सूक्ष्म जीव विज्ञान में सड़न के उपाय। पेट्री डिश भरना।

सड़न रोकनेवाला उपायों का अनुपालनबाँझ उपकरण और समाधान का उपयोग और काम के दौरान उनके संदूषण की रोकथाम है। प्रयोगशालाओं सहित पर्यावरण में बैक्टीरिया और कवक के बीजाणु व्यापक रूप से वितरित किए जाते हैं। माइक्रोबायोलॉजिस्ट को कल्चर माध्यम और उपकरणों की बाँझपन का लगातार ध्यान रखना चाहिए। ये "असुविधाएं" किसी भी सूक्ष्म जीवविज्ञानी के काम का एक अभिन्न अंग हैं। स्कूल और कॉलेज की प्रयोगशालाएँ केवल बुनियादी सावधानियाँ सिखाती हैं। नियमित सूक्ष्मजीवविज्ञानी कार्य के लिए विशेष रूप से सुसज्जित प्रयोगशालाओं की आवश्यकता होती है। उनके पास ऐसी सतहें होनी चाहिए जिन्हें साफ करना आसान हो और विशेष रूप से उन कार्य क्षेत्रों (बक्सों) को बंद कर दिया जाए जहां फ़िल्टर की गई बाँझ हवा की आपूर्ति की जाती है।

भरने वाले कप

भरने वाले कपसबसे बुनियादी सूक्ष्मजीवविज्ञानी तरीकों में से एक। एक डिश एक पेट्री डिश है जिसमें पोषक तत्व अगर होता है। पेट्री डिश विशेष रूप से उथले गोल कंटेनर बनाए जाते हैं जो कांच या प्लास्टिक के हो सकते हैं। इनका उपयोग ठोस मीडिया पर बैक्टीरिया, कवक या ऊतक संवर्धन के विकास के लिए किया जाता है। आमतौर पर पेट्री डिश का व्यास लगभग 9 सेंटीमीटर होता है। ऑटोक्लेविंग के बाद ग्लास कप का पुन: उपयोग किया जा सकता है। प्लास्टिक के कप इस्तेमाल के बाद फेंक दिए जाते हैं; वे आमतौर पर संस्कृति को नष्ट करने के लिए ऑटोक्लेव होते हैं। साथ ही ये पिघल जाते हैं। कप सीलबंद पैकेजों में खरीदे जाते हैं जिन्हें गामा किरणन द्वारा विसंक्रमित किया जाता है। ढक्कन कप के संदूषण को रोकते हैं, हालांकि, नीचे और ढक्कन के बीच संपर्क के बिंदुओं पर सूक्ष्म अनियमितताओं के माध्यम से गैस के अणु कप की आंतरिक मात्रा और पर्यावरण के बीच फैल सकते हैं। इसलिए, ऑक्सीजन की संस्कृति तक पहुंच है, और कार्बन डाइऑक्साइड को बाहर निकाल दिया जाता है।

डालने की प्रक्रियापिघला हुआ पोषक तत्व अगर ("डिश भरना") चित्र में दिखाया गया है। समझा जाता है कि अगर छोटी शीशियों (मेकार्टनी शीशियों) में तैयार किया गया था।

इनोक्यूलेशन के तरीके

संस्कृति के माध्यम में सूक्ष्मजीवों की एक छोटी संख्या को पेश करते समय - इनोक्यूलेशन (या सीडिंग) - संदूषण से बचने के लिए सड़न रोकनेवाला तरीकों का उपयोग करना आवश्यक है।
इनोक्यूलेशन प्रक्रियाएं माध्यम (तरल या ठोस) के प्रकार के आधार पर भिन्न होती हैं।

ठोस माध्यम पर बोना

स्ट्रोक बुवाई या कमजोर बुवाई
विधि चित्र में दिखाई गई है। इसका उपयोग जीवाणुओं के मिश्रण से शुद्ध जीवाणु उपनिवेशों को अलग करने के लिए किया जाता है। बुवाई के लिए, एक तार लूप का उपयोग किया जाता है, जिसे पहले प्रज्वलित किया जाना चाहिए, जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 12.4, एल स्टरलाइज़ करने के लिए। फिर, तरल निलंबन की एक पतली फिल्म या जांच के तहत सूक्ष्मजीव युक्त ठोस सामग्री की एक छोटी मात्रा को लूप के माध्यम से पूर्व-विकसित संस्कृति या सूक्ष्मजीव के अन्य स्रोत से लिया जाता है। लूप को धीरे-धीरे माध्यम की सतह पर से गुजारा जाता है, जिससे स्ट्रोक की एक श्रृंखला बन जाती है। स्ट्रोक की प्रत्येक श्रृंखला के बाद, कप को थोड़ा घुमाया जाता है ताकि स्ट्रोक की पिछली श्रृंखला के बैक्टीरिया प्रत्येक नई श्रृंखला में वितरित हो जाएं, इस प्रकार स्ट्रोक अलग-अलग बैक्टीरिया में कम हो जाते हैं। (ऊष्मायन समय समाप्त होने से पहले अंतिम स्ट्रोक पर कुछ भी देखने की उम्मीद न करें!) जब विधि का अभ्यास किया जाता है, तो स्ट्रोक बहुत जल्दी किया जा सकता है।

इस पद्धति से बैक्टीरिया को मिट्टी, दूध, पानी जैसे प्राकृतिक आवासों से अलग किया जा सकता है। ठोस पदार्थों के नमूने, जैसे कि मिट्टी, को पानी की थोड़ी मात्रा में निलंबित कर दिया जाता है, या तरल माध्यम में पूर्व-ऊष्मायन किया जाता है। पाश्चुरीकृत दूध नियमित कार्य के लिए एक सुरक्षित स्रोत है। बैक्टीरिया या कवक के साथ प्रयोग करने से पहले, कीटों की खेती के जोखिम को कम करने के लिए निर्देश और सुरक्षा नियम पढ़ें।

अगर सतह पर सीडिंग

इस विधि को चित्र में दिखाया गया है। तरल निलंबन से ठोस माध्यम पर सूक्ष्मजीवों के टीकाकरण के लिए यह सुविधाजनक है। धारावाहिक कमजोर पड़ने के बाद नमूने में व्यवहार्य कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के लिए विधि का उपयोग किया जाता है। मोटे टीकाकरण के बाद अगर की सतह पर सूक्ष्मजीवों का निरंतर "लॉन" प्राप्त करने के लिए भी इसका उपयोग किया जा सकता है। अवरोधकों की गतिविधि का विश्लेषण करते समय यह उपयोगी होता है, जैसे एंटीबायोटिक्स या कीटाणुनाशक, जो अगर में बने कुओं में जोड़े जाते हैं या अगर की सतह पर रखे फिल्टर पेपर डिस्क पर लगाए जाते हैं। अवरोधक आगर के माध्यम से फैलता है, छिद्रों या फिल्टर पेपर डिस्क के चारों ओर एक विकास अवरोधक क्षेत्र बनाता है, जो ऊष्मायन के बाद दिखाई देता है। ज़ोन व्यास निषेध की डिग्री के माप के रूप में काम कर सकता है।

डालकर बुवाई करना

डालकर बुवाई करनाआगर सतह चढ़ाना विधि के लिए एक वैकल्पिक विधि का उपयोग तरल संस्कृति से कोशिकाओं को टीका लगाने के साथ-साथ व्यवहार्य कोशिकाओं की गणना करने के लिए किया जाता है। चूंकि कोशिकाओं को पूरे माध्यम में वितरित किया जाता है और न केवल अगर की सतह पर, कई और गिने जा सकते हैं - प्रति प्लेट 1000 कॉलोनियों तक। हालाँकि, बढ़ी हुई कॉलोनियों का आकार बहुत छोटा है।

निश्चित मात्रा(0.5 सेमी 3 तक) सेल निलंबन को एक छोटी शीशी में पिघलाए गए निष्फल पोषक तत्व अगर की उपयुक्त मात्रा (लगभग 15-20 सेमी 3) में पेश किया जाता है, जिसे पहले पानी के स्नान में 45-50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया गया था। टोपी निकालें और सेल निलंबन जोड़ने से पहले शीशी की गर्दन को जला दें, जैसा कि चित्र में दिखाया गया है। हथेलियों में रखी शीशी को आगे-पीछे घुमाकर (नहीं मिलाते हुए) सेल सस्पेंशन को पोषक तत्व अगर के साथ अच्छी तरह मिलाया जाता है। फिर मिश्रण को एक बाँझ पेट्री डिश में डालें जैसा कि चित्र में दिखाया गया है। डिश के नीचे साइन इन करें और इसे इनक्यूबेट करें। ऊष्मायन के बाद, पकवान चित्र में दिखाए गए जैसा दिखता है।

इंजेक्शन द्वारा बुवाई

तरीकाअवायवीय जीवों या कम ऑक्सीजन सांद्रता (माइक्रोएरोफिल्स) पर बढ़ने वाले जीवों की खेती के लिए उपयोग किया जाता है। आमतौर पर पोषक तत्व अगर माध्यम वाली टेस्ट ट्यूब का उपयोग किया जाता है। डिश की तुलना में टेस्ट ट्यूब में आगर की छोटी सतह और बल्कि बड़ी गहराई के कारण, अगर के अंदर ऑक्सीजन की पहुंच सीमित है। बुवाई एक सीधे तार (लूप के बिना), या बैक्टीरियोलॉजिकल सुई के साथ की जाती है। कल्चर (ठोस या तरल) की एक छोटी मात्रा को सुई की नोक से लिया जाता है और फिर इसके साथ लंबवत पंचर किया जाता है। पंचर लाइन से संस्कृति अगर में सभी दिशाओं में बढ़ती है।