Raziskave z metodo ifa dekodiranja. ELISA: kakšna študija, kdaj in kako se izvaja in kaj pokaže? V

Z napredkom sodobne medicine je možno opraviti bolj poglobljeno diagnostiko v primeru suma na določene patologije pri pacientu. Ena od informativnih metod laboratorijskih raziskav je bila analiza ELISA, ki se izvaja z odvzemom venske krvi. To pomeni, da se za bolnika kot celoto nič ne spremeni. Toda laboratorijski pomočnik ELISA izvaja zapleteno tehniko za preučevanje zbranega biomateriala. Kaj so analize ELISA in kakšne so podrobnosti uporabe metode ELISA kot diagnostične, razumemo spodnji material.

Kaj je encimski imunski test?

Proizvodnja protiteles izzovejo sami antigeni, ki so vstopili v človeško telo. Ko vstopijo v »bitko« za zdravje telesa, se protitelesa tako rekoč označijo z antigeni, kar laboratorijski pomočnik vidi v krvni preiskavi. To pomeni, da je v zbranem biomaterialu mogoče slediti ne le prisotnosti okužbe, temveč tudi njene sledi po popolnem okrevanju telesa.


Tako lahko lečeči zdravnik s predpisovanjem encimskega imunskega testa bolniku spremlja trajanje okužbe, stopnjo njenega napredovanja ali ugotovi prisotnost imunosti na določeno okužbo.

Diagnostični postopek ELISA izgleda takole:

  • Odvzeto vensko kri v laboratoriju spravimo v stanje krvnega seruma;
  • Nato laboratorijski asistent uporabi poseben pladenj s celicami, od katerih vsaka že vsebuje vse potrebne antigene. Dovolj je le, da v vsako celico spustite krvni serum in spremljate reakcijo imunoglobulinov (protiteles) na antigene. Prisotnost "želene" reakcije je označena s spremembo barve preučevanega materiala. V prihodnosti laboratorijski pomočnik preučuje optično gostoto preučevanega medija.
  • Askariaza in enterobioza (okrogli črvi in ​​pinworms);
  • trihineloza;
  • Opisthorchiasis v akutni in kronični obliki;
  • Giardiasis;
  • amebioza;
  • toksoplazmoza;
  • Lišmanioza v kateri koli obliki.

Pomembno: encimski imunski test je lahko kvalitativni in kvantitativni. V prvem primeru laboratorijski pomočnik le potrdi ali ovrže prisotnost želene snovi v krvi. V drugem primeru je kot rezultat analize navedena njegova koncentracija v telesu pacienta.

Slabosti metode

Ob vseh prednostih te diagnostične metode je treba razumeti, da encimski imunski test ni način za odkrivanje vzroka bolnikove bolezni, temveč le metoda za potrditev diagnoze, ki jo je navedel lečeči zdravnik. In glede na to, da je študija precej draga, jo je treba uporabljati pametno. V tem primeru mora rezultate študije razlagati le usposobljen specialist.


Dešifriranje rezultatov

Potem ko smo razstavili kratico IFA in kaj je ─ ugotovili, je vredno preiti na interpretacijo rezultatov. Tukaj je pomembno razumeti, da če je bila analiza izvedena kvalitativno, bo rezultat le pozitiven ali negativen. To pomeni, da diagnoza potrdi zdravnikove sume o določeni diagnozi ali jih ovrže. V tem primeru bo obrazec vseboval simbole "+" oziroma "-".


Pomembno: Negativen rezultat testa ne pomeni vedno odsotnosti okužbe. Dejstvo je, da lahko protitelesa proti antigenom nastanejo v 14 dneh po okužbi in verjetno še niso nastala.

Če se izvede kvantitativna analiza, se tukaj določi vrsta protiteles, njihovo število in stopnja aktivnosti. Zlasti s takšno diagnozo se določijo protitelesa (imunoglobulini) IgG in IgM, ki se tvorijo v različnih obdobjih napredovanja okužbe. Najpogostejši rezultati v tem primeru so:

  • Povišan IgM in popolna odsotnost IgG. Ta slika kaže na nedavno okužbo in akutno fazo patologije.
  • Povečana aktivnost obeh vrst imunoglobulinov (IgM in IgG). Govori o dolgotrajnem in kroničnem poteku infekcijskega procesa.
  • Aktivnost IgG in popolna odsotnost IgM. Okužba je bila pred vsaj šestimi meseci in zdaj je virus v dolgotrajni kronični fazi.
  • Odsotnost protiteles IgG in IgA. Rezultat je nedefiniran.
  • Odsotnost protiteles IgM, IgA in IgG. Kaže na pomanjkanje imunosti na določeno okužbo.
  • Aktivnost protiteles IgG, IgM in IgA kaže na poslabšanje kroničnega procesa.

Laborant v posebnem stolpcu obrazca poleg določitve vrst protiteles navede tudi njihovo število na volumen krvi. Ne pozabite, da ko razumete, kaj je metoda ELISA, rezultatov ne interpretirajte sami. Dobljene rezultate lahko natančno interpretira le lečeči zdravnik, odvisno od predlagane diagnoze, zgrajene na podlagi klinične slike bolnika.

Razvoj sodobne medicine v svetu diagnostike nikoli ne preneha presenetiti s svojimi dosežki in zdaj zdravniku ni treba sklepati o verjetni diagnozi, temveč se opira le na posredne znake. Ustvarjanje in uvedba v svet laboratorijskih študij encimsko vezanega imunskega testa (ELISA) vam omogoča hitro in natančno določanje ne le prisotnosti patogena, temveč tudi številnih drugih značilnosti bolezni.

Zgodovina nastanka in razvoja IFA

Ta metoda testiranja krvi se je začela uporabljati v praktični medicini sredi prejšnjega stoletja - nekje v 60. letih prejšnjega stoletja. Njen začetni cilj je bilo znanstveno raziskovanje na področju histologije, ki je bilo omejeno na iskanje in proučevanje celične antigenske strukture bioloških vrst. Krvni test ELISA temelji na interakciji sorodnih antigenov (AG) in specifičnih protiteles (AT), s tvorbo kompleksa "antigen-protitelo", ki ga določa encim.

Ta pojav je znanstvenike spodbudil k odločitvi, da je mogoče metodo uporabiti za prepoznavanje beljakovinskih spojin različnih razredov, ki nastanejo v krvnem serumu, ko patogen vstopi v telo. Zaradi neposredne vpletenosti v delovanje imunskega sistema so te spojine poimenovali imunoglobulini (IG, Ig), odkritje pa je pomenilo največji preboj v laboratorijski diagnostiki.

Hkrati se je ta zelo občutljiva metoda začela aktivno uporabljati šele v 80. letih prejšnjega stoletja in je bila na voljo le v visoko specializiranih zdravstvenih ustanovah. Postaje in transfuzijski centri, venerične in infekcijske bolnišnice so bile prve, ki so imele možnost uporabljati encimske imunske analizatorje. To je bilo posledica hitrega širjenja »kuge 20. stoletja« – aidsa, zato so bili potrebni nujni diagnostični in terapevtski ukrepi.

Možnosti tehnike

Obseg krvnega testa ELISA je precej širok - trenutno si ni mogoče predstavljati, kako težko bi bilo iskati vzroke številnih bolezni. Takšna študija se danes uporablja v skoraj vseh vejah medicine, tudi v onkologiji. Čeprav je nepoučenemu težko razumljivo, je bilo v nekaterih primerih po izvedbi mogoče rešiti življenje bolnikov z odkritjem tumorja v zgodnjih fazah.

Pomembno! ELISA je krvni test, ki prikazuje označevalce, značilne za nekatere maligne procese, kar vam omogoča odkrivanje bolezni v časovni fazi, ko ni predmet nobene druge metode.

V sodobnih diagnostičnih centrih laboratorijske preiskave ne predstavljajo le tumorski markerji - opremljeni so z impresivnim arzenalom plošč za izvajanje te diagnoze. Z njihovo pomočjo lahko določite številna patološka stanja, kot so hormonske nenormalnosti in infekcijski procesi različnega izvora.

Poleg tega bo izvajanje in dešifriranje krvnega testa ELISA omogočilo spremljanje učinka zdravil na telo bolne osebe in celo živali. Slednji se pogosto uporablja v veterinarskih klinikah, saj pomaga ohranjati zdravje naših hišnih ljubljenčkov ali hranilcev, zagotavlja stabilno preskrbo z mesom, mlečnimi izdelki in jajci, ki so nepogrešljivi v prehrani.

Torej, kot rezultat odvzema le nekaj mililitrov venske krvi in ​​diagnosticiranja z metodo ELISA, bo zdravnik po opisu raziskovalnega materiala lahko ugotovil:

  • hormonsko stanje, vključno z biološko aktivnimi snovmi spolnih in ščitničnih žlez ter nadledvičnih žlez;
  • prisotnost bakterijske in virusne okužbe (hepatitis B in C, sifilis, herpes, klamidija, tuberkuloza, miko- in ureaplazmoza, HIV, TORCH) in druge bolezni te narave;
  • znaki vitalne aktivnosti patogenov patološkega procesa, ki se je končal z okrevanjem in prešel v fazo tvorbe protiteles (imunski odziv).

Takšne komplekse imunske celice veliko lažje prepoznajo in odpravijo. Preostali učinki v obliki protiteles v več primerih ostanejo v krvi vse življenje, kar praktično zmanjša tveganje ponovne okužbe na nič.

Različne vrste imunoglobulinov

Obstaja več vrst protiteles in vsako od njih je v določeni fazi vključeno v proces imunskega odziva. Na primer, imunoglobulini razreda M (IgM) so prvi, ki nastanejo kot odgovor na zaužitje antigena v telesu. Njihove najvišje stopnje so opažene v prvih dneh bolezni.

Vrste imunoglobulinov, ki se uporabljajo pri testu ELISA

Imunski sistem nato v plazmo izstreli IG razreda G (IgG), ki so odgovorni za popolno uničenje antigenov in ozdravitev bolnika. Kasneje ostanejo v krvi in ​​s tem pripravijo imunski sistem na ponovni vstop enakega patogena. Tako deluje cepljenje. Z vnosom oslabljenih antigenov patoloških mikroorganizmov se v plazmi pojavi veliko imunoglobulinov, ki ostanejo v obtoku.

Glavni predmeti laboratorijske diagnostike so Ig razreda M, G in A. Po stopnji njihove koncentracije lahko določite stopnjo bolezni in ugotovite, katere nalezljive bolezni je oseba imela v življenju. Preverite lahko na primer norice ali rdečke v anamnezi. Da bi ugotovili, ali je v telesu bolnika določena vrsta AT ali AH ali koncentracija katerega koli hormona, zdravniku ni treba predpisati več laboratorijskih preiskav - dovolj je, da napišete napotnico za ELISA.

Bistvo tehnike

Raziskovalna metodologija temelji na več možnostih (neposrednih in posrednih – tekmovalnih in netekmovalnih) nalog, od katerih je vsaka zasnovana za posebne namene. Ta pristop vam omogoča, da izvedete ciljno iskanje in v najkrajšem možnem času ugotovite vzrok določene patologije. Za odkrivanje Ig različnih kategorij razredov se uporablja plošča s 96 vdolbinicami (plošča iz polistirena), v njenih vdolbinicah pa se nahajajo adsorbirani rekombinantni proteini. Igrajo vlogo antigenov in so v začetni fazi v trdni fazi.

Ko vstopijo v vdolbino s krvno plazmo, antigeni ali protitelesa identificirajo predmet v povezavi s svojo orientacijo in tvorijo kompleks (AG - AT). To tvorbo fiksira encimska spojina (konjugat), ki se nato manifestira kot spremenjeno obarvanje vdolbinice. ELISA se proizvaja na posebnih testnih sistemih, izdelanih v specializiranih laboratorijih in opremljenih s celotnim naborom reagentov.

To analizo je mogoče izvesti na podložkah in spektrometrih za odčitavanje, vendar zahtevajo ročno delo. Seveda je nekajkrat bolj priročno in hitreje, da laboratorijski asistent izvaja vse manipulacije na popolnoma avtomatiziranih napravah. Pri njihovi uporabi je laboratorijsko osebje osvobojeno velike količine monotonih dejavnosti - pranja, vkapanja in preostale rutine, vendar si vse zdravstvene ustanove ne morejo privoščiti tako drage opreme.

Zato številne bolnišnice in diagnostične ustanove še naprej izvajajo ELISA na star način – na polavtomatskih napravah.

Interpretacija raziskovalnih materialov je izključno v pristojnosti specialista za laboratorijsko diagnostiko - le on lahko pove rezultate o posebnostih in subtilnostih poteka bolezni. V tem primeru mora zdravnik nujno upoštevati možnost pridobitve lažno negativnih ali lažno pozitivnih odgovorov.

Transkripcija materialov

Rezultat visokokakovostnega encimskega imunskega testa bi moral biti nedvoumen zaključek - ali je bil v tem vzorcu krvi najden želeni mikroorganizem ali ne. Kvantitativna analiza bo pokazala stopnjo koncentracije in se lahko izrazi na dva načina - vrednost v številkah ali število znakov "+".

Analizirani kazalniki

Med raziskavo se izvede temeljita študija glavnih imunoglobulinov, ki sodelujejo pri imunskem odzivu, kot so:

  • IgM - odkrivanje tega razreda pomeni razvoj akutne oblike nalezljive bolezni. Negativen rezultat pri iskanju IgM je lahko dokaz odsotnosti želenega patogena in prehod bolezni v kronični potek.
  • IgA - opredelitev tega razreda v odsotnosti IgM je v večini primerov znak kronične ali latentne oblike razvoja nalezljive bolezni.
  • IgM in IgA (hkratna prisotnost) - pozitivni rezultati za obe vrsti kažejo na sam vrh akutne oblike patologije.
  • IgG - njegova prisotnost kaže na preoblikovanje bolezni v kronično obliko ali okrevanje in nastanek imunosti na ugotovljeno sredstvo.

Pojav in kopičenje določenega razreda IG se pojavi v različnih časovnih fazah. Tako se na primer najprej pojavijo IgM, približno 5 dni po napadu patogena. IG ostanejo v krvi približno 5-6 tednov, nato pa postopoma izginejo. Trenutno so na voljo za določanje z ELISA. Približno 3-4 tedne po začetku bolezni se pojavijo IgG, ki lahko nato ostanejo več mesecev. Toda v analizi jih ni vedno mogoče odkriti.

IgA se tvorijo v krvi v 2-4 tednih, 20% jih je v serumu, 80% pa v izločku sluznice. Praviloma ti imunoglobulini izginejo v 2-9 tednih, kar kaže na uničenje patogena in okrevanje bolnika. Če ELISA še vedno kaže prisotnost IgA, potem to signalizira prehod procesa v kronično obliko.

Možnosti rezultatov analize

Odvisno od pridobljenih podatkov se lahko odgovori ELISA izdajo na obrazcu v obliki tabele s popolnim seznamom vseh AT in AG ter navedbo pozitivne ali negativne reakcije. V določenih situacijah bo prikazana kvantitativna vrednost - močno pozitiven, pozitiven, šibko pozitiven ali negativen rezultat. Druga možnost označuje količino protiteles v preučevanem vzorcu krvi.


Variante interpretacije materialov ELISA

Poleg zgornjih vrednosti se v procesu ELISA preučuje še en kvantitativni parameter - indeks avidnosti AT, izračunan kot odstotek. Prikazuje, kako dolgo traja bolezen - to je, višji kot je indikator, več časa se razvije patologija.

Alternativna metoda ELISA

Encimski imunosorbentni test je precej znana in pogosta diagnoza. Morda nekateri zanjo še niso slišali, a obstaja še ena različica te študije, ki je širšemu krogu ljudi še manj znana, pri kateri se vzame nekrvni vzorec. Ta tehnika se imenuje fekalna okultna krvavitev in se v mnogih primerih izogne ​​dodatnim izčrpavajočim postopkom, ki jih spremljajo tudi neprijetni občutki.

ELISA test na okultno kri (molekule hemoglobina) omogoča odkrivanje krvavitev prebavil, tudi rahlih, katerih znakov v blatu bolnika, kot pravijo, s prostim očesom ni mogoče najti. Encimski imunski test okultne krvi v človeškem blatu lahko v kratkem času pokaže peptični ulkus, polipozo, divertikulozo, tumorje, ki jih v zgodnjih fazah ne spremljajo določeni simptomi.

Do danes je bilo ustvarjenih na tisoče vrst diagnostičnih testnih sistemov z encimskim imunskim testom, ki omogočajo iskanje AT in AG z ogromnega seznama patologij. Zato se ta analiza uporablja v skoraj vseh vejah medicine, za katero koli starostno kategorijo. In absolutna neškodljivost vam omogoča, da se zatečete k njej tako med nosečnostjo kot za diagnozo oslabljenih bolnikov.

5.1 Bistvo in razvrstitev ELISA.

ELISA se je pojavila sredi 60. let prejšnjega stoletja in je bila prvotno razvita kot metoda za identifikacijo antigena v histološkem preparatu, kot tudi za vizualizacijo precipitacijskih linij v testu imunodifuzije in imunoelektroforeze, nato pa se je začela uporabljati za kvantitativno določanje antigenov in protitelesa v bioloških tekočinah. Pri razvoju metode sta sodelovala E. Engvall in R. Pelman ter neodvisno od njiju V. Van Veeman in R. Schurs.

riž. 6 Osnovno načelo ELISA:

    za odkrivanje antigenov; 2) za odkrivanje protiteles

Metoda temelji na specifični vezavi protitelesa na antigen, medtem ko je ena od komponent konjugirana z encimom; kot posledica reakcije z ustreznim kromogenim substratom nastane obarvan produkt, katerega količina se lahko določeno spektrofotometrično (slika 6).

Odkritje možnosti imobilizacije antigenov in protiteles na različne nosilce ob ohranjanju njihove vezavne aktivnosti je omogočilo razširitev uporabe ELISA na različnih področjih biologije in medicine.

Pojav monoklonskih protiteles je služil kot nadaljnji razvoj ELISA, kar je omogočilo povečanje njegove občutljivosti, specifičnosti in ponovljivosti rezultatov.

Teoretično ELISA temelji na podatkih sodobne imunokemije in kemijske encimologije, poznavanju fizikalno-kemijskih zakonitosti reakcije antigen-protitelo, pa tudi na glavnih načelih analitske kemije. Občutljivost ELISA in njegovo trajanje določa več glavnih dejavnikov: kinetične in termodinamične značilnosti reakcije antigen-protitelo, razmerje reagentov, aktivnost encimov in ločljivost njegovih metod odkrivanja. Na splošno lahko reakcijo antigen-protitelo opišemo s preprosto shemo:

+[AG]↔[ATAG]

Raznolikost predmetov študija od spojin z nizko molekulsko maso do virusov in bakterij, pa tudi nenavadno široka paleta nalog, povezanih z različnimi pogoji za uporabo ELISA, določa razvoj izjemno velikega števila različic te metode. .

Vsaka različica ELISA vsebuje 3 obvezne stopnje:

1. stopnja prepoznave testne spojine s protitelesom, specifičnim zanjo, kar povzroči nastanek imunskega kompleksa;

2. stopnja nastajanja povezave konjugata z imunskim kompleksom ali prostimi veznimi mesti;

3. stopnja pretvorbe encimske oznake v registriran signal. Razvrstitev metod ELISA temelji na več pristopih:

1. Glede na vrsto reagentov, prisotnih na prvi stopnji ELISA, ločimo kompetitivne in nekompetitivne metode.

A) Pri kompetitivni ELISA na prvi stopnji sistem vsebuje analizirano spojino in njen analog, označen z encimom in z njim tekmujeta za specifična vezavna mesta.

B) Za nekonkurenčne metode je značilna prisotnost v sistemu na prvi stopnji samo analizirane spojine in zanjo specifičnih vezavnih centrov.

2. Vse metode ELISA so razdeljene na homogene in heterogene.

Če se vse tri stopnje ELISA izvajajo v raztopini in med glavnimi stopnjami ni dodatnih stopenj ločevanja nastalih imunskih kompleksov od nereagiranih komponent, metoda spada v skupino homogenih.

Osnova homogenega testa ELISA, ki se običajno uporablja za določanje snovi z nizko molekulsko maso, je zaviranje aktivnosti encima v kombinaciji z antigenom ali protitelesom. Encimska aktivnost se obnovi kot posledica reakcije antigen-protitelo.

Ko se protitelo veže na antigen, ki vsebuje encimsko oznako, je aktivnost encima inhibirana za 95 % glede na substrat z visoko molekulsko maso, kar je posledica sterične izključitve substrata iz aktivnega centra encima. Ko se koncentracija antigena poveča, se veže več protiteles in ohrani se več prostih konjugatov antigen-encim, ki lahko hidrolizirajo substrat z visoko molekulsko maso. Analiza poteka zelo hitro, za eno določitev je potrebna 1 minuta. Občutljivost metode je precej visoka. Z njim lahko določite snov na ravni pikomolov.

Za heterogene metode je značilno, da se analiza izvaja v dvofaznem sistemu s sodelovanjem trdne faze - nosilca in obvezno stopnjo ločevanja imunskih kompleksov od nereagiranih komponent (pranje), ki so v različnih fazah (tvorjeni imunski kompleksi so v trdni fazi, nezreagirani kompleksi pa v raztopini). Heterogene metode, pri katerih tvorba imunskih kompleksov na prvi stopnji poteka na trdni fazi, se imenujejo metode trdne faze.

Metode so razvrščene kot homogeno-heterogene, če se 1. stopnja - tvorba specifičnih kompleksov pojavi v raztopini, nato pa se za ločevanje komponent uporabi trdna faza z imobiliziranim reagentom.

3. Po principu določanja preskusne snovi:

A) Neposredno določanje koncentracije snovi (antigena ali protitelesa) s številom vezavnih centrov, ki sodelujejo z njo. V tem primeru bo encimska oznaka v nastalem specifičnem kompleksu AG-AT. Koncentracija analita bo neposredno sorazmerna z registriranim signalom.

B) Določitev koncentracije snovi z razliko med skupnim številom veznih mest in preostalimi prostimi veznimi mesti. V tem primeru se bo koncentracija analita povečala, zabeleženi signal pa zmanjšal, zato v tem primeru obstaja obratna odvisnost od velikosti posnetega signala.

5.2 Značilnosti komponent, uporabljenih v testu ELISA.

Encimi.

Encimske oznake imajo izjemno močan katalitični učinek, ena encimska molekula lahko reagira z velikim številom substratnih molekul. Tako lahko encim, ki je prisoten v zanemarljivih količinah, zaznamo in kvantificiramo s tvorbo produktov, reakcijo, ki jo katalizira. Druga prednost uporabe encimov kot označevalcev je posledica prisotnosti v molekuli številnih funkcionalnih skupin (sulfhidrilnih, karboksilnih, tirazinskih ostankov itd.), preko katerih se lahko kovalentno vežejo molekule liganda.

Encimski označevalci, uporabljeni v testu ELISA, morajo imeti naslednje lastnosti:

– visoka aktivnost in stabilnost encima v pogojih analize, med modifikacijo in v konjugatu s protitelesi ali drugimi proteini;

– prisotnost občutljivih substratov in enostavnost metode za določanje produktov ali substratov encimske reakcije;

– možnost prilagajanja substratnih sistemov nadaljnjemu utrjevanju;

- odsotnost encima in njegovih inhibitorjev v proučevani biološki tekočini.

ELISA lahko uporablja vsaj 15 različnih encimov. V skladu z zgornjimi zahtevami so največjo uporabo našli hrenova peroksidaza (HRP), alkalna fosfataza (AP) in β-D-galaktozidaza. Vsi trije so stabilni in katalizirajo zelo občutljive reakcije. Poleg tega je mogoče produkte, ki nastanejo pri reakcijah, ki jih katalizirajo ti encimi, odvisno od uporabljenega substrata, zaznati ne samo s kolorimetričnimi metodami, ampak tudi s fluorescentnimi metodami. Drugi encimi se uporabljajo veliko redkeje. To je razloženo z njihovo manjšo specifično aktivnostjo v primerjavi s HRP in AP.

Podlage.

Izbira substrata je odvisna predvsem od encima, ki se uporablja kot oznaka, saj je reakcija encim-substrat zelo specifična.

Osnovne zahteve za podlago:

– zagotavljanje visoke občutljivosti metode pri detekciji encima v konjugatu;

– tvorba dobro definiranih (na primer obarvanih) produktov reakcije encim-substrat;

– substrat mora biti varen, poceni, dostopen in udoben za uporabo.

Pogosteje se uporabljajo kromogeni substrati, ki ob uničenju tvorijo barvno snov. Obetavna je uporaba visokoenergijskih substratov - fluorescentnih, kemiluminiscenčnih. Uporaba takih substratov teoretično omogoča povečanje občutljivosti ELISA za dva reda velikosti.

konjugirana tvorba.

Konjugat je antigen ali protitelo, označeno z encimsko oznako. Tvorba konjugata je eden od pomembnih korakov v testu ELISA.

Pri tvorbi konjugata je izbrana optimalna metoda za vnos encimske oznake, tako da obe komponenti konjugata ohranita svojo biološko aktivnost: encim - sposobnost interakcije s substratom in antigen ali protitelo - antigenost in vezava na antigen. dejavnost oz. Prisotnost označenega, visoko prečiščenega antigena omogoča uporabo konkurenčnih metod. V tem primeru lahko aktivnost konjugata, ki ni vezan na imobilizirana protitelesa, izmerimo v končni fazi, s čimer se izognemo postopku pranja in naredimo analizo bolj priročno. Vendar pa so antigeni raznoliki po fizikalno-kemijskih lastnostih in strukturi, kar pomeni, da ni mogoče razviti univerzalnih metod za pridobivanje konjugata z antigenom. V tem primeru je pridobivanje konjugata antigen-encim poseben izziv. Priprava označenih protiteles za ELISA je metodično bolj dostopna.

Konjugacija encima z imunokemično aktivnimi proteini poteka z različnimi metodami: kemično zamreženjem, kovalentno vezavo encimske molekule na AG ali AT in tvorbo spojin preko nekovalentnih vezi, na primer, ko je povezava med encima in AG ali AT poteka imunološko, z interakcijo antigen-protitelo.

Najbolj razširjene kovalentne metode za pripravo konjugatov. Izbira vezavne reakcije je odvisna od vrste funkcionalnih skupin, ki so na voljo v teh proteinskih molekulah. Kot reagenti za vnos encima v molekule antigena in protiteles se uporabljajo glutaraldehid, natrijev perjodat itd.

Obstajajo enostopenjske in dvostopenjske metode za pridobivanje konjugatov z uporabo glutaraldehida. Lahko nastanejo konjugati različnih velikosti z zmanjšano encimsko aktivnostjo (15 - 60 % prostega encima). Nastali konjugat velike velikosti lahko sterično ovira določanje preskusne snovi. Konjugati z relativno nizko molekulsko maso so sestavljeni iz Fab fragmenta in ene encimske molekule.

Kot rezultat dvostopenjske sinteze, ki obsega postopno pripravo encima, najprej modificiranega z zamreževalnim sredstvom, njegovo izolacijo in nato njegovo kasnejšo interakcijo z antigenom (protitelesom), se molekule Nastane homogena sestava, ki vsebuje 1-2 encimski molekuli na molekulo imunoglobulina in ohranja visoko encimsko in imunološko aktivnost. Vendar je količina nastalih konjugatov majhna (za hrenovo peroksidazo je 5–10 %).

Metoda pridobivanja konjugatov imunoperoksidaze, ki temelji na oksidaciji ogljikohidratne komponente encima z natrijevim perjodatom (vezava peroksidaze na konjugat doseže 70-90% začetne količine encima), je našla največjo praktično uporabo.

Zanesljiv konjugat mora imeti naslednje lastnosti:

Visoka koncentracija protiteles in visoka afiniteta za antigen, tako da se lahko uporablja v visoki razredčitvi in ​​tako zmanjša nespecifično vezavo;

Zadostna specifičnost v delovni vzreji;

Prevlada monomernih oblik nad polimernimi, ker polimerne oblike se ponavadi nespecifično oprimejo plastike, kar ima za posledico visoko stopnjo reakcije v ozadju;

Optimalno molsko razmerje med encimom in protitelesi (optimalno razmerje je približno 1:1);

Zadostna encimska aktivnost konjugata. To lastnost določajo predvsem pogoji konjugacije in razmerje med molekulami encima in protiteles v konjugatu.

5.3 Heterogene metode ELISA.

Heterogene ELISA (ali trdnofazne ELISA) vključujejo metode, pri katerih je analit v dveh fazah. Za ločevanje komponent imunokemične reakcije se uporablja trdna faza (netopen nosilec, običajno plastičen) z imobiliziranimi protitelesi ali antigenom, ki se na vsaki stopnji spere, da se odstranijo vmesni produkti nereagiranih komponent.

Imobilizacijo lahko izvedemo s kovalentno vezavo protiteles (antigenov) na aktivirani nosilec z uporabo kemičnih pristopov, pa tudi s fizično adsorpcijo protiteles (antigenov) na površini trdnih polimerov (na primer polistirenske plošče). V tuji literaturi se ta smer imenuje test ELISA ali encimski imunski test.

Nekompetitivni test ELISA za odkrivanje antigena z uporabo na primer z encimi označenih specifičnih protiteles in imobiliziranih protiteles.

Nosilcu z imobiliziranimi protitelesi dodamo raztopino, ki vsebuje analizirani antigen. Med inkubacijo nastane specifičen kompleks antigen-protitelo. Nato nosilec speremo z nevezanih antigenov in dodamo označena protitelesa – konjugat. Količina vezanega konjugata je premo sorazmerna s količino antigena v testnem vzorcu. Po drugi inkubaciji in odstranitvi odvečnega konjugata dodamo kromogeni substrat za uporabljeni encim, ki pod delovanjem encima spremeni barvo, tj. pride do encimske reakcije z obarvanjem raztopine v vdolbinicah. Stopnja obarvanja je neposredno sorazmerna s številom encimsko označenih specifičnih protiteles, encima in s tem testnega antigena. Meritve optične gostote raztopine v vdolbinicah pri določenem valu (odvisno od uporabljenega substrata) izvajamo s posebnimi spektrofotometri, prilagojenimi za čitalce mikroplošč. Koncentracijo antigena v vzorcu kvantificiramo s primerjavo rezultatov z umeritveno krivuljo odvisnosti optične gostote raztopine od koncentracije standardne raztopine antigena.

Slika 7

Ker je v fazi identifikacije specifičnega imunokompleksa antigen vezan na molekule imobiliziranih in označenih protiteles, se ta metoda v literaturi pogosto imenuje "sendvič" metoda (iz angleškega sandvich) ali dvocentrična metoda ELISA (iz angleški test na dveh mestih).

To metodo lahko uporabimo samo za analizo antigenov, ki imajo na svoji površini vsaj dve antigenski determinanti. Nesprejemljivo je za analizo velikega števila monovalentnih antigenov (zdravila, pesticidi itd.).

Glavna prednost te metode je visoka občutljivost. Meja detekcije spojin s to metodo trenutno dosega vrednost reda 10-21 mol, kar ustreza detekciji samo 600 molekul analita v vzorcu. Največja občutljivost je dosežena, ko se vsaka imunološka reakcija izvaja v ravnotežnem načinu, kar vpliva na trajanje analize, ki je v povprečju 4-6 ur. Nekompetitivni test ELISA za odkrivanje protiteles z uporabo sekundarnih protiteles, označenih z encimi, in imobiliziranih antigenov kot primer.

Imobiliziranemu antigenu se doda serum, ki ga je treba testirati. Po inkubaciji in izpiranju nevezanih protiteles dodamo označena sekundarna protitelesa, ki so specifična za analizirana protitelesa. Po sekundarni inkubaciji in odstranitvi odvečnih označenih sekundarnih protiteles je vsebnost encimske oznake na nosilcu sorazmerna s koncentracijo specifičnih protiteles v serumu.

Ta shema je ena najpogostejših ELISA za odkrivanje protiteles, saj omogoča odkrivanje protiteles proti različnim antigenom.

Heterogena konkurenčna ELISA za odkrivanje antigena z uporabo označenega antigena in imobiliziranih protiteles kot primera.

Protitelesom, imobiliziranim na nosilcu, dodamo raztopino, ki vsebuje analizirani antigen in fiksno koncentracijo konjugata antigen-encim. Po inkubaciji nosilec speremo z nevezanega prostega in označenega antigena in zabeležimo encimsko aktivnost na nosilcu, ki je obratno sorazmerna s koncentracijo antigena, ki ga določamo.


5.4 Homogena metoda ELISA.

Homogeni encimski imunski test (HIFA) je najbolj metodično preprosta vrsta ELISA. Ko je nastavljen, enega od udeležencev imunske reakcije (običajno nizkomolekularni antigen) označimo z encimom in z registracijo spremembe encimske aktivnosti spremljamo potek nastajanja kompleksa antigen-protitelo.

Do takšne motnje encimske aktivnosti lahko pride bodisi zaradi prostorske ločitve encima od substrata bodisi zaradi konformacijskih sprememb v encimski molekuli, ki spremljajo nastanek imunskega kompleksa. GIFA ima številne pomembne prednosti pred drugimi imunokemičnimi metodami. Prvič, visoka izraženost (celotna analiza z uporabo GIFA traja nekaj minut ali celo delčkov minut).

riž.8 Možnosti homogenega testa ELISA(A - učinek odklopa encima (F) in substrata (C) zaradi steričnih ovir med interakcijo antigena (Ag) in protitelesa (Ab); B - učinek spremembe konformacije encima med tvorbo kompleksa antigen-protitelo).

Drugič, metoda ima eno stopnjo in ne zahteva napornih in dolgotrajnih korakov pranja. In končno, tretjič, metoda zahteva minimalne volumne (8-50 µl) in količine biološkega ali kliničnega vzorca. Vendar ima metoda HIFA eno izjemno pomembno pomanjkljivost - z njo je mogoče ustvariti diagnostične testne sisteme samo za antigene z nizko molekulsko maso. Samo v tem primeru lahko protitelo v interakciji z antigenom učinkovito zaščiti ali spremeni molekulo encima, povezano s tem antigenom. V zvezi s tem (kljub navidezni preprostosti in očitnim prednostim pred drugimi metodami) so bili na podlagi HIFA ustvarjeni diagnostični kompleti za odkrivanje samo hormonov, peptidov, zdravilnih in narkotičnih snovi ter nekaterih nizkomolekularnih proteinov.

5.5 "Sendvič" - različica ELISA za odkrivanje antigenov.

Antigeni, odkriti s to različico ELISA, morajo imeti več epitopov, ki vežejo protitelesa, ali imeti ponavljajoče se, prostorsko ločene epitope iste specifičnosti.

Pri izvajanju te različice ELISA se visoko specifična poli- ali monoklonska protitelesa, adsorbirana na trdni fazi, inkubirajo s testnim vzorcem. Po postopku izpiranja v vdolbinice dodamo z encimi označena protitelesa (konjugat) proti istemu antigenu, nato pa izvedemo vse ostale faze reakcije. Učinkovitost tvorbe specifičnega kompleksa na vsaki stopnji analize je odvisna od vezavne konstante reakcije antigen-protitelo.

ELISA (enzimsko-imunski test, ELISA - angl.) je v praktično medicino vstopil nekje drugje v 60. letih prejšnjega stoletja. Njegova prvotna naloga je bila histološka raziskava v znanstvene namene, ki je bila omejena na iskanje in identifikacijo antigenske strukture celic živega organizma.

Metoda ELISA temelji na interakciji specifičnih (AT) in sorodnih antigenov (AG) s tvorbo kompleksa antigen-protitelo, ki se odkrije z encimom. To dejstvo je znanstvenike privedlo do ideje, da se metoda lahko uporablja v diagnostične namene za identifikacijo specifičnih imunoglobulinov različnih razredov, ki sodelujejo pri imunskem odzivu na določeno okužbo. In to je bil preboj v klinični laboratorijski diagnostiki!

Metoda se je začela aktivno uporabljati šele v zgodnjih 80. letih, in to predvsem v specializiranih ustanovah. Prvi analizatorji ELISA so bili dobavljeni v centre in postaje za transfuzijo krvi, infekcijske in venerične bolnišnice, saj se je grozoviti aids, rojen na afriški celini, pojavil na obzorju pri nas in se takoj pridružil "starim" okužbam, zahteval takojšnje ukrepe za diagnosticiranje in iskanje terapevtskih zdravil, ki vplivajo nanj.

Področje uporabe metode ELISA

Možnosti encimskega imunskega testa so resnično široke. Zdaj si je težko predstavljati, kako bi lahko brez takšnih študij, ki se uporabljajo dobesedno v vseh vejah medicine. Zdi se, da lahko ELISA naredi v onkologiji? Izkazalo se je, da lahko. In veliko. Sposobnost analize, da najde označevalce, značilne za določene vrste malignih novotvorb, je osnova za zgodnje odkrivanje tumorja, ko ga zaradi majhnosti še ne odkrijejo na drug način.

Sodobna klinično laboratorijska diagnostika (CDL) ima poleg tumorskih označevalcev precejšen arzenal panelov za ELISA in jih uporablja za diagnosticiranje različnih patoloških stanj (infekcijskih procesov, hormonskih motenj) in spremljanje farmacevtskih zdravil z namenom ugotavljanja njihovega učinka na bolnikovo stanje. telo in, mimogrede, ne samo človek. Trenutno se encimski imunski test pogosto uporablja v veterinarski službi, saj so tudi "naši manjši bratje" dovzetni za številne bolezni, zaradi katerih včasih zelo trpijo.

torej ELISA lahko zaradi svoje občutljivosti in specifičnosti iz vzorca krvi iz vene določi:

  • Hormonsko stanje (ščitnični in nadledvični hormoni, spolni hormoni);
  • Prisotnost virusne in bakterijske okužbe (HIV, B in C, klamidija, sifilis in, ter številne druge bolezni, ki jih povzročajo patogeni mikroorganizmi);
  • Sledi vitalne aktivnosti mikroorganizmov, ki so sprožili infekcijski proces, ki se je uspešno končal in prešel v fazo oblikovanja imunskega odziva na tega patogena. Takšne sledi, torej protitelesa, v mnogih primerih ostanejo v krvi krožiti vse življenje, kar človeka varuje pred ponovno okužbo.

Kaj je bistvo IF?

Metoda encimskega imunskega testa omogoča ugotavljanje ne le prisotnosti samega patogena (kvalitativna analiza), temveč tudi njegovo kvantitativno vsebnost v krvnem serumu pacienta.

Virusna ali bakterijska doza pomembno vpliva na potek infekcijskega procesa in njegov izid, zato ima kvantitativna analiza pomembno vlogo pri diagnostiki in zdravljenju bolezni v različnih oblikah in fazah.

Vendar pa ob poznavanju encimskih imunskih testov kot metode ELISA sploh ne pomislimo, kako uspe z njo zajeti tako širok spekter mikroorganizmov, ki živijo na našem planetu, od katerih mnogi neposredno ogrožajo zdravje in življenje ljudi in živali. Dejstvo je, da ima ELISA veliko možnosti (nekonkurenčne in konkurenčne – neposredne in posredne), od katerih vsaka rešuje svoj problem in tako omogoča ciljno iskanje.

Za odkrivanje imunoglobulinov enega ali drugega razreda se uporablja tradicionalna polistirenska plošča (tableta) s 96 jamicami, v vdolbinicah katere so koncentrirani adsorbirani rekombinantni proteini v trdni fazi. Protitelesa ali antigeni, ki so prišli v jamico s krvnim serumom, najdejo "znan" predmet in z njim tvorijo kompleks (AG - AT), ki se bo, fiksiran z encimskim konjugatom, pokazal kot sprememba barve jamice. pri branju rezultatov.

Encimski imunski test se izvaja na testnih sistemih določene specifičnosti, izdelanih v posebnih laboratorijih in opremljenih z vsemi potrebnimi reakcijskimi komponentami. Študije se lahko izvajajo z uporabo podložk ("podložk") in bralnih spektrofotometrov, kjer je vključenih največ ročnega dela. Na popolnoma avtomatskih strojih, ki laboratorijskega pomočnika osvobodijo monotonega vkapanja, pranja in drugih rutinskih opravil, je seveda hitreje in bolj priročno delati, vendar si vsi laboratoriji ne morejo privoščiti takšnega razkošja in še naprej delati na staromoden način - na polavtomatskih napravah.

Interpretacija rezultatov ELISA je v pristojnosti zdravnika laboratorijske diagnostike, pri čemer je nujno treba upoštevati lastnost skoraj vseh imunokemijskih reakcij, da dajejo lažno pozitivne ali lažno negativne odgovore.

Video: sodobni encimski imunski test

Rezultati ELISA na primeru sifilisa

ELISA je primeren za odkrivanje vseh oblik, poleg tega pa se uporablja v presejalnih študijah. Za analizo se uporabi venska kri bolnika, odvzeta na prazen želodec. Pri delu se uporabljajo plošče z določeno specifičnostjo (AT razredi A, M, G) ali totalna protitelesa.

Glede na to, da se protitelesa pri sifilisu proizvajajo v določenem zaporedju, lahko ELISA zlahka odgovori na vprašanje, kdaj je prišlo do okužbe in na kateri stopnji je proces, dekodiranje dobljenih rezultatov pa je mogoče predstaviti v naslednji obliki:

  • IgM kažejo na trajanje infekcijskega procesa (lahko se pojavijo med poslabšanjem kroničnih vnetnih bolezni);
  • IgA navajajo, da se je okužba zgodila pred več kot mesecem dni;
  • IgG kažejo, da je okužba v polnem razmahu ali pred kratkim zdravljena, kar zlahka ugotovimo pri zbiranju anamneze.

Pri testiranju na sifilis ostanejo negativne vdolbinice (in negativna kontrola) brezbarvne, medtem ko bodo pozitivne (kot pozitivna kontrola) svetlo rumene barve zaradi spremembe barve kromogena, dodanega med testom. Intenzivnost barve pa se ne ujema vedno s kontrolo, se pravi, da je lahko nekoliko bolj bleda ali rahlo rumenkasta. To so dvomljivi rezultati, ki jih je praviloma treba ponovno pregledati z obveznim upoštevanjem kvantitativnih kazalcev, pridobljenih na spektrofotometru, vendar je na splošno barva neposredno sorazmerna s številom imunskih kompleksov (antigenov in protiteles, povezanih drug drugemu).

Najbolj vznemirljiv encimski imunski test - ELISA za HIV

Analiza je morda bolj kot druge zanimiva za širok krog prebivalstva, saj še ni mogoče z gotovostjo trditi, da so številni družbeni problemi (prostitucija, odvisnost od drog itd.) izginili. Na žalost HIV ne prizadene le teh delov človeške družbe, okužite se lahko v različnih okoliščinah, ki niso povezane s spolno promiskuiteto ali uporabo drog. Če pa obstaja potreba po testu na HIV, se ne smete bati, da bodo vsi okoli izvedeli za obisk takega laboratorija. Zdaj so okuženi z virusom HIV zaščiteni z zakonom in tisti, ki dvomijo, se lahko obrnejo na anonimne pisarne, kjer lahko rešijo težavo brez strahu pred javnostjo in obsojanjem.

Encimski imunski test za diagnosticiranje okužbe s HIV je ena izmed primarnih standardnih študij, ki pa zahteva posebne pogoje, saj je tema zelo občutljiva.

ELISA za HIV je smiselno opraviti po spolnem stiku, transfuziji krvi, drugih medicinskih posegih, ki vključujejo okužbo, in ob koncu inkubacijske dobe (»seronegativno okno«), vendar je treba upoštevati, da je to časovno obdobje ni konstanten. Lahko se konča v 14-30 dneh ali pa traja do šest mesecev, zato se za povprečno vrednost šteje interval od 45 do 90 dni. Krv za HIV se daruje na enak način kot za druge okužbe - iz vene na prazen želodec. Rezultati bodo pripravljeni glede na kopičenje materiala v laboratoriju in njegovo obremenjenost (od 2 do 10 dni), čeprav večina laboratorijev poda odgovor še isti ali naslednji dan.

Kaj lahko pričakujemo od rezultatov HIV?

ELISA za okužbo s HIV zazna protitelesa proti dvema vrstama virusa: HIV-1 (pogostejši v Rusiji ter drugih evropskih in azijskih državah) in HIV-2 (pogostejši v zahodni Afriki).

Naloga testa HIV ELISA je iskanje protiteles razreda G, ki se odkrijejo na vseh testnih sistemih, vendar v poznejšem obdobju, ter protiteles razreda A in M, odkritih na rekombinantnih testnih kompletih nove generacije, ki omogočajo najzgodnejše odkrivanje protiteles. faze (inkubacijska doba je seronegativno okno). Od testa ELISA lahko pričakujemo naslednje odgovore:

  1. Primarni pozitiven rezultat: kri se ponovno preveri na testnem sistemu iste vrste, vendar, če je mogoče, druge serije in s strani druge osebe (laboratorija);
  2. Ponavljajoče (+) vključuje nov odvzem krvi pacientu s študijo, ki je podobna primarni analizi;
  3. Naslednji pozitivni rezultat je predmet referenčne analize, ki uporablja visoko specifične testne komplete (2-3 kosi);
  4. Pozitiven rezultat v obeh (ali treh) sistemih se pošlje na imunobloting (isti ELISA, vendar izveden individualno na testnih kompletih s posebno visoko specifičnostjo).

Zaključek o okužbi z virusom HIV se naredi le na podlagi imunoblotinga. Pogovor z okuženo osebo poteka v popolni zaupnosti. Razkritje zdravniške skrivnosti v Rusiji, pa tudi v drugih državah, je kazensko kaznovano.

Analize za klamidijo in citomegalovirus z encimskim imunskim testom so prav tako pridobile posebno priljubljenost, saj vam omogočajo, da določite čas okužbe, stopnjo bolezni in učinkovitost terapevtskih ukrepov.

Med uvajanjem je možno opazovati tudi pojav protiteles različnih razredov. v različnih fazah patološkega stanja, ki ga povzroča povzročitelj okužbe:

  • IgM lahko odkrijemo že sedem dni po okužbi;
  • IgA kažejo, da okužba živi v telesu več kot mesec dni;
  • IgG potrdi diagnozo klamidije, pomaga spremljati zdravljenje in ugotavljati njegovo učinkovitost. Treba je opozoriti, da protitelesa razreda G ostanejo in krožijo v telesu ne glede na trajanje bolezni, zato je za pravilno razlago analize treba upoštevati referenčne vrednosti ​​(norme), ki jih način, so za vsak CDL različni: ob upoštevanju znamke testnega sistema in specifičnosti reagentov, vključenih v komplet. Vrednosti norme se vnesejo v obrazec poleg rezultata ELISA.

Kar se tiče, tukaj je malo drugače: protitelesa razreda M se pojavijo v približno mesecu in pol, to pomeni, da pozitiven rezultat (IgM +) postane v fazi primarne okužbe ali med reaktivacijo latentne okužbe in ostane tako od 4 mesecev do šest mesecev.

Prisotnost protiteles razreda G je značilna za nastanek primarne akutne okužbe ali ponovne okužbe. Analiza navaja, da je virus prisoten, vendar ne daje podatkov o stopnji infekcijskega procesa. Medtem pa določanje norme titra IgG povzroča tudi težave, saj je v celoti odvisno od imunskega statusa določene osebe, ki pa se ugotavlja z odkrivanjem imunoglobulinov razreda G. Glede na to obnašanje protiteles pri diagnozi CMVI potrebno je oceniti sposobnost protiteles razreda G za interakcijo s CMV, da bi ga kasneje "nevtralizirali" (avidnost AT). V začetni fazi bolezni se IgG zelo slabo veže na antigene virusa (nizka avidnost) in šele nato začnejo kazati aktivnost, zato lahko govorimo o povečanju avidnosti protiteles.

O prednostih encimskega imunskega testa lahko govorimo dolgo časa, saj je ta metoda uspela rešiti številne diagnostične težave samo z uporabo venske krvi. Ni potrebe po dolgem čakanju, skrbeh in težavah z odvzemom materiala za raziskavo. Poleg tega se testni sistemi za ELISA še naprej izboljšujejo in dan, ko bo test dal 100-odstotno zanesljivost rezultata, ni daleč.

Video: izobraževalni film Moskovske državne medicinske univerze. Sechenov o osnovah ELISA

Ko je predpisana analiza, opravite test ELISA za sifilis. Metode laboratorijske diagnostike. Rezultati analize - kako določiti normo in odstopanja. Stroški encimskega imunskega testa.

Praviloma zdravniki nenehno ob stiku s kliniko predpisujejo različne teste. To jim omogoča prepoznavanje okužb in bolezni, za katerimi oseba trpi. ELISA ali tako imenovani encimski imunski test je odličen način za oceno imunskega sistema telesa ter ugotavljanje okužbe in stopnje bolezni glede na prisotnost protiteles.

Torej, komu je dodeljena ta analiza in kaj je encimski imunski test? Zdravniki predpisujejo to analizo, če ima oseba naslednje bolezni:

  • Izpuščaj na telesu - alergijske reakcije.
  • Virusi - herpes, citomegalavirus.
  • Spolno prenosljive bolezni - sifilis, Trichomonas.
  • Patologija, povezana z rakom.
  • nevrosifilis.

Poleg teh bolezni je predpisana analiza za določitev ravni hormona v krvi. Na podlagi rezultatov se oceni kakovost terapije. Kaj je sifilis verjetno ve vsak človek, vendar ne predstavlja njegovega obsega in koliko okuženih ljudi hodi poleg nas.

Trenutno je sifilis najpogostejša bolezen. To je treponoma, ki prizadene človeško telo. Posledično so prizadeti vsi notranji organi pacienta.

To je zelo nevarna okužba in pogosto se zgodi, da se dolgo časa ne manifestira. Zato je lahko oseba dolgo časa nosilec in distributer, ne da bi vedela, da je bolna.

Metoda laboratorijske diagnostike

Medicina ne miruje, sodobne analize so se bistveno razlikovale od starih metod preučevanja telesa. Čeprav so odlično opravili svojo vlogo, so morali včasih na rezultate čakati tedne in mesece. To seveda ni bilo ugodno za okuženo osebo. Kakšno je pričakovanje rezultata, je šla bolna oseba.

Klasične analize - odkrivanje sifilisa z Wassermanovo metodo, Kahnova metoda je začela izgubljati svoje položaje in so jih nadomestili testi, kot je ELISA.

To je najsodobnejša metoda za odkrivanje okužbe pri ljudeh. Rezultat se dešifrira z računalnikom. To vam omogoča natančnejšo določitev pozitivnega rezultata ali negativnega testa.

Preberite tudi povezano

Kaj je spolno prenosljiva bolezen? Simptomi, zdravljenje

Med dekodiranjem se izvaja iskanje protiteles proti specifičnim boleznim. In kot rezultat analize je bilo mogoče odkriti okužbo, ko je bil rezultat pozitiven. Uporaba ELISA za odkrivanje sifilisa pomeni uporabo treh razredov imunoglobulinov:

  • G, M, A - za diagnozo so najpomembnejši.
  • Proizvajajo se pri okuženi osebi strogo v določenem zaporedju.
  • Hitro določite stopnjo okužbe.

Rezultati ELISA - normalna in pozitivna analiza

Če govori o analizi ELISA za sifilis, potem je v tem primeru težko reči, da obstaja norma ali odstopanje. Rezultat je običajno negativen ali pozitiven. Poleg tega obstajajo titri, ki določajo količino protiteles v krvi.

Pri dešifriranju analize je veliko tankosti, če je pokazala pozitiven rezultat, bo treba analizo še vedno večkrat ponoviti, da se izključi metoda lažno pozitivne reakcije.

Kot je bilo že napisano, je pri dešifriranju analize veliko tankosti, rezultat pa lahko določi le zdravnik. V tabeli podajamo primere, katere rezultate lahko prikažemo za encimski imunski test:

Ne obupajte, če je analiza pokazala pozitiven rezultat. Za natančnejšo postavitev diagnoze se praviloma izvajajo dodatni testi in testi na različne načine.

Stroški encimskega imunskega testa

Stroški te analize so praviloma neposredno odvisni od same analize in identifikacije določene okužbe. Določanje označevalcev okužbe različnih vrst stane od 200 do 350 rubljev. In taka analiza se izvede v dveh dneh.

ELISA je najbolj priljubljena in sodobna metoda za diagnosticiranje organizma. Metoda se je izkazala za učinkovito pri odkrivanju okužbe in določanju natančnega obdobja okužbe.

Glede na cenovno politiko lahko rečemo, da je analiza na voljo vsaki osebi s katerim koli proračunom. Lečečemu zdravniku omogoča, da dobi popolno sliko o okužbi osebe. V primeru se je izkazal in ni razočaral zdravnikov. Hkrati se je lahko lečeči zdravnik po prejemu analize takoj odzval in predpisal pravočasno zdravljenje.