Aseptikos priemonių laikymasis yra sterilios įrangos ir tirpalų naudojimas bei jų užteršimo prevencija darbo metu. Bakterijos ir grybų sporos plačiai paplitusios aplinkoje, taip pat ir laboratorijose. Mikrobiologai turi nuolat rūpintis auginimo terpės ir įrangos sterilumu. Šie „nepatogumai“ yra neatsiejama bet kurio mikrobiologo darbo dalis. Mokyklų ir kolegijų laboratorijose mokoma tik pagrindinių atsargumo priemonių. Rutininiam mikrobiologiniam darbui reikalingos specialiai įrengtos laboratorijos. Juose turi būti lengvai valomi paviršiai ir specialiai atitvertos darbo vietos (dėžės), kur tiekiamas filtruotas sterilus oras.
Puodelių užpildymas
Puodelių užpildymas vienas iš pagrindinių mikrobiologinių metodų. Lėkštelė yra Petri lėkštelė, kurioje yra maistinių medžiagų agaras. Petri lėkštelės yra specialiai pagaminti negilūs apvalūs indai, kurie gali būti stikliniai arba plastikiniai. Jie naudojami bakterijų, grybų ar audinių kultūrų augimui kietoje terpėje. Paprastai Petri lėkštelės yra apie 9 cm skersmens. Stikliniai puodeliai gali būti pakartotinai naudojami po autoklave. Plastikiniai puodeliai po naudojimo išmetami; paprastai jie yra autoklavuojami, kad sunaikintų kultūrą. Tuo pačiu metu jie ištirpsta. Puodeliai perkami sandariose pakuotėse, kurios sterilizuojamos gama spinduliuote. Dangteliai apsaugo nuo puodelio užteršimo, tačiau dujų molekulės gali pasklisti tarp puodelio vidinio tūrio ir aplinkos dėl mikroskopinių nelygumų dugno ir dangtelio sąlyčio vietose. Todėl deguonis turi prieigą prie kultūros, o anglies dioksidas pašalinamas į išorę.
Išpylimo procedūra išlydytas maistinių medžiagų agaras („indo užpildymas“) parodytas paveikslėlyje. Suprantama, kad agaras buvo paruoštas mažuose buteliukuose (McCartney buteliukuose).
Inokuliacijos metodai
Įvedant nedidelį mikroorganizmų skaičių į auginimo terpę – inokuliuojant (arba sėjant), būtina laikytis aseptikos metodų, kad būtų išvengta užteršimo.
Sėjimo procedūros skiriasi priklausomai nuo terpės tipo (skystos ar kietos).
Sėjama ant kietos terpės
Insultinė sėja arba skiedimo sėja
Metodas parodytas paveikslėlyje. Jis naudojamas grynoms bakterijų kolonijoms išskirti iš bakterijų mišinio. Sėjai naudojama vielinė kilpa, kurią pirmiausia reikia uždegti, kaip parodyta pav. 12,4,L sterilizuoti. Tada iš išaugintos kultūros ar kito mikroorganizmo šaltinio kilpa paimama plona skystos suspensijos plėvelė arba nedidelis kiekis kietos medžiagos, kurioje yra tiriamas mikroorganizmas. Kilpa švelniai perbraukiama per terpės paviršių, atliekant kelis smūgius. Po kiekvienos smūgių serijos puodelis šiek tiek pasukamas, kad bakterijos iš ankstesnės serijos smūgių pasiskirstytų kiekvienoje naujoje serijoje, taip išeikvodamos smūgius iki atskirų bakterijų. (Nesitikėkite, kad paskutiniuose potėpiuose nieko pamatysite, kol nesibaigs inkubacijos laikas!) Praktikuojant metodą, smūgius galima atlikti labai greitai.
Šiuo metodu bakterijas galima išskirti iš natūralių buveinių, tokių kaip dirvožemis, pienas, vanduo. Kietųjų medžiagų, pvz., dirvožemio, mėginius geriausia suspenduoti nedideliame kiekyje vandens arba iš anksto inkubuoti skystoje terpėje. Saugus šaltinis įprastiniam darbui yra pasterizuotas pienas. Prieš eksperimentuodami su bakterijomis ar grybeliais, perskaitykite instrukcijas ir saugos taisykles, kad sumažintumėte kenkėjų auginimo riziką.
Sėjama ant agaro paviršiaus
Šis metodas parodytas paveikslėlyje. Patogu sėti mikroorganizmus iš skystos suspensijos į kietą terpę. Metodas naudojamas gyvybingų ląstelių skaičiui nustatyti mėginyje po serijinių praskiedimų. Jis taip pat gali būti naudojamas ištisinei mikroorganizmų „vejai“ gauti ant agaro paviršiaus po storo inokuliavimo. Tai naudinga analizuojant inhibitorių, tokių kaip antibiotikų ar dezinfekavimo priemonių, aktyvumą, kurie dedami į agare padarytas duobutes arba dedami ant filtravimo popieriaus diskų, dedamų ant agaro paviršiaus. Inhibitorius difunduoja per agarą, sudarydamas augimo slopinimo zoną aplink skylutes arba filtravimo popieriaus diskus, kuri matoma po inkubacijos. Zonos skersmuo gali būti naudojamas kaip slopinimo laipsnio matas.
Sėjama pilant
Sėjama pilant ląstelėms iš skystos kultūros pasėti, taip pat gyvybingoms ląstelėms skaičiuoti, naudojamas alternatyvus metodas agaro paviršiaus padengimo metodui. Kadangi ląstelės pasiskirsto visoje terpėje, o ne tik agaro paviršiuje, galima suskaičiuoti daug daugiau – iki 1000 kolonijų lėkštelėje. Tačiau išaugusių kolonijų dydis yra daug mažesnis.
Tam tikras tūris(iki 0,5 cm 3) ląstelių suspensijos įpilama į tinkamo tūrio (apie 15-20 cm 3) sterilizuotą maistinių medžiagų agarą, ištirpintą mažame buteliuke, kuris prieš tai buvo atšaldytas iki 45-50 ° C vandens vonioje. Nuimkite dangtelį ir sudeginkite buteliuko kaklelį prieš įpildami ląstelių suspensijos, kaip parodyta paveikslėlyje. Ląstelių suspensija kruopščiai sumaišoma su maistiniu agaru, sukant (nekratant) pirmyn ir atgal delnuose laikomą buteliuką. Tada supilkite mišinį į sterilų Petri lėkštelę, kaip parodyta paveikslėlyje. Pasirašykite indo dugną ir inkubuokite. Po inkubacijos indas atrodo taip, kaip parodyta paveikslėlyje.
Sėjama injekcijomis
Metodas naudojami anaerobiniams organizmams arba organizmams, augantiems esant žemai deguonies koncentracijai (mikroaerofilams), auginti. Paprastai naudojamas mėgintuvėlis su maistine agaro terpe. Dėl mažo agaro paviršiaus ir gana didelio gylio mėgintuvėlyje, palyginti su lėkšteliu, deguonies patekimas į agaro vidų yra ribotas. Sėjama tiesia viela (be kilpos), arba bakteriologine adata. Adatos galiuku paimamas nedidelis kultūros (kietos arba skystos) kiekis ir juo vertikaliai praduriamas agaras. Kultūra auga agare visomis kryptimis nuo punkcijos linijos.