الامتثال لتدابير التعقيمهو استخدام المعدات والمحاليل المعقمة والوقاية من تلوثها أثناء العمل. تنتشر البكتيريا والجراثيم الفطرية على نطاق واسع في البيئة ، بما في ذلك في المختبرات. يجب أن يهتم علماء الأحياء الدقيقة باستمرار بعقم وسط الاستزراع والمعدات. هذه "المضايقات" هي جزء لا يتجزأ من عمل أي عالم ميكروبيولوجي. تقوم مختبرات المدارس والكليات بتدريس الاحتياطات الأساسية فقط. يتطلب العمل الميكروبيولوجي الروتيني مختبرات مجهزة بشكل خاص. يجب أن يكون لها أسطح يسهل تنظيفها ومناطق عمل مسيجة بشكل خاص (صناديق) حيث يتم توفير الهواء المعقم المفلتر.
أكواب تعبئة
أكواب تعبئةواحدة من أبسط الطرق الميكروبيولوجية. الطبق عبارة عن طبق بتري يحتوي على أجار مغذي. أطباق بتري مصنوعة خصيصًا أوعية مستديرة ضحلة يمكن أن تكون زجاجية أو بلاستيكية. يتم استخدامها لنمو البكتيريا والفطريات أو زراعة الأنسجة على الوسائط الصلبة. يبلغ قطر أطباق بيتري عادةً حوالي 9 سم. يمكن إعادة استخدام الأكواب الزجاجية بعد التعقيم. يتم التخلص من الأكواب البلاستيكية بعد الاستخدام ؛ عادة ما يتم تعقيمها لتدمير الثقافة. في نفس الوقت تذوب. يتم شراء الكؤوس في عبوات محكمة الغلق ومعقمة بأشعة جاما. تمنع الأغطية تلوث الكوب ، ومع ذلك ، يمكن أن تنتشر جزيئات الغاز بين الحجم الداخلي للكوب والبيئة من خلال المخالفات المجهرية عند نقاط التلامس بين القاع والغطاء. لذلك ، يمكن للأكسجين الوصول إلى المزرعة ، ويتم إزالة ثاني أكسيد الكربون إلى الخارج.
إجراء الصبأجار المغذيات المنصهر ("ملء الطبق") يظهر في الشكل. من المفهوم أن الأجار تم تحضيره في قوارير صغيرة (قوارير مكارتني).
طرق التلقيح
عند إدخال عدد صغير من الكائنات الحية الدقيقة في وسط الاستزراع - التلقيح (أو البذر) - من الضروري استخدام طرق معقمة لتجنب التلوث.
تختلف إجراءات التلقيح حسب نوع الوسيط (السائل أو الصلب).
البذر على وسط صلب
بذر السكتة الدماغية أو البذر التخفيف
الطريقة موضحة في الشكل. يتم استخدامه لعزل المستعمرات البكتيرية النقية من خليط البكتيريا. بالنسبة للبذر ، يتم استخدام حلقة سلكية ، والتي يجب إشعالها أولاً ، كما هو موضح في الشكل. 12.4 لتر للتعقيم. بعد ذلك ، يتم أخذ غشاء رقيق من المعلق السائل أو كمية صغيرة من المواد الصلبة التي تحتوي على الكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة من ثقافة سابقة النمو أو مصدر آخر للكائنات الحية الدقيقة عن طريق حلقة. يتم تمرير الحلقة برفق فوق سطح الوسيط ، مما يؤدي إلى سلسلة من الضربات. بعد كل سلسلة من السكتات الدماغية ، يتم تدوير الكوب قليلاً بحيث يتم توزيع البكتيريا من السلسلة السابقة من السكتات الدماغية في كل سلسلة جديدة ، وبالتالي استنفاد السكتات الدماغية للبكتيريا الفردية. (لا تتوقع رؤية أي شيء في الضربات النهائية قبل انتهاء فترة الحضانة!) عندما تتم ممارسة هذه الطريقة ، يمكن تنفيذ السكتات الدماغية بسرعة كبيرة.
بهذه الطريقة يمكن عزل البكتيريا من الموائل الطبيعية مثل التربة والحليب والماء. من الأفضل تعليق عينات المواد الصلبة ، مثل التربة ، في كمية صغيرة من الماء ، أو تحضينها مسبقًا في وسط سائل. الحليب المبستر هو المصدر الآمن للعمل الروتيني. قبل تجربة البكتيريا أو الفطريات ، اقرأ التعليمات وقواعد السلامة لتقليل مخاطر زراعة الآفات.
البذر على سطح أجار
هذه الطريقة موضحة في الشكل. إنه مناسب لتلقيح الكائنات الحية الدقيقة من معلق سائل على وسط صلب. تُستخدم الطريقة لتحديد عدد الخلايا القابلة للحياة في العينة بعد التخفيفات التسلسلية. يمكن استخدامه أيضًا للحصول على "عشب" مستمر من الكائنات الحية الدقيقة على سطح أجار بعد تلقيح كثيف. هذا مفيد عند تحليل نشاط المثبطات ، مثل المضادات الحيوية أو المطهرات ، والتي تضاف إلى الآبار المصنوعة في الأجار أو يتم تطبيقها على أقراص الترشيح الورقية الموضوعة على سطح الأجار. ينتشر المانع من خلال الأجار ، مكونًا منطقة تثبيط نمو حول الثقوب أو أقراص ورق الترشيح ، والتي يمكن رؤيتها بعد الحضانة. يمكن أن يكون قطر المنطقة بمثابة مقياس لدرجة التثبيط.
البذر بالصب
البذر بالصبيتم استخدام طريقة بديلة لطريقة طلاء سطح أجار لتلقيح الخلايا من مزرعة سائلة وكذلك لحساب الخلايا القابلة للحياة. نظرًا لتوزيع الخلايا في جميع أنحاء الوسط وليس فقط على سطح الأجار ، يمكن حساب عدد أكبر بكثير - ما يصل إلى 1000 مستعمرة لكل لوحة. ومع ذلك ، فإن حجم المستعمرات المزروعة أصغر بكثير.
حجم معينيتم إدخال (حتى 0.5 سم 3) من المعلق الخلوي في حجم مناسب (حوالي 15-20 سم 3) من أجار المغذيات المعقم المذاب في قنينة صغيرة ، والتي تم تبريدها مسبقًا إلى 45-50 درجة مئوية في حمام مائي. قم بإزالة الغطاء وحرق عنق الزجاجة قبل إضافة تعليق الخلية ، كما هو موضح في الشكل. يتم خلط المعلق الخلوي تمامًا مع أجار المغذيات عن طريق قلب (عدم الاهتزاز) ذهابًا وإيابًا القارورة الموجودة في راحة اليد. ثم صب الخليط في طبق بتري معقم كما هو موضح في الشكل. قم بتوقيع قاع الطبق واحتضانه. بعد فترة الحضانة ، يبدو الطبق مثل الذي يظهر في الصورة.
البذر عن طريق الحقن
طريقةيستخدم لزراعة الكائنات الحية اللاهوائية أو الكائنات الحية التي تنمو بتركيزات منخفضة من الأكسجين (الكائنات الدقيقة). عادة ما يتم استخدام أنبوب اختبار مع وسط أجار المغذيات. نظرًا لصغر السطح والعمق الكبير للأجار في أنبوب الاختبار مقارنةً بالطبق ، فإن وصول الأكسجين إلى داخل الأجار محدود. يتم البذر بسلك مستقيم (بدون حلقة) ، أو بإبرة بكتريولوجية. يتم أخذ كمية صغيرة من المزرعة (صلبة أو سائلة) بطرف إبرة ثم يتم ثقب أجار عموديًا بها. تنمو الثقافة في أجار في جميع الاتجاهات من خط البزل.