ידוע שלמיקרואורגניזמים, למרות "הגידול הקטן" שלהם, יש גם "התמכרויות" למזון, טמפרטורה אופטימלית, באופן כללי, סביבה המתאימה להם בצורה מושלמת, שבה הם מרגישים נוח וטוב, ולכן מתחילים להתרבות ולגדול באופן אינטנסיבי.
זריעה בקטריולוגית או כפי שנהוג לכנותה בקיצור - זריעת מיכל, משמשת להשגת מספר רב של חיידקים מאותו המין (תרבית טהורה) על מנת לחקור את תכונותיהם הפיזיקוכימיות והביולוגיות, על מנת לאחר מכן ניתן להשתמש בנתונים שהתקבלו לאבחון של מחלות זיהומיות.
למרבה הצער, גם כעת שיטות פופולריות ואחרות, שהחיסרון העיקרי בהן הן תוצאות חיוביות שגויות או שליליות שגויות, אינן תמיד יכולות לזהות את הפתוגן. בנוסף, הם אינם מסוגלים לקלוט תרופות אנטיבקטריאליות ממוקדות. בעיה דומה נפתרת על ידי מיכל זריעה, אשר לעתים קרובות אינו ממהר למנות, בהתייחס לעובדה, למשל, הוא מעובד לאט, ועלות הניתוח היא ניכרת. עם זאת, הבריאות שווה את זה!
תנאים הדרושים לאוכל ולנשימה
מיקרוביולוגים יודעים כיום שכל פתוגן זקוק לסביבה ה"מקורית" שלו, תוך התחשבות ב-pH שלו, פוטנציאל החיזור, הצמיגות, הלחות והתכונות האוסמוטיות שלו. הסביבות יכולות להיות רכות וקשות, פשוטות ומורכבות, אוניברסליות ולא מאוד מגוונות, אך בכל המקרים עליהן לספק תזונה, נשימה, רבייה וצמיחה של תא החיידק.
דוגמה לגידול מיקרואורגניזמים לאחר חיסון במיכל לתוך תווך מזין
חלק מהמדיה (תיוגליקול, Sabouraud) מתאימים למגוון רחב של מיקרואורגניזמים ונקראים אוניברסליים. אחרים מיועדים רק למינים מסוימים, למשל, פנאומוקוק ו-Staphylococcus aureus, המייצרים המוליזינים, גדלים על אגר דם, המשמש לבודד זנים "קפריזיים" במיוחד ובו בזמן, מסוכנים. לפיכך, ישנם סוגים רבים של מדיה, כאשר כל אחד מהם מגדל מגוון משלו של מיקרואורגניזמים.
מטרת הגידול של מיקרואורגניזמים ומשמעותו לאבחון
בנוסף למים, אוויר, אדמה, המכילים מיקרואורגניזמים שונים בריכוזים שונים, כולל כאלה שמביאים למחלות (פתוגניות), ענפים רבים של מדע הרפואה מעוניינים בחיידקים החיים על העור והריריות של גוף האדם, אותם ניתן לייצג. על ידי:
- תושבי קבע, שאינם נושאים כל סכנה לאדם,כלומר, המיקרופלורה הרגילה של הגוף, שבלעדיה אנחנו פשוט לא יכולים לחיות. כך למשל, היעלמותם של חיידקים החיים במעיים ומשתתפים בתהליך העיכול מובילה לדיסבקטריוזיס, שאינה קלה לטיפול. אותו הדבר קורה עם היעלמות המיקרופלורה הנרתיקית. זה מאוכלס מיד על ידי מיקרואורגניזמים פתוגניים מותנה, gardnerella, למשל, אשר גורמים;
- פלורה פתוגנית על תנאי,שמזיק רק בכמויות גדולות בתנאים מסוימים (חוסר חיסוני). הגארדנרלה הנ"ל היא נציגה של סוג זה של מיקרואורגניזמים;
- נוכחות של חיידקים פתוגנייםשאינם נמצאים בגוף בריא. הם זרים לגוף האדם, שם הם נכנסים בטעות במגע עם אדם אחר (חולה) וגורמים להתפתחות של תהליך זיהומי, לפעמים די חמור או אפילו קטלני. למשל, מפגש עם פתוגנים זה עדיין בסדר, בהתחלה זה מטופל, אבל (חס וחלילה!) זה ישחרר כולרה, מגיפה, אבעבועות שחורות וכו'.
למרבה המזל, רבים מהם הובסו ונמצאים כיום "מאחורי שבעה חותמות" במעבדות מיוחדות, אך האנושות בכל עת חייבת להיות מוכנה לפלישה של אויב בלתי נראה המסוגל להשמיד עמים שלמים. זריעה בקטריולוגית במקרים כאלה ממלאת, אולי, את התפקיד העיקרי בזיהוי המיקרואורגניזם, כלומר, קביעת הסוג, המין, הסוג וכו '. (עמדה טוקסונומית), החשובה מאוד לאבחון תהליכים זיהומיים, לרבות מחלות המועברות במגע מיני.
לפיכך, שיטות הזריעה, כמו חומרי הזנה, שונות, עם זאת, יש להן אותה מטרה: להשיג תרבות טהורה ללא זיהומים בצורה של חיידקים ממעמדות אחרים, שחיים בכל מקום: במים, באוויר, על משטחים, על אדם ובתוכו.
מתי ממנים מיכל זריעה ואיך להבין את התשובות?
שם המיקרואורגניזם וכמותו
מטופלים אינם רושמים לעצמם ניתוח בקטריולוגי, זה נעשה על ידי רופא אם יש לו חשדות שבעיותיו של מטופל המציג תלונות שונות קשורות לחדירת פתוגן פתוגני לגוף או עם רבייה מוגברת של מיקרואורגניזמים שחיים ללא הרף. עם אדם, אך מציגים תכונות פתוגניות רק בתנאים מסוימים. לאחר שעבר את הניתוח ולאחר זמן מה שקיבל תשובה בידיו, אדם הולך לאיבוד, ולעתים אף נבהל, כאשר הוא רואה מילים וכינויים בלתי מובנים, לכן, כדי שזה לא יקרה, אני רוצה לתת א. הסבר קצר בנושא זה:
כאשר בודקים חומר ביולוגי לנוכחות מיקרואורגניזמים פתוגניים, התשובה יכולה להיות שלילית או חיובית ("מיכל זריעה רע"), שכן גוף האדם מהווה עבורם מחסה זמני בלבד, ולא בית גידול טבעי.
לפעמים, תלוי באיזה חומר יש לחסן, ניתן לראות את מספר המיקרואורגניזמים המתבטאים ביחידות יוצרות מושבות למ"ל (תא חי אחד ייתן צמיחה של מושבה שלמה) - CFU / מ"ל. לדוגמה, תרבית שתן לבדיקה בקטריולוגית נותנת בדרך כלל עד 10 3 CFU/ml מכלל תאי החיידק שהתגלו, במקרים מפוקפקים (חזור על הניתוח!) - 10 3 - 10 4 CFU/ml, עם תהליך דלקתי ממקור זיהומי - 10 5 ומעלה CFU/ml על שתי האפשרויות האחרונות בדיבור, לפעמים, הן מתבטאות בפשטות: "מיכל זריעה גרוע".
איך "למצוא שליטה" על מיקרואורגניזם פתוגני?
במקביל לזריעת החומר במצבים כאלה, נזרעת המיקרופלורה לרגישות לאנטיביוטיקה, שתיתן תשובה ברורה לרופא - אילו תרופות אנטיבקטריאליות ובאילו מינונים "יפחידו" את ה"פולש". גם כאן יש פענוח, למשל:
- סוג המיקרואורגניזם, למשל, אותו E. coli בכמות של 1x10 ^ 6;
- שם האנטיביוטיקה עם הכינוי (S) מצביע על רגישות הפתוגן לתרופה זו;
- סוג האנטיביוטיקה שאינה פועלת על המיקרואורגניזם מצוין בסמל (R).
ניתוח בקטריולוגי הוא בעל ערך מיוחד בקביעת רגישות לאנטיביוטיקה, שכן הבעיה העיקרית במלחמה בכלמידיה, מיקופלזמה, אוריאה וכדומה נותרה בחירת טיפול יעיל שאינו פוגע בגוף ואינו פוגע בכיסו של המטופל.
טבלה: דוגמה חלופית לתוצאות תרבית מיכל המראות אנטיביוטיקה יעילה
הכנה נכונה לניתוח בקטריולוגי היא המפתח לתוצאה אמינה
כל חומר ביולוגי שנלקח מאדם יכול להיות נתון לניתוח בקטריולוגי.(עור, דם, זרע, ריריות של חלל הפה, דרכי הנשימה והשתן, מערכת העיכול, איברי הראייה, השמיעה והריח וכו'). לרוב, מיכל הזריעה נקבע על ידי גינקולוגים ואורולוגים, אז כדאי להתעכב עליו קצת.
הכנה נכונה לתרבית בקטריולוגית תהיה המפתח לתוצאה הנכונה, כי אחרת, יהיה צורך לבצע את הניתוח מחדש ולהמתין לזמן המיועד. איך לתרום דם לסטריליות מוריד זו המשימה של עובדי הבריאות. ככלל, שום דבר לא תלוי במטופל כאן, הוא פשוט מספק כיפוף מרפק, והאחות לוקחת אותו למבחנה סטרילית בהתאם לכל כללי האספסיס והאנטיספסיס.
דבר נוסף הוא שתן או מדרכי המין. כאן על המטופל להבטיח את השלב הראשון (גדר), בהתאם לכללים שנקבעו. יש לציין שהשתן של נשים וגברים שונה במקצת, אם כי בשלפוחית השתן של שני המינים הוא סטרילי:
- בנשים, כאשר עוברים דרך השופכה, ניתן ללכוד מספר קטן של קוקוסים לא פתוגניים, אם כי באופן כללי, הוא נשאר לעתים קרובות סטרילי;
- אצל גברים הדברים קצת שונים. החלק הקדמי של השופכה יכול לספק שתן עובר עם הפריטים הבאים:
- דיפתרואידים;
- staphylococci;
- כמה חיידקים גרם שליליים שאינם פתוגניים, שיוצגו לאחר מכן בניתוח בקטריולוגי.
עם זאת, אם הם בריכוז מקובל (עד 10 3 CFU / ml), אז אין מה לפחד, זה גרסה של הנורמה.
כדי למנוע נוכחות של מיקרואורגניזמים אחרים וכדי להבטיח את הסטריליות של החומר הנלקח ככל האפשר, אסלה יסודית של איברי המין מתבצעת לפני הניתוח (הכניסה לנרתיק בנשים סגורה עם צמר גפן - הגנה מפני חדירת איברי המין המופרדים). לצורך ניתוח, נלקחת מנה ממוצעת של שתן (תחילת הטלת שתן לשירותים, כ-10 מ"ל של הגשה בינונית בצנצנת סטרילית, מסתיים בשירותים). המטופלים צריכים לדעת: שתן שנלקח לתרבית חייב להיות מעובד לא יאוחר משעתיים כאשר מאוחסן בטמפרטורה של לא יותר מ-20 מעלות צלזיוס, אז כדאי לשקול את זמן ההובלה.
בנוסף, החומר למיכל זריעה, במידת הצורך, נלקח מהשופכה ומפי הטבעת אצל גברים, מהשופכה, פי הטבעת, הנרתיק, צוואר הרחם ותעלת צוואר הרחם - אצל נשים, אבל זה קורה במתקן רפואי שבו המטופל צריך לְהַגִיעַ. כביסה, שטיפה ושימוש בחומרי חיטוי במקרים כאלה אסורים.
נושאים אחרים המדאיגים את המטופלים
מטופלים רבים מתעניינים בכמה ימים מתבצעת הניתוח. אי אפשר לענות על שאלה זו באופן חד משמעי, הכל תלוי באיזה חומר נחקר ואיזה פתוגן יש לחפש. לפעמים התשובה מוכנה תוך 3 ימים, לפעמים תוך שבוע או אפילו 10-14 ימים, מכיוון שדגימות מסוימות דורשות תת-תרבות למדיום אחר.
אל תעקוף את האנשים הפונים למיכל הזריעה ואת שאלת מחיר הניתוח. העלות המשוערת במוסקבה היא בערך 800 - 1500 רובל. כמובן, זה יכול להיות גבוה יותר ותלוי ברוחב ספקטרום החיפוש הבקטריולוגי. סביר להניח שתוכלי לבצע אנליזה בחינם במהלך ההריון במרפאת הלידה, או במרפאה מסיבות רפואיות מיוחדות.
עבור נשים בהריון, מיכל זריעה הוא חובה, הוא ניתן 2 פעמים(בעת רישום ובשבוע 36), בעוד שספוגית נלקחת לא רק ממערכת המין, אלא גם מהריריות של האף והגרון. מושא החיפוש במקרה זה, בנוסף לזיהומים אורוגניטליים, יהיה Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), אשר בתקופה שלאחר הלידה עלול לגרום לצרות רבות (דלקת שד מוגלתית וכו'). בנוסף, נשים בהריון נדרשות לבצע תרבית שתן, גרידה של אפיתל הנרתיק ומריחות מצוואר הרחם ותעלת צוואר הרחם.
נשים רבות, לפני שהולכות להליך, חוששות מאוד ממילים נוראיות כאלה ומתחילות לחשוב: "האם זה נחוץ? אולי אל תלך." אנו ממהרים להבטיח שהבדיקות אינן כואבות לחלוטין. מריחה מצוואר הרחם ותעלת צוואר הרחם נלקחת עם ציטומברשת סטרילית, ללא כאבים לאישה, אך לאחר מכן מיכל הזריעה מהש'/מ' והש'/ג יגן הן על האם המצפה והן על העובר מפני סיבוכים אפשריים. מושא החיפוש במהלך ההריון הם הגורמים הסיבתיים של כלמידיה, אוריאה ומיקופלזמה, דמויי שמרים (בדרך כלל קנדידה אלביקנס) ומיקרואורגניזמים אופורטוניסטיים ופתוגניים אחרים.
סרטון: סרטון הדגמה על תרבית טנקים מתעלת צוואר הרחם
מקרים מיוחדים המעניינים במיוחד את הנבחנים
פעם אחת בדרכי המין, מיקרואורגניזמים פתוגניים, לאחר זמן קצר מאוד, משתלטים ומתחילים בפעילותם המזיקה. לדוגמה, גונוקוקים פתוגניים (Neisseria), שהם האשמים במחלה די לא נעימה הקרויה וקשורה למחלות מין, מרגישים "בבית" ממש ביום השלישי. הם מתחילים להתרבות באופן פעיל ולנוע באומץ במעלה דרכי המין, וללכוד עוד ועוד טריטוריות חדשות. כולם יודעים שעכשיו זיבה מטופלת היטב וכמעט אף אחד לא מפחד ממנה. אבל קודם צריך למצוא אותו. השיטה העיקרית לחיפוש זיהום זה היא זריעת טנקים, טיפוח, זיהוי באמצעות צביעת גראם, מיקרוסקופיה.
נמצא במריחה שנלקחה "על הפלורה" ממערכת המין, שוכבת בזוגות "פולי קפה" (diplococci), אינם מעידים על נוכחות של מחלת מין. מיקרופלורה כזו של הנרתיק מופיעה לעתים קרובות לאחר גיל המעבר ואינה אומרת שום דבר רע. מריחה שנלקחה בתנאים לא סטריליים על שקופית זכוכית ומוכתמת במתילן כחול או רומנובסקי (ציטולוגיה) אינה יכולה להבדיל בין המיקרואורגניזם. הוא יכול רק להניח ולהפנות את המטופל למחקר נוסף (השגת תרבית מבודדת).
יש לציין שאם גירוד מהריריות של דרכי השתן, שנלקח לזריעה על ureaplasma, אינו אירוע נדיר כל כך, אז הרופאים עצמם נמנעים לעתים קרובות מזריעת שתן, מכיוון שקשה יותר לעבוד איתו.
זה יוצר קשיים באבחון, מה שמביא נזק רב לא רק במהלך ההריון. בנוסף, כלמידיה גורמת למחלות רבות השכיחות לא רק לנשים, אלא גם לאוכלוסיית הגברים, ולכן היא נזרעת, מטפחת, נחקרת, נקבעת רגישות לטיפול אנטיביוטי וכך נלחמים בה.
במהלך ההריון, בדרך כלל קשה להסתדר עם התרבות בקטריולוגית, שכן ניתן לפספס מיקרואורגניזמים רבים, המסויים במריחה ציטולוגית. בינתיים, ההשפעה של חלק מפתוגני STD על העובר עלולה להיות מזיקה. בנוסף, הרבה יותר קשה לטפל באישה בהריון, ורישום אנטיביוטיקה "בעין" פשוט לא מקובל.
שיטות זריעה
כדי לבודד תרבויות טהורות של פתוגנים, בשלב הראשון הם נוקטים בחיסון שלהם על מדיה מתאימה, המתבצעת בתנאים מיוחדים (סטריליים!). בעיקרון, העברת החומר לסביבה מתבצעת בעזרת מכשירים ששימשו עוד במאה ה-19 את לואי פסטר הגדול:
- לולאה חיידקית;
- פיפטה פסטר;
- מוט זכוכית.
כמובן, מכשירים רבים עברו שינויים במהלך 2 המאות, פלסטיק סטרילי וחד פעמי החליפו אותם, עם זאת, הישנים לא נשארו בעבר, וממשיכים לשרת את המדע המיקרוביולוגי עד היום.
השלב הראשון של השגת מושבות דורש ציות לכללים מסוימים:
- הזריעה מתבצעת מעל מנורת אלכוהול בקופסה שטופלה מראש בחומרי חיטוי וטיפול בקוורץ, או בארון למינרי המבטיח סטריליות באזור העבודה;
- גם הבגדים, הכפפות וסביבתו של עובד הבריאות חייבים להיות סטריליים, שכן ההיפך מונע בידוד של זנים מבודדים;
- אתה צריך לעבוד באגרוף במהירות, אבל בזהירות, אתה לא יכול לדבר ולהיות מוסחת, בזמן שאתה צריך לזכור על בטיחות אישית, כי החומר יכול להיות מדבק.
בידוד זנים ולימוד תרבויות טהורות
הבידוד של הזנים אינו תמיד זהה, מכיוון שחלק מהמדיה הביולוגית שנמצאת בגוף האדם דורשת גישה אינדיבידואלית, למשל, המוקולקטורה (דם) תחילה במדיום נוזלי (יחס 1: 10) הוא מעט "מבוגר". מאז דם (לא מדולל) יכול להרוג מיקרואורגניזמים, ולאחר מכן, לאחר יום או יותר, תת-תרבות על צלחות פטרי.
גם לזריעת שתן, שטיפת קיבה וחומרים נוזליים אחרים יש מאפיינים משלהם, כאשר על מנת לקבל תרבית טהורה יש קודם כל לעבור צנטריפוגה של הנוזל (תנאים אספטיים!), ורק אז לזרוע, ולא את הנוזל עצמו, אלא את המשקע שלו. .
גידול וטיפוח מושבות מתבצע על צלחות פטרי או מונח תחילה בתווך נוזלי שנשפך לבקבוקונים סטריליים, ולאחר מכן נזרעות שוב מושבות מבודדות, אך על אגר משופע והחומר מונח בטרמוסטט למשך יום. לאחר שמוודאים שהתרבית המתקבלת טהורה, הזנים מועברים לשקופית זכוכית, מבצעים מריחה ומצביעים לפי גראם (לרוב), Ziehl-Neelsen וכו', ולצורך בידול, המורפולוגיה של החיידק היא נחקר תחת מיקרוסקופ:
- הגודל והצורה של תא החיידק;
- נוכחות של כמוסות, דגלים, נבגים;
- תכונות טינקטוריות (היחס בין המיקרואורגניזם לצביעה) *.
* הקורא כנראה שמע על פתוגן כמו טרפונמה חיוורת? זהו הגורם הגורם לעגבת, ולכן שמה (חיוור) הופיע מכיוון שהוא אינו תופס צבע היטב ונשאר מעט ורדרד כשהוא מוכתם על פי רומנובסקי. מיקרואורגניזמים שאינם תופסים צבעי אנילין נקראים גרם שלילי, ותפיסה - גרם חיובית. חיידקים גראם שליליים מקבלים צבע ורוד או אדום על ידי צביעת גראם עם צבעים נוספים (מגנטה, ספרנין).
זריעת טנקים יכולה להיקרא ניתוח עתיק, אבל הפופולריות שלה לא נופלת מזה, אם כי לבקטריולוגיה מודרנית יש את היכולת לבודד לא רק זנים, אלא גם תא בודד ממנו, שנקרא שיבוט. עם זאת, כדי להשיג שיבוט יש צורך במכשיר מיוחד - מיקרומניפולטור, שאינו זמין במעבדות קונבנציונליות, שכן הוא משמש בעיקר לצורכי מחקר (מחקרים גנטיים).