Yra žinoma, kad mikroorganizmai, nepaisant jų „mažo augimo“, turi ir maisto „priklausomybę“, optimalią temperatūrą, apskritai jiems puikiai tinkančią aplinką, kurioje jie jaučiasi patogiai ir gerai, todėl pradeda intensyviai daugintis ir augti.
Bakteriologinis sėjimas arba, kaip paprastai vadinamas sėjamuoju baku, naudojamas norint gauti daug tos pačios rūšies mikrobų (gryna kultūra), siekiant ištirti jų fizikines, chemines ir biologines savybes, kad vėliau gautus duomenis galima panaudoti infekcinių ligų diagnostikai.
Deja, net ir dabar populiarūs ir kiti metodai, kurių pagrindinis trūkumas yra klaidingai teigiami arba klaidingai neigiami rezultatai, ne visada gali nustatyti sukėlėją. Be to, jie negali pasiimti tikslinių antibakterinių vaistų. Panašią problemą išsprendžia ir sėjos rezervuaras, kurio dažnai neskubama skirti, remdamasis tuo, kad, pavyzdžiui, jis lėtai kultivuojamas, o analizės kaina yra nemaža. Tačiau sveikata to verta!
Sąlygos, reikalingos maistui ir kvėpavimui
Mikrobiologai dabar žino, kad kiekvienam patogenui reikia savo „gimtosios“ aplinkos, atsižvelgiant į jo pH, redokso potencialą, klampumą, drėgmę ir osmosines savybes. Aplinkos gali būti minkštos ir kietos, paprastos ir sudėtingos, universalios ir nelabai universalios, tačiau visais atvejais jos turi užtikrinti mitybą, kvėpavimą, dauginimąsi ir bakterinės ląstelės augimą.
mikroorganizmų augimo pavyzdys po rezervuaro inokuliacijos į maistinę terpę
Kai kurios terpės (tioglikolis, Sabouraud) yra tinkamos įvairiems mikroorganizmams ir vadinamos universaliomis. Kiti yra skirti tik tam tikroms rūšims, pavyzdžiui, pneumokokai ir Staphylococcus aureus, gaminantys hemolizinus, auga ant kraujo agaro, kuris išskiria ypač „kaprizingas“, o kartu ir pavojingas padermes. Taigi, yra daugybė terpių veislių, kur kiekviena iš jų augina savo mikroorganizmų spektrą.
Mikroorganizmų auginimo paskirtis ir reikšmė diagnostikai
Be vandens, oro, dirvožemio, kuriame yra įvairių koncentracijų įvairių mikroorganizmų, įskaitant tuos, kurie sukelia ligas (patogeninius), daugelis medicinos mokslo šakų domisi mikrobais, gyvenančiais ant žmogaus kūno odos ir gleivinių, kuriuos galima pavaizduoti. pateikė:
- Nuolatiniai gyventojai, nekeliantys jokio pavojaus žmogui, tai yra normali organizmo mikroflora, be kurios tiesiog negalime gyventi. Pavyzdžiui, išnykus žarnyne gyvenančioms ir virškinimo procese dalyvaujančioms bakterijoms, išsivysto disbakteriozė, kurią nelengva gydyti. Tas pats atsitinka ir su makšties mikrofloros išnykimu. Jį iš karto apgyvendina sąlyginai patogeniški mikroorganizmai, pavyzdžiui, gardnerella, kurie sukelia;
- sąlyginai patogeniška flora, kuri žalinga tik dideliais kiekiais tam tikromis sąlygomis (imunodeficitas). Jau minėta gardnerella yra šio tipo mikroorganizmų atstovas;
- Patogeninių mikrobų buvimas kurių nėra sveikame organizme. Jie yra svetimi žmogaus organizmui, kur atsitiktinai patenka į kontaktą su kitu (sergančiu) asmeniu ir sukelia infekcinį procesą, kartais gana sunkų ar net mirtiną. Pavyzdžiui, susitikimas su ligų sukėlėjais vis tiek yra gerai, iš pradžių jis gydomas, bet (neduok Dieve!) Išleis cholerą, marą, raupus ir kt.
Laimei, daugelis jų buvo nugalėti ir šiuo metu yra „už septynių antspaudų“ specialiose laboratorijose, tačiau žmonija bet kuriuo metu turi būti pasirengusi nematomo priešo, galinčio sunaikinti ištisas tautas, invazijai. Bakteriologinis sėjimas tokiais atvejais galbūt vaidina pagrindinį vaidmenį identifikuojant mikroorganizmą, tai yra nustatant gentį, rūšį, tipą ir kt. (toksonominė padėtis), kuri yra labai svarbi infekcinių procesų, įskaitant lytiniu keliu plintančių ligų, diagnostikai.
Taigi, sėjos būdai, kaip ir maistinės terpės, skiriasi, tačiau turi tą patį tikslą: gauti gryną kultūrą be priemaišų kitų klasių mikrobų pavidalu, kurie gyvena visur: vandenyje, ore, paviršiuose, ant žmogaus ir jo viduje.
Kada paskiriamas sėjos bakas ir kaip suprasti atsakymus?
Mikroorganizmo pavadinimas ir jo kiekis
Bakteriologinės analizės pacientai patys neskiria, tai atlieka gydytojas, jei jam kyla įtarimų, kad įvairių nusiskundimų besiskundžiančio paciento problemos yra susijusios su patogeninio patogeno įsiskverbimu į organizmą arba su padidėjusiu nuolat gyvenančių mikroorganizmų dauginimu. su asmeniu, tačiau turi patogeninių savybių tik tam tikromis sąlygomis. Išlaikęs analizę ir po kurio laiko gavęs atsakymą į rankas, žmogus pasimeta, o kartais net išsigąsta, pamatęs nesuprantamus žodžius ir įvardijimus, todėl, kad taip nenutiktų, noriu duoti trumpas paaiškinimas šiuo klausimu:
Nagrinėjant biologinę medžiagą, ar nėra patogeninių mikroorganizmų, atsakymas gali būti neigiamas arba teigiamas („blogas sėjos rezervuaras“), nes žmogaus kūnas jiems yra tik laikina prieglobstis, o ne natūrali buveinė.
Kartais, priklausomai nuo to, kokia medžiaga turi būti inokuliuojama, galite pamatyti mikroorganizmų skaičių, išreikštą kolonijas formuojančiais vienetais viename mililitre (viena gyva ląstelė duos visos kolonijos augimą) - KSV / ml. Pavyzdžiui, šlapimo pasėlis bakteriologiniam tyrimui paprastai duoda iki 10 3 KSV / ml visų aptiktų bakterijų ląstelių, abejotinais atvejais (analizę pakartokite!) - 10 3 - 10 4 KSV / ml, esant infekcinės kilmės uždegiminiam procesui - 10 5 ir daugiau KSV /ml Apie paskutinius du šnekamosios kalbos variantus kartais jie tiesiog išreiškiami: „Blogas sėjos bakas“.
Kaip „rasti kontrolę“ patogeniniam mikroorganizmui?
Kartu su medžiagos sėjimu tokiose situacijose sėjama mikroflora dėl jautrumo antibiotikams, o tai gydytojui duos aiškų atsakymą – kokie antibakteriniai vaistai ir kokiomis dozėmis „išgąsdins“ „įsibrovėlį“. Čia taip pat yra iššifravimas, pavyzdžiui:
- Mikroorganizmo tipas, pavyzdžiui, tas pats E. coli kiekis 1x10 ^ 6;
- Antibiotiko pavadinimas su žymėjimu (S) rodo patogeno jautrumą šiam vaistui;
- Antibiotikų, kurie neveikia mikroorganizmo, tipas nurodomas simboliu (R).
Bakteriologinė analizė yra ypač vertinga nustatant jautrumą antibiotikams, nes pagrindinė problema kovojant su chlamidijomis, mikoplazmomis, ureaplazmomis ir kt. išlieka veiksmingo gydymo, kuris nekenkia organizmui ir nesimuša į paciento kišenę, parinkimas.
Lentelė: Alternatyvus bako kultūros rezultatų pavyzdys, rodantis veiksmingus antibiotikus
Tinkamas pasirengimas bakteriologinei analizei yra raktas į patikimą rezultatą
Bet kuriai iš žmogaus paimtai biologinei medžiagai gali būti atlikta bakteriologinė analizė.(oda, kraujas, sperma, burnos ertmės gleivinės, kvėpavimo ir šlapimo takų, virškinimo trakto, regos, klausos ir uoslės organai ir kt.). Dažniausiai sėjos baką skiria ginekologai ir urologai, todėl turėtumėte prie jo šiek tiek pasilikti.
Tinkamas pasirengimas bakteriologiniam pasėliui bus raktas į teisingą rezultatą, nes priešingu atveju analizę teks daryti iš naujo ir laukti nustatyto laiko. Kaip paaukoti kraują sterilumui iš venos – sveikatos priežiūros darbuotojų užduotis. Paprastai nuo paciento čia niekas nepriklauso, jis tiesiog sulenkia alkūnę, o slaugytoja, laikydamasi visų aseptikos ir antisepsio taisyklių, įneša jį į sterilų mėgintuvėlį.
Kitas dalykas – šlapimas arba iš lytinių takų. Čia pacientas turi užtikrinti pirmąjį etapą (tvorą), laikydamasis nustatytų taisyklių. Reikėtų pažymėti, kad moterų ir vyrų šlapimas šiek tiek skiriasi, nors abiejų lyčių šlapimo pūslėje jis yra sterilus:
- Moterims, praeinant per šlaplę, gali būti užfiksuotas nedidelis nepatogeninių kokų skaičius, nors paprastai jie dažnai lieka sterilūs;
- Vyrams viskas yra kiek kitaip. Priekinė šlaplės dalis gali aprūpinti šlapimą:
- difteroidai;
- stafilokokai;
- kai kurios nepatogeninės gramneigiamos bakterijos, kurios bus parodytos vėliau atlikus bakteriologinę analizę.
Tačiau jei jų koncentracija yra priimtina (iki 10 3 KSV / ml), tai nėra ko bijoti, tai yra normos variantas.
Siekiant išvengti kitų mikroorganizmų buvimo ir kuo labiau užtikrinti paimtos medžiagos sterilumą, prieš tyrimą atliekamas kruopštus lytinių organų tualetas (moterų įėjimas į makštį uždaromas medvilniniu tamponu - apsauga nuo atskirtų lytinių organų patekimas). Analizei imama vidutinė šlapimo dalis (šlapinimosi į tualetą pradžia, maždaug 10 ml terpės, patiekiant steriliame indelyje, baigiant tualetu). Pacientai turi žinoti: pasėliui paimtas šlapimas turi būti apdorotas ne vėliau kaip per dvi valandas, kai laikomas ne aukštesnėje kaip 20°C temperatūroje, todėl reikėtų atsižvelgti į transportavimo laiką.
Be to, medžiaga sėjimo bakui, jei reikia, imama iš šlaplės ir tiesiosios žarnos vyrams, iš šlaplės, tiesiosios žarnos, makšties, gimdos kaklelio ir gimdos kaklelio kanalo - moterims, tačiau tai atsitinka medicinos įstaigoje, kur pacientas turėtų. atvykti. Tokiais atvejais skalbti, dušuoti ir naudoti antiseptikus draudžiama.
Kiti pacientams rūpimai klausimai
Daugelis pacientų domisi, kiek dienų atliekama analizė. Į šį klausimą vienareikšmiškai atsakyti neįmanoma, viskas priklauso nuo to, kokia medžiaga tiriama ir kokio patogeno reikėtų ieškoti. Kartais atsakymas paruošiamas per 3 dienas, kartais per savaitę ar net 10-14 dienų, nes kai kuriuos mėginius reikia perkelti į kitą terpę.
Neapeiti žmonių, einančių į sėjos rezervuarą, ir klausimo dėl analizės kainos. Apytikslė kaina Maskvoje yra apie 800 - 1500 rublių. Žinoma, jis gali būti didesnis ir priklauso nuo bakteriologinės paieškos spektro pločio. Nėštumo metu analizę tikriausiai galite atlikti nemokamai Nėštumo klinikoje arba dėl ypatingų medicininių priežasčių klinikoje.
Nėščioms moterims sėjimo bakas yra privalomas, jis skiriamas 2 kartus(registruojantis ir 36 sav.), o tamponas imamas ne tik iš lytinių takų, bet ir iš nosies bei gerklės gleivinės. Paieškos objektu šiuo atveju, be urogenitalinių infekcijų, bus auksinis stafilokokas (Staphylococcus aureus), kuris pogimdyminiu laikotarpiu gali pridaryti daug rūpesčių (pūlinis mastitas ir kt.). Be to, nėščiosioms būtina atlikti šlapimo pasėlius, nugrandyti makšties epitelį ir tepinėlius iš gimdos kaklelio ir gimdos kaklelio kanalo.
Daugelis moterų, prieš eidamos į procedūrą, labai bijo tokių baisių žodžių ir pradeda galvoti: „Ar tai būtina? Gal neiti“. Skubame užtikrinti, kad tyrimai yra visiškai neskausmingi. Gimdos kaklelio ir gimdos kaklelio kanalo tepinėlis paimamas steriliu citošepetėliu, nesukeldamas visiškai jokio skausmo moteriai, tačiau vėliau sėjimo bakas iš s / m ir s / c apsaugos ir būsimąją motiną, ir vaisius nuo galimų komplikacijų. Nėštumo metu ieškoma chlamidijų, šlapalo ir mikoplazmų, mielių (dažniausiai Candida albicans) ir kitų oportunistinių bei patogeninių mikroorganizmų sukėlėjų.
Vaizdo įrašas: demonstracinis vaizdo įrašas apie bako kultūrą iš gimdos kaklelio kanalo
Ypatingi atvejai, ypač domina tuos, kurie atlieka testus
Patogeniniai mikroorganizmai, patekę į lytinius organus, po labai trumpo laiko įsisavinami ir pradeda žalingą veiklą. Pavyzdžiui, visada patogeniški gonokokai (Neisseria), kurie yra gana nemalonios ligos, vadinamos ir susijusios su lytiškai plintančiomis ligomis, kaltininkai, tiesiogine prasme jaučiasi „namie“ 3 dieną. Jie pradeda aktyviai daugintis ir drąsiai judėti lyties organais, užfiksuodami vis daugiau naujų teritorijų. Visi žino, kad dabar gonorėja gerai gydoma ir beveik niekas jos nebijo. Bet pirmiausia reikia jį rasti. Pagrindinis šios infekcijos paieškos būdas – sėjimas rezervuare, kultivavimas, identifikavimas Gramo dažymu, mikroskopija.
Rasta tepinėlyje, paimtame „ant floros“ iš lytinių takų, guli poromis „kavos pupelės“ (diplokokai), nerodo lytiškai plintančios ligos. Tokia makšties mikroflora dažnai atsiranda pomenopauzėje ir nieko blogo nereiškia. Nesteriliomis sąlygomis paimtas tepinėlis ant stiklelio ir nudažytas metileno mėlynu arba Romanovskiu (citologija) negali atskirti mikroorganizmo. Jis gali tik prisiimti ir nukreipti pacientą papildomiems tyrimams (izoliuotos kultūros gavimui).
Atkreiptinas dėmesys, kad jei sėti ant ureaplazmos paimtas šlapimo takų gleivinės grandymas nėra toks jau retas reiškinys, tai patys gydytojai dažnai vengia sėti šlapimą, nes dirbti su juo sunkiau.
Tai sukelia sunkumų diagnozuojant, o tai daro didelę žalą ne tik nėštumo metu. Be to, chlamidiozė sukelia daugybę ligų, būdingų ne tik moterims, bet ir vyrams, todėl ji sėjama, kultivuojama, tiriama, nustatomas jautrumas antibiotikų terapijai ir taip su ja kovojama.
Nėštumo metu paprastai sunku apsieiti be bakteriologinio pasėlio, nes daugelis mikroorganizmų, užmaskuotų citologiniu tepinėliu, gali būti nepastebėti. Tuo tarpu kai kurių lytiniu keliu plintančių ligų sukėlėjų poveikis vaisiui gali būti žalingas. Be to, nėščią moterį gydyti daug sunkiau, o antibiotikų skyrimas „iš akies“ tiesiog nepriimtinas.
Sėjimo būdai
Norėdami išskirti grynas patogenų kultūras, pirmajame etape jie imasi jų skiepijimo tinkamoje terpėje, kuri atliekama specialiomis (steriliomis!) sąlygomis. Iš esmės medžiagos perkėlimas į aplinką atliekamas naudojant prietaisus, kuriuos XIX amžiuje naudojo didysis Louisas Pasteuras:
- bakterinė kilpa;
- Pasteur pipetė;
- Stiklo strypas.
Žinoma, per 2 šimtmečius daugelis instrumentų pasikeitė, juos pakeitė plastikiniai sterilūs ir vienkartiniai, tačiau senieji neliko praeityje, tarnaujantys mikrobiologijos mokslui iki šiol.
Pirmajame kolonijų gavimo etape reikia laikytis tam tikrų taisyklių:
- Sėjama virš spiritinės lempos į dėžę, iš anksto apdorotą dezinfekavimo priemonėmis ir kvarciniu apdorojimu, arba laminarinėje spintelėje, kuri užtikrina sterilumą darbo vietoje;
- Sveikatos darbuotojo drabužiai, pirštinės ir aplinka taip pat turi būti sterilūs, nes priešingai neleidžia izoliuoti izoliuotų padermių;
- Bokse reikia dirbti greitai, bet atsargiai, negalima kalbėti ir blaškytis, tuo tarpu reikia nepamiršti asmeninio saugumo, nes medžiaga gali būti užkrečiama.
Padermių išskyrimas ir grynųjų kultūrų tyrimas
Padermių išskyrimas ne visada yra vienodas, nes kai kurioms biologinėms terpėms, esančioms žmogaus kūne, reikia individualaus požiūrio, pavyzdžiui, hemokultūra (kraujas) pirmiausia skystoje terpėje (santykis 1:10) šiek tiek „užauga“, nes kraujas (neskiestas) gali sunaikinti mikroorganizmus, o po dienos ar daugiau persodinti ant Petri lėkštelių.
Sėjos šlapimas, skrandžio plovimas ir kitos skystos medžiagos taip pat turi savo ypatybes, kai norint gauti gryną kultūrą, skystis pirmiausia turi būti centrifuguojamas (aseptinėmis sąlygomis!), Ir tik tada sėti, o ne patį skystį, o jo nuosėdas. .
Kolonijų auginimas ir kultivavimas atliekamas Petri lėkštelėse arba pirmiausia dedamas į skystą terpę, supiltą į sterilius buteliukus, o paskui vėl sėjamos izoliuotos kolonijos, bet ant pasvirusio agaro ir medžiaga parai dedama į termostatą. Įsitikinus, kad gauta kultūra yra gryna, padermės perkeliamos į stiklinį stiklelį, padaromas tepinėlis ir nudažomas pagal Gramą (dažniausiai), Ziehl-Neelsen ir kt., o diferenciacijai – mikrobo morfologija. tiriamas mikroskopu:
- Bakterijos ląstelės dydis ir forma;
- Kapsulių, žvynelių, sporų buvimas;
- Tinktūros savybės (mikroorganizmo ir dažymo santykis) *.
* Skaitytojas tikriausiai girdėjo apie tokį sukėlėją kaip blyški treponema? Tai yra sifilio sukėlėjas, todėl jo pavadinimas (blyškus) atsirado dėl to, kad jis blogai suvokia dažus ir, pasak Romanovskio, dažomas išlieka šiek tiek rausvas. Mikroorganizmai, kurie nesuvokia anilino dažų, vadinami gramneigiamais, o suvokiantys – gramteigiamais. Gram-neigiamoms bakterijoms suteikiama rausva arba raudona spalva, dažant gramais papildomais dažais (rausvai raudona, safraninu).
Sėją talpykloje galima vadinti senovine analize, tačiau jos populiarumas nuo to nekrenta, nors šiuolaikinė bakteriologija turi galimybę iš jos išskirti ne tik štamus, bet ir vieną ląstelę, kuri vadinama. klonas. Tačiau norint gauti kloną, reikalingas specialus prietaisas - mikromanipuliatorius, kurio nėra įprastose laboratorijose, nes jis daugiausia naudojamas mokslinių tyrimų tikslais (genetiniams tyrimams).