HEMAGLUTINACIJA

hemagliutinacija(iš graikų háima kraujas ir lot. agglutinatio klijavimas), eritrocitų klijavimas ir nusodinimas veikiant bakterijoms, virusams, toksinams ir kt., galinčių adsorbuotis eritrocitų paviršiuje, taip pat hemagliutininai. Vieno gyvūno eritrocitus gali agliutinuoti kito gyvūno serumas, nes jame yra normalių izohemagliutininų (antikūnų). Reakcijos pagalba G. diegti . Fenomenas G. naudojami mikrobiologiniuose ir imunologiniuose tyrimuose.

Atskirkite tiesioginį arba aktyvųjį ir netiesioginį arba pasyvųjį, G. Tiesiai G. dėl tiesioginio bakterinių ir virusinių agentų poveikio eritrocitams. Tuo pačiu metu hemagliutininai sąveikauja su mukoproteazės prigimties receptoriais, esančiais eritrocitų paviršiuje su mucinazės fermento pagalba, sukeldami antigeno adsorbciją. Dėl to eritrocitų suspensija (pavyzdžiui, vištiena) sudaro plačias nuosėdas skėčio pavidalu su nelygiais kraštais. Ši reakcija nėra specifinė, vyksta nedalyvaujant imuniniam serumui. tiesioginis G. naudojami serologiniuose tyrimuose, ypač nustatant slopinimo reakcijoje naudojamo antigeno darbinį praskiedimą G., kuris pagrįstas antigeno hemagliutinuojamojo poveikio uždelsimu imuniniam specifiniam serumui. tiesioginis G. taip pat naudojamas apytiksliai kai kurių virusinių ligų (arklių gripo, paukščių maro, Niukaslio ligos, ančių gripo) diagnostikai. netiesioginis G.(RNHA) pagrįsta įjautrintų eritrocitų (adsorbuojant ant jų esantį antigeną) gebėjimu agliutinuotis su homologiniais imuninio serumo antikūnais. Dėl didelio jautrumo ir specifiškumo netiesioginis G. jis naudojamas diagnozuoti daugelį virusinių, bakterinių ir ricketsinių ligų. Yra keletas netiesioginių modifikacijų G. antikūnų slopinimo, uždelsimo, neutralizavimo reakcijos ir kt. RNHA ir jos modifikacijų pagalba tiek antikūnai gyvūnų ir žmonių kraujo serume (naudojant žinomu antigenu įjautrintus eritrocitus), tiek antigenai (naudojant tam tikrais įjautrintus eritrocitus) antikūnų) galima aptikti . Reakcijai naudojami nuplauti skirtingų gyvūnų rūšių eritrocitai (dažniausiai avių ir vištų eritrocitai). Eritrocitų gebėjimas adsorbuoti baltyminio pobūdžio didelius molekulinius antigenus padidėja po jų apdorojimo taninu. Kad pailgėtų eritrocitų galiojimo laikas, jie konservuojami formalinu. Diagnostinės medžiagos, gautos iš formalizuotų eritrocitų, gali išlaikyti savo aktyvumą ilgą laiką. Esant jau paruoštoms eritrocitų diagnostikoms, reakcijos formulavimas labai supaprastėja. Veterinarinėje praktikoje RNGA naudojamas diagnozuoti kai kurias (daugiausia virusines) gyvūnų ligas – klasikinį paukščių marą, Niukaslio ligą, karvių raupus, arklių gripą, kiaulių ir ančių gripą, pulorozę – paukščių vidurių šiltinę ir kt. Taip pat žr.

Literatūra:
Veterinarijos laboratoriniai tyrimai, M., 1971;
Mikrobiologinių ir virusologinių tyrimų metodų vadovas, red. M. O. Birgeris 2 leidimas, M., 1973 m.

Veterinarijos enciklopedinis žodynas. - M.: "Tarybų enciklopedija". Vyriausiasis redaktorius V.P. Šiškovas. 1981 .

Sinonimai:

Pažiūrėkite, kas yra „HEMAGLIUTINACIJA“ kituose žodynuose:

hemagliutinacija- hemagliutinacija... Rašybos žodynas

hemagliutinacija- susigrūdimas, sujungimas Rusų sinonimų žodynas. hemagliutinacija daiktavardis, sinonimų skaičius: 2 agliutinacija (3) … Sinonimų žodynas

HEMAGLUTINACIJA- (iš hemo... ir lot. agglutinatio bonding) skystyje suspenduotų eritrocitų surišimas ir nusodinimas veikiant įvairiems veiksniams, pavyzdžiui, antikūnams, bakterijoms ar virusams. Hemagliutinacijos testas naudojamas diagnozuoti ...... Didysis enciklopedinis žodynas

Hemagliutinacija- eritrocitų klijavimo į plika akimi matomus agregatus procesas. G. priežastis: 1) At prie eritrocitų ir heterofilinio Ag; 2) Ab į Ag, svetimas eritrocitams, adsorbuotas jų paviršiuje (žr. Hemagliutinacijos pasyvioji reakcija); 3)... Mikrobiologijos žodynas

HEMAGLUTINACIJA- HEMAGLUTINACIJA, eritrocitų agliutinacija (sulipimas) sumaišius su homologiniais serumais. Jei žmogaus eritrocitai pakeičiami to paties žmogaus serumu, purtant gaunama vienoda suspensija. Jei vieno žmogaus raudonieji kraujo kūneliai ...... Didžioji medicinos enciklopedija

hemagliutinacija- Reiškinys, kuriuo grindžiamas antikūnų nustatymo metodas, pagrįstas jų eritrocitų agliutinacija dėl prisijungimo prie pačių eritrocitų antigenų arba kitų antigenų, dirbtinai prijungtų prie eritrocitų paviršiaus. Techninis vertėjo vadovas- (hemas + agliutinacija) eritrocitų agliutinacija ... Didysis medicinos žodynas

Hemagliutinacija- iš graikų kalbos. haimo kraujo ir lat. agliutinacijos agliutinacija), raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacijos ir vėlesnio nusėdimo procesas; sukelia hemagliutininai (žr. Hemagliutininai), bakterijos ir virusai, agentai, galintys adsorbuotis ant ... ... Didžioji sovietinė enciklopedija

hemagliutinacija- eritrocitų klijavimas (agliutinacija). Jis vystosi, įskaitant nesuderinamo kraujo perpylimą.

Hemagliutinacijos reakcija (RHA)

RGA pagrįsta tuo, kad kai kurios bakterijų ir virusų rūšys gali adsorbuotis ant skirtingų gyvūnų (ir paukščių) rūšių eritrocitų paviršiaus, todėl jie sulimpa ir sudaro agliutinatą. (tiesioginis RGA).

Antigeno (bakterijų, virusų) adsorbcija eritrocitų paviršiuje ne visada pasireiškia matomų nuosėdų susidarymu; be to, RGA yra nespecifinė, nes tos pačios gyvūnų rūšies eritrocitai gali adsorbuoti skirtingus antigenus.

Pasyviosios (netiesioginės) hemagliutinacijos (RPHA) reakcija yra specifinė. Jo nustatymui iš anksto paruošiamas eritrocitų diagnostinis tyrimas (eritrocitai, ant kurių adsorbuojamas antigenas). Šiuo tikslu steriliai paimamas avino (arba gaidžio) kraujas, defibrinuojamas ir kelis kartus plaunamas fosfatiniu buferiniu tirpalu (pH 7,2), centrifuguojant 3-5 kartus. Supernatantas pašalinamas, eritrocitų koncentracija nustatoma iki 2,5% (1:40). Į 2,5% eritrocitų suspensiją lygiu tūriu (1 ml arba 0,5 ml) įpilama tirtų mikrobų rūšių bakterijų suspensijos, kurios koncentracija yra 5-10 milijardų ląstelių 1 ml. Eritrocitai lengvai adsorbuoja polisacharidinio pobūdžio antigeną. Baltyminio pobūdžio antigenui adsorbuoti eritrocitai iš anksto apdorojami taninu, praskiedimu santykiu 1:20 000. Eritrocitai kartu su pridėtu antigenu paliekami 2 valandas termostate (37 °C) jautrinti (adsorbuoti). , po to vėl centrifuguojama 3-4 tūkst. aps./min. greičiu 5 min. su fosfatiniu buferiniu tirpalu (9.13 pav.).

Gautas eritrocitų diagnostinis tirpalas dedamas į mėgintuvėlius (arba organinio stiklo plokštės duobutes) ir į jį įpilamas standartinis imuninis serumas.

Teigiamais atvejais atsiras RGA - eritrocitų praradimas būdingų dribsnių ar granuliuotų nuosėdų pavidalu, pasiskirstęs visame mėgintuvėlio dugno paviršiuje (hemagliutinatas). Tai reiškia, kad tiriamo mikrobo (antigeno) tipas yra specifinis imunoserumo antikūnams. Neigiamais atvejais nesuklijuoti raudonieji kraujo kūneliai nusėda apačioje mažo lygaus apskritimo pavidalu.

Norėdami užtikrinti didesnį RPGA rezultatų patikimumą, uždelsta reakcija(stabdymas) hemagliutinacijos reiškinys(RZGA) arba jo modifikacija - antikūnų neutralizavimo reakcija(RIA).

Ryžiai. 9.13. Pasyvi hemagliutinacijos reakcija (schema): Er - eritrocitai: AG - antigenas: AT - antikūnas

RZGA esmė susideda iš to, kad agliutinacijos reakcija nustatoma su specifiniu diagnostiniu serumu ir tiriamu antigenu (tyriamas mikrobo tipas naudojamas kaip antigenas). Šis mišinys palaikomas 1-2 valandas 37°C temperatūroje, tada pridedami eritrocitai. Jei tiriamasis antigenas yra homologiškas diagnostiniams serumo antikūnams, jie sąveikauja tarpusavyje ir pridėję eritrocitai neagliutinuojasi – reakcijos rezultatas teigiamas. Jei tiriamasis antigenas nėra homologiškas serumo antikūnams arba jo nėra medžiagoje, tada pridėti eritrocitai adsorbuoja antigeną ir atsiranda RHA – RHA rezultatas neigiamas, tiriamo mikrobo (antigeno) tipas nenustatytas.

PH A nustatymo būdas yra tai, kad jie paima vienodus tūrius ir sumaišo diagnostinį imuninį serumą su įvairiais tiriamosios medžiagos (norimo antigeno) skiedimais, palieka kontaktuoti 1-2 valandas, tada prideda eritrocitų, įjautrintų tam tikru (žinomu) serumui būdingu antigenu. antikūnai (eritrocitų diagnostika). Kai norimas antigenas reaguoja su serumo antikūnais, jie neutralizuojami ir pridėję eritrocitai neagliutinuojasi, RHA neatsiranda – PHA rezultatas teigiamas. Jei tiriamojoje medžiagoje nėra naudojamo serumo antikūnams specifinio antigeno, antikūnai nebus neutralizuojami. Todėl, pridėjus eritrocitų diagnostiką, atsiranda eritrocitų agliutinacija (hemagliutinacija), o RHA rezultatas yra neigiamas. Antikūnų neutralizavimo testas yra labai jautrus metodas, leidžiantis nustatyti antigeną ne tik gyvų (ar žuvusių) bakterijų suspensijoje, bet ir įvairių organų gruntinio audinio suspensijoje, sergančio organizmo vietinėse ir įkaitintose sekretose bei ekskrementuose.

1. Hemagliutinacijos reakcija

(RGA)

virusų aptikimo ir identifikavimo metodas, pagrįstas tam tikrų virusų gebėjimu selektyviai agliutinuoti tam tikrų gyvūnų rūšių eritrocitus.

RHA yra pagrįstas eritrocitų sukibimo reiškiniu, kuris atsiranda veikiant įvairiems veiksniams. Atskirkite tiesioginę ir netiesioginę hemagliutinaciją. Tiesioginės hemagliutinacijos reakcijos metu eritrocitai sulimpa, kai ant jų adsorbuojami tam tikri antigenai, pavyzdžiui, virusai.

Serologiniuose tyrimuose naudojama tiesioginė hemagliutinacijos slopinimo reakcija, kai iš paciento išskirtas virusas neutralizuojamas specifiniu imuniniu serumu, o vėliau sujungiamas su raudonaisiais kraujo kūneliais. Hemagliutinacijos nebuvimas rodo viruso ir naudojamo imuninio serumo atitikimą.

Netiesioginė hemagliutinacijos reakcija (pasyvi hemagliutinacija) stebima, kai iš anksto įvairiais antigenais apdoroti (įjautrinti) eritrocitai papildomi imuniniu serumu arba paciento serumu, turinčiu atitinkamų antikūnų. Vyksta specifinis eritrocitų jungimasis, jų pasyvi hemagliutinacija.

Netiesioginės, arba pasyviosios, hemagliutinacijos reakcija yra pranašesnė už kitus serologinius metodus jautrumu ir specifiškumu, ji naudojama bakterijų, riketsijų ir pirmuonių sukeltų infekcijų diagnostikai.

Netiesioginės hemagliutinacijos reakcijos nustatymo metodas susideda iš kelių etapų. Pirmiausia eritrocitai nuplaunami izotoniniu natrio chlorido tirpalu, po to, jei reikia (naudojant baltyminio pobūdžio antigenus), apdorojami 1:20 000 tanino tirpalu ir įjautrinami tirpiais antigenais. Išplovus buferiniu izotoniniu natrio chlorido tirpalu, eritrocitų antigenas yra paruoštas naudoti. Tiriamasis serumas skiedžiamas izotoniniu natrio chlorido tirpalu mėgintuvėliuose arba specialiose plastikinėse plokštelėse su skylutėmis, po to į kiekvieną serumo skiedimą pridedama eritrocitų diagnostinė medžiaga. Į netiesioginės hemagliutinacijos reakcijos rezultatus atsižvelgiama pagal vamzdelio apačioje susidariusių eritrocitų nuosėdų pobūdį. Teigiamas laikomas reakcijos rezultatas, kai eritrocitai tolygiai padengia visą mėgintuvėlio dugną. Esant neigiamai reakcijai, eritrocitai mažo disko arba „mygtuko“ pavidalu yra mėgintuvėlio dugno centre.

RHA vartojimas

RGA naudojamas virusų indikacijai (aptikimui) atliekant indikacinę diagnostiką, virusų titravimui pagal hemagliutinacijos savybes (hemagliutinacijos vienetų – AU nustatymas).

Viruso adsorbcija

Virusų sukeltos agliutinacijos reiškinio pagrindas yra virusų adsorbcija eritrocitų paviršiuje, lydima pastarųjų klijavimo (agliutinacijos) ir kritulių.

RGA antigenas

Kaip RHA antigenas imama bet kokia medžiaga (patologinė medžiaga organų suspensijos pavidalu, medžiaga iš užkrėstos erkinio encefalito, audinių kultūros ir kt.), kurioje tikimasi viruso. Medžiaga turi būti skysta, be didelių dalelių.

Orientacinės RGA nustatymas

Norint nustatyti apytikslę RGA, vienas lašas viruso turinčios medžiagos užlašinamas ant švaraus ir gerai nuriebalinto stiklelio, į jį įlašinamas vienas lašas 5% eritrocitų suspensijos ir sumaišoma su stikline lazdele.

RHA reakcijos įvertinimas

Įvertinkite reakciją kryželiais (pliusais). Vertinant reakciją kryžmuose, atkreipiamas dėmesys į nuosėdų pobūdį. Jei eritrocitai plonu sluoksniu nusėdo tolygiai išilgai vamzdelio dugno (skėčio pavidalu), reakcija vertinama keturiais kryžiais.

2. Hemagliutinacijos slopinimo reakcija- serologinė reakcija, pagrįsta antikūnų gebėjimu užkirsti kelią eritrocitų agliutinacijai dėl hemagliutinuojančių virusų tipų (adenovirusų, arbovirusų, kai kurių enterovirusų, gripo ir paragripo virusų, tymų, reovirusų). Specifiniai antivirusiniai antikūnai sąveikauja su šių virusų virionų hemagliutininų paviršiaus molekulėmis ir blokuoja jų prisijungimą prie papildomų eritrocitų membranos molekulių.

Pastaruoju metu reakcija buvo plačiai naudojama klinikinės virusologijos laboratorijose, siekiant nustatyti specifinių antikūnų prieš tam tikrus virusus titrus, taip pat serologiniam virusų izoliatų identifikavimui ir tipavimui iš pacientų klinikinės medžiagos. Naudojimas yra šiek tiek ribotas, nes žmonių kraujo serume yra nespecifinių virusų inhibitorių, taip pat natūralių antikūnų - agliutininų.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija (RTGA). Nepaisant pavadinimo, reakcijos principas daugeliu atžvilgių panašus į virusų PH, nes jis pagrįstas AT gebėjimu surišti įvairius virusus ir juos neutralizuoti, todėl eritrocitai negali agliutinuotis. Vizualiai šis poveikis pasireiškia hemagliutinacijos „slopinimu“. RTHA naudojamas diagnozuojant virusines infekcijas, siekiant nustatyti specifinius antihemagliutininus ir identifikuoti įvairius virusus pagal jų hemagliutininus, pasižyminčius Ag savybėmis.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija

(RTGA)

viruso nustatymo arba antivirusinių antikūnų nustatymo paciento kraujo serume metodas, pagrįstas eritrocitų agliutinacijos nebuvimo reiškiniu, kai preparatas, turintis virusą, esant jam imuniniam kraujo serumui.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija. Mechanizmas ir praktinis panaudojimas.

Daugelis virusų turi galimybę agliutinuoti griežtai apibrėžtų žinduolių ir paukščių rūšių eritrocitus. Taigi, gripo ir kiaulytės virusai agliutinuoja viščiukų, jūrų kiaulyčių ir žmonių eritrocitus, o adenovirusai – žiurkių ir pelių eritrocitus. Šiuo atžvilgiu, norėdami juos aptikti pacientų ar ląstelių kultūrų, embrionų ir gyvūnų medžiagoje, jie įdėjo hemagliutinacijos reakcija(RGA). Norėdami tai padaryti, tablečių šuliniuose paruošiami dvigubai didėjantys virusų turinčių medžiagų ir skysčių skiedimai, į juos įpilant eritrocitų suspensijų, išplautų izotoniniu NaCl tirpalu. Norint kontroliuoti spontanišką agliutinaciją, eritrocitai sumaišomi su tokiu pat kiekiu izotoninio NaCl tirpalo. Mišiniai inkubuojami termostate 37°C temperatūroje arba kambario temperatūroje.

Į RHA rezultatus atsižvelgiama pagal eritrocitų agliutinacijos pobūdį po 30-60 minučių, kai paprastai jie visiškai nusėda kontrolėje. Teigiama reakcija rodoma pliusais. „++++“ – skėčio formos nuosėdos, „+++“ – nuosėdos su tarpais, „++“ – nuosėdos su dideliais tarpais, „+“ – flokuliuojančios nuosėdos, apsuptos susikaupusių eritrocitų zonos, ir „–“ – tos pačios ryškiai apibrėžtos eritrocitų nuosėdos „mygtuko“ pavidalu, kaip ir kontrolinėje

Kadangi RGA yra specifinė grupei, ji neleidžia nustatyti virusų rūšių. Jie tapatinami su hemagliutinacijos slopinimo reakcijos(RTGA). Jam nustatyti naudojami žinomi imuniniai antivirusiniai serumai, kurie skiedžiami izotoniniu natrio chlorido tirpalu du kartus mažėjančia koncentracija ir supilami į šulinėlius. Į kiekvieną skiedimą įpilamas vienodas kiekis viruso turinčio skysčio. Kontrolė yra viruso suspensija izotoniniame natrio chlorido tirpale. Lėkštelės su serumo ir viruso mišiniu laikomos termostate 30 minučių arba kambario temperatūroje 2 valandas, po to į kiekvieną įpilama eritrocitų suspensijos. Po 30 minučių nustatomas neutralizuojančio serumo titras (t.y. jo maksimalus praskiedimas), dėl kurio sulėtėjo eritrocitų agliutinacija.

RTGA naudojamas serologinei virusinių ligų, ypač gripo ir adenovirusinių infekcijų, diagnostikai. Geriau dėti taip, kaip pH, su poriniais serumais. Keturis kartus padidėjęs antikūnų titras antrajame serume patvirtina įtariamą diagnozę.

3. Serologinis tyrimas leidžia nustatyti diagnozę, jei pacientų serume aptinkami specifiniai antikūnai. Serologinėms reakcijoms atlikti naudojami suporuoti serumai, kurie imami pirmosiomis dienomis nuo ligos pradžios ir po 1–3 savaičių, tačiau tiriami tuo pačiu metu. Antikūnų titro padidėjimas 4 ar daugiau kartų turi diagnostinę reikšmę. RTGA, RN, RSK, RTGads, RIF, RIA, ELISA nustatomi su antigenais (diagnostikais), paruoštais iš atitinkamų virusų etaloninių padermių.

4. Suporuotas – tai reiškia, kad kraujas imamas du kartus su tam tikru laiko intervalu. Padidinus antikūnų titrą, nustatoma, kad įvyko infekcija. Jei antikūnų titras nekinta, vadinasi, šie antikūnai organizme buvo jau seniai, nėra naujos infekcijos.

Didžiausia diagnostinė vertė yra porinių serumų, paimtų iš gyvūnų ligos pradžioje ir pabaigoje (su 14-21 dienos intervalu), tyrimas. Serumas surenkamas į sterilius mėgintuvėlius ir laikomas analizei.

apibūdinimas

Kiaulių parvovirusinės ligos diagnostikos rinkinys skirtas aptikti parvoviruso antigeną abortuotų vaisių vidaus organų suspensijoje atliekant hemagliutinacijos testą (HA) ir specifinius antikūnus kiaulių, taip pat naujagimių paršelių kraujo serume (prieš vartojant priešpienis) atliekant hemagliutinacijos slopinimo testą (HA). Reakcija mikrometodu įdedama į polistireno plokštelių šulinėlius. polistireno 96 šulinėlių plokštelės imunologinėms reakcijoms; specifinio antigeno inaktyvuotas, turintis hemagliutinuojantį aktyvumą bent 1:128; specifinis serumas, kurio aktyvumas RTGA ne mažesnis kaip 1:256; serumas normalus (neigiama kontrolė).

Analizės laikas:

RGA - 2,5-3,5 valandos, RTGA - 3,5-4,5 valandos (neįskaitant laiko, skirto medžiagai ruošti tyrimui).

Metodo principas:

Hemagliutinacijos reakcija (RHA) pagrįsta eritrocitų, suspenduotų skystyje, sukibimu, veikiant hemagliutinuojančioms viruso savybėms, ir birių nuosėdų susidarymu skėčio pavidalu. RTGA esmė yra neutralizuoti hemagliutinuojančias viruso savybes specifiniais antikūnais, esančiais kraujo serume, dėl to eritrocitai nesulimpa ir nusėda ant dugno, sudarydami tankias nuosėdas mygtuko pavidalu. .

Laikymo sąlygos

Rinkinys laikomas sausoje, tamsioje vietoje 2–8°C temperatūroje. Ištirpę rinkinio komponentai gali būti laikomi užšaldyti 1 mėnesį, pakartotinis užšaldymas neleidžiamas.

Geriausias iki data

Eritrocitai (arba latekso dalelės) su adsorbuotais antigenais sąveikauja su atitinkamais kraujo serumo antikūnais, todėl eritrocitai sulimpa ir iškrenta į vamzdelio ar ląstelės dugną šukuotų nuosėdų pavidalu. Esant neigiamai reakcijai, eritrocitai nusėda mygtuko pavidalu. Agliutinacijos reakcija gali būti atliekamas mikrovariantu 96 šulinėlių plokštelės ląstelėse imunologiniams tyrimams su kūginiu dugnu. Į tabletės šulinėlius įpilama 0,05 ml FSB (pH 7,2-7,4) ir ruošiami dvigubi tiriamo kraujo serumo skiedimai santykiu 1:2 ir daugiau. Tada į kiekvieną ląstelę įpilama 0,005 ml grybų ląstelių suspensijos, kurios koncentracija yra 100 000 grybelio ląstelių 1 ml. Tabletė švelniai purtoma ir inkubuojama 2 valandas termostate 37°C temperatūroje, o po to 16-18 valandų 4°C temperatūroje. Kaip neigiama kontrolė naudojamas normalus (neigiamas) kraujo serumas ir FSB. Į reakcijos rezultatus atsižvelgiama naudojant mikroskopą ir vizualiai ir nustatomi kryžiais pagal šią schemą: (++++) - visiškas skysčio nušvitimas ir agliutinato susidarymas skylės apačioje apversto "skėčio" pavidalu, sukratant "skėtis" suyra į dribsnius; (+++) - nepilnas skysčio nušvitimas ir aiškiai apibrėžtas "skėtis"; (++) - pastebimas skysčio nušvitimas, "skėtis" išreikštas saikingai; (+) - vos pastebimas skystas nušvitimas, "skėtis" silpnai išreikštas; ( - ) - neigiamas rezultatas, skystis nepasidarė skaidrus, šulinio dugne susidaro mygtuko formos nuosėdos, šiek tiek purtant susidaro vienoda suspensija. Antikūnų titras buvo paimtas kaip paskutinis tiriamojo serumo skiedimas, kuriame įvyko mažiausiai dviejų kryžių (++) agliutinacija.

Agliutinacijos reakcija- tai imuninė antigeno sąveikos su antikūnais reakcija esant elektrolitams, o antigenas yra korpuskulinės būsenos (eritrocitai, bakterijos, latekso dalelės su adsorbuotais antigenais). Agliutinacijos metu korpuskuliniai antigenai yra suklijuojami antikūnais, o tai pasireiškia flokuliuojančių nuosėdų susidarymu. Dribsnių susidarymas atsiranda dėl to, kad antikūnai turi du aktyvius centrus, o antigenai yra daugiavalenčiai, t.y. turi daug antigenų determinantų. RA naudojamas nustatyti patogeną, išskirtą iš paciento medžiagos, taip pat aptikti antikūnus prieš patogeną paciento kraujo serume (pavyzdžiui, Wright ir Huddleson reakcijas sergant brucelioze, Vidalio reakcija sergant vidurių šiltine ir paratifiu). ).

Lengviausias būdas nustatyti RA yra reakcija ant stiklo, tai yra apytikslis RA, kuris naudojamas nustatant iš paciento išskirtą patogeną. Nustatant reakciją ant stiklelio, užtepamas diagnostinis agliutinuojantis serumas (atskiedus 1:10 arba 1:20), tada įvedamas paciento kultūra. Reakcija teigiama, jei laše atsiranda flokuliuojančių nuosėdų. Šalia dedama kontrolė: vietoj serumo užlašinamas lašas natrio chlorido tirpalo. Jeigu diagnostinis agliutinuojantis serumas yra neadsorbuotas 1, tai jis skiedžiamas (iki titro – skiedimo iki kurio turėtų įvykti agliutinacija), t.y. išplėstą RA įdėkite į mėgintuvėlius su didėjančiais agliutinuojančio serumo praskiedimais, į kuriuos įlašinami 2-3 lašai iš paciento išskirto sukėlėjo suspensijos. Į agliutinaciją atsižvelgiama pagal nuosėdų kiekį ir skysčio skaidrumo laipsnį mėgintuvėliuose. Reakcija laikoma teigiama, jei agliutinacija pastebima praskiedimu, artimu diagnostinio serumo titrui. Reakciją lydi kontrolinės medžiagos: serumas, praskiestas izotoniniu natrio chlorido tirpalu, turi būti skaidrus, mikrobų suspensija tame pačiame tirpale turi būti tolygiai drumsta, be nuosėdų.

Norint nustatyti ligos sukėlėjo antikūnus paciento kraujo serume, naudojamas išplėstas RA. Įdėjus jį į mėgintuvėlius, paciento kraujo serumas atskiedžiamas ir į mėgintuvėlius įpilama tiek pat diagnostinės suspensijos (žuvusių mikrobų suspensijos). Po inkubacijos nustatomas didžiausias serumo praskiedimas, kuriam esant įvyko agliutinacija, t.y. susidarė nuosėdos (serumo titras). Šiuo atveju agliutinacijos reakcija su O-diagnosticum (bakterijos žūsta kaitinant, išlaiko termostabilų O-antigeną) vyksta smulkiagrūdės agliutinacijos forma. Agliutinacijos reakcija su H-diagnosticum (bakterijos, naikinamos formalinu, išlaikančios karščiui labilų žiuželinį H-antigeną) yra stambiagrūdė ir vyksta greičiau.

Netiesioginės (pasyviosios) hemagliutinacijos reakcija(RNGA arba RPGA) yra RA tipas. Šis metodas yra labai jautrus. RNGA pagalba galima išspręsti dvi užduotis: nustatyti antikūnus paciento kraujo serume, prie kurio pridedama antigeninė eritrocitų diagnostinė medžiaga, tai yra eritrocitai, ant kurių adsorbuojami žinomi antigenai; nustatyti antigenų buvimą tiriamojoje medžiagoje. Šiuo atveju reakcija kartais vadinama atvirkštine netiesiogine hemagliutinacijos reakcija (RONGA). Statuojant į tiriamąją medžiagą pridedama antikūnų eritrocitų diagnostinė medžiaga (eritrocitai, kurių paviršiuje adsorbuoti antikūnai). Eritrocitai šioje reakcijoje veikia kaip nešikliai ir pasyviai dalyvauja formuojant imuninius agregatus. Esant teigiamai reakcijai, pasyviai suklijuoti eritrocitai uždengia šulinio dugną lygiu sluoksniu nupjautais kraštais („skėtis“); nesant agliutinacijos, eritrocitai kaupiasi centrinėje skylės įduboje, sudarydami kompaktišką „mygtuką“ su aiškiai apibrėžtais kraštais.

Koagliutinacijos reakcija naudojamas patogeninėms ląstelėms (antigenams) aptikti naudojant adsorbuotus antikūnus Staphylococcus aureus, turintis baltymo A. Baltymas A turi afinitetą imunoglobulinų Fc fragmentui. Dėl šios priežasties antikūnai prie stafilokoko jungiasi netiesiogiai per Fc fragmentą, o Fab fragmentai yra orientuoti į išorę ir gali sąveikauti su atitinkamais iš pacientų išskirtais mikrobais. Tokiu atveju susidaro dribsniai.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija (HITA) naudojami diagnozuojant virusines infekcijas ir tik hemagliutinuojančių virusų sukeltas infekcijas. Šių virusų paviršiuje yra baltymo – hemagliutinino, kuris yra atsakingas už hemagliutinacijos reakciją (RHA), kai pridedama prie eritrocitų virusų. RTGA susideda iš virusų antigenų blokavimo antikūnais, dėl kurių virusai praranda gebėjimą agliutinuoti raudonuosius kraujo kūnelius.

Kumbso reakcija - RA, skirtas nepilniems antikūnams aptikti. Sergant kai kuriomis infekcinėmis ligomis, pavyzdžiui, brucelioze, paciento kraujo serume cirkuliuoja nepilni ligos sukėlėjo antikūnai. Neužbaigti antikūnai vadinami blokuojančiais, nes jie turi vieną antigeno surišimo vietą, o ne dvi, kaip pilni antikūnai. Todėl, pridėjus antigeninį diagnostiką, nepilni antikūnai jungiasi su antigenais, bet jų nesulipina. Reakcijai pasireikšti pridedamas antiglobulino serumas (antikūnai prieš žmogaus imunoglobulinus), kuris sukels pirmajame reakcijos etape susidariusių imuninių kompleksų (antigeninių diagnostinių + nepilnų antikūnų) agliutinaciją.

Netiesioginė Kumbso reakcija naudojama pacientams, kuriems yra intravaskulinė hemolizė. Kai kuriems iš šių pacientų randami nepilni monovalentiniai antireuso antikūnai. Jie konkrečiai sąveikauja su Rh teigiamais eritrocitais, bet nesukelia jų agliutinacijos. Todėl į anti-Rh antikūnų + Rh teigiamų eritrocitų sistemą pridedamas antiglobulino serumas, kuris sukelia eritrocitų agliutinaciją. Taikant Kumbso reakciją, diagnozuojamos patologinės būklės, susijusios su imuninės kilmės eritrocitų intravaskuline lize, pavyzdžiui, naujagimio hemolizinė liga dėl rezus konflikto.

RA kraujo grupėms nustatyti pagrįstas eritrocitų agliutinacija imuninio serumo antikūnais prieš A (II), B (III) kraujo grupių antigenus. Kontrolė – serumas, kuriame nėra antikūnų, t.y. serumo AB (IV) kraujo grupės ir A (P) ir B (III) grupių eritrocitų antigenai. 0(I) grupės eritrocitai naudojami kaip neigiama kontrolė, nes jie neturi antigenų.

Rh faktoriui nustatyti naudojami anti-Rh serumai (bent dvi skirtingos serijos). Esant Rh antigenui ant tiriamų eritrocitų membranos, įvyksta šių ląstelių agliutinacija.

Hemadsorbcijos reakcija(RGAD). Hemadsorbcija – tai eritrocitų sujungimas su viruso paveiktų ląstelių paviršiumi, pagrįstas viruso receptorių, esančių paveiktos ląstelės paviršiuje, ryšiu su eritrocitų receptoriais, dėl kurio atsiranda jų tarpusavio sukibimas, panašus į hemagliutinacijos reakciją. Šios reakcijos pranašumas yra tas, kad ji tampa teigiama net prieš atsirandant ryškiems citopatiniams pokyčiams užkrėstose ląstelėse.

Skiriasi adsorbcijos tipas (difuzinis, židininis), sorbuotų eritrocitų tipas (žmogus, beždžionės, jūrų kiaulytės ir kt.), temperatūra, kurioje vyksta reakcija (37 °C, 0 °C), buvimas. eliuavimo (taip, ne) . G. galima sulėtinti iš anksto inkubuojant virusu užkrėstas to-ry ląsteles su virusui būdingu antiserumu. G. slopinimo reakcija naudojama virusų identifikavimui.