रक्तगुल्म

hemagglutination(ग्रीक हाइमा ब्लड और लैट से। एग्लूटिनाटियो ग्लूइंग), बैक्टीरिया, वायरस, टॉक्सिन्स आदि के प्रभाव में एरिथ्रोसाइट्स की ग्लूइंग और वर्षा, एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर सोखने में सक्षम, साथ ही हेमग्लगुटिनिन। एक जानवर के एरिथ्रोसाइट्स को सामान्य आइसोहेमाग्ग्लुटिनिन (एंटीबॉडी) की उपस्थिति के कारण दूसरे के सीरम से जोड़ा जा सकता है। प्रतिक्रिया की सहायता से जी।स्थापित करना । घटना जी।सूक्ष्मजीवविज्ञानी और प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययन में उपयोग किया जाता है।

प्रत्यक्ष, या सक्रिय, और अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय के बीच भेद करें, जी।सीधा जी।एरिथ्रोसाइट्स पर बैक्टीरिया और वायरल एजेंटों के प्रत्यक्ष प्रभाव के कारण। उसी समय, हेमाग्लगुटिनिन म्यूकोप्रोटेज प्रकृति के रिसेप्टर्स के साथ बातचीत करते हैं जो म्यूसिनेज एंजाइम की मदद से एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित होते हैं, जिससे एंटीजन का सोखना होता है। नतीजतन, एरिथ्रोसाइट्स (उदाहरण के लिए, चिकन) का निलंबन असमान किनारों के साथ एक छाता के रूप में एक विस्तृत अवक्षेप बनाता है। यह प्रतिक्रिया विशिष्ट नहीं है, प्रतिरक्षा सीरम की भागीदारी के बिना आगे बढ़ती है। प्रत्यक्ष जी।सीरोलॉजिकल अध्ययनों में प्रयोग किया जाता है, विशेष रूप से अवरोध प्रतिक्रिया में प्रयुक्त एंटीजन के कामकाजी कमजोर पड़ने का निर्धारण करने में जी।, जो प्रतिरक्षा विशिष्ट सीरम द्वारा एंटीजन की रक्तगुल्म क्रिया में देरी पर आधारित है। प्रत्यक्ष जी।कुछ वायरल रोगों (इक्वाइन इन्फ्लुएंजा, बर्ड प्लेग, न्यूकैसल रोग, डक फ्लू) के अनुमानित निदान के लिए भी उपयोग किया जाता है। अप्रत्यक्ष जी।(आरएनएचए) प्रतिरक्षा सीरम के सजातीय एंटीबॉडी के साथ समूहीकृत करने के लिए संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स (उन पर एक प्रतिजन के सोखने से) की क्षमता पर आधारित है। अप्रत्यक्ष की उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के कारण जी।इसका उपयोग कई वायरल, बैक्टीरियल और रिकेट्सियल बीमारियों के निदान के लिए किया जाता है। अप्रत्यक्ष के कई संशोधन हैं जी। RNHA और इसके संशोधनों की मदद से, जानवरों और मनुष्यों के रक्त सीरम में दोनों एंटीबॉडी (ज्ञात एंटीजन के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग करते समय) और एंटीजन (एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग करते समय कुछ के साथ संवेदीकरण) एंटीबॉडी) का पता लगाया जा सकता है। प्रतिक्रिया के लिए, विभिन्न जानवरों की प्रजातियों के धोए गए एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है (अक्सर भेड़ और चिकन के एरिथ्रोसाइट्स)। टैनिन के साथ उनके उपचार के बाद एक प्रोटीन प्रकृति के बड़े आणविक प्रतिजनों को सोखने के लिए एरिथ्रोसाइट्स की क्षमता बढ़ जाती है। एरिथ्रोसाइट्स के शेल्फ जीवन को बढ़ाने के लिए, उन्हें फॉर्मेलिन के साथ संरक्षित किया जाता है। औपचारिक एरिथ्रोसाइट्स से प्राप्त डायग्नोस्टिकम लंबे समय तक अपनी गतिविधि बनाए रख सकते हैं। रेडीमेड एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिक्स की उपस्थिति में, प्रतिक्रिया का सूत्रीकरण बहुत सरल है। पशु चिकित्सा पद्धति में, RNGA का उपयोग कुछ (मुख्य रूप से वायरल) पशु रोगों के निदान के लिए किया जाता है - क्लासिकल फाउल प्लेग, न्यूकैसल रोग, काउ पॉक्स, हॉर्स इन्फ्लुएंजा, स्वाइन और डक फ्लू, पुलोरोसिस - एवियन टाइफाइड, आदि। यह भी देखें।

साहित्य:
पशु चिकित्सा में प्रयोगशाला शोध, एम।, 1971;
माइक्रोबायोलॉजिकल और वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड्स की हैंडबुक, एड। एम. ओ. बिगर 2रा संस्करण, एम., 1973।

पशु चिकित्सा विश्वकोश शब्दकोश। - एम .: "सोवियत विश्वकोश". मुख्य संपादक वी.पी. शिशकोव. 1981 .

समानार्थी शब्द:

देखें कि "हेमग्लुटिनेशन" अन्य शब्दकोशों में क्या है:

hemagglutination- रक्तगुल्म... वर्तनी शब्दकोश

hemagglutination- रूसी पर्यायवाची का भीड़, एकत्रीकरण शब्दकोश। hemagglutination संज्ञा, समानार्थक शब्द की संख्या: 2 एकत्रीकरण (3) … पर्यायवाची शब्द

रक्तगुल्म- (हीमो से... और अव्यक्त। एग्लूटीनेशन बॉन्डिंग) विभिन्न एजेंटों के प्रभाव में एक तरल में निलंबित एरिथ्रोसाइट्स के बंधन और वर्षा, उदाहरण के लिए, एंटीबॉडी, बैक्टीरिया या वायरस। Hemagglutination परीक्षण का निदान करने के लिए प्रयोग किया जाता है ... ... बड़ा विश्वकोश शब्दकोश

hemagglutination- नंगी आंखों से दिखने वाले समुच्चय में एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ने की प्रक्रिया। जी। कारण: 1) एरिथ्रोसाइट और हेटरोफिलिक एजी पर; 2) एबी से एजी, एरिथ्रोसाइट्स के लिए विदेशी, उनकी सतह पर adsorbed (हेमग्लगुटिनेशन निष्क्रिय प्रतिक्रिया देखें); 3) ... सूक्ष्म जीव विज्ञान का शब्दकोश

रक्तगुल्म- हेमाग्लुटिनेशन, होमोलॉगस सीरा के साथ मिश्रित होने पर एरिथ्रोसाइट्स का एग्लूटिनेशन (क्लंपिंग)। यदि मानव एरिथ्रोसाइट्स को उसी व्यक्ति के सीरम से बदल दिया जाता है, तो हिलाकर एक समान निलंबन प्राप्त किया जाएगा। अगर एक व्यक्ति की लाल रक्त कोशिकाएं ... ... बिग मेडिकल इनसाइक्लोपीडिया

hemagglutination- एंटीबॉडी का निर्धारण करने की विधि अंतर्निहित घटना, एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन के आधार पर या तो स्वयं एरिथ्रोसाइट्स के एंटीजन के लिए बाध्य करने के परिणामस्वरूप, या एरिथ्रोसाइट्स की सतह से कृत्रिम रूप से जुड़े अन्य एंटीजन के लिए। ... ... तकनीकी अनुवादक की पुस्तिका- (हेम + एग्लूटिनेशन) एरिथ्रोसाइट्स का एग्लूटिनेशन ... बिग मेडिकल डिक्शनरी

hemagglutination- ग्रीक से। हाइमा रक्त और अव्यक्त। agglutinatio agglutination), समूहन की प्रक्रिया और लाल रक्त कोशिकाओं के बाद के अवसादन; हेमाग्लगुटिनिन के कारण (देखें। हेमाग्लगुटिनिन), बैक्टीरिया और वायरस, एजेंटों को सोखने में सक्षम ... ... महान सोवियत विश्वकोश

hemagglutination- एरिथ्रोसाइट्स का ग्लूइंग (एग्लूटिनेशन)। यह असंगत रक्त के आधान सहित विकसित होता है।

रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (RHA)

आरजीए इस तथ्य पर आधारित है कि कुछ प्रकार के बैक्टीरिया और वायरस जानवरों (और पक्षियों) की विभिन्न प्रजातियों के एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर सोखने की क्षमता रखते हैं, जिससे वे एक साथ चिपक जाते हैं और एग्लूटिनेट बनाते हैं। (प्रत्यक्ष आरजीए)।

एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर एक एंटीजन (बैक्टीरिया, वायरस) का सोखना हमेशा एक दृश्य तलछट के गठन से प्रकट नहीं होता है; इसके अलावा, आरजीए विशिष्ट नहीं है, क्योंकि एक ही पशु प्रजाति के एरिथ्रोसाइट्स विभिन्न प्रतिजनों का विज्ञापन कर सकते हैं।

निष्क्रिय (अप्रत्यक्ष) hemagglutination (RPHA) की प्रतिक्रिया विशिष्ट है। इसकी स्थापना के लिए, एक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम प्रारंभिक रूप से तैयार किया जाता है (एरिथ्रोसाइट्स जिस पर प्रतिजन का विज्ञापन किया जाता है)। इस प्रयोजन के लिए, राम (या मुर्गा) रक्त को 3-5-गुना सेंट्रीफ्यूगेशन का उपयोग करके फॉस्फेट बफर समाधान (पीएच 7.2) में कई बार विसंक्रमित रूप से प्राप्त, डिफाइब्रिनेटेड और धोया जाता है। सतह पर तैरनेवाला हटा दिया जाता है, एरिथ्रोसाइट्स की एकाग्रता को 2.5% (1:40) में समायोजित किया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स के 2.5% निलंबन को एक समान मात्रा (1 मिली या 0.5 मिली) में जोड़ा जाता है, अध्ययन किए गए सूक्ष्म जीव प्रजातियों के जीवाणुओं का निलंबन 5-10 बिलियन कोशिकाओं प्रति 1 मिली की सांद्रता में होता है। एरिथ्रोसाइट्स पॉलीसेकेराइड प्रकृति के एंटीजन को आसानी से सोख लेते हैं। एक प्रोटीन प्रकृति के एंटीजन को सोखने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स को 1:20,000 के कमजोर पड़ने पर टैनिन के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है। जोड़े गए एंटीजन के संयोजन में एरिथ्रोसाइट्स को थर्मोस्टैट (37 डिग्री सेल्सियस) में 2 घंटे के लिए संवेदीकरण (सोखना) के लिए छोड़ दिया जाता है। , फिर फॉस्फेट बफर समाधान (चित्र। 9.13) के साथ 5 मिनट के लिए 3-4 हजार आरपीएम / मिनट पर फिर से सेंट्रीफ्यूज किया गया।

परिणामी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम को टेस्ट ट्यूब (या प्लेक्सीग्लास बोर्ड में कुएं) में रखा जाता है और इसमें मानक प्रतिरक्षा सीरम जोड़ा जाता है।

सकारात्मक मामलों में, आरजीए होगा - टेस्ट ट्यूब के नीचे की पूरी सतह पर वितरित एक विशेषता परतदार या दानेदार तलछट के रूप में एरिथ्रोसाइट्स का नुकसान (हेमग्लगुटिनेट)। इसका मतलब है कि अध्ययन के तहत माइक्रोब (एंटीजन) का प्रकार इम्यूनोसेरम एंटीबॉडी के लिए विशिष्ट है। नकारात्मक मामलों में, बिना चिपकी हुई लाल रक्त कोशिकाएं एक छोटे सम वृत्त के रूप में तली में बैठ जाएंगी।

RPGA के परिणामों की अधिक विश्वसनीयता के लिए, देरी प्रतिक्रिया(ब्रेक लगाना) रक्तगुल्म घटना(RZGA) या इसका संशोधन - एंटीबॉडी न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन(आरआईए)।

चावल। 9.13। निष्क्रिय रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (योजना): एर - एरिथ्रोसाइट्स: एजी - एंटीजन: एटी - एंटीबॉडी

RZGA का सारइस तथ्य में शामिल है कि एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया एक विशिष्ट डायग्नोस्टिक सीरम और परीक्षण किए गए एंटीजन के साथ सेट की जाती है (अध्ययन किए गए माइक्रोब का उपयोग एंटीजन के रूप में किया जाता है)। इस मिश्रण को 37 डिग्री सेल्सियस पर 1-2 घंटे के लिए रखा जाता है, फिर एरिथ्रोसाइट्स मिलाए जाते हैं। यदि परीक्षण एंटीजन डायग्नोस्टिक सीरम एंटीबॉडीज के समरूप है, तो वे एक दूसरे के साथ बातचीत करते हैं और जोड़े गए एरिथ्रोसाइट्स एग्लुटिनेट नहीं होते - प्रतिक्रिया का परिणाम सकारात्मक होता है। यदि परीक्षण प्रतिजन सीरम एंटीबॉडी के लिए समरूप नहीं है या यह सामग्री में निहित नहीं है, तो जोड़ा गया एरिथ्रोसाइट्स एंटीजन को सोख लेता है और आरएचए होता है - आरएचए का परिणाम नकारात्मक है, जिस प्रकार के माइक्रोब (एंटीजन) का परीक्षण किया जा रहा है, वह स्थापित नहीं है।

PH A सेट करने की विधियह है कि वे समान मात्रा में लेते हैं और नैदानिक ​​प्रतिरक्षा सीरम को परीक्षण सामग्री (वांछित एंटीजन) के विभिन्न कमजोर पड़ने के साथ मिलाते हैं, इसे 1-2 घंटे के लिए संपर्क के लिए छोड़ देते हैं, फिर सीरम के लिए विशिष्ट (ज्ञात) एंटीजन के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स जोड़ें एंटीबॉडी (एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम)। जब वांछित एंटीजन सीरम एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया करता है, तो वे बेअसर हो जाते हैं और जोड़े गए एरिथ्रोसाइट्स एग्लूटिनेट नहीं होते हैं, आरएचए नहीं होता है - पीएचए परिणाम सकारात्मक होता है। यदि परीक्षण सामग्री में उपयोग किए गए सीरम के एंटीबॉडी के लिए एंटीजन विशिष्ट नहीं है, तो एंटीबॉडी का कोई निष्प्रभावीकरण नहीं होगा। इसलिए, जब एक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन (हेमग्लगुटिनेशन) प्रकट होता है, और आरएचए का परिणाम नकारात्मक होता है। एंटीबॉडी न्यूट्रलाइजेशन टेस्ट न केवल जीवित (या मारे गए) बैक्टीरिया के निलंबन में एंटीजन का पता लगाने के लिए एक अत्यधिक संवेदनशील तरीका है, बल्कि विभिन्न अंगों, मूल और गर्म स्राव और रोगग्रस्त जीव के उत्सर्जन के ग्राउंड टिश्यू के निलंबन में भी है।

1. रक्तगुल्म प्रतिक्रिया

(आरजीए)

कुछ जानवरों की प्रजातियों के एरिथ्रोसाइट्स को चुनिंदा रूप से एकत्र करने के लिए कुछ वायरस की क्षमता के आधार पर वायरस की पहचान और पहचान के लिए एक विधि।

आरएचए एरिथ्रोसाइट आसंजन की घटना पर आधारित है, जो विभिन्न कारकों के प्रभाव में होता है। प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म के बीच अंतर। प्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया में, एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपक जाते हैं जब कुछ एंटीजन, जैसे कि वायरस, उन पर सोख लिए जाते हैं।

सीरोलॉजिकल अध्ययनों में, प्रत्यक्ष रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है, जब रोगी से पृथक वायरस को एक विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम के साथ निष्प्रभावी किया जाता है, और फिर लाल रक्त कोशिकाओं के साथ जोड़ा जाता है। रक्तगुल्म की अनुपस्थिति वायरस के पत्राचार और उपयोग किए गए प्रतिरक्षा सीरम को इंगित करती है।

एक अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (निष्क्रिय hemagglutination) देखी जाती है जब विभिन्न प्रतिजनों के साथ पूर्व-उपचारित (संवेदी) एरिथ्रोसाइट्स को प्रतिरक्षा सीरम या रोगी सीरम के साथ पूरक किया जाता है जिसमें उपयुक्त एंटीबॉडी होते हैं। एरिथ्रोसाइट्स का एक विशिष्ट बंधन है, उनका निष्क्रिय रक्तगुल्म।

अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय, रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया अन्य सीरोलॉजिकल विधियों की संवेदनशीलता और विशिष्टता में श्रेष्ठ है, और इसका उपयोग बैक्टीरिया, रिकेट्सिया और प्रोटोजोआ के कारण होने वाले संक्रमण के निदान में किया जाता है।

अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया स्थापित करने की विधि में कई चरण होते हैं। सबसे पहले, एरिथ्रोसाइट्स को एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से धोया जाता है, फिर, यदि आवश्यक हो (प्रोटीन प्रकृति के एंटीजन का उपयोग करते समय), उन्हें 1: 20,000 टैनिन समाधान के साथ इलाज किया जाता है और घुलनशील एंटीजन के साथ संवेदनशील किया जाता है। बफ़र्ड आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल से धोने के बाद, एरिथ्रोसाइट एंटीजन उपयोग के लिए तैयार है। टेस्ट सेरा को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड सॉल्यूशन के साथ टेस्ट ट्यूब या छेद वाली विशेष प्लास्टिक प्लेटों में पतला किया जाता है, फिर प्रत्येक सीरम कमजोर पड़ने पर एक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है। ट्यूब के तल पर गठित एरिथ्रोसाइट तलछट की प्रकृति द्वारा अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है। प्रतिक्रिया का परिणाम सकारात्मक माना जाता है, जिसमें एरिथ्रोसाइट्स टेस्ट ट्यूब के पूरे तल को समान रूप से कवर करते हैं। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एक छोटी डिस्क या "बटन" के रूप में एरिथ्रोसाइट्स टेस्ट ट्यूब के नीचे के केंद्र में स्थित होते हैं।

आरएचए उपयोग

आरजीए का उपयोग सांकेतिक निदान के दौरान वायरस के संकेत (पहचान) के लिए किया जाता है, रक्तगुल्म गुणों द्वारा वायरस के अनुमापन के लिए (रक्तगुल्म इकाइयों का निर्धारण - एयू)।

वायरस सोखना

वायरस के कारण होने वाली एग्लूटिनेशन की घटना का आधार एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर वायरस का सोखना है, साथ में उत्तरार्द्ध और वर्षा का ग्लूइंग (एग्लूटिनेशन)।

आरजीए के लिए एंटीजन

आरएचए के लिए एक प्रतिजन के रूप में, कोई भी सामग्री ली जाती है (अंगों से निलंबन के रूप में रोग संबंधी सामग्री, संक्रमित टीबीई से सामग्री, ऊतक संस्कृतियों, आदि), जिसमें वायरस की उपस्थिति अपेक्षित है। सामग्री तरल होनी चाहिए, बड़े कणों के बिना।

एक सांकेतिक RGA की स्थापना

एक अनुमानित आरजीए सेट करने के लिए, वायरस युक्त सामग्री की एक बूंद को साफ और अच्छी तरह से वसा रहित कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, एरिथ्रोसाइट्स के 5% निलंबन की एक बूंद को इसमें जोड़ा जाता है और एक कांच की छड़ के साथ मिलाया जाता है।

आरएचए की प्रतिक्रिया का मूल्यांकन

क्रॉस (प्लस) में प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करें। क्रॉस में प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करते समय तलछट की प्रकृति पर ध्यान दिया जाता है। यदि एरिथ्रोसाइट्स ट्यूब के नीचे (एक छतरी के रूप में) समान रूप से एक पतली परत में बसे हैं, तो प्रतिक्रिया का मूल्यांकन चार पारों में किया जाता है

2. रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया- हीमोग्लूटिनेटिंग प्रकार के वायरस (एडेनोवायरस, अर्बोवायरस, कुछ एंटरोवायरस, इन्फ्लूएंजा और पैरेन्फ्लुएंजा वायरस, खसरा, रीओवायरस) द्वारा एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन को रोकने के लिए एंटीबॉडी की क्षमता पर आधारित एक सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया। विशिष्ट एंटीवायरल एंटीबॉडी इन विषाणुओं के विषाणुओं के हेमाग्लगुटिनिन की सतह के अणुओं के साथ परस्पर क्रिया करते हैं और एरिथ्रोसाइट झिल्ली के पूरक अणुओं के लिए उनके बंधन को अवरुद्ध करते हैं।

हाल ही में, प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से क्लिनिकल वायरोलॉजी प्रयोगशालाओं में कुछ वायरस के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के टाइटर्स निर्धारित करने के लिए उपयोग किया गया है, साथ ही सीरोलॉजिकल पहचान और वायरस के टाइपिंग के लिए रोगियों से नैदानिक ​​​​सामग्री से अलग किया गया है। वायरस के गैर-विशिष्ट अवरोधकों के लोगों के रक्त सीरम में उपस्थिति के साथ-साथ प्राकृतिक एंटीबॉडी - एग्लूटीनिन के कारण उपयोग कुछ हद तक सीमित है।

Hemagglutination निषेध प्रतिक्रिया (RTGA)। अपने नाम के बावजूद, प्रतिक्रिया का सिद्धांत कई तरह से वायरस के PH के समान है, क्योंकि यह विभिन्न वायरस को बांधने और उन्हें बेअसर करने की AT की क्षमता पर आधारित है, जिससे एरिथ्रोसाइट्स के लिए एग्लुटिनेट करना असंभव हो जाता है। नेत्रहीन, यह प्रभाव रक्तगुल्म के "निषेध" में प्रकट होता है। आरटीएचए का उपयोग वायरल संक्रमण के निदान में विशिष्ट एंटीहेमग्लगुटिनिन की पहचान करने और उनके हेमाग्लगुटिनिन द्वारा विभिन्न वायरस की पहचान करने के लिए किया जाता है, जो एजी के गुणों को प्रदर्शित करता है।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया

(आरटीजीए)

रोगी के रक्त सीरम में वायरस की पहचान करने या एंटीवायरल एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक विधि, रक्त सीरम प्रतिरक्षा की उपस्थिति में वायरस युक्त तैयारी द्वारा एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति की घटना के आधार पर।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया। तंत्र और व्यावहारिक उपयोग।

कई विषाणुओं में स्तनधारियों और पक्षियों की कड़ाई से परिभाषित प्रजातियों के एरिथ्रोसाइट्स को समूहीकृत करने की क्षमता होती है। इस प्रकार, इन्फ्लूएंजा और कण्ठमाला के वायरस मुर्गियों, गिनी सूअरों और मनुष्यों के एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ते हैं, और एडेनोवायरस चूहों और चूहों के एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ते हैं। इस संबंध में, रोगियों या सेल संस्कृतियों, भ्रूण और जानवरों की सामग्री में उनका पता लगाने के लिए, वे डालते हैं रक्तगुल्म प्रतिक्रिया(आरजीए)। ऐसा करने के लिए, गोलियों के कुओं में वायरस युक्त सामग्री और तरल पदार्थों के दोगुने बढ़ते कमजोर पड़ने को तैयार किया जाता है, जिसमें NaCl के एक आइसोटोनिक समाधान के साथ धोए गए एरिथ्रोसाइट्स के निलंबन को जोड़ा जाता है। सहज एकत्रीकरण को नियंत्रित करने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स को आइसोटोनिक NaCl समाधान के बराबर मात्रा में मिलाया जाता है। मिश्रण को 37 डिग्री सेल्सियस या कमरे के तापमान पर थर्मोस्टेट में ऊष्मायन किया जाता है।

आरएचए के परिणामों को 30-60 मिनट के बाद एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन की प्रकृति द्वारा ध्यान में रखा जाता है, जब वे आमतौर पर नियंत्रण में पूरी तरह से अवक्षेपित होते हैं। प्लसस द्वारा एक सकारात्मक प्रतिक्रिया का संकेत दिया जाता है। "++++" एक छाते के आकार का तलछट है, "++++" अंतराल के साथ एक तलछट है, "++" बड़े अंतराल के साथ एक तलछट है, "+" गुच्छेदार एरिथ्रोसाइट्स के एक क्षेत्र से घिरा एक गुच्छेदार तलछट है, और "-" - नियंत्रण में "बटन" के रूप में समान रूप से परिभाषित एरिथ्रोसाइट तलछट

समूह-विशिष्ट होने के कारण, आरजीए वायरस की प्रजातियों को निर्धारित करना संभव नहीं बनाता है। से उनकी पहचान है hemagglutination निषेध प्रतिक्रियाओं(आरटीजीए)। इसकी स्थापना के लिए, ज्ञात प्रतिरक्षा एंटीवायरल सीरा का उपयोग किया जाता है, जो आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में दो गुना घटती हुई सांद्रता में पतला होता है और कुओं में डाला जाता है। प्रत्येक कमजोर पड़ने पर वायरस युक्त तरल की समान मात्रा डाली जाती है। नियंत्रण आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में वायरस का निलंबन है। सेरा और वायरस के मिश्रण वाली प्लेटों को थर्मोस्टेट में 30 मिनट या कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए रखा जाता है, फिर उनमें से प्रत्येक में एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन जोड़ा जाता है। 30 मिनट के बाद, न्यूट्रलाइज़िंग सीरम (यानी, इसकी अधिकतम कमजोर पड़ने) का टिटर निर्धारित किया जाता है, जिससे एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन में देरी होती है।

आरटीजीए का उपयोग वायरल रोगों के सीरोलॉजिकल डायग्नोसिस में किया जाता है, विशेष रूप से इन्फ्लूएंजा और एडेनोवायरस संक्रमणों में। इसे पीएच के समान ही युग्मित सेरा के साथ रखना बेहतर है। दूसरे सीरम में एंटीबॉडी टिटर में चार गुना वृद्धि संदिग्ध निदान की पुष्टि करती है।

3. सीरोलॉजिकल परीक्षणरोगियों के सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के मामले में आपको निदान करने की अनुमति देता है। सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के लिए, युग्मित सेरा का उपयोग किया जाता है, जो रोग की शुरुआत से पहले दिनों में और 1 से 3 सप्ताह के बाद लिया जाता है, लेकिन एक साथ अध्ययन किया जाता है। एंटीबॉडी टिटर में 4 गुना या उससे अधिक की वृद्धि नैदानिक ​​​​मूल्य है। आरटीजीए, आरएन, आरएसके, आरटीजीएडीएस, आरआईएफ, आरआईए, एलिसा संबंधित वायरस के संदर्भ उपभेदों से तैयार एंटीजन (डायग्नोस्टिकम) के साथ सेट हैं।

4. युग्मित - इसका अर्थ है कि रक्त कुछ समय अंतराल पर दो बार लिया जाता है। एंटीबॉडी टिटर को बढ़ाकर, यह निर्धारित किया जाता है कि संक्रमण हुआ है। यदि एंटीबॉडी टिटर नहीं बदलता है, तो इसका मतलब है कि ये एंटीबॉडी लंबे समय से शरीर में हैं, कोई ताजा संक्रमण नहीं हुआ है।

सबसे बड़ा नैदानिक ​​मूल्य रोग की शुरुआत और अंत में (14-21 दिनों के अंतराल के साथ) जानवरों से लिए गए युग्मित सीरा का अध्ययन है। सीरम बाँझ ट्यूबों में एकत्र किया जाता है और विश्लेषण के लिए संग्रहीत किया जाता है।

विवरण

सूअरों के परवोवायरस रोग के निदान के लिए किट को हेमग्लगुटीनेशन टेस्ट (एचए) में गर्भस्थ भ्रूणों के आंतरिक अंगों के निलंबन और सूअरों के रक्त सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ-साथ नवजात पिगलेट (लेने से पहले) में परवोवायरस एंटीजन का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया है। कोलोस्ट्रम) hemagglutination निषेध परीक्षण (एचए) में। प्रतिक्रिया को माइक्रोमेथोड द्वारा पॉलीस्टायरीन प्लेटों के कुओं में डाला जाता है। इम्यूनोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के लिए पॉलीस्टीरिन 96-वेल प्लेटें; एंटीजन विशिष्ट निष्क्रिय, जिसमें कम से कम 1:128 की रक्तगुल्म गतिविधि होती है; आरटीजीए में गतिविधि के साथ विशिष्ट सीरम 1:256 से कम नहीं; सीरम सामान्य (नकारात्मक नियंत्रण) है।

विश्लेषण का समय:

आरजीए - 2.5-3.5 घंटे, आरटीजीए - 3.5-4.5 घंटे (अध्ययन के लिए सामग्री तैयार करने के समय को छोड़कर)।

विधि सिद्धांत:

रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (आरएचए) वायरस के रक्तगुल्म गुणों के प्रभाव में एक तरल में निलंबित एरिथ्रोसाइट्स के आसंजन और एक छतरी के रूप में ढीले अवक्षेप के गठन पर आधारित है। आरटीजीए का सार रक्त सीरम में निहित विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ वायरस के हेमग्लुटिनेटिंग गुणों को बेअसर करना है, जिसके परिणामस्वरूप एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपकते नहीं हैं और वे एक बटन के रूप में घने अवक्षेप बनाते हुए नीचे तक बस जाते हैं। .

जमा करने की अवस्था

सेट को 2 से 8 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक सूखी, अंधेरी जगह में संग्रहित किया जाता है। विघटन के बाद, किट घटकों को 1 महीने के लिए जमे हुए रखा जा सकता है, फिर से ठंड की अनुमति नहीं है।

तारीख से पहले सबसे अच्छा

एरिथ्रोसाइट्स (या लेटेक्स कण) उन पर एंटीजन के साथ संबंधित रक्त सीरम एंटीबॉडी के साथ बातचीत करते हैं, जिसके कारण एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपक जाते हैं और स्कैलप्ड तलछट के रूप में ट्यूब या सेल के नीचे गिर जाते हैं। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एरिथ्रोसाइट्स एक बटन के रूप में व्यवस्थित होते हैं। समूहन प्रतिक्रियाशंक्वाकार तल के साथ इम्यूनोलॉजिकल अध्ययन के लिए 96-वेल प्लेट की कोशिकाओं में माइक्रोवेरिएंट में किया जा सकता है। एफएसबी (पीएच 7.2-7.4) के 0.05 मिलीलीटर को टैबलेट के कुओं में जोड़ा जाता है, और 1: 2 और ऊपर से परीक्षण किए गए रक्त सीरा के दो गुना कमजोर पड़ने को तैयार किया जाता है। फिर, 1 मिलीलीटर प्रति 100,000 कवक कोशिकाओं की एकाग्रता पर प्रत्येक कोशिका में कवक कोशिकाओं के निलंबन का 0.005 मिलीलीटर जोड़ा जाता है। टैबलेट को धीरे से हिलाया जाता है और थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए और फिर 4 डिग्री सेल्सियस पर 16-18 घंटे के लिए ऊष्मायन किया जाता है। एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में, सामान्य (नकारात्मक) रक्त सीरम और एफएसबी का उपयोग किया जाता है। प्रतिक्रिया के परिणामों को एक माइक्रोस्कोप और दृष्टि से ध्यान में रखा जाता है और निम्नलिखित योजना के अनुसार क्रॉस में निर्धारित किया जाता है: (++++) - तरल का पूर्ण ज्ञान और उल्टे "छाता" के रूप में छेद के तल पर एग्लूटिनेट का निर्माण, जब हिलाया जाता है, तो "छाता" गुच्छे में टूट जाता है; (+++) - तरल का अधूरा ज्ञान और एक अच्छी तरह से परिभाषित "छाता"; (++) - तरल का ध्यान देने योग्य ज्ञान, "छाता" मध्यम रूप से व्यक्त किया जाता है; (+) - बमुश्किल ध्यान देने योग्य तरल प्रबुद्धता, "छतरी" कमजोर रूप से व्यक्त की जाती है; (-) - एक नकारात्मक परिणाम, तरल स्पष्ट नहीं हुआ, कुएं के तल पर एक बटन के रूप में अवक्षेप बनता है, मामूली झटकों के साथ एक समान निलंबन बनता है। एंटीबॉडी टिटर को परीक्षण सीरम के अंतिम कमजोर पड़ने के रूप में लिया गया था, जिसमें कम से कम दो क्रॉस (++) का एग्लूटिनेशन हुआ था।

समूहन प्रतिक्रिया- यह इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीबॉडी के साथ एक एंटीजन की बातचीत की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, और एंटीजन एक कॉर्पसकुलर अवस्था (एरिथ्रोसाइट्स, बैक्टीरिया, लेटेक्स कणों के साथ सोखने वाले एंटीजन) में है। एग्लूटिनेशन के दौरान, कॉर्पसकुलर एंटीजन को एंटीबॉडी द्वारा एक साथ चिपकाया जाता है, जो एक गुच्छेदार तलछट के गठन से प्रकट होता है। गुच्छे का निर्माण इस तथ्य के कारण होता है कि एंटीबॉडी के दो सक्रिय केंद्र होते हैं, और एंटीजन पॉलीवलेंट होते हैं, अर्थात। कई प्रतिजनी निर्धारक हैं। आरए का उपयोग रोगी की सामग्री से पृथक रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए किया जाता है, साथ ही रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस में राइट और हडलसन प्रतिक्रियाएं, टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार में विडाल प्रतिक्रिया) ).

आरए को स्थापित करने का सबसे आसान तरीका कांच पर प्रतिक्रिया है, यह एक अनुमानित आरए है, जिसका उपयोग रोगी से अलग किए गए रोगज़नक़ को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। एक ग्लास स्लाइड पर प्रतिक्रिया सेट करते समय, एक डायग्नोस्टिक एग्लूटिनेटिंग सीरम (1:10 या 1:20 के कमजोर पड़ने पर) लगाया जाता है, फिर रोगी से एक कल्चर पेश किया जाता है। यदि बूंद में एक गुच्छेदार अवक्षेप दिखाई देता है तो प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है। पास में एक नियंत्रण रखा गया है: सीरम के बजाय सोडियम क्लोराइड घोल की एक बूंद डाली जाती है। यदि डायग्नोस्टिक एग्लूटिनेटिंग सीरम गैर-सोखना 1 है, तो इसे पतला किया जाता है (टिटर के लिए - जिस कमजोर पड़ने पर एग्लूटिनेशन होना चाहिए), यानी। एग्लूटिनेटिंग सीरम के बढ़ते कमजोर पड़ने के साथ परखनली में विस्तारित आरए डालें, जिसमें रोगी से अलग किए गए रोगज़नक़ के निलंबन की 2-3 बूंदें डाली जाती हैं। तलछट की मात्रा और परखनली में तरल के स्पष्टीकरण की डिग्री द्वारा समूहन को ध्यान में रखा जाता है। डायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के करीब कमजोर पड़ने पर एग्लूटिनेशन को नोट किया जाता है, तो प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है। प्रतिक्रिया नियंत्रण के साथ होती है: आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पतला सीरम पारदर्शी होना चाहिए, एक ही समाधान में रोगाणुओं का निलंबन तलछट के बिना समान रूप से अशांत होना चाहिए।

रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी का निर्धारण करने के लिए, एक विस्तारित आरए का उपयोग किया जाता है। जब इसे परखनली में रखा जाता है, तो रोगी के रक्त सीरम को पतला कर दिया जाता है और उतनी ही मात्रा में डायग्नोस्टिकम सस्पेंशन (मारे गए रोगाणुओं का निलंबन) परखनली में डाल दिया जाता है। ऊष्मायन के बाद, उच्चतम सीरम कमजोर पड़ने का निर्धारण किया जाता है, जिस पर एग्लूटिनेशन होता है, अर्थात। एक तलछट का गठन (सीरम टिटर)। इस मामले में, ओ-डायग्नोस्टिकम (ताप द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, थर्मोस्टेबल ओ-एंटीजन को बनाए रखने) के साथ एग्लूटिनेशन रिएक्शन ठीक-दाने वाली एग्लूटिनेशन के रूप में होता है। एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मेलिन द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, हीट-लेबाइल फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बरकरार रखते हुए) के साथ एग्लूटीनेशन रिएक्शन मोटे दाने वाली होती है और तेजी से आगे बढ़ती है।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया(आरएनजीए या आरपीजीए) आरए का एक प्रकार है। यह तरीका बेहद संवेदनशील है। आरएनजीए की मदद से, दो कार्यों को हल किया जा सकता है: रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण करना, जिसमें एक एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, जो कि एरिथ्रोसाइट्स है, जिस पर ज्ञात एंटीजन अधिशोषित होते हैं; परीक्षण सामग्री में एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करें। इस मामले में, प्रतिक्रिया को कभी-कभी रिवर्स इनडायरेक्ट हेमग्लुटिनेशन रिएक्शन (RONGA) कहा जाता है। मंचन करते समय, एक एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (उनकी सतह पर एंटीबॉडी के साथ एरिथ्रोसाइट्स) को परीक्षण सामग्री में जोड़ा जाता है। इस प्रतिक्रिया में एरिथ्रोसाइट्स वाहक के रूप में कार्य करते हैं और प्रतिरक्षा समुच्चय के निर्माण में निष्क्रिय रूप से शामिल होते हैं। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, निष्क्रिय रूप से चिपके हुए एरिथ्रोसाइट्स स्कैलप्ड किनारों ("छाता") के साथ एक समान परत के साथ कुएं के नीचे को कवर करते हैं; एग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति में, एरिथ्रोसाइट्स छेद के केंद्रीय अवकाश में जमा हो जाते हैं, जिससे तेजी से परिभाषित किनारों के साथ एक कॉम्पैक्ट "बटन" बनता है।

जमावट प्रतिक्रियापर adsorbed एंटीबॉडी का उपयोग करके रोगज़नक़ कोशिकाओं (एंटीजन) का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है स्टाफीलोकोकस ऑरीअस,प्रोटीन ए युक्त प्रोटीन ए में इम्यूनोग्लोबुलिन के एफसी खंड के लिए एक संबंध है। इसके कारण, एंटीबॉडी स्टेफिलोकोकस को अप्रत्यक्ष रूप से एफसी टुकड़े के माध्यम से बांधते हैं, और फैब टुकड़े बाहर की ओर उन्मुख होते हैं और रोगियों से अलग किए गए संबंधित रोगाणुओं के साथ बातचीत करने में सक्षम होते हैं। इस मामले में, गुच्छे बनते हैं।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (HITA)वायरल संक्रमणों के निदान में उपयोग किया जाता है, और केवल हीमोग्लुटिनेटिंग वायरस के कारण होने वाले संक्रमण। इन विषाणुओं में उनकी सतह पर एक प्रोटीन होता है - हेमाग्लगुटिनिन, जो एरिथ्रोसाइट वायरस में जोड़े जाने पर हीमोग्लूटीनेशन रिएक्शन (आरएचए) के लिए जिम्मेदार होता है। आरटीजीए में वायरल एंटीजन को एंटीबॉडी के साथ अवरुद्ध करना शामिल है, जिसके परिणामस्वरूप वायरस लाल रक्त कोशिकाओं को जोड़ने की क्षमता खो देते हैं।

कूम्ब्स अभिक्रिया -अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए आरए। कुछ संक्रामक रोगों में, जैसे कि ब्रुसेलोसिस, रोगज़नक़ के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी रोगी के रक्त सीरम में प्रसारित होते हैं। अधूरे एंटीबॉडी को ब्लॉकिंग कहा जाता है क्योंकि उनके पास एक एंटीजन-बाइंडिंग साइट होती है, न कि दो, पूर्ण एंटीबॉडी की तरह। इसलिए, जब एक एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, तो अधूरे एंटीबॉडी एंटीजन से बंध जाते हैं, लेकिन उन्हें एक साथ नहीं रखते। प्रतिक्रिया प्रकट करने के लिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम (मानव इम्युनोग्लोबुलिन के एंटीबॉडी) को जोड़ा जाता है, जिससे प्रतिक्रिया के पहले चरण में गठित प्रतिरक्षा परिसरों (एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम + अपूर्ण एंटीबॉडी) का समूहन होगा।

इनडायरेक्ट कॉम्ब्स रिएक्शन का उपयोग इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस वाले रोगियों में किया जाता है। इनमें से कुछ रोगियों में अधूरे मोनोवैलेंट एंटी-रीसस एंटीबॉडी पाए जाते हैं। वे विशेष रूप से आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स के साथ बातचीत करते हैं, लेकिन उनकी समूहन का कारण नहीं बनते हैं। इसलिए, एंटी-आरएच एंटीबॉडी + आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स की प्रणाली में एंटीग्लोबुलिन सीरम जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का कारण बनता है। Coombs प्रतिक्रिया का उपयोग करते हुए, प्रतिरक्षा मूल के एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर लसीका से जुड़ी रोग स्थितियों का निदान किया जाता है, उदाहरण के लिए, रीसस संघर्ष के कारण नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग।

रक्त समूहों के निर्धारण के लिए आरएरक्त समूह A (II), B (III) के प्रतिजनों के लिए प्रतिरक्षा सीरम के एंटीबॉडी द्वारा एरिथ्रोसाइट्स के समूहन पर आधारित है। नियंत्रण सीरम है जिसमें एंटीबॉडी नहीं होते हैं, अर्थात। सीरम AB (IV) रक्त समूह, और समूह A (P) और B (III) के एरिथ्रोसाइट्स के एंटीजन। समूह 0 (I) एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जाता है क्योंकि उनके पास एंटीजन नहीं होते हैं।

आरएच कारक निर्धारित करने के लिए, एंटी-आरएच सीरा का उपयोग किया जाता है (कम से कम दो अलग-अलग श्रृंखला)। अध्ययन किए गए एरिथ्रोसाइट्स की झिल्ली पर आरएच प्रतिजन की उपस्थिति में, इन कोशिकाओं का समूहन होता है।

रक्तशोषण प्रतिक्रिया(आरजीएडी)। हेमाडसॉर्प्शन वायरस से प्रभावित कोशिकाओं की सतह के साथ एरिथ्रोसाइट्स का कनेक्शन है, जो एरिथ्रोसाइट रिसेप्टर्स के साथ प्रभावित सेल की सतह पर स्थित वायरस रिसेप्टर्स के संबंध पर आधारित है, जो हेमग्लगुटिनेशन प्रतिक्रिया के समान उनके आपसी आसंजन की ओर जाता है। इस प्रतिक्रिया का लाभ यह है कि यह संक्रमित कोशिकाओं में विशिष्ट साइटोपैथिक परिवर्तनों के प्रकट होने से पहले ही सकारात्मक हो जाती है।

सोखने के प्रकार (फैलाना, फोकल), सोरबेड एरिथ्रोसाइट्स (मानव, बंदर, गिनी सूअर, आदि) के प्रकार में अंतर हैं, जिस तापमान पर प्रतिक्रिया होती है (37 डिग्री सेल्सियस, 0 डिग्री सेल्सियस), उपस्थिति क्षालन का (हाँ, नहीं)। वायरस से संक्रमित टू-आरई कोशिकाओं के प्रारंभिक ऊष्मायन द्वारा जी को धीमा किया जा सकता है, जिसमें वायरस के लिए विशिष्ट एंटीसेरम होता है। G. के निरोधात्मक अभिक्रिया का प्रयोग विषाणुओं की पहचान के लिए किया जाता है।