Методика определения групп крови. Реакция Кумбса непрямая (антиглобулиновый тест, выявление неполных антиэритроцитарных антител), кровь

КУМБСА РЕАКЦИЯ (R. R. А. Coombs, англ. иммунолог, род. в 1921 г.; син.: проба Кумбса, антиглобулиновый тест ) - иммунологическая реакция для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов.

Реакция была разработана в 1908 г. Мореши (С. Moreschi), но получила широкое применение лишь с 1945 г. после того, как Кумбсом была показана ее роль в определении совместимости при гемотрансфузиях, резус-конфликте, диагностике аутоаллергических и аутоиммунных состояний и др.

К. р. основана на использовании в ней специально приготовленного препарата - антиглобулиновой сыворотки. В присутствии антиглобулиновой сыворотки эритроциты, нагруженные неполными антителами, агглютинируются. Эритроциты, не содержащие на своей поверхности антител, остаются неагглютинированными.

К. р. широко применяется для: а) установления состояния изосенсибилизации, т. е. обнаружения изоантител, возникающих при повторных переливаниях крови (см. Переливание крови) или беременностях (см. Беременность); б) выполнения пробы на совместимость при гемо-трансфузиях; в) определения в эритроцитах разновидности резус-фактора (см.); г) обнаружения аутоиммунных антител на эритроцитах больных приобретенной гемолитической анемией (см.) и другими аутоаллергическими болезнями (см.), а также при некоторых инфекциях, протекающих с аллергическим компонентом; д) обнаружения изоиммунных антител, фиксированных на эритроцитах детей, страдающих гемолитической болезнью новорожденных (см.). К. р. применяется также в судебно-медицинских и антропологических исследованиях.

Основным материалом для постановки К. р. являются сыворотка или цитратная плазма и эритроциты, больного. Различают два варианта К. р.: непрямую и прямую. При непрямой К. р. изучают сыворотку больного, в к-рой определяют свободно циркулирующие антитела. При прямой К. р. исследуют эритроциты на присутствие антител, фиксированных на этих форменных элементах крови.

Антиглобулиновую сыворотку для К. р. получают путем иммунизации лаб. животных (кроликов, коз, овец и др.) глобулинами, выделенными из сыворотки человека фракционированием этанолом, сернокислым аммонием или гель-фильтрацией на сефадексе. При получении антиглобулиновой сыворотки необходимо удалить гетероагглютинирующие антитела, возникающие в результате иммунизации животных глобулинами человека. Достигают этого путем адсорбции иммунной сыворотки смесью эритроцитов людей с различной группой крови или разведением ее изотоническим р-ром хлорида натрия. В последнем случае титр гетеро-агглютининов должен быть невысок (1: 16 - 1: 32), с тем чтобы антиглобулиновая сыворотка после разведения сохранила хорошую активность в К. р.

Непрямая Кумбса реакция

Непрямая Кумбса реакция проводится в два этапа. Первый этап выполняют в специально предназначенных для этой цели небольших пробирках размером 4 X 0,5 см. В каждую пробирку к трем каплям сыворотки (цельная, 1: 2 и т. д.), в к-рой подозревают наличие антител, добавляют одну каплю осадка эритроцитов известного антигенного состава. Содержимое пробирки перемешивают и помещают в термостат при t° 37° на 1 час. Затем эритроциты троекратно отмывают изотоническим р-ром хлорида натрия. Второй этап состоит в приготовлении 5% взвеси отмытых эритроцитов и соединении на белой (фарфоровой) пластинке со смачиваемой поверхностью одной капли эритроцитов с одной каплей антиглобулиновой сыворотки. Учет результатов выполняют до 10 мин. Исключение ложноположительных результатов производят путем выполнения контрольных исследований. Использование изотонического р-ра хлорида натрия вместо антиглобулиновой сыворотки не должно сопровождаться агглютинацией эритроцитов. Выполнение непрямой К. р. в отношении эритроцитов известного фенотипа изоантигенов позволяет установить специфичность антител. Напр., исследование сыворотки больного с эритроцитами 0(I), CDE, Kk, Fya; 0(1), CDe, Kk, Fуа; 0(I), сDe, Кк, Fya; 0(I), cDE, Кк, Fya; 0(I), cde, kk, Fya показало положительный результат с образцом крови в 1-м и 4-м случаях; другие образцы крови (2, 3, 5-й случаи) показали отрицательный результат. Сыворотка содержит анти-Е-антитела. С помощью непрямой К. р. могут быть выявлены неполные антитела против антигенов: С, D, Е, с, е; К, k; Fya, Fyb; Lea, Leb; Jka, Jkb и др. (см. Группы крови).

Прямая Кумбса реакция

Прямая Кумбса реакция по технике выполнения соответствует второму этапу непрямой К. р.: троекратно отмытые изотоническим р-ром хлорида натрия исследуемые эритроциты больного (5% взвесь) соединяют с антиглобулиновой сывороткой. Прямую К. р. выполняют, когда есть основание полагать, что эритроциты исследуемого больного in vivo уже сенсибилизированы антителами. Положительная прямая К. р. служит диагиостическим признаком при гемолитической болезни новорожденных, обусловленной сенсибилизацией организма женщины к антигенам плода и проникновением антител через плаценту в организм ребенка, а также при приобретенной гемолитической анемии.

За последние годы К. р. существенно усовершенствована. С ее помощью удается не только констатировать наличие на эритроцитах антител, но и установить класс иммуноглобулинов (см.). Для этого используют сыворотку против отдельных классов иммуноглобулинов: IgG, IgM, IgA. Изоиммунные антитела против резус, Келл-антигенов, Даффи-антигенов и других антигенов, а также тепловые аутоиммунные антитела, как правило, относятся к IgG. Холодовые аутоиммунные антитела, а также изоиммунные антитела против Le и некоторых других антигенов, как правило, относятся к IgM. Природу IgA имеют лишь редко встречающиеся аутоиммунные антитела (см. Аутоантитела) .

Библиография: Дыгин В. П. Аутоиммунные заболевания в клинике внутренних болезней, Л., 1970, библиогр.; Кассир-с к и й И. А. и Алексеев Г. А. Клиническая гематология, М., 1970; Косяков П. Н. Изо антигены и изо антитела человека в норме и патологии, М., 1974, библиогр.; В о i v i n P. e. a. Les anemies hemolytiques, p. 93, P., 1971, bibliogr.; Clinical aspects of immunology, ed. by P. G. H. Geli а. о., Oxford, 1975; Coombs R. R. A., M o u г a n t A. E. a. Race R. R. In-vivo isosensitisation of red cells in babies with haemolytic disease, Lancet, v. 1, p. 264, 1946.

Из множества существующих антигенов в медицинской практике наибольшее значение уделяется трем типам агглютиногенов крови. Одним из них является тип ответственный за проявление резус-фактора: если он присутствует на мембране эритроцита, диагностируют Rh+ группу крови, если отсутствует - Rh-. Если в состав резус-отрицательной крови попадают эритроциты с агглютиногенами Rh+, организм запускает реакцию иммунного ответа и начинает вырабатывать антитела к этому антигену, что становится причиной патологических состояний.

СПРАВКА! Резус-фактор — сложная многокомпонентная система из нескольких десятков антигенов. Наиболее часто встречаемые из них — агглютиногены типа D (85% случаев), а также E и C.

Пробу Кумбса проводят только при наличии прямых показаний. Общий список причин для назначения пробы Кумбса:

  • планирование и ведение беременности (родители имеют разный Rh);
  • донорство и подготовка к переливанию крови (несовпадение крови по Rh не менее губительно, чем несовпадение по системе АВ0);
  • планируемое хирургическое вмешательство (на случай восполнения кровопотери с помощью переливания крови);
  • диагностика гемолитических болезней.

Более конкретные показания зависит от типа проводимого исследования.

Прямая проба Кумбса

Прямой тест позволяет обнаружить антитела на поверхности эритроцитов. Это необходимо для диагностики уже имеющихся гемолитических патологий :

  • аутоиммунных (эритроциты и гемоглобин разрушаются в результате атаки антител собственного организма);
  • медикаментозных (патологический процесс запускает прием некоторых лекарственных препаратов типа хинидина или прокаинамида);
  • посттрансфузионных (при несовпадении группы крови при переливании), а также в виде резус-конфликта при беременности (эритробластоз новорожденных).

СПРАВКА! Гемолитическая анемия - заболевание, связанное с преждевременным разрушением эритроцитов в результате гемолиза, что приводит к недостаточному насыщению крови кислородом и гипоксии головного мозга и/или внутренних органов.

Гемолиз кровяных элементов наблюдается при онкологических, инфекционных, ревматических заболеваниях, поэтому прямая проба Кумбса может использоваться как дополнительное средство диагностики патологического состояния. При этом стоит помнить: отрицательное значение анализа не исключает вероятность гемолиза, а является поводом для дополнительного обследования.

Непрямая проба Кумбса

Непрямая проба чаще применяется для предотвращения патологических ситуаций. Она помогает выявить антитела в плазме крови, что необходимо для оценки совместимости при переливании и диагностики рисков резус-конфликта во время беременности.

Более 80% людей имеют положительный резус-фактор (Rh+), соответственно, чуть менее 20% являются резус-отрицательными. Если у Rh- матери развивается Rh+ ребенок, ее организм начинает вырабатывать антитела, атакующие эритроциты плода, провоцируя гемолиз.

С учетом того, что процент “разнорезусных” браков достигает 12-15%, риск гемолитической болезни новорожденных должен быть велик, но в реальности лишь в 1 из 25 подобных случаев у женщин наблюдается явление сенсибилизации (на 200 успешных родов 1 пример гемолитической патологии). Частично это обусловлено тем, что первый резус-положительный ребенок обычно не вызывает открытой агрессии организма матери; подавляющее количество случаев приходится на второго и последующих детей. Действует тот же принцип, что и при обычной сенсибилизации к тому или иному аллергену.

При первом контакте реакции не происходит. Организм только знакомится с новым для него антигеном, вырабатывая антитела класса IgМ, которые отвечают за быстрый иммунный ответ, но редко проникают через плацентарный барьер в кровь ребенка. Все патологические реакции проявляются при повторной “встрече”, когда в организме начинают вырабатываться антитела класса IgG, легко проникающие в кровоток плода, запуская процесс гемолиза.

Непрямая проба Кумбса при беременности позволяет обнаружить наличие антител в организме матери и вовремя выявить начальную стадию сенсибилизации. Положительный ответ, требует постановки на учет с ежемесячным исследованием титра антител и обязательной госпитализацией за 3-4 недели до родов.

СПРАВКА! Несовместимость по резус-фактору на состоянии матери никак не сказывается, гемолитическая болезнь развивается только у ребенка. В тяжелых случаях и при отсутствии своевременной реакции плод может погибнуть еще в утробе или сразу после рождения.

Подготовка к процедуре и ее проведение

Для диагностики используют венозную кровь. Специальная длительная подготовка к проведению пробы Кумбса не требуется. Старайтесь соблюдать стандартный набор правил перед взятием крови из вены на анализ:

  • за 3 суток откажитесь от алкоголя, медикаментозных препаратов (по возможности);
  • последний прием пищи планируйте на позже, чем за 8 часов до взятия крови на анализ;
  • за 1 час откажитесь от курения, физических, умственных и эмоциональных нагрузок;
  • перед процедурой выпейте стакан чистой негазированной воды.

Метод исследования основан на реакции гемагглютинации.

При проведении прямой пробы на образец крови воздействуют заранее заготовленной антиглобулиновой сывороткой с известными показателями, выдерживают смесь некоторое время и проверяют на предмет агглютинатов, которые образуются при наличии на эритроцитах антител. Уровень содержания агглютинатов диагностируют с помощью агглютинирующего титра.

Непрямая проба Кумбса имеет сходную методику, но более сложную последовательность действий. В отделенную сыворотку крови вводят антигенные эритроциты (с резус-фактором) и только после этих манипуляций добавляют антиглобулиновую сыворотку для диагностики и титра агглютинатов.

Результаты исследования

В норме и прямая, и непрямая проба Кумбса должны давать отрицательный результат:

  • отрицательная прямая проба свидетельствует о том, что специфические антитела к резус-фактору, связанные с эритроцитами, в крови отсутствуют и не могут являться причиной гемолиза
  • отрицательная непрямая проба показывает, что свободные антитела к резус-фактору в плазме крови также отсутствуют; факт свидетельствует о совместимости крови донора с кровью реципиента (или крови матери и ребенка) по резус-фактору.

Положительная проба Кумбса говорит о факте резус-сенсибилизации организма, что является главной причиной резус-конфликта в случае переливания крови или при вынашивании ребенка с иным резус-статусом. В этом случае результаты сохраняются неизменными в течение 3-х месяцев (срок жизни эритроцитов). Если причиной стала аутоиммунная гемолитическая анемия, то положительная проба может преследовать пациента на протяжении нескольких лет (в ряде случаев - всю жизнь).

СПРАВКА! Антиглобулиновый тест отличается высокой чувствительностью, но имеет малую информативность. Он не регистрирует активность гемолитического процесса, не определяет тип антитела и не в состоянии выявить причину патологии. Для получения более полной картины, лечащий врач обязательно назначает дополнительные исследования (микроскопию крови, общий и биохимический анализ, ревмопробы, СОЭ, уровень железа и ферритина).

Степень сенсибилизации может иметь качественное выражение (от «+» до «++++») или количественное - в виде титра:

  • 1:2 - низкое значение, не представляет опасности;
  • 1:4 - 1:8 - начало развития иммунологической реакции; не представляет опасности, но требует постоянного контроля;
  • 1:16 -1:1024 - яркая форма сенсибилизации, следует незамедлительно принять меры.

Причиной положительной пробы могут стать:

  • переливание нетипированной крови (или с ошибкой типирования), когда резус-фактор донора и реципиента не совпадают;
  • резус-конфликт при беременности (если состав антигенов крови у отца и матери не совпадают);
  • аутоиммунная гемолитическая анемия - как врожденная (первичная), так и вторичная, которая является следствием некоторых болезней (синдрома Эванса, инфекционной пневмонии, сифилиса, холодовой гемоглобинурии, лимфомы);
  • медикаментозная гемолитическая реакция.

Ни одна из вышеперечисленных проблем не может быть решена пациентом без врачебной помощи. Во всех случаях потребуется срочная консультация, постановка на учет или экстренная госпитализация.

ВНИМАНИЕ! В редких случаях возможна ложноположительная проба Кумбса. Причиной этого могут стать частые переливания крови, а также ряд заболеваний: ревматоидные артриты, красная волчанка, саркоидозы. Также это явление может наблюдаться после удаления селезенки, а также при нарушении хода реакции (частые встряхивания содержимого, наличие загрязняющих примесей).

В последние годы среди пациентов различного возраста увеличилось количество заболеваний крови и для их диагностики используются различные методы и средства. Проба Кумбса является клиническим исследованием крови, и цель ее проведения заключается в выявлении в организме определенных , представляющих угрозу для здоровья человека.

Может произойти приклеивание антител к и результатом этого может стать нарушение состояния иммунной системы. Прямая проба Кумбса представляет собой антиглобулиновый тест, который проводится для выявления антител, прикрепившихся к поверхности эритроцитов.

Обычно специалисты прибегают к проведению теста на антитела в следующих ситуациях:

  • Необходимость переливания крови. Из курса школьной анатомии известно, что у человека может быть одна из четырех групп крови. Проведение антиглобулинового теста позволяет определить возможность переливания крови в другой организм. Говорить о том, что пациент может стать донором для переливания можно лишь в том случае, если его кровь соответствует типу больного, то есть в ней присутствуют одинаковые антигены. В том случае, если у пациента и донора существует различие антигенов, то это может привести к тому, что произойдет разрушение иммунной системой перелитых клеток. Результатом этого может стать развитие тяжелых заболеваний и осложнений, и даже летальный исход. Именно по этой причине важную роль придается поиску нужного типа крови при появлении необходимости ее переливания.
  • Определение риска резус-сенсибилизации. Современная медицина определяет резус как антиген, а его полным определением является понятие «резус-фактор». Благодаря тесту Кумбса удается диагностировать присутствие антител к резус-фактору в крови женщин во время . В том случае, если будущая мамочка имеет отрицательный резус-фактор, а отец положительный, то будущий ребенок может унаследовать любой из них. При выявлении у будущего ребенка положительного резус-фактора повышается опасность развития резус-сенсибилизации — это процесс смешения крови и матери во время беременности или родовой деятельности.

В том случае, если наблюдается несовместимость группы матери и ребенка, то иммунная система женского организма начинает воспринимать плод как чужеродный предмет и оказывает на него всевозможную атаку. Результатом этого может стать развитие тяжелой патологии у ребенка, которая получила название эритробластоза. В некоторых случаях при отсутствии эффективного лечения наблюдается гибель плода в утробе матери либо сразу же после его рождения.

В некоторых случаях проба Кумбса проводится с целью выявления аутоиммунной гемолитической .

Такое заболевание встречается довольно редко и проявляется в образовании к антигенам эритроцитов своего собственного организма.


Специалисты выделяют две разновидности проб Кумбса, каждая из которых применяется для определенных целей.

Прямая проба. Прямая проба в медицинской практике еще называется прямой антиглобулиновый тест и с его помощью удается диагностировать антитела, прикрепленные к поверхности . В некоторых случаях производство таких антител в организме человека происходит как результат прогрессирования различных либо приема таких лекарственных препаратов, как:

  • Хинидин
  • Метилдоп
  • Прокаинамид

Опасность таких антител кроется в том, что они могут становиться причиной развития и оказывать разрушающее воздействие на . Иногда к проведению теста Кумбса прибегают в том случае, когда необходимо выявить причины развития таких патологий, как анемия и .

Проба Кумбса – анализ для выявления антител прикрепленных к поверхности или растворенных в плазме. С его помощью выявляют иммунизированность и антитела к эритроцитам. Второе название антиглобулиновый тест. Бывает прямым и непрямым.

При прямом антиглобулиновом тесте определяет антитела фиксированные на поверхности эритроцитов. Проводится при подозрении на , при других аутоиммунных заболеваниях, после приема лекарств (метилдопа, пенициллин, хинин) и .

Эритроциты были сенсибилизированы in vivo – к ним уже прочно прикреплены антитела, а добавление антиглобулиновой сыворотки (анти-IgG) вызывает склеивание сенсибилизированных клеток, что и видно невооруженным глазом.

Непрямая проба Кумбса выявляет антиэритроцитарные антитела в плазме крови, ее выполняют перед переливанием крови и при .

Антиэритроцитарные антитела — вид аутоантител, т.е. антител против собственных же тканей. Аутоантитело возникает при патологической реактивности иммунной системы на некоторые препараты, например, на высокие дозы пенициллина.

Эритроциты на своей поверхности содержат различные химические структуры (гликолипиды, сахариды, гликопротеины и протеины), в медицине именуемые антигенами. Человек наследует от родителей определенную карту антигенов на каждой красной клетке крови.

Антигены объединены в группы и подле этого кровь делят на несколько групп — по системе AB0, резус, Келл, Левис, Кидд, Даффи. Самые известные и значимые в работе врача — AB0 и резус-фактор (Rh).

Система AB0

Резус-принадлежность человека определяется наличием именно этих антигенов. Особо важный антиген эритроцитов – антиген D. Если он присутствует, то говорят о резус-положительной крови RhD , а если его нет – о резус-отрицательной Rhd .

Если к антигенам эритроцитов присоединится соответствующее антитело, то эритроцит разрушается – произойдет гемолиз .

Показания

Главное показание к прямому антиглобулиновому тесту — подозрение на гемолитическую анемию. Наиболее часто его проводят при первичной аутоиммунной гемолитической анемии, гемолизе при ревматических, опухолевых, инфекционных заболеваниях, гемолизе, вызванном лекарствами.

Если анемия появилась спустя несколько дней или месяцев после переливания крови или при длительной желтухе у новорожденого также делают прямую пробу Кумбса.

Непрямой антиглобулиновый тест выполняют перед переливанием крови и при беременности резус-отрицательной женщины.

Аутоиммунная гемолитическая анемия

Аутоиммунная гемолитическая анемия (первичная) – классическое аутоиммунное заболевание с неизвестными причинами. Нарушено взаимодействие внутри иммунной системы, что ведет к восприятию собственных эритроцитов как чужих. В лимфоузлах синтезируются антитела класса IgG (реагируют при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), которые присоединяясь к поверхности эритроцита запускают ряд ферментов (систему комплемента) и «продырявливают» стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу.


Первые симптомы обусловлены как разрушением эритроцитов, так и уменьшением гемоглобина. Среди них:

  • усталость, общая слабость, раздражительность
  • одышка
  • боль в животе и груди, тошнота
  • темный цвет мочи
  • боли в спине
  • желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек
  • снижение количества эритроцитов и в

Положительный результат прямой пробы Кумбса на 100% подтверждает диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, доказывая ее аутоммунное происхождение. Одновременно отрицательный результат — не дает возможности снять диагноз.

Вторичная гемолитическая анемия

Вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия и положительная проба Кумбса могут быть при следующих заболеваниях:

  • синдром Эванса
  • инфицирование пневмонии

Положительный антиглобулиновый тест при данных заболеваниях является одним из симптомов, а не критерием диагноза.

Гемолитическая болезнь новорожденного

Причина гемолитической болезни новорожденных — несовместимость группы крови у матери и плода, в большинстве случаев по системе резус, в одиночных — по системе АВ0, казуистично — по другим антигенам.

Резус-конфликт развивается, если у резус-отрицательной женщины плод унаследовал от отца резус-положительную кровь.

Заболевание у новорожденного развивается только в том случае, если мать уже выработала антитела к соответствующим антигенам, что бывает после предыдущих беременностей, абортов, переливания несовместимой крови. Наиболее частая причина запуска синтеза антител к антигенам эритроцитарной оболочки — роды (фето-материнское кровотечение). Первые роды в основном проходят без осложнений, но последующие чреваты гемолитической болезнью новорожденного в первые дни после рождения.

Симптомы гемолитической болезни новорожденного:

  • желтушность кожи
  • , и слизистых
  • увеличение печени и селезенки
  • нарушения дыхания
  • отек всего тела
  • возбуждение и постепенное угнетение центральной нервной системы

Анемия после переливания крови

Непрямую пробу Кумбса проводят перед переливанием крови для оценки совместимости, а прямую пробу Кумбса — после него при подозрении на посттрансфузный гемолиз, т.е. при наличии симптомов, таких как лихорадка, поливость (читай ниже). Цель анализа – выявить антитела к перелитым эритроцитам, которые связались с эритроцитами получившего кровь и являются причиной посттрансфузного гемолиза, а также преждевременного удаления донорских эритроцитов из кровообращения у реципиента (того, кто получил кровь).

Симптомы:

  • повышение температуры тела
  • сыпь на коже
  • боли в спине
  • красная
  • тошнота
  • головокружение


Расшифровка

Стоит напомнить, что принципиальные правила расшифровки прямого и непрямого антиглобулинового теста одинаковы. Единственное отличие — расположение антител — в крови или уже на эритроците.

  • если прямая проба Кумбса отрицательна – значит на эритроцитах не «сидит» антитело и причину симптомов следует искать дальше и провести непрямую пробу Кумбса
  • если положительный результат пробы Кумбса выявлен после переливания крови, инфекций, лекарств – положительность длится до 3 месяцев (время жизни эритроцитов 120 дней — 3 месяца)
  • положительный результат антиглобулинового теста при аутоиммунном заболевании длится месяцы и даже годы

Норма

  • прямая проба Кумбса — отрицательно
  • непрямая проба Кумбса — отрицательно

Качественно положительный результат измеряется в количестве плюсов от одного до четырех (+, ++, +++, ++++), а количественно в цифровом виде — 1:16, 1:256 и т.д.


Недостатки антиглобулинового теста

  • нельзя определить силу связывания антигена с антителом
  • неизвестно количество связанных антител
  • не определяет вид антитела
  • положительность пробы Кумбса не поможет определить ее причину
  • 0,5% здоровых людей имеют положительную пробу Кумбса без каких-либо признаков гемолитической анемии
  • не подходит для контроля успешности лечения, поскольку не укажет активность гемолиза эритроцитов

Дополнительные исследования

  • анализ крови на
  • микроскопия мазка крови
  • — ( , ), ( , )
  • — 2. 5-10-20 лет тому мне перелили кровь, стоит ли сейчас говорить об этом врачу перед новым переливанием крови?

    Да. О том, что Вы получили трансфузию крови обязательно должен знать Ваш врач, поскольку она влияет на правильность расшифровки результатов анализов сейчас. При получении чужой (хоть и много раз проверенной крови) всегда существует вероятность того, что ваше тело выработает антитела против перелитой крови. Именно данные антитела окажут отрицательное влияние на состояние здоровья. При последующих переливаниях крови врач должен знать о том, что Вы уже получали трансфузии, а значит было время для синтеза антител. Для беременных женщин данная информация еще более актуальна.

    3. Если несоответствие по резус-фактору между матерью и ребенку, будут ли больны все дети?

    Зависит на резус-положительности или отрицательности ребенка (RhD). Носители группы крови I, II, III и IV могут быть как резус-положительны, так и отрицательны. В ситуации когда мать резус-отрицательна, а ребенок резус положителен – антитела будут вырабатываться уже с первой беременностью, но только после первых родов (или прерывания беременности) произойдет прямой контакт крови матери и ребенка. Реализация гемолитического влияния антител будет только при вторых и следующих родах, что приведет к гемолитической болезни у новорожденного.

    Каждая женщина с отрицательным резус-фактором должна быть тщательно обследована во время беременности, а после родов проводится профилактическое лечение для предупреждения появления антител и дальнейших осложнений.

    4. Во время беременности нужно ли знать группу крови мужа перед проведением пробы Кумбса?

    Нужно не просто знать, но еще и проверить группу крови биологического отца ребенка во время беременности.

    Факты

    • предложена впервые в Кэмбридже в 1945 году
    • порог чувствительности — не менее 300 фиксированных молекул антител на одном эритроците
    • число антител запускающих гемолиз — индивидуально для каждого человека (от 16-30 до 300)
    • динамика других лабораторных показателей гемолитической анемии (гемоглобин, билирубин, ретикулоциты) может нормализоваться, а проба Кумбса останется на том же уровне

    Проба Кумбса was last modified: Март 16th, 2018 by Мария Бодян

Реакцию агглютинации для определения антирезусных антител (непрямую реакцию Кумбса) применяют у больных при внутрисосудистом гемолизе. У некоторых таких боль­ных обнаруживают антирезусные антитела, которые являются неполными, одновалент­ными. Они специфически взаимодействуют с резус-положительными эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Наличие таких неполных антител определяют в непрямой реакции Кумбса. Для этого в систему антирезусные антитела + резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобули­нов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов. С помощью реакции Кумбса диагностируют патологические состо­яния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов иммунного генеза, например ге­молитическую болезнь новорожденных: эрит­роциты резус-положительного плода соединя­ются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые пере­шли через плаценту от резус-отрицательной матери.

Механизм . Сложность выявления неполных (моновалентных) антител связана с тем, что эти антитела, связываясь с эпитопами специфического антигена, не образуют структуру решетки и реакция между антигенами и антителами не выявляется ни агглютина­цией, ни преципитацией, ни другими тестами. Для выявления образовавшихся комплексов антиген - антитело приходится ис­пользовать дополнительные тест-системы. Для выявления непол­ных антител, например к резус-антигену эритроцитов в сыворот­ке крови беременной женщины, реакция ставится в два этапа: 1) к двукратным разведениям испытуемой сыворотки добавляют эритроциты, содержащие резус-антиген, и выдерживают при 37 °С в течение часа; 2) к тщательно отмытым после первого этапа эритроцитам добавляют кроличью античеловеческую анти-глобулиновую сыворотку (в заранее оттитрованном рабочем раз­ведении). После инкубации в течение 30 мин при 37 °С резуль­таты оценивают по наличию гемагглютинации (положительная реакция). Необходимо ставить контроль ингредиентов реакции: 1) антиглобулиновая сыворотка + заведомо сенсибилизирован­ные специфическими антителами эритроциты; 2) обработанные нормальной сывороткой эритроциты + антиглобулиновая сыво­ротка; 3) обработанные исследуемой сывороткой резус-отрица­тельные эритроциты + антиглобулиновая сыворотка.

50. Реакция пассивной гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на использова­нии эритроцитов (или латекса) с адсорбиро­ванными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соот­ветствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеива­ние и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.

Компоненты. Для постанов­ки РНГА могут быть использованы эритроциты барана, лошади, кролика, курицы, мыши, человека и другие, которые заготавли­вают впрок, обрабатывая формалином или глютаральдегидом. Ад­сорбционная емкость эритроцитов увеличивается при обработке их растворами танина или хлорида хрома.

Антигенами в РНГА могут служить полисахаридные АГ микро­организмов, экстракты бактериальных вакцин, АГ вирусов и риккетсий, а также другие вещества.

Эритроциты, сенсибилизированные АГ, называются эритроцитарными диагностикумами. Для приготовления эритроцитарного диагностикума чаще всего используют эритроциты барана, обла­дающие высокой адсорбирующей активностью.

Применение . РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гор­мона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительнос­ти к лекарственным препаратам, гормонам и в некоторых других случаях.

Механизм . Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) отличается значительно более высокой чувствительностью и специфич­ностью, чем реакция агглютинации. Ее используют для иденти­фикации возбудителя по его антигенной структуре или для индикации и идентификации бактериальных продуктов - токси­нов в исследуемом патологическом материале. Соответственно используют стандартные (коммерческие) эритроцитарные анти­тельные диагностикумы, полученные путем адсорбции специфи­ческих антител на поверхности танизированных (обработанных танином) эритроцитов. В лунках пластмассовых пластин готовят последовательные разведения исследуемого материала. Затем в каждую лунку вносят одинаковый объем 3 % суспензии на­груженных антителами эритроцитов. При необходимости реакцию ставят параллельно в нескольких рядах лунок с эритроцитами, нагруженными антителами разной групповой специфичности.

Через 2 ч инкубации при 37 °С учитывают результаты, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): при отри­цательной реакции появляется осадок в виде компактного.диска или кольца на дне лунки, при положительной реакции - харак­терный кружевной осадок эритроцитов, тонкая пленка с неров­ными краями.