من المعروف أن الكائنات الحية الدقيقة ، على الرغم من "نموها الصغير" ، لديها أيضًا "إدمان" على الطعام ، ودرجة حرارة مثالية ، بشكل عام ، بيئة تناسبها تمامًا ، حيث تشعر بالراحة والراحة ، وبالتالي تبدأ في التكاثر والنمو بشكل مكثف.
يستخدم البذر البكتريولوجي أو كما يطلق عليه عادة البذر القصير في الخزان للحصول على عدد كبير من الميكروبات من نفس النوع (الثقافة النقية) من أجل دراسة خصائصها الفيزيائية والكيميائية والبيولوجية ، من أجل ذلك يمكن استخدام البيانات التي تم الحصول عليها لتشخيص الأمراض المعدية.
لسوء الحظ ، حتى الآن الأساليب الشائعة ، والطرق الأخرى ، التي تتمثل عيبها الرئيسي في النتائج الإيجابية أو السلبية الخاطئة ، لا يمكنها دائمًا تحديد العامل الممرض. بالإضافة إلى ذلك ، فهم غير قادرين على التقاط الأدوية المضادة للبكتيريا المستهدفة. يتم حل مشكلة مماثلة بواسطة خزان البذر ، والذي غالبًا لا يتعجل تعيينه ، في إشارة إلى حقيقة أنه ، على سبيل المثال ، يتم زراعته ببطء ، وتكلفة التحليل كبيرة. ومع ذلك ، فإن الصحة تستحق كل هذا العناء!
الشروط اللازمة للغذاء والتنفس
يعرف علماء الأحياء المجهرية الآن أن كل مُمْرِض يحتاج إلى بيئته "الأصلية" ، مع مراعاة الأس الهيدروجيني وإمكانات الأكسدة والاختزال واللزوجة والرطوبة والخصائص التناضحية. يمكن أن تكون البيئات ناعمة وصلبة وبسيطة ومعقدة وعالمية وليست شديدة التنوع ، ولكن في جميع الحالات يجب أن توفر التغذية والتنفس والتكاثر والنمو للخلية البكتيرية.
مثال على نمو الكائنات الحية الدقيقة بعد تلقيح الخزان في وسط مغذي
بعض الوسائط (ثيوجليكول ، سابورو) مناسبة لمجموعة واسعة من الكائنات الحية الدقيقة وتسمى عالمية. البعض الآخر مخصص فقط لأنواع معينة ، على سبيل المثال ، المكورات الرئوية والمكورات العنقودية الذهبية ، التي تنتج الهيموليزينات ، وتنمو على أجار الدم ، والذي يعمل على عزل السلالات "المتقلبة" بشكل خاص ، وفي الوقت نفسه ، السلالات الخطرة. وبالتالي ، هناك العديد من أنواع الوسائط ، حيث ينمو كل منها مجموعته الخاصة من الكائنات الحية الدقيقة.
الغرض من زراعة الكائنات الحية الدقيقة وأهميتها للتشخيص
بالإضافة إلى الماء والهواء والتربة ، التي تحتوي على كائنات دقيقة مختلفة بتركيزات مختلفة ، بما في ذلك تلك التي تسبب الأمراض (مسببة للأمراض) ، تهتم العديد من فروع العلوم الطبية بالميكروبات التي تعيش على الجلد والأغشية المخاطية لجسم الإنسان ، والتي يمكن تمثيلها بواسطة:
- المقيمين الدائمين ، لا يحملون أي خطر على الإنسان ،أي ، البكتيريا الطبيعية للجسم ، والتي بدونها لا يمكننا العيش ببساطة. على سبيل المثال ، اختفاء البكتيريا التي تعيش في الأمعاء وتشارك في عملية الهضم يؤدي إلى دسباقتريوز ، وهو ليس من السهل علاجه. يحدث الشيء نفسه مع اختفاء البكتيريا المهبلية. يتم ملؤها على الفور بالكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض المشروطة ، Gardnerella ، على سبيل المثال ، والتي تسبب ؛
- النباتات المسببة للأمراض مشروطة ،وهو ضار بكميات كبيرة فقط في ظل ظروف معينة (نقص المناعة). Gardnerella المذكورة أعلاه هي ممثل لهذا النوع من الكائنات الحية الدقيقة ؛
- وجود الميكروبات المسببة للأمراضالتي لا توجد في الجسم السليم. إنها غريبة عن جسم الإنسان ، حيث تدخل عن طريق الخطأ عند الاتصال بشخص (مريض) آخر وتسبب تطور عملية معدية ، تكون أحيانًا شديدة جدًا أو حتى مميتة. على سبيل المثال ، لا يزال الاجتماع مع مسببات الأمراض على ما يرام ، في البداية يتم علاجه ، ولكن (لا سمح الله!) سيؤدي إلى إطلاق الكوليرا والطاعون والجدري ، إلخ.
لحسن الحظ ، تم هزيمة العديد منهم وهم حاليًا "وراء سبعة أختام" في مختبرات خاصة ، لكن الإنسانية في أي وقت يجب أن تكون مستعدة لغزو عدو غير مرئي قادر على تدمير أمم بأكملها. ربما يلعب البذر البكتريولوجي في مثل هذه الحالات الدور الرئيسي في تحديد الكائن الدقيق ، أي تحديد الجنس والأنواع والنوع وما إلى ذلك. (الوضع السمي) ، وهو مهم جدًا لتشخيص العمليات المعدية ، بما في ذلك الأمراض المنقولة جنسياً.
وبالتالي ، فإن طرق البذر ، مثل وسائط المغذيات ، مختلفة ، ومع ذلك ، فإن لها نفس الهدف: الحصول على ثقافة نقية بدون شوائب على شكل ميكروبات من فئات أخرىالتي تعيش في كل مكان: في الماء ، في الهواء ، على الأسطح ، على الإنسان وداخله.
متى يتم تعيين خزان البذر وكيفية فهم الإجابات؟
اسم الكائن الدقيق وكميته
لا يصف المرضى تحليلًا جرثوميًا لأنفسهم ، يتم إجراء ذلك من قبل الطبيب إذا كان لديه شك في أن مشاكل المريض التي تقدم شكاوى مختلفة مرتبطة باختراق مسببات الأمراض في الجسم أو بزيادة تكاثر الكائنات الحية الدقيقة التي تعيش باستمرار مع شخص ، ولكن تظهر خصائص مسببة للأمراض فقط في ظروف معينة. بعد اجتياز التحليل وبعد فترة من تلقي إجابة بين يديه ، يضيع الشخص ، وأحيانًا يكون خائفًا ، عندما يرى كلمات وتسميات غير مفهومة ، لذلك ، حتى لا يحدث هذا ، أود أن أعطي شرح موجز لهذه القضية:
عند فحص المواد البيولوجية لوجود الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض ، يمكن أن تكون الإجابة سلبية أو إيجابية ("خزان البذر السيئ") ، لأن جسم الإنسان هو مجرد مأوى مؤقت لهم ، وليس موطنًا طبيعيًا.
في بعض الأحيان ، اعتمادًا على المادة المراد تلقيحها ، يمكنك رؤية عدد الكائنات الحية الدقيقة المعبر عنها بوحدات تكوين مستعمرات لكل مل (خلية حية واحدة ستعطي نمو مستعمرة كاملة) - CFU / ml. على سبيل المثال ، تعطي مزرعة البول للفحص البكتريولوجي ما يصل إلى 10 3 CFU / مل من جميع الخلايا البكتيرية المكتشفة ، في الحالات المشكوك فيها (كرر التحليل!) - 10 3 - 10 4 CFU / ml ، مع عملية التهابية من أصل معدي - 10 5 وما فوق CFU / مل حول الخيارين الأخيرين في الخطاب العامي ، في بعض الأحيان ، يتم التعبير عنهما ببساطة: "خزان البذر السيئ".
كيف "تجد السيطرة" على الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض؟
بالتزامن مع زرع المادة في مثل هذه الحالات ، تزرع البكتيريا الدقيقة من أجل الحساسية للمضادات الحيوية ، والتي ستعطي إجابة واضحة للطبيب - ما هي الأدوية المضادة للبكتيريا وفي الجرعات التي "تخيف" "الدخيل". هنا أيضًا يوجد فك تشفير ، على سبيل المثال:
- نوع الكائن الدقيق ، على سبيل المثال ، نفس الإشريكية القولونية بحجم 1x10 ^ 6 ؛
- يشير اسم المضاد الحيوي مع التعيين (S) إلى حساسية العامل الممرض لهذا الدواء ؛
- يشار إلى نوع المضادات الحيوية التي لا تؤثر على الكائنات الحية الدقيقة بالرمز (R).
التحليل البكتريولوجي له قيمة خاصة في تحديد الحساسية للمضادات الحيوية ، حيث أن المشكلة الرئيسية في مكافحة الكلاميديا والميكوبلازما واليوريا وما إلى ذلك تظل اختيار العلاج الفعال الذي لا يؤذي الجسم ولا يضرب جيب المريض.
الجدول: مثال بديل لنتائج ثقافة الخزان التي تُظهر مضادات حيوية فعالة
التحضير المناسب للتحليل البكتيري هو المفتاح للحصول على نتيجة موثوقة
يمكن أن تخضع أي مادة بيولوجية مأخوذة من شخص للتحليل البكتيريولوجي.(الجلد ، الدم ، السائل المنوي ، الأغشية المخاطية لتجويف الفم ، الجهاز التنفسي والمسالك البولية ، الجهاز الهضمي ، أعضاء الرؤية ، السمع والشم ، إلخ). في أغلب الأحيان ، يتم وصف خزان البذر من قبل أطباء أمراض النساء وأطباء المسالك البولية ، لذلك يجب أن تفكر فيه قليلاً.
سيكون التحضير المناسب للثقافة البكتريولوجية هو المفتاح للنتيجة الصحيحة ، لأنه بخلاف ذلك ، يجب إعادة التحليل وانتظار الوقت المحدد. إن كيفية التبرع بالدم من أجل العقم من الوريد هي مهمة العاملين الصحيين. كقاعدة عامة ، لا شيء يعتمد على المريض هنا ، فهو ببساطة يوفر ثنيًا للكوع ، وتأخذه الممرضة في أنبوب اختبار معقم وفقًا لجميع قواعد التعقيم والتعقيم.
شيء آخر هو البول أو من الجهاز التناسلي. هنا يجب على المريض التأكد من المرحلة الأولى (السياج) ، باتباع القواعد المقررة. وتجدر الإشارة إلى أن بول المرأة والرجل يختلف نوعًا ما ، وإن كان معقمًا في المثانة لكلا الجنسين:
- عند النساء ، عند المرور عبر مجرى البول ، يمكن التقاط عدد صغير من المكورات غير المسببة للأمراض ، على الرغم من أنها تظل عقيمة بشكل عام ؛
- بالنسبة للرجال ، الأمور مختلفة بعض الشيء. يمكن للجزء الأمامي من مجرى البول أن يمد التبول بما يلي:
- الخناقات.
- المكورات العنقودية.
- بعض البكتيريا سالبة الجرام غير المسببة للأمراض ، والتي ستظهر لاحقًا عن طريق التحليل البكتريولوجي.
ومع ذلك ، إذا كانت في تركيز مقبول (حتى 10 3 CFU / مل) ، فلا يوجد ما يخاف منه ، فهذا هو البديل من القاعدة.
لتجنب وجود الكائنات الحية الدقيقة الأخرى ولضمان عقم المادة المأخوذة قدر الإمكان ، يتم إجراء مرحاض شامل للأعضاء التناسلية قبل التحليل (يتم إغلاق مدخل المهبل عند النساء بقطعة قطن - الحماية من دخول الأعضاء التناسلية المفصولة). للتحليل ، يتم أخذ جزء متوسط من البول (بداية التبول في المرحاض ، حوالي 10 مل من الحصة المتوسطة في جرة معقمة، وتنتهي في المرحاض). يحتاج المرضى إلى معرفة ما يلي: يجب معالجة البول المأخوذ للزرع في موعد لا يتجاوز ساعتين عند تخزينه بدرجة لا تزيد عن 20 درجة مئوية ، لذلك يجب مراعاة وقت النقل.
بالإضافة إلى ذلك ، يتم أخذ مادة خزان البذر ، إذا لزم الأمر ، من مجرى البول والمستقيم عند الرجال ، من مجرى البول والمستقيم والمهبل وعنق الرحم وقناة عنق الرحم - عند النساء ، ولكن هذا يحدث في منشأة طبية حيث يجب على المريض يصل. يحظر الغسل والغسل واستخدام المطهرات في مثل هذه الحالات.
قضايا أخرى تهم المرضى
يهتم العديد من المرضى بعدد الأيام التي يتم فيها إجراء التحليل. من المستحيل الإجابة على هذا السؤال بشكل لا لبس فيه ، كل هذا يتوقف على المادة التي تتم دراستها وما هو العامل الممرض الذي يجب البحث عنه. أحيانًا تكون الإجابة جاهزة في 3 أيام ، وأحيانًا في غضون أسبوع أو حتى 10-14 يومًا، لأن بعض العينات تتطلب ثقافة فرعية إلى وسط آخر.
لا تتجاوز الأشخاص المتجهين إلى خزان البذر ومسألة سعر التحليل. التكلفة التقريبية في موسكو حوالي 800 - 1500 روبل. بالطبع ، يمكن أن يكون أعلى ويعتمد على اتساع نطاق البحث البكتيريولوجي. يمكنك على الأرجح إجراء تحليل مجانًا أثناء الحمل في عيادة ما قبل الولادة ، أو في العيادة لأسباب طبية خاصة.
بالنسبة للنساء الحوامل ، فإن خزان البذر إلزامي ، ويتم إعطاؤه مرتين(عند التسجيل وفي الأسبوع 36) ، بينما يتم أخذ مسحة ليس فقط من الجهاز التناسلي ، ولكن أيضًا من الأغشية المخاطية للأنف والحنجرة. سيكون موضوع البحث في هذه الحالة ، بالإضافة إلى التهابات الجهاز البولي التناسلي ، هو Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) ، والتي يمكن أن تسبب الكثير من المتاعب في فترة ما بعد الولادة (التهاب الضرع القيحي ، إلخ). بالإضافة إلى ذلك ، يُطلب من النساء الحوامل إجراء زراعة البول ، وكشط الظهارة المهبلية ومسحات من عنق الرحم وقناة عنق الرحم.
العديد من النساء ، قبل الذهاب إلى العملية ، يخشين بشدة من مثل هذه الكلمات الفظيعة ويبدأن في التفكير: "هل هذا ضروري؟ ربما لا تذهب ". نسارع إلى التأكيد على أن الاختبارات غير مؤلمة على الإطلاق. يتم أخذ مسحة من عنق الرحم وقناة عنق الرحم بفرشاة خلوية معقمة ، ولا تسبب أي ألم للمرأة على الإطلاق ، ولكن بعد ذلك سيحمي خزان البذر من s / m و s / c كل من الأم الحامل والجنين من المضاعفات المحتملة. الهدف من البحث أثناء الحمل هو العوامل المسببة للكلاميديا واليوريا والميكوبلازما ، مثل الخميرة (عادة المبيضات البيضاء) ، وغيرها من الكائنات الحية الدقيقة الانتهازية والممرضة.
فيديو: فيديو توضيحي عن ثقافة الخزان من قناة عنق الرحم
حالات خاصة ذات أهمية خاصة لمن يخضعون للاختبارات
مرة واحدة في الجهاز التناسلي ، الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض ، بعد وقت قصير جدا ، تتقن وتبدأ نشاطها الضار. على سبيل المثال ، المكورات البنية المسببة للأمراض (النيسرية) ، والتي هي السبب في مرض مزعج إلى حد ما يسمى ويتعلق بالأمراض المنقولة جنسياً ، يشعر وكأنه في المنزل حرفياً في اليوم الثالث. يبدأون في التكاثر بنشاط ويتحركون بجرأة في الجهاز التناسلي ، والاستيلاء على المزيد والمزيد من المناطق الجديدة. يعلم الجميع أن مرض السيلان يعالج الآن بشكل جيد ولا يخاف منه أحد تقريبًا. لكن عليك أولا أن تجده. الطريقة الرئيسية للبحث عن هذه العدوى هي البذر في الخزان ، والزراعة ، والتعرف على صبغ الجرام ، والفحص المجهري.
وجدت في مسحة مأخوذة "على الفلورا" من الجهاز التناسلي ، ملقاة في أزواج "حبوب البن" (المكورات المزدوجة) ، لا تشير إلى وجود مرض ينتقل عن طريق الاتصال الجنسي. غالبًا ما تظهر هذه البكتيريا الدقيقة في المهبل في مرحلة ما بعد انقطاع الطمث ولا تعني شيئًا سيئًا. لا يمكن للمسحة المأخوذة تحت ظروف غير معقمة على شريحة زجاجية وملطخة بأزرق الميثيلين أو رومانوفسكي (علم الخلايا) أن تفرق بين الكائنات الحية الدقيقة. يمكنه فقط أن يفترض ويحيل المريض لإجراء بحث إضافي (الحصول على ثقافة معزولة).
وتجدر الإشارة إلى أنه إذا لم يكن كشط الأغشية المخاطية للمسالك البولية ، المأخوذ للبذر على اليوريا ، أمرًا نادر الحدوث ، فغالبًا ما يتجنب الأطباء أنفسهم بذر البول ، حيث يصعب التعامل معه.
إنه يخلق صعوبات في التشخيص ، مما يسبب ضررًا كبيرًا ليس فقط أثناء الحمل. بالإضافة إلى ذلك ، تسبب الكلاميديا العديد من الأمراض الشائعة ليس فقط بين النساء ، ولكن أيضًا بين الذكور ، لذلك يتم زرعها وزراعتها ودراستها ، ويتم تحديد الحساسية للعلاج بالمضادات الحيوية ، وبالتالي يتم مكافحتها.
أثناء الحمل ، يصعب الاستغناء عن الثقافة البكتريولوجية بشكل عام ، حيث يمكن تفويت العديد من الكائنات الحية الدقيقة ، المحجوبة في لطاخة خلوية. وفي الوقت نفسه ، يمكن أن يكون تأثير بعض مسببات الأمراض المنقولة بالاتصال الجنسي على الجنين ضارًا. بالإضافة إلى ذلك ، يصعب علاج المرأة الحامل ، ووصف المضادات الحيوية "بالعين" أمر غير مقبول بكل بساطة.
طرق البذر
لعزل الثقافات النقية من مسببات الأمراض ، يلجأون في المرحلة الأولى إلى تلقيحهم على الوسائط المناسبة ، والتي تتم في ظل ظروف خاصة (معقمة!). في الأساس ، يتم نقل المواد إلى البيئة بمساعدة الأجهزة المستخدمة في القرن التاسع عشر من قبل لويس باستور العظيم:
- حلقة بكتيرية
- ماصة باستور
- الزجاج قضيب.
بالطبع ، خضعت العديد من الأدوات لتغييرات على مدار القرنين ، وقد حلت محلها الأدوات البلاستيكية المعقمة والتي يمكن التخلص منها ، ومع ذلك ، لم تبقى الأدوات القديمة في الماضي ، واستمرت في خدمة علم الأحياء الدقيقة حتى يومنا هذا.
تتطلب المرحلة الأولى للحصول على المستعمرات الامتثال لقواعد معينة:
- يتم البذر فوق مصباح كحولي في صندوق معالج مسبقًا بالمطهرات ومعالجة الكوارتز ، أو في خزانة رقائقية تضمن العقم في منطقة العمل ؛
- يجب أن تكون ملابس العامل الصحي ، والقفازات ، والبيئة معقمة أيضًا ، لأن العكس يمنع عزل السلالات المعزولة ؛
- تحتاج إلى العمل في الملاكمة بسرعة ، ولكن بحذر ، لا يمكنك التحدث وتشتيت انتباهك ، بينما عليك أن تتذكر السلامة الشخصية ، لأن المواد يمكن أن تكون معدية.
عزل السلالات ودراسة الثقافات النقية
لا يكون عزل السلالات هو نفسه دائمًا ، نظرًا لأن بعض الوسائط البيولوجية الموجودة في جسم الإنسان تتطلب نهجًا فرديًا ، على سبيل المثال ، زراعة الدم (الدم) أولاً في وسط سائل (نسبة 1: 10) "تكبر" قليلاً ، لأن الدم (غير المخفف) يمكن أن يقتل الكائنات الحية الدقيقة ، وبعد يوم أو أكثر ، تتم زراعته على أطباق بتري.
إن بذر البول وغسل المعدة والمواد السائلة الأخرى لها أيضًا خصائصها الخاصة ، حيث من أجل الحصول على ثقافة نقية ، يجب أولاً طرد السائل (ظروف معقمة!) ، وبعد ذلك فقط يتم البذر ، وليس السائل نفسه ، ولكن رواسبه .
تتم زراعة المستعمرات وزراعتها على أطباق بتري أو وضعها أولاً في وسط سائل يُسكب في قوارير معقمة ، ثم تُزرع المستعمرات المعزولة مرة أخرى ، ولكن على أجار مائل وتوضع المادة في منظم حرارة ليوم واحد. بعد التأكد من أن الثقافة الناتجة نقية ، يتم نقل السلالات إلى شريحة زجاجية ، ويتم عمل مسحة وملطخة وفقًا لجرام (في أغلب الأحيان) ، و Ziehl-Neelsen ، وما إلى ذلك ، وللتمايز ، يكون شكل الميكروب هو درس تحت المجهر:
- حجم وشكل الخلية البكتيرية.
- وجود كبسولات ، سوط ، جراثيم.
- الخصائص الصغرى (نسبة الكائنات الحية الدقيقة إلى التلوين) *.
* ربما سمع القارئ عن مُمْرِض مثل الوذمة اللولبية الشاحبة؟ هذا هو العامل المسبب لمرض الزهري ، وبالتالي ظهر اسمه (شاحب) لأنه لا يرى الطلاء جيدًا ويظل ورديًا قليلاً عند تلطيخه وفقًا لرومانوفسكي. الكائنات الحية الدقيقة التي لا ترى صبغات الأنيلين تسمى سلبية الجرام ، وتدرك - إيجابية الجرام. يتم إعطاء البكتيريا سالبة الجرام لونًا ورديًا أو أحمر عن طريق صبغ الجرام مع صبغات إضافية (أرجواني ، سافرانين).
يمكن تسمية البذر في الخزان بتحليل قديم ، لكن شعبيته لا تسقط من هذا ، على الرغم من أن علم الجراثيم الحديث لديه القدرة على عزل ليس فقط سلالات ، ولكن أيضًا خلية واحدة منه ، وهو ما يسمى استنساخ. ومع ذلك ، للحصول على استنساخ ، هناك حاجة إلى جهاز خاص - معالج دقيق ، وهو غير متوفر في المختبرات التقليدية ، لأنه يستخدم بشكل أساسي لأغراض البحث (الدراسات الجينية).