Mała hemaglutynacja. Diagnostyka serologiczna duru brzusznego i duru rzekomego

HEMAGLUTYNACJA

hemaglutynacja(z gr. háima blood i łac. aglutinatio gluing), sklejanie i wytrącanie erytrocytów pod wpływem bakterii, wirusów, toksyn itp., zdolnych do adsorpcji na powierzchni erytrocytów, a także hemaglutynin. Erytrocyty jednego zwierzęcia mogą ulec aglutynacji z surowicą innego zwierzęcia z powodu obecności w nim normalnych izohemaglutynin (przeciwciał). Za pomocą reakcji G. zainstalować . Zjawisko G. stosowany w badaniach mikrobiologicznych i immunologicznych.

Rozróżnij bezpośrednie lub aktywne i pośrednie lub pasywne, G. Prosty G. ze względu na bezpośredni wpływ czynników bakteryjnych i wirusowych na erytrocyty. Jednocześnie hemaglutyniny oddziałują z receptorami natury mukoproteazy znajdującymi się na powierzchni erytrocytów za pomocą enzymu mucynazy, powodując adsorpcję antygenu. W rezultacie zawiesina erytrocytów (na przykład kurczaka) tworzy szeroki osad w postaci parasola o nierównych krawędziach. Ta reakcja nie jest specyficzna, przebiega bez udziału surowicy odpornościowej. bezpośredni G. stosowany w badaniach serologicznych, w szczególności do określania roboczego rozcieńczenia antygenu stosowanego w reakcji hamowania G., który opiera się na opóźnieniu działania hemaglutynującego antygenu przez specyficzną surowicę immunologiczną. bezpośredni G. stosowany również do przybliżonej diagnostyki niektórych chorób wirusowych (grypa koni, pomor ptaków, rzekomy pomór drobiu, kacza grypa). pośredni G.(RNHA) opiera się na zdolności uczulonych erytrocytów (poprzez adsorpcję na nich antygenu) do aglutynacji z homologicznymi przeciwciałami surowicy odpornościowej. Ze względu na wysoką czułość i specyficzność metody pośredniej G. służy do diagnozowania wielu chorób wirusowych, bakteryjnych i riketsjowych. Istnieje kilka modyfikacji pośredniego G. reakcje hamowania, opóźnienia, neutralizacji przeciwciał itp. Za pomocą RNHA i jego modyfikacji, zarówno przeciwciała w surowicy krwi zwierząt i ludzi (w przypadku stosowania erytrocytów uczulonych znanym antygenem), jak i antygenu (w przypadku stosowania erytrocytów uczulonych pewnymi antygenami) przeciwciała) można wykryć. Do reakcji wykorzystuje się przemyte erytrocyty różnych gatunków zwierząt (najczęściej erytrocyty owiec i kur). Zdolność erytrocytów do adsorpcji wielkocząsteczkowych antygenów o charakterze białkowym wzrasta po ich potraktowaniu taniną. Aby wydłużyć okres przechowywania erytrocytów, konserwuje się je formaliną. Diagnosticum otrzymane ze sformalizowanych erytrocytów mogą długo zachowywać swoją aktywność. W obecności gotowych diagnostycznych erytrocytów formułowanie reakcji jest znacznie uproszczone. W praktyce weterynaryjnej RNGA stosuje się w diagnostyce niektórych (głównie wirusowych) chorób zwierzęcych - klasycznej zarazy drobiu, rzekomego pomoru drobiu, ospy krowiej, grypy końskiej, grypy świń i kaczek, pullorozy - duru brzusznego ptaków itp. Zobacz także.

Literatura:
Badania laboratoryjne w medycynie weterynaryjnej, M., 1971;
Podręcznik mikrobiologicznych i wirusologicznych metod badawczych, wyd. MO Birger 2nd ed., M., 1973.


Słownik encyklopedyczny weterynaryjny. - M.: „Encyklopedia radziecka”. Redaktor naczelny V.P. Sziszkow. 1981 .

Synonimy:

Zobacz, czym jest „HEMAGGLUTYNACJA” w innych słownikach:

    hemaglutynacja- hemaglutynacja... Słownik ortograficzny

    hemaglutynacja- zatłoczenie, aglutacja Słownik rosyjskich synonimów. hemaglutynacja rzeczownik, liczba synonimów: 2 aglutynacja (3) … Słownik synonimów

    HEMAGLUTYNACJA- (od hemo... i łac. aglutinatio bonding) wiązanie i wytrącanie erytrocytów zawieszonych w cieczy pod wpływem różnych czynników, np. przeciwciał, bakterii czy wirusów. Test hemaglutynacji służy do diagnozowania ... ... Wielki słownik encyklopedyczny

    Hemaglutynacja- proces sklejania erytrocytów w widoczne gołym okiem agregaty. G. przyczyna: 1) At do erytrocytów i heterofilnych Ag; 2) Ab do Ag, obcych dla erytrocytów, zaadsorbowanych na ich powierzchni (patrz reakcja bierna hemaglutynacji); 3) ... Słownik mikrobiologii

    HEMAGLUTYNACJA- HEMAGLUTYNACJA, aglutynacja (zlepianie się) erytrocytów po zmieszaniu z homologiczną surowicą. Jeśli ludzkie erytrocyty zostaną zastąpione surowicą tej samej osoby, wówczas przez wstrząsanie uzyska się jednorodną zawiesinę. Jeśli czerwone krwinki jednej osoby ... ... Wielka encyklopedia medyczna

    hemaglutynacja- Zjawisko leżące u podstaw metody oznaczania przeciwciał, polegającej na ich aglutynacji erytrocytów w wyniku wiązania się albo z antygenami samych erytrocytów, albo z innymi antygenami sztucznie przyczepionymi do powierzchni erytrocytów. ... ... Podręcznik tłumacza technicznego- (hem + aglutynacja) aglutynacja erytrocytów... Duży słownik medyczny

    Hemaglutynacja— z greckiego. haima krew i łac. aglutynacja aglutynacji), proces aglutynacji i późniejszej sedymentacji krwinek czerwonych; spowodowane przez hemaglutyniny (patrz. Hemaglutyniny), bakterie i wirusy, czynniki zdolne do adsorpcji na ... ... Wielka radziecka encyklopedia

    hemaglutynacja- sklejanie (aglutynacja) erytrocytów. Rozwija się, w tym przy transfuzji niezgodnej krwi.

Reakcja hemaglutynacji (RHA)

RGA opiera się na fakcie, że niektóre rodzaje bakterii i wirusów mają zdolność adsorbowania na powierzchni erytrocytów różnych gatunków zwierząt (i ptaków), powodując ich sklejanie i tworzenie aglutynatów (bezpośredni RGA).

Adsorpcja antygenu (bakterii, wirusów) na powierzchni erytrocytów nie zawsze objawia się utworzeniem widocznego osadu; ponadto RGA jest niespecyficzna, ponieważ erytrocyty tego samego gatunku zwierząt mogą adsorbować różne antygeny.

Reakcja pasywnej (pośredniej) hemaglutynacji (RPHA) jest specyficzna. W celu jego ustalenia wstępnie przygotowuje się diagnostykę erytrocytów (erytrocyty, na których adsorbowany jest antygen). W tym celu krew barana (lub koguta) pobiera się w sposób sterylny, rozwłóknia się i kilkakrotnie przemywa w roztworze buforu fosforanowego (pH 7,2) stosując 3-5-krotne wirowanie. Supernatant usunięto, stężenie erytrocytów doprowadzono do 2,5% (1:40). Do 2,5% zawiesiny erytrocytów dodaje się w równej objętości (1 ml lub 0,5 ml) zawiesinę bakterii badanych gatunków drobnoustrojów w stężeniu 5-10 miliardów komórek na 1 ml. Erytrocyty łatwo adsorbują antygen o charakterze polisacharydowym. Aby zaadsorbować antygen o charakterze białkowym, erytrocyty poddaje się wstępnej obróbce taniną w rozcieńczeniu 1:20 000. Erytrocyty w połączeniu z dodanym antygenem pozostawia się do uczulenia (adsorpcji) na 2 godziny w termostacie (37°C) , następnie ponownie odwirowano przy 3-4 tys. obr./min przez 5 min z roztworem buforu fosforanowego (ryc. 9.13).

Powstałe erytrocyty diagnostyczne umieszcza się w probówkach (lub dołkach w płytce z pleksiglasu) i dodaje do nich standardową surowicę immunologiczną.

W przypadkach dodatnich nastąpi RGA – utrata erytrocytów w postaci charakterystycznego łuszczącego się lub ziarnistego osadu rozłożonego na całej powierzchni dna probówki (hemaglutynian). Oznacza to, że rodzaj badanego drobnoustroju (antygenu) jest specyficzny dla przeciwciał immunosurowicy. W przypadkach ujemnych niesklejone krwinki czerwone osiądą na dnie w postaci małego, równego okręgu.

Dla większej wiarygodności wyników RPGA, opóźnienie reakcji(hamowanie) zjawisko hemaglutynacji(RZGA) lub jego modyfikacja - reakcja neutralizacji przeciwciał(RIA).

Ryż. 9.13. Reakcja biernej hemaglutynacji (schemat): Er - erytrocyty: AG - antygen: AT - przeciwciało

Istota RZGA polega na tym, że reakcję aglutynacji ustawia się specyficzną surowicą diagnostyczną i badanym antygenem (jako antygen używany jest badany typ drobnoustroju). Tę mieszaninę utrzymuje się przez 1-2 godziny w temperaturze 37°C, następnie dodaje się erytrocyty. Jeśli testowany antygen jest homologiczny do przeciwciał surowicy diagnostycznej, to wchodzą one ze sobą w interakcje, a dodane erytrocyty nie ulegają aglutynacji – wynik reakcji jest pozytywny. Jeśli badany antygen nie jest homologiczny do przeciwciał surowicy lub nie jest zawarty w materiale, to dodane erytrocyty adsorbują antygen i następuje RHA – wynik RHA jest ujemny, nie jest ustalony rodzaj badanego drobnoustroju (antygenu).

Sposób ustawienia PH A polega na tym, że biorą równe objętości i mieszają diagnostyczną surowicę immunologiczną z różnymi rozcieńczeniami materiału testowego (pożądanego antygenu), pozostawiają do kontaktu na 1-2 godziny, następnie dodają erytrocyty uczulone pewnym (znanym) antygenem swoistym dla surowicy przeciwciała (erytrocytów diagnostycznych). Gdy pożądany antygen zareaguje z przeciwciałami surowiczymi, ulegają one neutralizacji, a dodane erytrocyty nie ulegają aglutynacji, nie występuje RHA – wynik PHA jest dodatni. Jeśli materiał testowy nie zawiera antygenu specyficznego dla przeciwciał użytej surowicy, nie nastąpi neutralizacja przeciwciał. Dlatego po dodaniu erytrocytów diagnostycznych pojawia się aglutynacja erytrocytów (hemaglutynacja), a wynik RHA jest ujemny. Test neutralizacji przeciwciał jest wysoce czułą metodą wykrywania antygenu nie tylko w zawiesinie żywych (lub zabitych) bakterii, ale także w zawiesinie rozdrobnionych tkanek różnych narządów, natywnych i ogrzanych wydzielin oraz wydalin chorego organizmu.

1. Reakcja hemaglutynacji

(RGA)

metoda wykrywania i identyfikacji wirusów oparta na zdolności niektórych wirusów do selektywnej aglutynacji erytrocytów niektórych gatunków zwierząt.

RHA opiera się na zjawisku adhezji erytrocytów, które zachodzi pod wpływem różnych czynników. Rozróżnij hemaglutynację bezpośrednią i pośrednią. W bezpośredniej reakcji hemaglutynacji erytrocyty sklejają się, gdy adsorbowane są na nich pewne antygeny, takie jak wirusy.

W badaniach serologicznych stosuje się bezpośrednią reakcję hamowania hemaglutynacji, gdy wyizolowany od pacjenta wirus jest neutralizowany swoistą surowicą odpornościową, a następnie łączony z krwinkami czerwonymi. Brak hemaglutynacji wskazuje na zgodność wirusa i użytej surowicy odpornościowej.

Pośrednią reakcję hemaglutynacji (hemaglutynację bierną) obserwuje się, gdy erytrocyty poddane wstępnej obróbce (uczuleni) różnymi antygenami zostaną uzupełnione surowicą odpornościową lub surowicą pacjenta, która zawiera odpowiednie przeciwciała. Istnieje specyficzne wiązanie erytrocytów, ich bierna hemaglutynacja.

Reakcja pośredniej lub biernej hemaglutynacji ma wyższą czułość i swoistość niż inne metody serologiczne i jest stosowana w diagnostyce zakażeń wywołanych przez bakterie, riketsje i pierwotniaki.

Metoda ustawienia reakcji pośredniej hemaglutynacji składa się z kilku etapów. Najpierw erytrocyty przemywa się izotonicznym roztworem chlorku sodu, a następnie, jeśli to konieczne (w przypadku stosowania antygenów o charakterze białkowym), traktuje się je roztworem garbników 1: 20 000 i uczula rozpuszczalnymi antygenami. Po przemyciu buforowanym izotonicznym roztworem chlorku sodu antygen erytrocytów jest gotowy do użycia. Surowice testowe rozcieńcza się izotonicznym roztworem chlorku sodu w probówkach lub specjalnych plastikowych płytkach z otworami, a następnie do każdego rozcieńczenia surowicy dodaje się erytrocyt diagnostyczny. Wyniki pośredniej reakcji hemaglutynacji są brane pod uwagę przez charakter osadu erytrocytów tworzącego się na dnie probówki. Za pozytywny uważa się wynik reakcji, w której erytrocyty równomiernie pokrywają całe dno probówki. Przy reakcji ujemnej erytrocyty w postaci małego krążka lub „guzika” znajdują się na środku dna probówki.

stosowanie RHA

RGA służy do oznaczania (wykrywania) wirusów w trakcie diagnostyki wskaźnikowej, do miareczkowania wirusów na podstawie właściwości hemaglutynacyjnych (oznaczanie jednostek hemaglutynacji - AE).

Adsorpcja wirusów

Podstawą zjawiska aglutynacji wywołanej przez wirusy jest adsorpcja wirusów na powierzchni erytrocytów, której towarzyszy sklejanie (aglutynacja) tych ostatnich i wytrącanie.

Antygen dla RGA

Jako antygen dla RHA przyjmuje się dowolny materiał (materiał patologiczny w postaci zawiesiny z narządów, materiał z zakażonego KZM, hodowle tkankowe itp.), w którym spodziewana jest obecność wirusa. Materiał musi być płynny, bez dużych cząstek.

Ustanowienie orientacyjnego RGA

Aby ustalić przybliżoną wartość RGA, na czystą i dobrze odtłuszczoną płytkę szklaną nanosi się jedną kroplę materiału zawierającego wirusy, dodaje się do niej jedną kroplę 5% zawiesiny erytrocytów i miesza się ją szklanym pręcikiem.

Ocena reakcji RHA

Oceń reakcję w krzyżykach (plusy). Oceniając reakcję na krzyżach, zwraca się uwagę na charakter osadu. Jeśli erytrocyty osiadły cienką warstwą równomiernie wzdłuż dna probówki (w postaci parasolki), reakcję ocenia się w czterech krzyżykach

2. Reakcja hamowania hemaglutynacji- reakcja serologiczna oparta na zdolności przeciwciał do zapobiegania aglutynacji erytrocytów przez hemaglutynujące typy wirusów (adenowirusy, arbowirusy, niektóre enterowirusy, wirusy grypy i rzekomej grypy, odry, reowirusy). Specyficzne przeciwciała przeciwwirusowe oddziałują z powierzchniowymi cząsteczkami hemaglutynin wirionów tych wirusów i blokują ich wiązanie z komplementarnymi cząsteczkami błony erytrocytów.

W ostatnim czasie reakcja ta znalazła szerokie zastosowanie w laboratoriach wirusologii klinicznej do oznaczania miana swoistych przeciwciał przeciwko niektórym wirusom, a także do serologicznej identyfikacji i typowania izolatów wirusów z materiału klinicznego pochodzącego od pacjentów. Zastosowanie jest nieco ograniczone ze względu na obecność w surowicy krwi ludzi niespecyficznych inhibitorów wirusów, a także naturalnych przeciwciał - aglutynin.

Reakcja hamowania hemaglutynacji (RTGA). Pomimo swojej nazwy zasada reakcji jest pod wieloma względami podobna do PH wirusów, ponieważ opiera się na zdolności AT do wiązania różnych wirusów i neutralizowania ich, uniemożliwiając aglutynację erytrocytów. Wizualnie efekt ten przejawia się w „hamowaniu” hemaglutynacji. RTHA jest stosowany w diagnostyce infekcji wirusowych do identyfikacji specyficznych antyhemaglutynin i identyfikacji różnych wirusów na podstawie ich hemaglutynin, które wykazują właściwości Ag.

Reakcja hamowania hemaglutynacji

(RTGA)

metoda identyfikacji wirusa lub wykrywania przeciwciał przeciwwirusowych w surowicy krwi pacjenta, oparta na zjawisku braku aglutynacji erytrocytów przez preparat zawierający wirusa w obecności opornej na niego surowicy krwi.

Reakcja hamowania hemaglutynacji. Mechanizm i praktyczne zastosowanie.

Wiele wirusów ma zdolność aglutynacji erytrocytów ściśle określonych gatunków ssaków i ptaków. Tak więc wirusy grypy i świnki aglutynują erytrocyty kur, świnek morskich i ludzi, a adenowirusy aglutynują erytrocyty szczurów i myszy. W związku z tym stawiają na ich wykrywanie w materiale pacjentów lub hodowlach komórkowych, zarodkach i zwierzętach reakcja hemaglutynacji(RGA). Aby to zrobić, w studzienkach tabletek przygotowuje się podwójnie rosnące rozcieńczenia materiałów i płynów zawierających wirusy, dodając do nich zawiesiny erytrocytów przemytych izotonicznym roztworem NaCl. Aby kontrolować spontaniczną aglutynację, erytrocyty miesza się z równą objętością izotonicznego roztworu NaCl. Mieszaniny inkubuje się w termostacie w temperaturze 37°C lub w temperaturze pokojowej.

Wyniki RHA są brane pod uwagę przez charakter aglutynacji erytrocytów po 30-60 minutach, kiedy są one zwykle całkowicie wytrącone w kontroli. Pozytywna reakcja jest wskazywana przez plusy. „++++” to osad w kształcie parasola, „+++” to osad z lukami, „++” to osad z dużymi lukami, „+” to osad kłaczkowaty otoczony strefą zlepionych erytrocytów, oraz „–” – ten sam ostro zaznaczony osad erytrocytów w postaci „guzika” jak w kontroli

Będąc specyficzną dla grupy, RGA nie pozwala na określenie gatunku wirusów. Są identyfikowane z reakcje hamowania hemaglutynacji(RTGA). Do jego ustawienia stosuje się znane surowice odpornościowe przeciwwirusowe, które rozcieńcza się izotonicznym roztworem chlorku sodu w dwukrotnym zmniejszaniu stężenia i wlewa do studzienek. Do każdego rozcieńczenia dodaje się taką samą ilość płynu zawierającego wirusy. Kontrolę stanowi zawiesina wirusa w izotonicznym roztworze chlorku sodu. Płytki z mieszaniną surowic i wirusów trzyma się w termostacie przez 30 minut lub w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, następnie do każdej z nich dodaje się zawiesinę erytrocytów. Po 30 minutach oznacza się miano surowicy neutralizującej (tj. jej maksymalne rozcieńczenie), co spowodowało opóźnienie aglutynacji erytrocytów.

RTGA znajduje zastosowanie w diagnostyce serologicznej chorób wirusowych, w szczególności grypy i zakażeń adenowirusami. Lepiej ująć to tak samo jak pH, ze sparowanymi surowicami. Czterokrotny wzrost miana przeciwciał w drugiej surowicy potwierdza podejrzenie rozpoznania.

3. Testy serologiczne pozwala na postawienie diagnozy w przypadku wykrycia swoistych przeciwciał w surowicy pacjentów. W przypadku reakcji serologicznych stosuje się sparowane surowice, które są pobierane w pierwszych dniach od wystąpienia choroby i po 1 do 3 tygodniach, ale są badane jednocześnie. Wartość diagnostyczną ma 4-krotny lub większy wzrost miana przeciwciał. RTGA, RN, RSK, RTGads, RIF, RIA, ELISA są ustawione z antygenami (diagnosticums) przygotowanymi ze szczepów referencyjnych odpowiednich wirusów.

4. Sparowana - oznacza to, że krew jest pobierana dwukrotnie w pewnym odstępie czasu. Poprzez zwiększenie miana przeciwciał stwierdza się, że wystąpiła infekcja. Jeśli miano przeciwciał się nie zmienia, oznacza to, że te przeciwciała są w organizmie od dłuższego czasu, nie ma świeżej infekcji.

Największą wartością diagnostyczną jest badanie sparowanych surowic pobranych od zwierząt na początku i na końcu choroby (w odstępie 14-21 dni). Surowicę zbiera się do sterylnych probówek i przechowuje do analizy.

Opis

Zestaw do diagnostyki parwowirusowej choroby świń przeznaczony jest do wykrywania antygenu parwowirusa w zawiesinie narządów wewnętrznych poronionych płodów w teście hemaglutynacji (HA) oraz swoistych przeciwciał w surowicy krwi świń, a także nowonarodzonych prosiąt (przed podaniem colostrum) w teście hamowania hemaglutynacji (HA).

Reakcję umieszcza się mikrometodą w dołkach płytek polistyrenowych.

    polistyrenowe płytki 96-dołkowe do reakcji immunologicznych;

    inaktywowane specyficznie względem antygenu, wykazujące aktywność hemaglutynacji co najmniej 1:128;

    swoista surowica o aktywności w RTGA nie mniejszej niż 1:256;

    surowica jest normalna (kontrola ujemna).

Czas analizy:

RGA - 2,5-3,5 godziny, RTGA - 3,5-4,5 godziny (nie licząc czasu na przygotowanie materiałów do badania).

Zasada metody:

Reakcja hemaglutynacji (RHA) polega na adhezji erytrocytów zawieszonych w cieczy pod wpływem właściwości hemaglutynujących wirusa i tworzeniu się luźnego osadu w postaci parasola. Istotą RTGA jest zneutralizowanie właściwości hemaglutynujących wirusa za pomocą swoistych przeciwciał zawartych w surowicy krwi, w wyniku czego erytrocyty nie sklejają się i osiadają na dnie, tworząc gęsty osad w postaci guzika .

Warunki przechowywania

Zestaw przechowuje się w suchym, ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8°C.

Po rozpuszczeniu składniki zestawu można przechowywać w stanie zamrożonym przez 1 miesiąc, ponowne zamrażanie jest niedozwolone.

Najlepiej spożyć przed datą

Erytrocyty (lub cząsteczki lateksu) z zaadsorbowanymi na nich antygenami wchodzą w interakcję z odpowiednimi przeciwciałami surowicy krwi, co powoduje, że erytrocyty sklejają się i opadają na dno probówki lub komórki w postaci zapiekanego osadu. Przy negatywnej reakcji erytrocyty osadzają się w postaci guzika.

Reakcja aglutynacji można przeprowadzić w mikrowariantach w komórkach 96-dołkowej płytki do badań immunologicznych ze stożkowym dnem. Do studzienek tabletki dodaje się 0,05 ml FSB (pH 7,2-7,4) i przygotowuje się dwukrotne rozcieńczenia badanych surowic krwi od 1:2 i powyżej. Następnie do każdej komórki dodaje się 0,005 ml zawiesiny komórek grzyba w stężeniu 100 000 komórek grzyba na 1 ml. Tabletkę delikatnie wstrząsa się i inkubuje przez 2 godziny w termostacie w temperaturze 37°C, a następnie 16-18 godzin w temperaturze 4°C. Jako kontrolę negatywną stosuje się normalną (ujemną) surowicę krwi i FSB.

Wyniki reakcji są brane pod uwagę za pomocą mikroskopu i wizualnie i są określane w krzyżykach zgodnie z następującym schematem:

(++++) - całkowite oświecenie cieczy i utworzenie aglutynatu na dnie otworu w postaci odwróconego „parasolki”, po wstrząśnięciu „parasolka” rozpada się na płatki;

(+++) - niepełne oświecenie cieczy i dobrze zarysowany "parasol";

(++) - zauważalne oświecenie płynu, "parasol" jest wyrażony umiarkowanie;

(+) - ledwo zauważalne płynne oświecenie, „parasol” jest słabo wyrażony;

(-) - wynik negatywny, ciecz nie stała się klarowna, na dnie studzienki tworzy się osad w postaci guzka, przy lekkim wstrząśnięciu tworzy się jednorodna zawiesina.

Miano przeciwciał przyjmowano jako ostatnie rozcieńczenie badanej surowicy, w którym wystąpiła aglutynacja co najmniej dwóch krzyżyków (++).

Reakcja aglutynacji- jest to reakcja immunologiczna interakcji antygenu z przeciwciałami w obecności elektrolitów, a antygen jest w stanie korpuskularnym (erytrocyty, bakterie, cząsteczki lateksu z zaadsorbowanymi antygenami). Podczas aglutynacji antygeny krwinek są sklejane ze sobą przez przeciwciała, co objawia się tworzeniem kłaczkowatego osadu. Powstawanie płatków następuje dzięki temu, że przeciwciała mają dwa centra aktywne, a antygeny są wielowartościowe, tj. mają wiele determinantów antygenowych. RZS służy do identyfikacji patogenu wyizolowanego z materiału pacjenta, a także do wykrywania przeciwciał przeciwko patogenowi w surowicy krwi pacjenta (np. reakcja Wrighta i Huddlesona w brucelozie, reakcja Vidala w durze brzusznym i durze rzekomym) ).

Najprostszym sposobem na ustawienie RZS jest reakcja na szkle, jest to przybliżona RZS, która służy do określenia patogenu wyizolowanego od pacjenta. Podczas ustawiania odczynu na szkiełku podstawowym aplikuje się diagnostyczną surowicę aglutynującą (w rozcieńczeniu 1:10 lub 1:20), następnie wprowadza się posiew od pacjenta. Reakcja jest dodatnia, jeśli w kropli pojawi się kłaczkowaty osad. W pobliżu umieszcza się kontrolę: zamiast surowicy aplikuje się kroplę roztworu chlorku sodu. Jeżeli diagnostyczna surowica aglutynująca jest nieadsorbowana 1, to jest rozcieńczana (do miana - rozcieńczenia, do którego powinna nastąpić aglutynacja), tj. umieścić ekspandowane RZS w probówkach ze wzrastającymi rozcieńczeniami surowicy aglutynującej, do których dodaje się 2-3 krople zawiesiny patogenu wyizolowanego od pacjenta. Aglutynacja jest uwzględniana przez ilość osadu i stopień klarowania cieczy w probówkach. Reakcję uważa się za dodatnią, jeżeli w rozcieńczeniu zbliżonym do miana surowicy diagnostycznej stwierdza się aglutynację. Reakcji towarzyszą kontrole: surowica rozcieńczona izotonicznym roztworem chlorku sodu powinna być przezroczysta, zawiesina drobnoustrojów w tym samym roztworze powinna być jednorodnie mętna, bez osadu.

Aby określić przeciwciała przeciwko patogenowi w surowicy krwi pacjenta, stosuje się rozszerzone RA. Po umieszczeniu w probówkach surowica krwi pacjenta jest rozcieńczana i do probówek dodawana jest taka sama ilość zawiesiny diagnosticum (zawiesiny zabitych drobnoustrojów). Po inkubacji określa się największe rozcieńczenie surowicy, przy którym wystąpiła aglutynacja, tj. utworzył się osad (miano surowicy). W tym przypadku reakcja aglutynacji z O-diagnosticum (bakterie zabite przez ogrzewanie, zachowujące termostabilny antygen O) zachodzi w postaci aglutynacji drobnoziarnistej. Reakcja aglutynacji z H-diagnosticum (bakterie zabijane przez formalinę, zachowujące nietrwały termicznie antygen wiciowy H) jest gruboziarnista i przebiega szybciej.



Reakcja pośredniej (biernej) hemaglutynacji(RNGA lub RPGA) to rodzaj RZS. Ta metoda jest bardzo czuła. Za pomocą RNGA można rozwiązać dwa zadania: oznaczenie przeciwciał w surowicy krwi pacjenta, do której dodaje się antygenowy erytrocyt diagnostyczny, czyli erytrocyty, na których adsorbowane są znane antygeny; określić obecność antygenów w badanym materiale. W tym przypadku reakcja jest czasami nazywana reakcją odwrotnej pośredniej hemaglutynacji (RONGA). Podczas oceny stopnia zaawansowania do badanego materiału dodaje się przeciwciało erythrocyte diagnosticum (erytrocyty z przeciwciałami zaadsorbowanymi na ich powierzchni). Erytrocyty w tej reakcji pełnią rolę nośników i biorą bierny udział w tworzeniu agregatów immunologicznych. Przy pozytywnej reakcji biernie sklejone erytrocyty pokrywają dno studzienki równą warstwą o ząbkowanych krawędziach („parasol”); przy braku aglutynacji erytrocyty gromadzą się w centralnym zagłębieniu otworu, tworząc zwarty „guzik” o ostro określonych krawędziach.

Reakcja koaglutynacji służy do wykrywania komórek patogenów (antygenów) za pomocą zaadsorbowanych na nich przeciwciał Staphylococcus aureus, zawierające białko A. Białko A ma powinowactwo do fragmentu Fc immunoglobulin. Dzięki temu przeciwciała wiążą się ze gronkowcem pośrednio poprzez fragment Fc, a fragmenty Fab są zorientowane na zewnątrz i są zdolne do interakcji z odpowiednimi drobnoustrojami wyizolowanymi od pacjentów. W takim przypadku powstają płatki.

Reakcja hamowania hemaglutynacji (HITA) stosowany w diagnostyce infekcji wirusowych i tylko infekcji wywołanych przez wirusy hemaglutynujące. Wirusy te zawierają na swojej powierzchni białko - hemaglutyninę, która po dodaniu do wirusów erytrocytów odpowiada za reakcję hemaglutynacji (RHA). RTGA polega na blokowaniu antygenów wirusowych przeciwciałami, w wyniku czego wirusy tracą zdolność do aglutynacji krwinek czerwonych.



reakcja Coombsa - RA do wykrywania niekompletnych przeciwciał. W przypadku niektórych chorób zakaźnych, takich jak bruceloza, w surowicy krwi pacjenta krążą niekompletne przeciwciała przeciwko patogenowi. Niekompletne przeciwciała nazywane są blokującymi, ponieważ mają jedno miejsce wiązania antygenu, a nie dwa, jak pełne przeciwciała. Dlatego po dodaniu diagnostycznego antygenu niekompletne przeciwciała wiążą się z antygenami, ale ich nie sklejają. W celu zamanifestowania reakcji dodaje się surowicę antyglobulinową (przeciwciała przeciwko immunoglobulinom ludzkim), co doprowadzi do aglutynacji powstałych w pierwszym etapie reakcji kompleksów immunologicznych (antygenowe diagnostyka + niekompletne przeciwciała).

Pośrednią reakcję Coombsa stosuje się u pacjentów z hemolizą wewnątrznaczyniową. U niektórych z tych pacjentów stwierdza się niekompletne monowalentne przeciwciała anty-Rhesus. Oddziałują specyficznie z erytrocytami Rh-dodatnimi, ale nie powodują ich aglutynacji. Dlatego surowica antyglobulinowa jest dodawana do układu przeciwciała anty-Rh + erytrocyty Rh-dodatnie, co powoduje aglutynację erytrocytów. Za pomocą reakcji Coombsa diagnozuje się stany patologiczne związane z wewnątrznaczyniową lizą erytrocytów pochodzenia immunologicznego, np. chorobę hemolityczną noworodka spowodowaną konfliktem Rhesus.

RZS do oznaczania grup krwi opiera się na aglutynacji erytrocytów przez przeciwciała surowicy odpornościowej na antygeny grup krwi A (II), B (III). Kontrolą jest surowica, która nie zawiera przeciwciał, tj. grupy krwi AB (IV) w surowicy oraz antygeny erytrocytów grupy A (P) i B (III). Erytrocyty grupy 0(I) są używane jako kontrola negatywna, ponieważ nie mają antygenów.

Do oznaczenia czynnika Rh stosuje się surowice anty-Rh (co najmniej dwie różne serie). W obecności antygenu Rh na błonie badanych erytrocytów dochodzi do aglutynacji tych komórek.

Reakcja hemadsorpcji(RGAD). Hemadsorpcja to połączenie erytrocytów z powierzchnią komórek dotkniętych wirusem, oparte na relacji receptorów wirusowych znajdujących się na powierzchni dotkniętej komórki z receptorami erytrocytów, co prowadzi do ich wzajemnej adhezji podobnej do reakcji hemaglutynacji. Zaletą tej reakcji jest to, że staje się dodatnia jeszcze przed pojawieniem się wyraźnych zmian cytopatycznych w zakażonych komórkach.

Istnieją różnice w rodzaju adsorpcji (rozproszona, ogniskowa), rodzaju sorbowanych erytrocytów (ludzkie, małpy, świnki morskie itp.), temperaturze, w której przebiega reakcja (37°C, 0°C), obecności elucji (tak, nie). G. można spowolnić przez wstępną inkubację zainfekowanych wirusem komórek To-ry'ego z antysurowicą kospecyficzną dla wirusa. Reakcja hamowania G. jest wykorzystywana do identyfikacji wirusów.