طرق دراسة التمثيل الغذائي للبروتين. طرق دراسة التمثيل الغذائي للبروتين في الكبد ، القيمة التشخيصية

دراسة استقلاب البروتين

نشاط الليباز البنكرياس

القيمة السريرية والتشخيصية للتعريف

يرفعنشاط ليباز البنكرياسفي مصل الدم مع التهاب البنكرياسمن أي أصل ، وخاصة التهاب البنكرياس الحاد ، حيث يزداد نشاط الإنزيم أيضًا في السائل الاستسقائي. في المرضى الذين يعانون من التهاب البنكرياس ، يُنصح بالتحقيق في وقت واحد في نشاط الليباز في الدم والبول ، لأنه في الأخير يتضح أنه يزداد أكثر من الدم. الأدوية التي تثير تشنج العضلة العاصرة للأودي (المخدرات ، المسكنات ، سيكريتين) ، الهيبارين (تحفيز إفراز الليباز) تنشط هذا الإنزيم.

تم العثور على مستويات منخفضة من نشاط الليباز في مرضى السل والزهري والسرطان وأمراض معدية مختلفة ، ومع تقدم العملية المرضية ، يتناقص نشاط الإنزيم أكثر فأكثر.

البروتينات هي مواد تحتوي على نيتروجين بوزن جزيئي مرتفع. هناك بروتينات بسيطة - بروتينات تتكون من 20 نوعًا من الأحماض الأمينية المختلفة ، وبروتينات معقدة - بروتينات ، تتكون من بروتين ومكون اصطناعي (غير بروتيني). تشتمل المكونات الصناعية على الأحماض النووية ، والهيم ، والدهون ، وحمض الفوسفوريك ، وما إلى ذلك. تشتمل البروتينات المعقدة على البروتينات النووية ، والبروتينات الصبغية ، والبروتينات الدهنية ، والبروتينات الفوسفورية.

يبدأ التحليل الكيميائي الحيوي عادةً بتحديد المحتوى البروتين الكلي في الدم في الدم.

التغييرات في مستوى البروتين الكلي مطلقة ونسبية. عادة ما يتم ملاحظة هذا الأخير مع زيادة (نقص) في حجم الدم (البلازما). وهكذا ، يؤدي هيدرات الدم إلى نقص نسبي في بروتين الدم ، ويؤدي الجفاف إلى فرط نسبي في بروتين الدم. في هذا الصدد ، عند تفسير مؤشرات البروتين الكلي في مصل الدم (بلازما) الدم ، من الضروري مراعاة انتهاكات استقلاب الماء.

يمكن أن يخفي الجفاف نقص بروتين الدم المطلق ، لأنه مع هذا المزيج ، لا يختلف تركيز البروتين في بلازما الدم دائمًا عن القاعدة. ويترتب على ذلك أن سبب نقص وفرط بروتين الدم لا يمكن أن يكون فقط اختلال التوازن بين تناول البروتين ، والتخليق الحيوي ، وتقويضه وإزالته ، ولكن أيضًا تغيير حجم الحيز داخل الأوعية الدموية بسبب الجزء السائل (الماء) من الدم. من الواضح أن التسبب في هذه التغييرات مختلف.

للتمييز بين التغيرات المطلقة والنسبية في محتوى بروتين البلازما ، يكفي فحص الهيماتوكريت أو تحديد حجم البلازما (الدم).

في الغالبية العظمى من الأمراض المزمنة للأعضاء الداخلية ، المصحوبة بتغيرات في التمثيل الغذائي للبروتين ، يتم الكشف عن نقص بروتين الدم ، والذي يكون عادةً ثانويًا.

نقص بروتينات الدم المطلقتم اكتشافه في المتلازمات الفيزيولوجية المرضية ، والتي يتم التعبير عنها في انخفاض في التخليق الحيوي ، وزيادة الهدم ، والخسائر غير الطبيعية ، والتوزيع المرضي للبروتين بين القطاعات الفردية من الجسم. أسباب نقص بروتين الدم المطلق هي:

1. عدم كفاية تناول البروتين من الطعام بسبب الجوع وسوء التغذية وتضيق (تضيق) المريء (بسبب الحروق والأورام) وانتهاكات سلامة ووظيفة الجهاز الهضمي مع عمليات التهابية مطولة في جدار الأمعاء وغيرها الحالات المصحوبة بتدهور في الهضم وامتصاص البروتين ، كما لوحظ انخفاض في مستوى البروتين الكلي في البلازما (أو الميل إلى الإصابة بنقص بروتين الدم) في متلازمة ضعف امتصاص الأطعمة البروتينية واختلال في تكوين الأحماض الأمينية.

2. تثبيط وظيفة تخليق البروتين في الكبد ، لوحظ في التهاب الكبد المتني ، وتليف الكبد ، وكذلك حالات التسمم الناتجة عن العمليات القيحية المطولة ، والأورام الخبيثة ، والتسمم الدرقي ، والتأثيرات السامة لبعض المواد الكيميائية.

3. يرتبط الانهيار المتزايد للبروتينات في الجسم ، الناجم عن الحاجة إلى تعويض تكاليف الطاقة الكبيرة ، بنقص الموارد البلاستيكية. لوحظ في الحروق الحرارية وأمراض الحروق والأورام الخبيثة.

4. فقدان الجسم للبروتين: مع الدم في حالة النزيف الحاد والمزمن ، مع البول في حالة المتلازمة الكلوية (الكلى ، الداء النشواني في الكلى).

5. الانتقال إلى الأنسجة الأخرى مع زيادة نفاذية جدار الشعيرات الدموية بشكل حاد: تكوين وذمة واسعة النطاق ، والانتقال إلى الفضاء الثالث - مع تكوين إفرازات ، وانصباب في التجاويف المصلية ، في تجويف الأمعاء (مع الانفتال والتهاب الصفاق ).

6. عيب بروتينات الدم ، ᴛ.ᴇ. اضطرابات وراثية نادرة نسبيًا (محددة وراثيًا) في تخليق بروتينات الدم.

7. ملامح الحالة الفسيولوجية للجسم . لوحظ أيضًا انخفاض محتوى البروتين في بلازما الدم في بعض الحالات الفسيولوجية: على سبيل المثال ، عند النساء في الأشهر الأخيرة من الحمل وأثناء الرضاعة.

نقص بروتين الدم النسبي.من المعروف أن التروية الوفيرة لمحلول الجلوكوز والسوائل الفسيولوجية الأخرى تؤدي إلى انخفاض في تركيز البروتين بسبب زيادة حجم الجزء السائل من الدم.

أكثر من نصف الكمية الإجمالية لبروتينات البلازما (35-55 جم / لتر) يمثلها الألبومين. يتم تحديث ألبومين البلازما بسرعة: خلال النهار ، يتم تصنيع 10-16 جم من هذا البروتين وتحللها. نظرًا لتركيزه العالي ، وارتفاع نسبة الماء فيه ، وصغر حجمه الجزيئي ، يؤدي الألبومين وظيفة مهمة في الحفاظ على الضغط الاسموزي الغرواني للدم. وبالتالي ، فهو يشارك في تبادل الماء بين الدم والفضاء الخلالي. عندما يكون محتوى الألبومين أقل من 30 جم / لتر ، ينخفض ​​ضغط الأورام كثيرًا بحيث يمر الماء من الداخل إلى قطاع الأوعية الدموية.

يلعب تحديد مستوى الألبومين في البلازما دورًا أساسيًا في تقييم شدة مسار الأمراض المصحوبة بنقص ألبومين الدم.

نفس القيمة التشخيصية المهمة هي تحديد تركيز الألبومين في البول.

لوحظ انخفاض في مستوى الألبومين في أمراض الكلى المزمنة - المتلازمة الكلوية ، وكذلك الحروق ، وفقدان الدم ، والأمراض المعدية ، والعمليات القيحية ، والالتهاب الرئوي غير المحدد ، والسل الرئوي والأعضاء الأخرى ، والتهاب المفاصل الحاد وحالات التهابية أخرى ، والأورام الخبيثة ( دنف سرطاني) ، سرطان الدم ، فقر الدم ، قصور القلب ، احتشاء عضلة القلب ، خسارة كبيرة للبروتين في الأمعاء.

لوحظ ظهور البروتين في البول (بيلة بروتينية) في عدد من أمراض الكلى. من المعتاد عزل البيلة البروتينية الكلوية الوظيفية (الناتجة عن آفات حمة الكلى - الأمراض الالتهابية والمتلازمة الكلوية وأحيانًا العيوب الخلقية في النيفرون) والبروتين الكلوي الوظيفي المرتبط بزيادة نفاذية المرشح الكلوي أو تباطؤ تدفق الدم في الكبيبات (تحت تأثير انخفاض حرارة الجسم والإجهاد البدني والعقلي).

البيلة البروتينية السابقة للكلية تترافق مع زيادة تفكك بروتينات الأنسجة وانحلال الدم الشديد. كلوي - بسبب أمراض الكلى (الكبيبي والأنبوبي) ؛ ما بعد الكلى - بسبب أمراض المسالك البولية وغالبًا - نضح التهابي.

من المعتاد التفريق ثلاثة مستويات بروتينية: معتدل - مع خسارة يومية للبروتين تصل إلى 1 جم ، متوسط ​​- من 1 إلى 3 جم وضوحا - أكثر من 3 جم / يوم.

الأسباب الرئيسية للبيلة البروتينية هي:

1. زيادة نفاذية المرشح الكبيبي لبروتينات البلازما (البيلة البروتينية الكبيبية) ؛

2. انتهاك إعادة الامتصاص الأنبوبي للبروتينات المفلترة (البيلة البروتينية الأنبوبية) ؛

3. بروتينات الدم و / أو زيادة في محتوى البروتينات في الدم ؛

4. تغييرات في ديناميكا الدم الكلوية.

صفحة 66 من 76

فيديو: تحديد البروتين التفاعلي في مصل الدم

تعتبر مؤشرات بروتين بلازما الدم الكلي وجزيئاته الفردية مهمة في تشخيص العديد من الأمراض.
تحديد البروتين الكلي في مصل الدم. يمكن إنتاجه باستخدام عدد من الطرق (قياس الأزوتومتر ، قياس الجاذبية ، قياس النوى ، الانكسار ، الطيف الضوئي ، إلخ). من بين طرق القياس اللوني ، تعد طريقة البيوريت الأكثر تحديدًا وحساسية ودقيقة ويمكن الوصول إليها عمليًا. يتم تقديم هذه الطريقة كطريقة موحدة لتحديد البروتين الكلي في مصل الدم. يعتمد على المبدأ التالي: تتفاعل البروتينات في بيئة قلوية مع كبريتات النحاس ، مكونة مركبات ذات لون أرجواني.
تقنية تحديد البروتين الكلي هي كما يلي. إلى 5 مل من محلول العامل من كاشف biuret (يذوب 4.5 جم من ملح Rochelle في 40 مل من 0.2 N هيدروكسيد الصوديوم ، ويضاف 1.5 جم من C11SO4 5H2O و 0.5 جم من K1 ويضاف إلى 100 مل من 0.2 N هيدروكسيد الصوديوم) أضف 0.1 مل من مصل الدم. بعد 30 دقيقة ، تكون العينة قياسًا لونيًا على FEK في كفيت 10 مم مع مرشح الضوء الأخضر ضد التحكم. لتحضير عنصر تحكم ، يضاف 0.1 مل من 0.9٪ كلوريد الصوديوم إلى 5 مل من كاشف بيوريت. يتم الحساب وفقًا لجدول المعايرة.
يتراوح التركيز الطبيعي للبروتين الكلي عند البالغين من 62 إلى 82 جم / لتر. يتم عرض البيانات حسب العمر عند الأطفال في الجدول. 49.
تبويب 49. محتوى أجزاء البروتين كنسبة مئوية من إجمالي كمية البروتين (متوسط ​​البيانات) حسب العمر (وفقًا لـ Yu. E. Veltishchev ، 1979)

الأسباب الأكثر شيوعًا لنقص بروتين الدم هي عدم كفاية تناول البروتينات في الجسم مع الطعام (تجويع البروتين) ، وفقدان البروتين بشكل كبير وتثبيط التخليق الحيوي لبروتين الدم.
لوحظ عدم كفاية تناول البروتينات في الجسم في حالات اضطرابات الجهاز الهضمي (تضيق المريء ، وتشنج البواب وتضيق البواب ، والأورام ، والتهاب الجهاز الهضمي ، وما إلى ذلك) ، وانخفاض محتوى البروتين في النظام الغذائي أو تكوين الأحماض الأمينية غير المتوازنة ، إلخ.
أمراض الكلى التي تحدث مع بروتينية ، نزيف حاد ومزمن ، إفرازات واسعة وانصباب في التجاويف المصلية ، والحروق ، وما إلى ذلك تؤدي إلى فقدان الجسم للبروتين.
يحدث نقص بروتين الدم المرتبط بانخفاض تخليق البروتين في الكبد في التهاب الكبد المزمن ، والتسمم ، وتليف الكبد ، والعمليات القيحية المطولة ، والأورام الخبيثة ، إلخ.
فرط بروتين الدم ظاهرة نادرة نسبيًا. لوحظ مع داء النفاخ ، والسكري الكاذب ، وانسداد الأمعاء ، والتهاب الصفاق المعمم ، والورم النخاعي (يستمر حتى 120 جم / لتر).
طرق تحديد نسبة البروتين في مصل الدم. تعتبر دراسة العلاقة الكمية بين أجزاء البروتين الفردية ذات قيمة تشخيصية كبيرة ، حيث تتيح التمييز بين أنواع معينة من نقص البروتين وفرط البروتين في الدم ، فضلاً عن عدد من الأمراض التي لا يصاحبها تغيير في محتوى البروتين الكلي.
لتجزئة بروتينات البلازما ، يتم استخدام الأملاح المحايدة ، التجزيء الكهربي ، طرق المناعة والترسيب ، الترسيب مع الكحول الإيثيلي عند درجة حرارة منخفضة ، الكروماتوجرافيا ، الترشيح الهلامي. أكثر هذه الطرق شيوعًا هي طرق الرحلان الكهربي بناءً على السرعة المختلفة لحركة البروتينات في المجال الكهربائي ، اعتمادًا على شحنتها الكهربائية وغيرها من الخصائص الفيزيائية والكيميائية.
تُستخدم على نطاق واسع طرق الرحلان الكهربائي على الورق والمواد الهلامية - أجار ونشا وغيرها ، خاصة على هلام بولي أكريلاميد ، والذي يمكن استخدامه للحصول على حوالي 30 جزءًا من البروتين. في كثير من الأحيان ، بدأ استخدام الرحلان الكهربائي على أفلام أسيتات السليلوز. ومع ذلك ، في مختبرات التشخيص السريري ، يتم استخدام طريقة الرحلان الكهربائي على الورق بشكل أساسي (V.G.Kolb ، V. S. Kamyshnikov ، 1976). تعتمد هذه الطريقة على المبدأ التالي: تحت تأثير المجال الكهربائي الثابت ، تتحرك بروتينات المصل بشحنة كهربائية على طول الورق المبلل بمحلول منظم بسرعة تعتمد على حجم الشحنة والوزن الجزيئي. في هذه الحالة ، تنقسم بروتينات مصل الدم إلى خمسة أجزاء: الألبومين والجلوبيولين a1 ، a2 ، b ، y.
النسبة الطبيعية للألبومين والجلوبيولين (نسبة الألبومين - الجلوبيولين) حوالي 2: 1. يتم عرض النسبة المئوية للكسور الفردية للبروتينات في البالغين والأطفال ، حسب العمر ، في الجدول. 49. الكمية الإجمالية لأجزاء البروتين والبروتين في الدم تتغير مع أمراض مختلفة عند الأطفال.
في البالغين والأطفال الأكبر سنًا ، يتم تمييز الأنواع التالية من المخطط الكهربائي: 1) العملية الالتهابية الحادة - 2) الالتهاب المزمن تحت الحاد - 3) معقد الأعراض الكلوية - 4) الأورام الخبيثة - 5) التهاب الكبد - 6) تليف الكبد - 7) اليرقان الانسدادي - 8) في - و p-globulin plasmacytomas.

في النوع الأول ، هناك انخفاض في مستوى الألبومين وزيادة في a1 ، a2-globulins ، وفي المراحل اللاحقة ، و y-globulins ؛ في النوع الثاني ، انخفاض معتدل في كسور الألبومين وزيادة ملحوظة في a2 - ، كسور الجلوبيولين y ؛ في الثالث ، انخفاض كبير في الألبومين ، وزيادة في الجلوبيولين مع انخفاض معتدل في y-globulins ؛ في الرابع - انخفاض في الألبومين وزيادة كبيرة في جميع أجزاء الجلوبيولين ؛ في الخامس - انخفاض معتدل في الألبومين وزيادة في y- و (3-globulins ؛ في السادس - انخفاض في الألبومين مع زيادة قوية في جزء y-globulin ، الذي يتم توسيع قاعدته ؛ في السابع - انخفاض في الألبومين وزيادة معتدلة في CC2- و P- و y-globulins ؛ في الثامن - يزداد إجمالي البروتين بشكل حاد ، ويتم تقليل الألبومين ومعظم الجلوبيولين ، اعتمادًا على النوع ، تزداد y- أو β-globulins - بولين.
عند الرضع ، هناك نقص فسيولوجي في التخليق الحيوي لـ y-globulins. لذلك ، في الأمراض المعدية ، تزداد ب- و a2-globulins بشكل ملحوظ أكثر من الأطفال الأكبر سنًا والبالغين. قد تشير الزيادة المستمرة في y-globulins عند الأطفال الصغار إلى وجود حالة إنتانية.

البروتين هو المادة العضوية الرئيسية المحتوية على النيتروجين. يوجد جرام واحد من النيتروجين في 6.25 جرام من البروتين (نسبة النيتروجين) ، أي أن البروتين حوالي 16٪ نيتروجين. لذلك ، من خلال فحص تبادل النيتروجين في الجسم ، من الممكن تقييم حالة التمثيل الغذائي للبروتين. يمكن الحكم على شدة تخليق البروتين بكمية النيتروجين التي تدخل الجسم ، ويمكن تقدير تكسير البروتينات بكمية النيتروجين التي تفرز في البول والعرق (كمية النيتروجين المفقودة مع العرق لا تكاد تذكر في الظروف العادية ، لذلك غالبًا ما لا يؤخذ نيتروجين العرق في الاعتبار). يمكنك مقارنة تركيب البروتينات وانهيارها عن طريق تحديد توازن النيتروجين.

توازن النيتروجين هو نسبة كمية النيتروجين التي تدخل الجسم وتفرز منه. تتميز الأنواع التالية من توازن النيتروجين - التوازن الإيجابي والسلبي والنيتروجين. توازن النيتروجين الإيجابي: إن تناول النيتروجين في الجسم يتجاوز إفرازه من الجسم (احتباس النيتروجين في الجسم). يشير هذا إلى أن تخليق البروتين يتجاوز تفككه. عادة ، يحدث هذا النوع من توازن النيتروجين أثناء نمو الجسم ، وأثناء الحمل ، والنقاهة ، وإضافة كتلة العضلات أثناء ممارسة الرياضة. توازن النيتروجين السلبي - يكون تناول النيتروجين أقل من إفرازه من الجسم. يشير هذا إلى أن تخليق البروتين أقل من تفككه. يحدث هذا النوع من توازن النيتروجين في الحالات التالية:

1) تجويع البروتين (كمية غير كافية من البروتينات تدخل الجسم أو يتم تزويد البروتينات المعيبة بالطعام. لا يحتوي البروتين المعيب على واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية الأساسية) ؛

2) ضعف امتصاص الأحماض الأمينية.

3) الشيخوخة.

4) أمراض أو حالات مصحوبة بانهيار واضح للأنسجة (أورام ، دنف) ؛

5) انخفاض تخليق البروتين بسبب اعتلال الخميرة.

توازن النيتروجين - إن تناول وإفراز النيتروجين هو نفسه. يشير إلى نفس شدة تخليق البروتين وانحلاله (Raguzin A.V.، Setko N.P.، Shirshov O.V.، Fateeva T.A. 2001)

خاتمة

السناجب(البروتينات) هي مركبات معقدة تحتوي على جزيئات عالية من النيتروجين تتكون من أحماض أمينية. مجموعة وتسلسل الأحماض الأمينية في البروتين يميز كل من خصوصياته البيوكيميائية وقيمته الغذائية. من بين العشرات من الأحماض الأمينية المعروفة حاليًا ، يوجد 20 فقط في الطعام.

الأحماض الأمينية التي تتكون منها البروتينات تنقسم إلى أساسية وغير أساسية. الأحماض الأمينية الأساسيةيجب تزويده بالطعام بالكميات المطلوبة وبنسب معينة. الأحماض الأمينية غير الأساسيةيمكن أن تخضع لتحولات متبادلة في الجسم أو تتشكل من تحولات لا يمكن الاستغناء عنها نتيجة للتحولات البيوكيميائية المختلفة (تفاعلات التحويل ، التوليف من المركبات غير البروتينية باستخدام الأمونيا كمصدر للنيتروجين). تشمل الأحماض الأمينية الأساسية أرجينين ، فالين ، هيستيدين ، إيزولوسين ، ليسين ، ليسين ، ميثيونين ، تريبتوفان ، فينيل ألانين ، ثريونين (علاوة على ذلك ، يعتبر الأرجينين والهيستيدين ضروريين للأطفال دون سن 3 سنوات). أحماض أمينية غير أساسية: ألانين ، أسباراجين ، حمض الأسبارتيك ، جلايسين ، حمض الجلوتاميك ، جلوتامين ، سيرين ، سيستين ، تيروسين ، برولين.

تؤدي بروتينات جسم الإنسان وظائف حيوية: البلاستيك ، والطاقة ، والحافز ، والتنظيمي ، والوقائي ، والنقل ، والمستقبلات.

وفقًا لمعايير التغذية الفسيولوجية السارية في بلدنا ، يجب أن يكون إجمالي كمية البروتين في وجبات الأطفال ضعف الكمية التي توفر توازن النيتروجين أو توازن النيتروجين ، وبالنسبة للسكان البالغين - 1.5 كمية. لمرحلة ما قبل المدرسة - 53-69 جم ، لأطفال المدارس - 77-98 جم ، للبالغين: للنساء - 58-87 جم وللرجال - 65-117 جم (حسب أنشطتهم المهنية).

فهرس

1. Raguzin A.V.، Setko N.P.، Shirshov O.V.، Fateeva T.A. الجوانب الفسيولوجية والصحية لعملية التمثيل الغذائي واستقلاب الطاقة والتغذية العقلانية: دليل للعمل المستقل لطلاب كلية الطب والوقاية - أورينبورغ: مركز OGAU للنشر ، 2001. - 40 ص.

2. فسيولوجيا الإنسان / تحرير ج. Kositsky - م: "الطب" ، 1985. - 560 ص.

3. الكيمياء الحيوية: Proc. للجامعات / ف. كوموف ، ف. شفيدوفا. - م: بوستارد ، 2004. - 640 ص.

4. دليل للتمارين العملية في نظافة الغذاء: كتاب مدرسي. دليل للجامعات / Setko N.P. ، Setko A.G. ، Fateeva T.A. ، Volodina E.A. ، Trishina S.P. ، Chistyakova E.S. ؛ تحت المجموع إد. ن. سيتكو. - أورينبورغ: Orgma ، 2011. - 652 ص.

تحديد البروتين الكلي في المصل / البلازما / الدم والسوائل البيولوجية الأخرى.

تنقسم جميع الطرق المعروفة لتحديد تركيز البروتين الكلي في مصل الدم إلى المجموعات الرئيسية التالية:

1. Azotometric ، بناءً على تحديد كمية بروتين النيتروجين - طريقة Kjeldahl وتعديلاتها.

2. الطرق المتكونة في تحديد كثافة المصل غير دقيقة بسبب الكثافة لا تعتمد فقط على محتوى البروتينات.

3. الوزن - يتم ترسيب بروتينات مصل الدم وتجفيفها إلى وزن ثابت ووزنها على ميزان تحليلي. الطرق شاقة وتتطلب كمية كبيرة من المصل.

4. قياس الانكسار - ليست مثالية ، لأن جزء من الانكسار ناتج عن مكونات أخرى في المصل.

5. قياس الألوان - الطريقة الأكثر شيوعًا هي طريقة البيوريت ، وهي طريقة موحدة.

6. طرق أخرى - nephelometric ، polarimetric ، spectrophotometric لا تستخدم على نطاق واسع.

بدأت الصناعة المحلية في إنتاج مجموعات لدراسة تركيز البروتين الكلي في مصل الدم وفقًا لتفاعل البيوريت. يتم استخدام نفس المبدأ لقياس مستوى البروتين الكلي في السوائل البيولوجية باستخدام الكواشف التي توفرها الشركات المختلفة.

تحديد البروتين الكلي في مصل الدم عن طريق تفاعل بيوريت.

الكواشف.

1.0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم / 0.9 جم من كلوريد الصوديوم لكل 100 مل ماء مقطر /.

2.0.2N محلول هيدروكسيد الصوديوم ، خالي من ثاني أكسيد الكربون / 20 مل من 1N هيدروكسيد الصوديوم يتم تعديله إلى 100 مل بالماء المقطر المغلي /.

3. كاشف Biuret: يذاب 4.5 جم من ملح روشيل في 40 مل من 0.2 ن محلول هيدروكسيد الصوديوم ، ثم يضاف 1.5 جم من كبريتات النحاس و 0.5 جم من الصودا الكاوية. تخزينها في وعاء زجاجي داكن ، الحل مستقر.

4.0.5٪ محلول يوديد البوتاسيوم في 0.2N محلول هيدروكسيد الصوديوم.

5. محلول عامل بيوريت: يتم خلط 20 مل من كاشف بيوريت مع 80 مل من محلول يوديد البوتاسيوم. حل الرف.

6. المحلول القياسي للألبومين من مصل الإنسان أو البقري: محلول 10٪ من الألبومين في 0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم / 1 مل من المحلول يحتوي على 0.1 جرام بروتين - 100 جم / لتر /.

مبدأ الطريقة.

تتفاعل البروتينات في بيئة قلوية مع كبريتات النحاس لتكوين مركبات ملونة باللون البنفسجي \ تفاعل بيوريت \.

مسار التحديد: يضاف 0.1 مل من المصل إلى 5 مل من محلول العامل من كاشف biuret ، مختلطًا ، مع تجنب تكوين الرغوة. بعد 30 دقيقة \ وفي موعد لا يتجاوز ساعة \ يتم قياسها على FEK في كفيت بسمك طبقة 1 سم بطول موجة 540-560 نانومتر \ مرشح الضوء الأخضر \ ضد التحكم.

يتحكم: يضاف 0.1 مل من محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ إلى 5 مل من محلول عامل كاشف بيوريت ، ثم تتم معالجته كتجربة.

يتم الحساب وفقًا لجدول المعايرة.

القيم الطبيعية للبروتين الكلي هي 65-85 جم / لتر.

إنشاء رسم بياني للمعايرة.

كاشف:محلول قياسي من الألبومين 10٪ في 0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم ، يحتوي 1 مل منه على 0.1 جرام بروتين. لتحضير الكاشف ، يمكن استخدام الألبومين المجفف بالتجميد من مجموعة البيليروبين القياسية من Lachem. تشير تعليمات المجموعة إلى محتوى الألبومين بالملغم. بناءً على ذلك ، نحسب المقدار الضروري لإضافة 0.9 ٪ من كلوريد الصوديوم إلى هذا الألبومين من أجل الحصول على 0.1 غرام من البروتين في 1 مل من المحلول.

على سبيل المثال:تنص تعليمات المجموعة على أن الألبومين المجفف بالتجميد يحتوي على 160 مجم من الألبومين. طريقة الحساب: يحتوي المحلول القياسي 10٪ على 10 جم أو 10000 مجم في 100 مل

في المعيار 160 مجم في X

X = 1.6 مل ، أي أضف 1.6 مل من كلوريد الصوديوم 0.9٪ إلى الزجاجة المحتوية على الألبومين ونحصل على أن 1 مل من هذا المحلول يحتوي على 0.1 جرام من البروتين.

بعد تحضير الحل القياسي ، نقوم بإعداد سلسلة من تخفيفات العمل منه وفقًا للجدول:

حساب تركيز البروتين بالجرام / لتر.

يحتوي 1 مل من محلول 10٪ القياسي على 0.1 جرام من البروتين

0.04 غرام من البروتين موجود في 1 مل من المحلول

X 1000 مل

من كل تخفيف عامل للتركيز المقابل ، يتم أخذ 0.1 مل في 3-4 أنابيب اختبار ، أي يتم تنفيذ كل تحديد في 3-4 متوازيات ويضاف 5 مل من كاشف البيوريت إلى كل أنبوب اختبار. بعد 30-60 دقيقة قياس الألوان على FEC مقابل السيطرة. نحصل على 3-4 قراءات للكثافة البصرية لكل تركيز. نجد منها الوسيلة الحسابية ، بعد أن تجاهلنا قراءات منحرفة بحدة في السابق.

نبني رسمًا بيانيًا للمعايرة: في الإحداثي السيني ، نرسم تركيز البروتين بالجرام / لتر ، أي 40-60-80-100 جم / لتر ؛ وعلى طول المحور الصادي ، تم الحصول على قراءات الكثافات الضوئية على FEC \ الوسط الحسابي /.

يجب أن يبدو منحنى المعايرة وكأنه تم رسمه من خلال 3 نقاط. يتم فحص هذا المنحنى على الأمصال المانحة \ على الأقل 3-4 تحديدات \. عند الحصول على قراءات البروتين الطبيعية ، أي ضمن المعدل الطبيعي يتم استخدام منحنى المعايرة المركب في العمل.

ملحوظة.

1. يجب بناء منحنى المعايرة مرة واحدة على الأقل في السنة ، وكذلك في كل مرة بعد الإصلاح وعلى مقياس الألوان الكهروضوئي الذي تم الحصول عليه حديثًا.

2. يتم الحفاظ على العلاقة الخطية بين الكثافة البصرية والتركيز حتى D = 0.5. إذا كان المصل يحتوي على كمية أكبر من البروتين ، فيتم تخفيف المصل بكلوريد الصوديوم مرتين.

تحديد اليوريا في الدم والبول.

اليوريا هي المنتج الرئيسي المحتوي على النيتروجين لتقويض البروتين.

أثناء انهيار البروتينات ، تتراكم الأمونيا - مادة سامة. الطريقة الرئيسية لتحييد الأمونيا هي تصنيع اليوريا في الكبد. يعتمد تركيز اليوريا في الدم على معدل تكونها في الكبد وإخراجها من الجسم عن طريق الكلى مع البول.

في معظم المرضى ، يعكس معدل تكوين اليوريا معدل استخدام البروتين الخلوي وانهياره.

في أمراض الكبد الشديدة ، تضعف قدرة خلايا الكبد على تصنيع اليوريا ، وتتراكم الأمونيا ، وينخفض ​​محتوى اليوريا في الدم.

يحدث إفراز اليوريا المتكونة في البول ويعتمد على وظيفة إفراز الكلى.

يتم تحديد اليوريا بالطرق التالية:

1. الطريقة الكيميائية عن طريق تفاعل اللون مع ثنائي الأسيتيل أحادي أكسيد.

2. الطريقة الأنزيمية (اليورياز)

3. طريقة "الكيمياء الجافة".

تقدير اليوريا بالتفاعل مع ثنائي أسيتيل أحادي أكسيد.

الكواشف.

1. ثنائي أسيتيل أحادي أكسيد وثيوسيميكاربزايد أو كاشف في أقراص.

2. محلول مرجعي أو قياسي يحتوي على 100 ملغ من اليوريا في 100 مل أو 1 ملغ في 1 مل.

تحضير الحلول.

محلول الكاشف: قم بإذابة قرص واحد بالتسخين في دورق حجمي سعة 50 مل في 30 مل من الماء المقطر. بعد التبريد ، ارفع مستوى الصوت إلى العلامة. الحل مستقر لعدة أسابيع.

محلول حامض الكبريتيك: يضاف 150 مل من الماء المقطر و 25 مل من 96٪ حمض الكبريتيك بدرجة تحليلية إلى دورق حجمي سعة 250 مل. تسخين بعد التبريد ، ارفع مستوى الصوت إلى العلامة. الحل مستقر.

يتم تحضير محلول العمل من الكاشف وحمض الكبريتيك قبل التفاعل بنسبة 1: 1 (انظر مخطط التعريف).

مبدأ الطريقة.

تشكل اليوريا مركبًا أحمر مع ثنائي أسيتيل أحادي أكسيد في وجود ثيوسيميكاربازيد وأملاح الحديد في وسط حمضي قوي ، وتتناسب شدة اللون مع تركيز اليوريا.

تقدم التعريف.

معيار التحكم في تجربة الكواشف

1.المصل 0.02 - -

2. حل العمل

أ \ حل الكاشف 2.0 2.0 2.0

ب \ محلول كبريتي

الأحماض 2.0 2.0 2.0

3. الحل القياسي

اليوريا - - 0.02

احتضان لمدة 10 دقائق في حمام مائي مغلي. تبرد لمدة 2-3 دقائق في تيار من الماء البارد. قياس الألوان في موعد لا يتجاوز 15 دقيقة: مرشح الضوء الأخضر \ بطول موجة 490-540 \ ، كفيت 1 سم ، مقابل التحكم.

عملية حسابية: قبل

X \ u003d -------- * C st في مليمول \ لتر ، أين

هل - الكثافة البصرية للتجربة ؛

Dst - الكثافة الضوئية لمحلول قياسي من اليوريا أو قياسي ؛

C st هو تركيز اليوريا في المحلول القياسي ؛

X هو تركيز اليوريا في عينة المصل.

لتحويل مجم٪ إلى مليمول / لتر ، يتم استخدام معامل 0.1665.

القيم الطبيعية لليوريا في مصل الدم هي 2.5 - 8.3 مليمول / لتر.

ملحوظات.

1. يمكن تعديل مسار التحديد أعلاه عن طريق زيادة أحجام جميع الحلول المقاسة بمقدار 2-3 مرات ، اعتمادًا على حجم الأكواخ.

3. يمكن أن يتم تحويل اليوريا إلى نيتروجين اليوريا بضرب معامل 0.466.

4. Thiosemicarbazide هو كاشف سام. عند العمل معها ، يجب أن تتبع قواعد العمل مع المواد السامة.

طرق دراسة التمثيل الغذائي للبروتين: رحلاني كهربائي - يعتمد على فصل البروتينات في مجال كهربائي ثابت ، اعتمادًا على حجم جزيء البروتين. يعتمد التنبيذ الفائق على معدلات الترسيب المختلفة للبروتينات الفردية اعتمادًا على وزنها الجزيئي. الكروماتوغرافيا: - كروماتوغرافيا التبادل الأيوني تعتمد على القدرة المختلفة للبروتينات الفردية على التبادل مع أيونات راتنجات التبادل الأيوني ، - كروماتوغرافيا على المناخل الجزيئية (ترشيح الهلام) - في Sephadex - يتم فصل البروتينات حسب حجم الجزيء ، - كروماتوغرافيا التقارب - تنقسم البروتينات إلى بروتينات فردية اعتمادًا على تقاربها مع الحشو (حشو العمود).

التمليح - على أساس إزالة قشرة الماء بتركيزات مختلفة من أملاح الفلزات القلوية والقلوية الأرضية وأيونات الأمونيوم. هذه طريقة قديمة لفصل البروتينات. استخدام تفاعلات الألوان - على سبيل المثال ، biuret للبروتين الكلي ، والبروتين xantoprotein للأحماض الأمينية الحلقية ، يتم قياس كثافة اللون بطريقة لونية. طرق المناعة - تستخدم لقياس البروتينات الفردية. عند التفاعل مع مصل مضاد معين ، يتم تكوين محلول غائم ، ويتم قياس شدة الغيوم بطريقة لونية.

تحضير الموضوعات: يتم أخذ عينات الدم في الصباح من الساعة 8 إلى 10 صباحًا. في حالات الطوارئ ، يتم أخذ عينات الدم في أي وقت من اليوم. يؤخذ الدم على معدة فارغة بعد 8-12 ساعة من الصيام. الامتناع عن تناول المشروبات الكحولية لمدة 24 ساعة على الأقل. يتم استبعاد الإجهاد البدني والإثارة العاطفية ، حيث يُسمح للموضوع بالراحة لمدة 15 دقيقة.

استلام وتخزين المواد البيولوجية: المصل الجليدي ، أو المنحلل ، أو الكيليوس ، أو البلازما غير مناسبين للبحث. للحصول على البلازما ، يتم جمع الدم الوريدي في أنبوب نظيف وجاف مع مضاد للتخثر. تقلل أملاح EDTA والهيبارين وهيبارين الليثيوم وأكسالات الصوديوم والسترات من النتائج. يتم تنفيذ الطرد المركزي في الوضع المعتاد في موعد لا يتجاوز 3 ساعات من أخذ عينات من المادة.

للحصول على مصل الدم ، يتم جمع الدم الوريدي في أنبوب اختبار نظيف وجاف. يتم تنفيذ الطرد المركزي في الوضع المعتاد في موعد لا يتجاوز 3 ساعات من أخذ عينات من المادة. لدراسة البول ، استخدم جزء الصباح. يتم إجراء الدراسة في موعد لا يتجاوز ساعتين بعد أخذ العينات.

شروط تخزين المواد البيولوجية: يتم تخزين المواد البيولوجية في حاويات محكمة الإغلاق. الدم الكامل غير مناسب للتخزين ، حتى مع وجود مواد حافظة. يمكن تخزين البلازما والمصل لمدة يوم واحد في درجة حرارة الغرفة ، و 7 أيام عند 4-8 درجات مئوية ، ومن 3 إلى 6 أشهر عند -20 درجة مئوية.في عبوات محكمة الغلق ، يكون البروتين مستقرًا في البول لمدة يومين في درجة حرارة الغرفة ، أعلى إلى 17 يومًا في الثلاجة (4-8 8 درجة مئوية).

ملاحظات: قد يعتمد مستوى البروتين الكلي على العمر (أقل عند الأطفال وكبار السن) والجنس (أعلى عند الرجال) والنظام الغذائي. العوامل التالية تسبب زيادة في بروتينات الدم: البقاء لفترة طويلة في وضع مستقيم ، الإجهاد ، تناول الكحول ، بعض الأدوية (سيفوتاكسيم ، فوروسيميد ، فينوباربيتال ، بريدنيزولون ، بروجسترون). انخفاض مستوى البروتينات في الدم ناتج عن: الصدمة ، التدخين ، الحمل ، الصيام ، التوقف عن تناول الكحول ، سوء التغذية ، السمنة ، بعض الأدوية (ديكستران ، ايبوبروفين ، حبوب منع الحمل).

واجب منزلي Pustovalova L.M. صفحة أساسيات الكيمياء الحيوية للكليات الطبية