטופל נשאב למבחנה, עובר צנטריפוגה, ולאחר מכן נשאב הסרום החוצה בעזרת פיפטה להמשך מחקר.

מניחים אותו בכמות של 2 טיפות על צלחת, ואז מוסיפים לו תאי דם אדומים סטנדרטיים מקבוצות A ו-B.

תוצאות שיטת ריאקציה צולבת

לאחר חמש דקות, הדגימות מוכנות לבדיקה. האפשרויות הן:

• הדבקה התרחשה בשתי הטיפות - קבוצה 1;
• לא נצפים פתיתים באף אחת מהדגימות - קבוצה 4;
• התהליך נראה בדגימה אחת - קבוצה 2 או 3 (תלוי היכן בדיוק הדם נקרש).

שיטה באמצעות זוליקלונים

כדי לקבוע את קבוצת הדם, אגלוטינציה בדרך זו מתבצעת באמצעות תחליפי סרום סינתטיים. הם נקראים זוליקלונים. הם מכילים תחליפים מלאכותיים ל-ά ו-β-agglutins, הידועים כ-erythrotests (ורוד וכחול, בהתאמה). התגובה מתרחשת בינם לבין תאי הדם האדומים של החולה.

שיטה זו היא המדויקת והאמינה ביותר. בעיקרון, זה לא מצריך חזרה על המחקר. התוצאות מוערכות באותו אופן כמו במקרה של השיטה הסטנדרטית. המוזרות היא שיש לאשר אותה על ידי תגובה עם תחליף סינטטי ספציפי (אנטי-AV). בנוסף, אין הדבקה בעת הוספת תמיסת נתרן כלורי.

שיטת אקספרס עם ערכת "כרטיס קבוצת אריטרוסט".

כאשר בוחנים שיטות ניתוח אפשריות לקביעת קבוצת הדם, ראוי לציין כי לשיטה זו יש מאפיינים משלה. הם טמונים בעובדה שניתן להעריך את התוצאה לא רק במעבדה, אלא גם בשטח. ערכה מיוחדת משמשת לביצוע המחקר. הוא כולל כרטיס עם בארות, שבתחתיתם כבר יש ריאגנטים מיובשים. בנוסף לאנטי-AB, אנטי-A ואנטי-B, נעשה שימוש באנטי-D לקביעת גורם ה-Rh.

שיטה זו אינה דורשת הכנה מיוחדת מותר להשתמש בדם שנלקח מאצבע, והיא עשויה להכיל חומרים משמרים. ראשית אתה צריך להוסיף טיפת מים לכל באר כדי להמיס את החומרים. לאחר מכן, מוסיפים דם ומערבבים קלות. תוך שלוש דקות תתקבל התוצאה.

צבירה כוזבת

לפעמים הנתונים המתקבלים לאחר בדיקה אינם נכונים. תופעה זו תלויה בגורמים מסוימים.

ישנם שלושה סוגים של תגובות שווא:

פסאודואגלוטינציה. הדבקה אמיתית אינה מתרחשת, תאי הדם האדומים פשוט מתקפלים לעמודי מטבעות. אם מוסיפים כמה טיפות של תמיסת מלח, הן מתפרקות. ניתן לזהות תופעה דומה במיקרוסקופ.

צבירה של דם קר. תגובה זו נצפית אם התנאים לביצוע המחקר היו שליליים. כאשר הטמפרטורה נמוכה מ-16˚C+, עלולה להיווצר הדבקה.

Panagglutination. אם יש זיהום בדם, תוצאות הבדיקה עלולות להיות שגויות. תופעה זו אפשרית גם במקרה של סרטן ואלח דם.

אגלוטינציה חשובה מאוד ברפואה. זה מאפשר לא רק לקבוע את סוג הדם, אלא גם לזהות את הגורם הסיבתי של מחלות, כמו גם נוכחות של זיהומים. העיקר הוא לעקוב אחר המלצות הרופא בעת הכנה להליך זה. באשר לצוותים רפואיים, המשימה שלהם היא ליצור תנאים נוחים ולעמוד בכל הכללים. זוהי הדרך היחידה להשיג תוצאות מדויקות בעת ביצוע צפיפות דם.

תגובת צבירהמבוסס על אינטראקציה ספציפית של נוגדנים (אגלוטינינים) עם תאים מיקרוביאליים שלמים או אחרים. כתוצאה מאינטראקציה זו, נוצרים חלקיקים מצטברים המשקעים (אגגלוטינים). חיידקים, פרוטוזואה, פטריות, שמרים, ריקטסיה, אריתרוציטים ותאים אחרים, חיים וגם מומתים, יכולים להשתתף בתגובת הצבירה. התגובה מתרחשת בשני שלבים:

• הראשון הוא שילוב ספציפי של אנטיגן ונוגדן,
• השני הוא לא ספציפי, כלומר היווצרות של אגלוטינאט גלוי.

משקעים של agglutinate מתרחשים בנוכחות אלקטרוליטים, כגון נתרן כלורי. המיקרואורגניזמים באגלוטינט נשארים בחיים, אך מאבדים את הניידות שלהם.

תגובת האגלוטינציה נמצאת בשימוש נרחב לאבחון סרולוגי של מחלות זיהומיות וקביעת המבנה האנטיגני של חיידקים מבודדים. כדי לבסס את המבנה האנטיגני של פתוגן מבודד מגופו של מטופל או נשא, השתמש סרום חיסוני ספציפי, המתקבל על ידי חיסון בעלי חיים (ארנבת, חמור, כבשים) במיקרואורגניזמים מסוימים. זיהוי החיידק מתבצע בתגובת צבירה על זכוכית עם סרה ספוג או מונורצפטור או במבחנות עם סרה אגלוטינציה ספציפית. סרה נספחת מכילה נוגדנים רק לאנטיגנים ספציפיים לחיידק נתון, וסרה מונורצפטורים מכילה נוגדנים רק לאנטיגן ספציפי אחד של הפתוגן. סרת מינים מכילים נוגדנים לכל האנטיגנים של חיידק מסוים.

השתייכותה של תרבית מיקרואורגניזמים מבודדת למין נתון נקבעת על ידי אגלוטינציה עם סרום ידוע לטיטר הנוגדנים המצוין על התווית של אמפולת הסרום. טיטר הנוגדנים של נסיוב נחשב לדילול האחרון שלו, שבו עדיין נצפית צבירה של תרבית החיידקים המשמשים לחיסון החיה. סרה ספיגה ומונורצפטור משמשת בדרך כלל לא מדוללת בתגובת צמיחת הזכוכית.

בעת קביעת נוכחות של נוגדנים בסרום הדם של המטופל, הוא מדולל בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית החל מדילול של 1: 50 עד 1: 800 או יותר. השעיה של חיידקים חיים או מומתים מתווספת לכל דילול. תכשירים המכילים חיידקים שנהרגים על ידי חום או פורמלדהיד נקראים אבחון. דיאגנוסטיקומים המתקבלים על ידי חימום תרביות מיקרואורגניזמים מכילים רק אנטיגנים סומטיים. כאשר משתמשים רק בפורמלדהיד, חיידקים שומרים על האנטיגנים הדגלים שלהם.

בנוכחות נוגדנים בדם החולה, האבחון שנלקח בתגובה נדבק יחד ונוצר משקעים (אגלוטינאט) על שתי מבחנות. במקרה זה, התוצאות של תגובת האגלוטינציה נחשבות כחיוביות. בצינור הבקרה, שלתוכו מוסיפים תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית ודיאגנוסטיקום, ההשעיה של החיידקים צריכה להיות הומוגנית (תגובת אגלוטינציה שלילית).

תוצאות תגובת הצבירה במחלות מסוימות, למשל, לפטוספירוזיס, נלקחות בחשבון רק במיקרוסקופ בשדה ראייה חשוך של מיקרוסקופ (מיקרואגלוטינציה). כדי לבצע אבחנה סרולוגית של מחלה, המחלה האבחנתית נלקחת בחשבון. זה בדרך כלל מתאים לדילול סרום של 1:100 או 1:200.

ניתן לזהות נוגדנים בסרום הדם של המטופל באמצעות תגובת האגלוטינציה במקרים של קדחת טיפוס ופארטיפוס (תגובת וידאל), ברוצלוזיס (תגובת רייט), טולרמיה וכו'.

תגובת קסטלאני. עם כמה מחלות זיהומיות או חיסון עם מיקרואורגניזמים המכילים אנטיגנים קבוצתיים, בסרום הדם, בנוסף לנוגדנים ספציפיים לסוג מסוים, מופיעים גם נוגדנים קבוצתיים. במקרה זה, מיני חיידקים קשורים יצטברו על ידי הסרה המתקבלת.

קסטלני הציע שיטה לספיחת נוגדנים קבוצתיים מסרה חיסונית, המבוססת על הסרתם בעזרת מיקרואורגניזמים ממינים קרובים שיש להם אנטיגנים קבוצתיים אך חסרים כאלה ספציפיים. תרבית של מיקרואורגניזמים כאלה שנוספו לסרום סופחת נוגדנים מקבוצה לא ספציפית, ולאחר הסרת קומפלקס האנטיגן-נוגדנים בצנטריפוגה, נותרו בסרום רק אימונוגלובולינים ספציפיים. סרה מעובדת על פי שיטת Castellani יכולה לשמש בתגובת האגלוטינציה כספציפית ביותר.

IN מבוסס על תגובת ההמגלוטינציהטמונה התופעה של הידבקות תאי דם אדומים, המתרחשת בהשפעת גורמים שונים. יש hemagglutination ישיר ועקיף.

בְּ תגובות ישירות להמגלוטינציהתאי דם אדומים נצמדים זה לזה כאשר אנטיגנים מסוימים, כגון וירוסים, נספגים עליהם.

במחקרים סרולוגיים משתמשים בתגובה ישירה של עיכוב המגלוטינציה, כאשר הנגיף שבודד מחולה מנוטרל בסרום חיסוני ספציפי ולאחר מכן משולב עם כדוריות דם אדומות. היעדר המגלוטינציה מעיד על עקביות הנגיף והסרום החיסוני המשמש.

תגובה עקיפה להמגלוטינציה(המגלוטינציה פסיבית) נצפית במקרים בהם מתווספים סרום חיסוני או סרום חולה המכיל נוגדנים מתאימים לתאי דם אדומים שטופלו בעבר (עברו רגישות) באנטיגנים שונים. הדבקה ספציפית של תאי דם אדומים מתרחשת, ההמגלוטינציה הפסיבית שלהם.

תגובת ההמגלוטינציה העקיפה או הפסיבית עדיפה ברגישות ובספציפיות לשיטות סרולוגיות אחרות, והיא משמשת לאבחון זיהומים הנגרמים על ידי חיידקים, ריקטזיה ופרוטוזואה.

השיטה לביצוע תגובת המגלוטינציה עקיפה מורכבת ממספר שלבים. ראשית, תאי דם אדומים נשטפים בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית, ולאחר מכן, במידת הצורך (בעת שימוש באנטיגנים חלבוניים), הם מטופלים בתמיסת טאנין של 1: 20,000 ומרגישים באנטיגנים מסיסים. לאחר כביסה עם תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית מבוקרת, אנטיגן האריתרוציטים מוכן לשימוש. סרום הבדיקה מדוללים בתמיסה איזוטונית של נתרן כלוריד במבחנות או בצלחות פלסטיק מיוחדות עם בארות, לאחר מכן מוסיפים אבחון אריתרוציטים לכל דילול של הסרום. תוצאות תגובת ההמגלוטינציה העקיפה נלקחות בחשבון על ידי אופי משקע תאי הדם האדומים הנוצרים בתחתית הצינור. תוצאת תגובה שבה תאי דם אדומים מכסים באופן שווה את כל תחתית הצינור נחשבת חיובית. בתגובה שלילית, תאי דם אדומים בצורת דיסק קטן או "כפתור" ממוקמים במרכז החלק התחתון של המבחנה.

תגובת צבירה (RA) היא הדבקה ומשקעים של חיידקים או תאים אחרים בהשפעת נוגדנים בנוכחות אלקטרוליט (תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית). המשקע שנוצר נקרא אגלוטינאט. לתגובה אתה צריך:

1. נוגדנים (אגלוטינינים) - נמצאים בסרום החולה או בסרום החיסוני.

2. אנטיגן - תרחיף של מיקרואורגניזמים חיים או מומתים, תאי דם אדומים או תאים אחרים.

3. תמיסה איזוטונית.

תגובת האגלוטינציה עבור serodiagnosis נמצאת בשימוש נרחב עבור קדחת טיפוס, קדחת פארטיפוס (תגובת וידאל), ברוצלוזיס (תגובת רייט) וכו'. הנוגדן במקרה זה הוא הסרום של המטופל, והאנטיגן הוא חיידק ידוע.

בעת זיהוי חיידקים או תאים אחרים, ההשעיה שלהם משמשת כאנטיגן, וסרום חיסוני ידוע משמש כנוגדן. תגובה זו נמצאת בשימוש נרחב באבחון של דלקות מעיים, שעלת וכו'.

הכנת מרכיבים: 1) השגת מי גבינה, ראה עמ'. 200; 2) הכנת אנטיגן. ההשעיה של חיידקים חיים צריכה להיות הומוגנית ולהתאים (ב-1 מ"ל) לכ-30 יחידות. עכירות לפי התקן האופטי GISC. להכנתו, משתמשים בדרך כלל בתרבית של 24 שעות הגדלה על נטיות אגר. התרבית נשטפת עם 3-4 מ"ל של תמיסה איזוטונית, מועברת לצינור סטרילי, צפיפותה נקבעת ובמידת הצורך מדללת.

השימוש בתרחיף של חיידקים מומתים - אבחונים - מקל על העבודה והופך אותה לבטוחה. בדרך כלל הם משתמשים באבחון שהוכן בייצור.

הגדרת תגובה. קיימות שתי שיטות לביצוע תגובה זו: תגובת צמיחת הזכוכית (נקראת לעיתים התגובה האינדיקטיבית) ותגובת האגלוטינציה המורחבת (במבחנות).

תגובת צבירה על זכוכית. מרחו 2 טיפות של סרום ספציפי (נספג) וטיפה של תמיסה איזוטונית על שקף זכוכית ללא שומן. סרומים לא נספגים מדוללים מראש ביחס של 1:5 - 1:25. מורחים טיפות על הזכוכית כך שיהיה מרחק ביניהן. השתמש בעיפרון שעווה כדי לסמן על הזכוכית היכן נמצאת כל טיפה. התרבית נטחנת ביסודיות על זכוכית באמצעות לולאה או פיפטה, ולאחר מכן מוסיפה לטיפה של תמיסה איזוטונית ואחת מטיפות הסרום, תוך ערבוב בכל אחת מהן עד שנוצרת תרחיף הומוגני. טיפת סרום ללא תרבית היא בקרת סרום.

תְשׁוּמַת לֵב! לא ניתן להעביר את התרבית מהנסיוב לטיפה של תמיסה איזוטונית, שהיא בקרת אנטיגן.

התגובה מתרחשת בטמפרטורת החדר למשך 1-3 דקות. בקרת הסרום צריכה להישאר ברורה ובקרת האנטיגן צריכה להראות עכירות אחידה. אם בטיפה שבה התרבית מעורבת בסרום, מופיעים פתיתים אגלוטינים על רקע נוזל שקוף, תוצאת התגובה נחשבת חיובית. אם התגובה שלילית, תהיה עכירות אחידה בירידה, כמו בבקרת האנטיגן.

התגובה נראית בבירור יותר כאשר רואים אותה על רקע כהה באור מועבר. כאשר לומדים אותו, אתה יכול להשתמש בזכוכית מגדלת.

תגובת צבירה מפורטת. מכינים דילולים סדרתיים, לרוב כפולים של סרום. הסרום של המטופל מדולל בדרך כלל מ-1:50 עד 1:1600, סרום חיסון - לטיטר או לחצי מהטיטר. הטיטר של סרום מצטבר הוא הדילול המרבי שלו שבו הוא מצמיד תאים הומולוגיים.

דילול בסרום: 1) הנח את המספר הנדרש של מבחנות באותו קוטר, גובה ותצורה תחתונה במדף;

2) על כל מבחנה מצוינת מידת הדילול של הסרום, בנוסף, במבחנה 1 כתוב מספר הניסוי או שם האנטיגן. על צינורות הבקרה הם כותבים "KS" - בקרת סרום ו"KA" - בקרת אנטיגן;

3) 1 מ"ל של תמיסה איזוטונית מוזגת לכל המבחנות;

4) הדילול הראשוני (הפועל) של הסרום מוכן במבחנה נפרדת. לדוגמה, כדי להכין דילול עבודה של 1:50, יוצקים 4.9 מ"ל של תמיסה איזוטונית ו-0.1 מ"ל של סרום למבחנה. יש לציין את מידת הדילול על המבחנה. דילול הסרום הראשוני מתווסף לשתי המבחנות הראשונות ולמבחנה לבקרת הסרום;

5) הכינו דילולים סדרתיים פי שניים של הסרום.

סכימה משוערת לדילול שלה ניתנת בטבלה. 16.

טבלה 16. ערכת דילול סרום עבור RA מלא

פֶּתֶק. החצים מציינים את העברת הנוזל ממבחנה למבחנה; מהמבחנה החמישית וממבחנה הביקורת בסרום יוצקים 1.0 מ"ל לתמיסת החיטוי.

תְשׁוּמַת לֵב! כל המבחנות חייבות להכיל את אותו נפח נוזל.

לאחר ביצוע דילול של הסרום, מוסיפים 1-2 טיפות של אנטיגן (דיאגנוסטיקום או תרחיף טרי שהוכן של חיידקים) לכל המבחנות, למעט סרום הבקרה. יש להופיע עכירות קלה אחידה במבחנות. בקרת הסרום נשארת ברורה.

המבחנות מנערות היטב ומניחות בתרמוסטט (37 מעלות צלזיוס). חשבונאות ראשונית של תוצאות התגובה מתבצעת לאחר שעתיים, וחשבון סופי לאחר 18-20 שעות (שמירה בטמפרטורת החדר).

התחשבנות בתוצאות, כמו תמיד, מתחילה בבקרות. בקרת הסרום צריכה להישאר ברורה, בקרת האנטיגן עכורה באופן אחיד. בדקו את הצינורות באור משודר (נוח מאוד על רקע כהה) בעין בלתי מזוינת, באמצעות זכוכית מגדלת או אגלוטינוסקופ.

אגלוטינוסקופ- התקן המורכב מצינור מתכת חלול המותקן על מעמד. מעליו עינית עם בורג כוונון. מראה מסתובבת מחוברת מתחת לצינור. המבחנה עם הנוזל הנחקר מוחדרת מהצד לתוך החור של המבחנה במרחק כזה שהנוזל בה נמצא מתחת לעינית. על ידי הגדרת התאורה באמצעות מראה ומיקוד העינית, נקבעת נוכחות ואופי האגלוטינט.

אם תוצאת התגובה חיובית, גרגירים או פתיתים של אגלוטינט נראים במבחנות. האגלוטינאט שוקע בהדרגה לתחתית בצורה של "מטריה", והנוזל שמעל המשקע הופך צלול (השווה לבקרת האנטיגן העכורה באופן אחיד).

כדי ללמוד את גודל המשקע ואופי המשקעים, מנערים מעט את תכולת המבחנות. יש אגלוטינציה דקת גרגר ופלקולנט. עדין גרגיר (O-agglutination) מתקבל בעבודה עם O-sera *. דמוי פתית (H) - במהלך האינטראקציה של מיקרואורגניזמים תנועתיים עם H-sera flagellar.

* (O-sera מכילים נוגדנים לאנטיגן O (סומטי), H-sera - לאנטיגן flagellar.)

צפיפות מתרחשת מהר יותר המשקע המתקבל מאוד רופף ונשבר בקלות.

עוצמת התגובה מתבטאת כך:

כל התאים התיישבו, הנוזל במבחנה שקוף לחלוטין. התוצאה של התגובה חיובית באופן חד.

יש פחות משקעים, אין פינוי מוחלט של הנוזל. תוצאת התגובה חיובית.

יש אפילו פחות משקעים, הנוזל עכור. תוצאת התגובה חיובית מעט.

משקעים קלים, נוזל עכור. תוצאת תגובה מפוקפקת.

אין משקעים, הנוזל מעונן באופן אחיד, כמו בבקרת האנטיגן. תוצאה שלילית של התגובה.

שגיאות אפשריות בעת ביצוע תגובת אגלוטינציה. 1. צבירה ספונטנית (ספונטנית). תאים מסוימים, במיוחד חיידקים בצורת R, אינם מייצרים תרחיף אחיד (הומוגני) ומשקעים במהירות. כדי להימנע מכך, כדאי להשתמש בתרבית בצורת S, שאינה נותנת צבירה ספונטנית.

2. הסרום של אנשים בריאים מכיל נוגדנים למיקרואורגניזמים מסוימים (מה שנקרא "נוגדנים נורמליים"). הטיטר שלהם נמוך. לכן, תוצאה חיובית של תגובה בדילול של 1:100 ומעלה מעידה על הספציפיות שלה.

3. תגובה קבוצתית עם חיידקים דומים במבנה האנטיגני. לדוגמה, נסיוב של חולה עם קדחת טיפוס יכול גם לצבור חיידקים פארטיפוסיים A ו-B. בניגוד לתגובה הספציפית של הקבוצה, היא מתרחשת בטיפוס נמוך יותר. סרומים נספגים אינם נותנים תגובה קבוצתית.

4. יש לקחת בחשבון שנוגדנים ספציפיים לאחר מחלה ואף לאחר חיסונים יכולים להתמיד לאורך זמן. הם נקראים "אנמנסטיים". כדי להבדיל ביניהם מנוגדנים "זיהומיים" שנוצרו במהלך המחלה הנוכחית, התגובה מתבצעת באופן דינמי, כלומר, נבדק הסרום של המטופל, נלקח שוב לאחר 5-7 ימים. עלייה בטיטר הנוגדנים מעידה על נוכחות של מחלה הטיטר של נוגדנים "אנמנסטיים" אינו עולה, ואולי אף יורד.

שאלות אבטחה

1. מהן תגובות חיסוניות, מהן התכונות העיקריות שלהן?

2. אילו מרכיבים מעורבים בתגובות סרולוגיות? מדוע תגובות נקראות סרולוגיות מכמה פאזות הן מורכבות?

3. מהי תגובת אגלוטינציה? השימוש בו ושיטות היישום שלו. מהו אבחון?

4. באיזה אנטיגן משתמשים בעת בדיקת סרום של מטופל? באיזה סרום משתמשים כדי לקבוע את סוג החיידק הלא ידוע?

5. מהי O- ו-H-agglutination? באילו מקרים נוצר משקעים פקקולנטיים ומתי הוא עדין?

תַרגִיל

1. בצעו בדיקת אגלוטינציה מפורטת כדי לקבוע את טיטר הנוגדנים בסרום המטופל ולקחת בחשבון את התוצאה שלו.

2. בצע תגובת צבירה על זכוכית כדי לקבוע את סוג המיקרואורגניזם המבודד.

אם מניחים טיפת סרום המכילה אגלוטינין מסוים על צלחת חרסינה עם משטח שניתן להרטיב ומוסיפים טיפת דם (ביחס של 10:1), שהאריתרוציטים שלה מכילים את אותו אגלוטינוגן, אז תתרחש תגובת אגלוטינציה - הדבקה של אריתרוציטים. תגובת האגלוטינציה יכולה להיות ספציפית (אמיתית) ולא ספציפית.

תגובות צבירה ספציפיות כוללות:

1. איזו-המוגלוטינציה, בה הדבקה של כדוריות דם אדומות מתרחשת עקב אינטראקציה של אותו אגלוטינין ואגלוטינוגן. הוא יציב ומכריע בקביעת קבוצת הדם;

2. אגלוטינציה קרה היא אגלוטינציה אמיתית של אריתרוציטים, המתבטאת בטמפרטורות מתחת ל-15 מעלות צלזיוס, עקב נוכחות אגלוטינין קר בסרום.

תגובות צבירה לא ספציפיות כוללות:

1. צבירה כוזבת (פסאודו-אגלוטינציה), שבה תאי דם אדומים נצמדים זה לזה ל"עמודות מטבעות". תגובה זו היא פיזיולוגית ואינה תלויה בתכונות הצבירה של תאי דם אדומים. בנוסף, בהתבוננות ממושכת מתחיל הייבוש מהפריפריה של הטיפה ומופיעה פסאודואגלוטינציה שולית. ניתן להבחין בקלות בין צבירה כוזבת לבין צבירה אמיתית על ידי הוספת טיפה של תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית, ולאחר ערבוב האגלוטינציה נעלמת.

2. Panagglutination היא תופעה שבה סרום הדם הצטבר עם כל אריתרוציטים בטמפרטורת החדר, ואריתרוציטים עם כל הסרום, אפילו עם סרום מהקבוצה הרביעית. תופעה זו מתרחשת במספר חולים כאשר הרכב החלבון של סרום הדם משתנה, כלומר עם דומיננטיות של גלובולינים או הופעת מקרוגלובלינים, אשר נצפתה בתהליכים דלקתיים כרוניים (מחלות כבד, כליות), דיספרוטינמיה, ממאירות גידולים, מחלות המטולוגיות. לעתים קרובות יותר, הגבול העליון לתגובה זו הוא טמפרטורה של +30 מעלות צלזיוס (טמפרטורה זו אינה קיימת באורגניזם חי). Panagglutination נחלשת כאשר הצלחת מחוממת בתרמוסטט בטמפרטורה של +37 מעלות צלזיוס למשך 5-6 דקות, וב +45 מעלות צלזיוס יכולת הפנאגלוטינציה נעלמת.

3. תופעת תומסון. זה מתרחש כאשר הדם נגוע, ובמקרה זה כדוריות הדם האדומות נדבקות על ידי כל הסרה הסטנדרטית. זה מתרחש עקב האנזימים הפרוטאוליטיים של חיידקים, שיש להם את היכולת להפעיל את אנטיגן ה-T של אריתרוציטים, ואגלוטינציה מתרחשת עם אנטי-T-agglutinins, והם כלולים בסרום של כל האנשים. במקרה זה, תגובת הצבירה מבוטלת על ידי חימום הצלחת בתרמוסטט בטמפרטורה של +37 מעלות צלזיוס למשך 5-6 דקות.