Se sabe que los microorganismos, a pesar de su “pequeño crecimiento”, también tienen “adicciones” alimentarias, una temperatura óptima, en general, un ambiente que les conviene perfectamente, donde se sienten cómodos y bien, y por lo tanto comienzan a multiplicarse y crecer intensamente.
La siembra bacteriológica o, como se le llama comúnmente, siembra en tanque, se utiliza para obtener una gran cantidad de microbios de la misma especie (cultivo puro) para estudiar sus propiedades fisicoquímicas y biológicas, para luego los datos obtenidos se pueden utilizar para el diagnóstico de enfermedades infecciosas.
Desafortunadamente, incluso ahora, los métodos populares y otros, cuya principal desventaja son los resultados falsos positivos o falsos negativos, no siempre pueden identificar el patógeno. Además, no pueden detectar fármacos antibacterianos dirigidos. Un problema similar se resuelve con un tanque de siembra, que a menudo no tiene prisa por designar, en referencia al hecho de que, por ejemplo, se cultiva lentamente y el costo del análisis es considerable. Sin embargo, ¡la salud vale la pena!
Condiciones necesarias para la alimentación y la respiración.
Los microbiólogos ahora saben que cada patógeno necesita su propio entorno "nativo", teniendo en cuenta su pH, potencial redox, viscosidad, humedad y propiedades osmóticas. Los ambientes pueden ser blandos y duros, simples y complejos, universales y poco versátiles, pero en todos los casos deben proporcionar nutrición, respiración, reproducción y crecimiento de la célula bacteriana.
ejemplo de crecimiento de microorganismos después de la inoculación en un tanque en un medio nutritivo
Algunos medios (tioglicol, Sabouraud) son adecuados para una amplia gama de microorganismos y se denominan universales. Otros están destinados solo a ciertas especies, por ejemplo, el neumococo y el Staphylococcus aureus, que producen hemolisinas, crecen en agar sangre, lo que sirve para aislar cepas particularmente "caprichosas" y, al mismo tiempo, peligrosas. Así, existen muchas variedades de medios, donde cada uno de ellos cultiva su propia gama de microorganismos.
El propósito del cultivo de microorganismos y su importancia para el diagnóstico.
Además del agua, el aire, el suelo, que contiene varios microorganismos en varias concentraciones, incluidos los que provocan enfermedades (patógenos), muchas ramas de la ciencia médica están interesadas en los microbios que viven en la piel y las membranas mucosas del cuerpo humano, que pueden ser representados por:
- Residentes permanentes, que no conlleven ningún peligro para el hombre, es decir, la microflora normal del cuerpo, sin la cual simplemente no podemos vivir. Por ejemplo, la desaparición de las bacterias que viven en los intestinos y participan en el proceso de digestión da lugar a la disbacteriosis, que no es fácil de tratar. Lo mismo ocurre con la desaparición de la microflora vaginal. Inmediatamente se puebla de microorganismos condicionalmente patógenos, gardnerella, por ejemplo, que provocan;
- flora condicionalmente patógena, que es dañino solo en grandes cantidades bajo ciertas condiciones (inmunodeficiencia). La mencionada gardnerella es una representante de este tipo de microorganismos;
- La presencia de microbios patógenos. que no están presentes en un cuerpo sano. Son ajenos al cuerpo humano, donde entran accidentalmente al contacto con otra persona (enferma) y provocan el desarrollo de un proceso infeccioso, a veces bastante grave o incluso mortal. Por ejemplo, una reunión con patógenos todavía está bien, al principio se trata, pero (¡Dios no lo quiera!) Liberará cólera, peste, viruela, etc.
Afortunadamente, muchos de ellos han sido derrotados y actualmente se encuentran "detrás de siete sellos" en laboratorios especiales, pero la humanidad en cualquier momento debe estar lista para la invasión de un enemigo invisible capaz de destruir naciones enteras. La siembra bacteriológica en tales casos juega, quizás, el papel principal en la identificación del microorganismo, es decir, la determinación del género, especie, tipo, etc. (posición toxonómica), muy importante para el diagnóstico de procesos infecciosos, incluidas las enfermedades de transmisión sexual.
Así, los métodos de siembra, como los medios nutritivos, son diferentes, sin embargo, tienen el mismo objetivo: obtener un cultivo puro sin impurezas en forma de microbios de otras clases, que viven en todas partes: en el agua, en el aire, en las superficies, en una persona y dentro de ella.
¿Cuándo se designa un tanque de siembra y cómo entender las respuestas?
El nombre del microorganismo y su cantidad.
Los pacientes no prescriben un análisis bacteriológico por sí mismos, esto lo hace un médico si tiene sospechas de que los problemas de un paciente que presenta diversas quejas están asociados con la penetración de un patógeno patógeno en el cuerpo o con una mayor reproducción de microorganismos que viven constantemente. con una persona, pero exhiben propiedades patogénicas solo en ciertas condiciones. Habiendo pasado el análisis y después de un tiempo de haber recibido una respuesta en sus manos, una persona se pierde y, a veces, incluso se asusta cuando ve palabras y designaciones incomprensibles, por lo tanto, para que esto no suceda, me gustaría dar un breve explicación sobre este tema:
Al examinar material biológico para detectar la presencia de microorganismos patógenos, la respuesta puede ser negativa o positiva ("mal tanque de siembra"), ya que el cuerpo humano es solo un refugio temporal para ellos, y no un hábitat natural.
En ocasiones, dependiendo de qué material se vaya a inocular, se puede ver el número de microorganismos expresado en unidades formadoras de colonias por ml (una célula viva dará el crecimiento de toda una colonia) - UFC/ml. Por ejemplo, el urocultivo para examen bacteriológico normalmente arroja hasta 10 3 CFU/ml de todas las células bacterianas detectadas, en casos dudosos (¡repita el análisis!) - 10 3 - 10 4 CFU/ml, con un proceso inflamatorio de origen infeccioso - 10 5 y más UFC /ml Sobre las dos últimas opciones en el habla coloquial, en ocasiones, se expresan simplemente: “Mal tanque de siembra”.
¿Cómo "encontrar control" sobre un microorganismo patógeno?
Simultáneamente con la siembra del material en tales situaciones, la microflora se siembra para la sensibilidad a los antibióticos, lo que le dará una respuesta clara al médico: qué medicamentos antibacterianos y en qué dosis "asustarán" al "intruso". Aquí también hay un descifrado, por ejemplo:
- El tipo de microorganismo, por ejemplo, el mismo E. coli en la cantidad de 1x10 ^ 6;
- El nombre del antibiótico con la designación (S) indica la sensibilidad del patógeno a este medicamento;
- El tipo de antibiótico que no actúa sobre el microorganismo se indica con el símbolo (R).
El análisis bacteriológico tiene un valor particular para determinar la sensibilidad a los antibióticos, ya que el principal problema en la lucha contra la clamidia, el micoplasma, el ureaplasma, etc. sigue siendo la selección de un tratamiento eficaz que no dañe el cuerpo y no golpee el bolsillo del paciente.
Tabla: Ejemplo alternativo de resultados de cultivo en tanque que muestran antibióticos efectivos
La preparación adecuada para el análisis bacteriológico es la clave para obtener un resultado fiable
Cualquier material biológico tomado de una persona puede ser sometido a análisis bacteriológico.(piel, sangre, semen, mucosas de la cavidad bucal, tracto respiratorio y urinario, tracto gastrointestinal, órganos de la vista, oído y olfato, etc.). La mayoría de las veces, el tanque de siembra es recetado por ginecólogos y urólogos, por lo que debe detenerse un poco.
La preparación adecuada para el cultivo bacteriológico será la clave para el resultado correcto, ya que de lo contrario habrá que retomar el análisis y esperar el tiempo señalado. Cómo donar sangre para la esterilidad de una vena es tarea de los trabajadores de la salud. Como regla general, aquí nada depende del paciente, él simplemente dobla el codo y la enfermera lo lleva a un tubo de ensayo estéril de acuerdo con todas las reglas de asepsia y antisepsia.
Otra cosa es la orina o del tracto genital. Aquí el paciente debe asegurar la primera etapa (valla), siguiendo las reglas prescritas. Cabe señalar que la orina de mujeres y hombres es algo diferente, aunque en la vejiga de ambos sexos es estéril:
- En la mujer, al pasar por la uretra, se puede captar un pequeño número de cocos no patógenos, aunque en general suele permanecer estéril;
- Para los hombres, las cosas son algo diferentes. La parte anterior de la uretra puede suministrar orina al pasar con lo siguiente:
- difteroides;
- estafilococos;
- algunas bacterias gramnegativas no patógenas, que se demostrarán posteriormente mediante análisis bacteriológico.
Sin embargo, si están en una concentración aceptable (hasta 10 3 CFU / ml), entonces no hay nada que temer, esta es una variante de la norma.
Para evitar la presencia de otros microorganismos y garantizar en la medida de lo posible la esterilidad del material extraído, antes del análisis se realiza un aseo minucioso de los órganos genitales (la entrada a la vagina en las mujeres se cierra con un bastoncillo de algodón - protección contra la entrada de los órganos genitales separados). Para el análisis, se toma una porción promedio de orina (el comienzo de la micción en el inodoro, aproximadamente 10 ml de porción mediana en un frasco estéril, terminando en el inodoro). Los pacientes necesitan saber: la orina tomada para cultivo debe procesarse a más tardar dos horas cuando se almacena a no más de 20 ° C, por lo que debe considerar el tiempo para el transporte.
Además, el material para el tanque de siembra, si es necesario, se toma de la uretra y el recto en los hombres, de la uretra, el recto, la vagina, el cuello uterino y el canal cervical, en las mujeres, pero esto sucede en un centro médico donde el paciente debe llegar. El lavado, las duchas vaginales y el uso de antisépticos en tales casos están prohibidos.
Otros temas de interés para los pacientes
Muchos pacientes están interesados en cuántos días se realiza el análisis. Es imposible responder a esta pregunta sin ambigüedades, todo depende de qué material se esté estudiando y qué patógeno se debe buscar. A veces la respuesta está lista en 3 días, a veces en una semana o incluso en 10-14 días, ya que algunas muestras requieren subcultivo a otro medio.
No pase por alto a las personas que se dirigen al tanque de siembra y la cuestión del precio del análisis. El costo aproximado en Moscú es de aproximadamente 800 a 1500 rublos. Por supuesto, puede ser mayor y depende de la amplitud del espectro de búsqueda bacteriológica. Probablemente pueda hacerse un análisis gratis durante el embarazo en la clínica prenatal, o en la clínica por razones médicas especiales.
Para mujeres embarazadas, el tanque de siembra es obligatorio, se da 2 veces(al registrarse y a las 36 semanas), mientras que se toma un hisopo no solo del tracto genital, sino también de las membranas mucosas de la nariz y la garganta. El objeto de búsqueda en este caso, además de las infecciones urogenitales, será Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), que en el período posparto puede causar muchos problemas (mastitis purulenta, etc.). Además, las mujeres embarazadas deben realizar cultivos de orina, raspado del epitelio vaginal y frotis del cuello uterino y del canal cervical.
Muchas mujeres, antes de ir al procedimiento, tienen mucho miedo de palabras tan terribles y comienzan a pensar: “¿Es esto necesario? Tal vez no vayas". Nos apresuramos a asegurar que las pruebas son absolutamente indoloras. Se toma una muestra del cuello uterino y el canal cervical con un citocepillo estéril, que no causa absolutamente ningún dolor a la mujer, pero posteriormente el tanque de siembra del s / m y s / c protegerá tanto a la futura madre como al feto de posibles complicaciones. El objeto de la búsqueda durante el embarazo son los agentes causales de la clamidia, la urea y el micoplasma, las levaduras (generalmente Candida albicans) y otros microorganismos oportunistas y patógenos.
Video: video de demostración sobre cultivo en tanque del canal cervical.
Casos especiales de particular interés para quienes toman las pruebas
Una vez en el tracto genital, los microorganismos patógenos, después de un tiempo muy corto, son dominados y comienzan su actividad dañina. Por ejemplo, los gonococos siempre patógenos (Neisseria), que son los culpables de una enfermedad bastante desagradable llamada y relacionada con las ETS, se sienten literalmente “en casa” el día 3. Comienzan a multiplicarse activamente y a moverse audazmente por el tracto genital, capturando más y más territorios nuevos. Todo el mundo sabe que la gonorrea ahora está bien tratada y casi nadie le tiene miedo. Pero primero tienes que encontrarlo. El principal método de búsqueda de esta infección es la siembra en tanque, cultivo, identificación por tinción de Gram, microscopía.
Encontrado en un frotis tomado "en la flora" del tracto genital, acostado en pares "granos de café" (diplococos), no indica la presencia de una enfermedad de transmisión sexual. Tal microflora de la vagina a menudo aparece en la posmenopausia y no significa nada malo. Un frotis tomado en condiciones no estériles en un portaobjetos de vidrio y teñido con azul de metileno o Romanovsky (citología) no puede diferenciar el microorganismo. Solo puede asumir y derivar al paciente para investigación adicional (obtención de un cultivo aislado).
Cabe señalar que si el raspado de las membranas mucosas del tracto urinario, tomado para sembrar ureaplasma, no es tan raro, los médicos a menudo evitan sembrar orina, ya que es más difícil trabajar con ella.
Crea dificultades en el diagnóstico, lo que trae un gran daño no solo durante el embarazo.. Además, la clamidia provoca muchas enfermedades que son comunes no solo a las mujeres, sino también a la población masculina, por lo que se siembra, se cultiva, se estudia, se determina la sensibilidad a la antibioticoterapia y así se combate.
Durante el embarazo, generalmente es difícil prescindir del cultivo bacteriológico, ya que muchos microorganismos, enmascarados en un frotis citológico, pueden pasarse por alto. Mientras tanto, el efecto de algunos patógenos de ETS en el feto puede ser perjudicial. Además, es mucho más difícil tratar a una mujer embarazada, y recetar antibióticos "a ojo" es simplemente inaceptable.
Métodos de siembra
Para aislar cultivos puros de patógenos, en una primera etapa se recurre a su inoculación en medios apropiados, que se realiza en condiciones especiales (¡estériles!). Básicamente, la transferencia de material al medio ambiente se lleva a cabo con la ayuda de dispositivos utilizados allá por el siglo XIX por el gran Louis Pasteur:
- bucle bacteriano;
- pipeta Pasteur;
- Varilla de vidrio.
Por supuesto, muchos instrumentos han sufrido cambios a lo largo de los 2 siglos, los plásticos estériles y desechables los han reemplazado, sin embargo, los antiguos no han quedado en el pasado, y continúan sirviendo a la ciencia microbiológica hasta el día de hoy.
La primera etapa de obtención de colonias requiere el cumplimiento de ciertas reglas:
- La siembra se realiza sobre lámpara de alcohol en caja pretratada con desinfectantes y tratamiento de cuarzo, o en gabinete laminar que asegure la esterilidad en el área de trabajo;
- La indumentaria, los guantes y el ambiente del trabajador de la salud también deben ser estériles, ya que lo contrario impide el aislamiento de cepas aisladas;
- Debe trabajar en el boxeo rápidamente, pero con cuidado, no puede hablar y distraerse, mientras que debe recordar la seguridad personal, porque el material puede ser contagioso.
Aislamiento de cepas y estudio de cultivos puros
El aislamiento de las cepas no siempre es el mismo, ya que algunos medios biológicos que se encuentran en el cuerpo humano requieren un enfoque individual, por ejemplo, el hemocultivo (sangre) primero en un medio líquido (proporción 1: 10) es ligeramente "crecido", ya que la sangre (sin diluir) puede matar los microorganismos y luego, después de un día o más, se subcultiva en placas de Petri.
La siembra de orina, lavado gástrico y otros materiales líquidos también tiene sus propias características, donde para obtener un cultivo puro, primero se debe centrifugar el líquido (¡condiciones asépticas!), Y solo luego sembrar, y no el líquido en sí, sino su sedimento. .
El cultivo y cultivo de colonias se realiza en placas Petri o se colocan primero en un medio líquido vertido en viales estériles, y luego se siembran nuevamente colonias aisladas, pero en agar inclinado y se coloca el material en un termostato por un día. Después de asegurarse de que el cultivo resultante es puro, las cepas se transfieren a un portaobjetos de vidrio, se realiza un frotis y se tiñe según Gram (más a menudo), Ziehl-Neelsen, etc., y para la diferenciación, se determina la morfología del microbio. estudiado al microscopio:
- El tamaño y la forma de la célula bacteriana;
- La presencia de cápsulas, flagelos, esporas;
- Propiedades tintóreas (la relación entre el microorganismo y la tinción) *.
* ¿El lector probablemente ha oído hablar de un patógeno como el treponema pálido? Este es el agente causal de la sífilis y, por lo tanto, apareció su nombre (pálido) porque no percibe bien la pintura y permanece ligeramente rosado cuando se tiñe según Romanovsky. Los microorganismos que no perciben los colorantes de anilina se denominan gramnegativos y los que perciben grampositivos. Las bacterias gramnegativas adquieren un color rosa o rojo mediante la tinción de Gram con colorantes adicionales (magenta, safranina).
La siembra en tanque se puede llamar un análisis antiguo, pero su popularidad no se reduce a esto, aunque la bacteriología moderna tiene la capacidad de aislar no solo cepas, sino también una sola célula, que se llama clon. Sin embargo, para obtener un clon, se necesita un dispositivo especial: un micromanipulador, que no está disponible en los laboratorios convencionales, ya que se utiliza principalmente con fines de investigación (estudios genéticos).