IFA डिकोडिंग की विधि द्वारा अनुसंधान। एलिसा: यह किस प्रकार का अध्ययन, कब और कैसे किया जाता है और यह क्या दर्शाता है? वी

आधुनिक चिकित्सा की प्रगति के साथ, किसी रोगी में कुछ विकृति का संदेह होने पर अधिक गहन निदान करना संभव है। प्रयोगशाला अनुसंधान के सूचनात्मक तरीकों में से एक एलिसा विश्लेषण था, जो शिरापरक रक्त लेकर किया जाता है। यानी समग्र रूप से रोगी के लिए कुछ भी नहीं बदलता है। लेकिन एलिसा प्रयोगशाला सहायक एकत्रित बायोमटेरियल का अध्ययन करने के लिए एक जटिल तकनीक का संचालन करता है। एलिसा विश्लेषण क्या हैं और एलिसा पद्धति को निदान के रूप में उपयोग करने की बारीकियां क्या हैं, हम नीचे दी गई सामग्री को समझते हैं।

एंजाइम इम्यूनोएसे क्या है?

एंटीबॉडी का उत्पादन स्वयं एंटीजन द्वारा उकसाया जाता है जो मानव शरीर में प्रवेश कर चुके हैं। शरीर के स्वास्थ्य के लिए "लड़ाई" में प्रवेश करते समय, एंटीबॉडी, जैसे कि, खुद को एंटीजन के साथ चिह्नित करते हैं, जिसे प्रयोगशाला सहायक रक्त परीक्षण में देखता है। यही है, एकत्रित बायोमटेरियल में, न केवल संक्रमण की उपस्थिति को ट्रैक करना संभव है, बल्कि शरीर के पूरी तरह से ठीक होने के बाद इसके निशान भी हैं।

इस प्रकार, एक मरीज के लिए एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख निर्धारित करके, उपस्थित चिकित्सक संक्रमण की अवधि, इसकी प्रगति की डिग्री को ट्रैक कर सकता है, या किसी विशेष संक्रमण के प्रति प्रतिरक्षा की उपस्थिति की पहचान कर सकता है।

एलिसा डायग्नोस्टिक प्रक्रिया इस तरह दिखती है:

• लिए गए शिरापरक रक्त को प्रयोगशाला में रक्त सीरम की स्थिति में लाया जाता है;
• फिर प्रयोगशाला सहायक कोशिकाओं के साथ एक विशेष ट्रे का उपयोग करता है, जिनमें से प्रत्येक में पहले से ही सभी आवश्यक एंटीजन होते हैं। प्रत्येक कोशिका में रक्त सीरम डालना और एंटीजन के प्रति इम्युनोग्लोबुलिन (एंटीबॉडी) की प्रतिक्रिया को ट्रैक करना ही पर्याप्त है। "वांछित" प्रतिक्रिया की उपस्थिति अध्ययन के तहत सामग्री के रंग में परिवर्तन से संकेतित होती है। भविष्य में, प्रयोगशाला सहायक अध्ययन के तहत माध्यम के ऑप्टिकल घनत्व का अध्ययन करता है।

• एस्कारियासिस और एंटरोबियासिस (राउंडवॉर्म और पिनवॉर्म);
• ट्राइचिनोसिस;
• तीव्र और जीर्ण रूपों में ओपिसथोरकियासिस;
• जिआर्डियासिस;
• अमीबियोसिस;
• टोक्सोप्लाज्मोसिस;
• लीशमैनियासिस किसी भी रूप में।

महत्वपूर्ण: एंजाइम इम्यूनोपरख गुणात्मक और मात्रात्मक दोनों हो सकता है। पहले मामले में, प्रयोगशाला सहायक केवल रक्त में वांछित पदार्थ की उपस्थिति की पुष्टि या खंडन करता है। दूसरे मामले में, विश्लेषण के परिणामस्वरूप, रोगी के शरीर में इसकी एकाग्रता का संकेत मिलता है।

विधि के नुकसान

इस निदान पद्धति के सभी फायदों के साथ, यह समझा जाना चाहिए कि एक एंजाइम इम्यूनोएसे किसी मरीज की बीमारी का कारण खोजने का एक तरीका नहीं है, बल्कि केवल उपस्थित चिकित्सक द्वारा कथित निदान की पुष्टि करने का एक तरीका है। और इस तथ्य को ध्यान में रखते हुए कि अध्ययन काफी महंगा है, इसका उपयोग समझदारी से किया जाना चाहिए। इस मामले में, अध्ययन के परिणामों की व्याख्या केवल एक योग्य विशेषज्ञ द्वारा की जानी चाहिए।

परिणामों का निर्णय लेना

हमने संक्षिप्त नाम IFA और यह क्या है, को विघटित कर दिया है ─ पता चला, परिणामों की व्याख्या करने के लिए आगे बढ़ना उचित है। यहां यह समझना जरूरी है कि यदि विश्लेषण गुणात्मक रूप से किया गया तो परिणाम सकारात्मक या नकारात्मक ही आएगा। अर्थात्, निदान या तो किसी विशेष निदान के बारे में डॉक्टर के संदेह की पुष्टि करता है, या उनका खंडन करता है। इस मामले में, फॉर्म में क्रमशः "+" या "-" प्रतीक होंगे।

महत्वपूर्ण: एक नकारात्मक परीक्षा परिणाम हमेशा संक्रमण की अनुपस्थिति का संकेत नहीं देता है। तथ्य यह है कि एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी संक्रमण के 14 दिनों के भीतर बन सकती हैं और संभावना है कि वे अभी तक नहीं बनी हैं।

यदि मात्रात्मक विश्लेषण किया जाए तो यहां एंटीबॉडी के प्रकार, उनकी संख्या और गतिविधि का चरण निर्धारित किया जाता है। विशेष रूप से, इस तरह के निदान के साथ, एंटीबॉडी (इम्युनोग्लोबुलिन) आईजीजी और आईजीएम निर्धारित किए जाते हैं, जो संक्रमण की प्रगति की विभिन्न अवधियों में बनते हैं। इस मामले में सबसे आम परिणाम हैं:

• ऊंचा IgM और IgG की पूर्ण अनुपस्थिति। यह चित्र हाल ही में हुए संक्रमण और विकृति विज्ञान के तीव्र चरण को इंगित करता है।
• दोनों प्रकार के इम्युनोग्लोबुलिन (आईजीएम और आईजीजी) की गतिविधि में वृद्धि। वह संक्रामक प्रक्रिया के दीर्घकालिक और दीर्घकालिक पाठ्यक्रम की बात करते हैं।
• आईजीजी गतिविधि और आईजीएम की पूर्ण अनुपस्थिति। संक्रमण कम से कम छह महीने पहले हुआ था और अब वायरस लंबे समय तक पुरानी अवस्था में है।
• आईजीजी और आईजीए एंटीबॉडी की अनुपस्थिति. परिणाम अपरिभाषित है.
• IgM, IgA और IgG एंटीबॉडी की अनुपस्थिति. किसी विशिष्ट संक्रमण के प्रति प्रतिरोधक क्षमता की कमी का संकेत देता है।
• आईजीजी, आईजीएम और आईजीए एंटीबॉडी की गतिविधि एक पुरानी प्रक्रिया के तेज होने का संकेत देती है।

एंटीबॉडी के प्रकारों की पहचान करने के अलावा, प्रयोगशाला सहायक फॉर्म के एक विशेष कॉलम में प्रति रक्त मात्रा में उनकी संख्या भी इंगित करता है। याद रखें, यह समझने के बाद कि एलिसा पद्धति क्या है, परिणामों की व्याख्या स्वयं न करें। प्राप्त परिणामों की व्याख्या केवल उपस्थित चिकित्सक द्वारा सटीकता के साथ की जा सकती है, जो रोगी की नैदानिक ​​​​तस्वीर के आधार पर प्रस्तावित निदान पर निर्भर करता है।

निदान की दुनिया में आधुनिक चिकित्सा का विकास कभी भी अपनी उपलब्धियों से आश्चर्यचकित नहीं होता है, और अब डॉक्टर को केवल अप्रत्यक्ष संकेतों पर भरोसा करते हुए, संभावित निदान के बारे में धारणा बनाने की आवश्यकता नहीं है। एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) के प्रयोगशाला अध्ययन की दुनिया में निर्माण और परिचय आपको न केवल रोगज़नक़ की उपस्थिति, बल्कि रोग की कई अन्य विशेषताओं को भी जल्दी और सटीक रूप से निर्धारित करने की अनुमति देता है।

IFA के निर्माण और विकास का इतिहास

रक्त परीक्षण की इस पद्धति का उपयोग व्यावहारिक चिकित्सा में पिछली शताब्दी के मध्य में - लगभग 60 के दशक में शुरू हुआ। इसका प्रारंभिक लक्ष्य ऊतक विज्ञान के क्षेत्र में वैज्ञानिक अनुसंधान था, जो जैविक प्रजातियों की सेलुलर एंटीजेनिक संरचना की खोज और अध्ययन तक सीमित था। एलिसा रक्त परीक्षण एक एंजाइम द्वारा निर्धारित "एंटीजन-एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स के गठन के साथ संबंधित एंटीजन (एजी) और विशिष्ट एंटीबॉडी (एटी) की बातचीत पर आधारित है।

इस घटना ने वैज्ञानिकों को यह निर्णय लेने के लिए प्रेरित किया कि इस विधि का उपयोग विभिन्न वर्गों के प्रोटीन यौगिकों को पहचानने के लिए किया जा सकता है जो रक्त सीरम में बनते हैं जब एक रोगज़नक़ शरीर में प्रवेश करता है। प्रतिरक्षा प्रणाली के कामकाज में उनकी प्रत्यक्ष भागीदारी के कारण, इन यौगिकों को इम्युनोग्लोबुलिन (आईजी, आईजी) कहा जाता था, और यह खोज प्रयोगशाला निदान में सबसे बड़ी सफलता थी।

साथ ही, इस अत्यधिक संवेदनशील विधि का सक्रिय रूप से उपयोग केवल 80 के दशक में ही किया जाने लगा और यह केवल अत्यधिक विशिष्ट चिकित्सा संस्थानों में ही उपलब्ध थी। स्टेशनों और रक्त आधान केंद्रों, यौन और संक्रामक रोगों के अस्पतालों को सबसे पहले एंजाइम इम्यूनोएसे विश्लेषक का उपयोग करने का अवसर मिला। यह "20वीं सदी के प्लेग" - एड्स के तेजी से फैलने के कारण था, और तत्काल निदान और चिकित्सीय उपायों की आवश्यकता थी।

तकनीक की संभावनाएँ

एलिसा रक्त परीक्षण का दायरा काफी व्यापक है - फिलहाल यह कल्पना करना असंभव है कि कई बीमारियों के कारणों की खोज करना कितना मुश्किल होगा। इस तरह का अध्ययन अब लगभग सभी चिकित्सा शाखाओं में उपयोग किया जाता है, यहां तक ​​कि ऑन्कोलॉजी में भी। हालांकि अनभिज्ञ लोगों के लिए इसे समझना मुश्किल है, लेकिन कुछ मामलों में इसे आयोजित करने के बाद प्रारंभिक चरण में ट्यूमर का पता लगाकर मरीजों की जान बचाना संभव हो सका।

महत्वपूर्ण! एलिसा एक रक्त परीक्षण है जो कुछ घातक प्रक्रियाओं की विशेषता वाले मार्कर दिखाता है, जो आपको उस समय चरण में बीमारी का पता लगाने की अनुमति देता है जब यह किसी अन्य विधि के अधीन नहीं होता है।

आधुनिक निदान केंद्रों में, प्रयोगशाला परीक्षाओं को न केवल ट्यूमर मार्करों द्वारा दर्शाया जाता है - वे इस निदान के संचालन के लिए पैनलों के एक प्रभावशाली शस्त्रागार से सुसज्जित हैं। उनकी मदद से, आप कई रोग संबंधी स्थितियों को निर्धारित कर सकते हैं, जैसे हार्मोनल असामान्यताएं और विभिन्न मूल की संक्रामक प्रक्रियाएं।

इसके अलावा, एलिसा रक्त परीक्षण आयोजित करने और समझने से किसी बीमार व्यक्ति और यहां तक ​​कि एक जानवर के शरीर पर दवाओं के प्रभाव को ट्रैक करना संभव हो जाएगा। उत्तरार्द्ध का व्यापक रूप से पशु चिकित्सा क्लीनिकों में उपयोग किया जाता है, जो हमारे पालतू जानवरों या ब्रेडविनर्स के स्वास्थ्य को बनाए रखने में मदद करता है, मांस, डेयरी उत्पादों और अंडों की स्थिर आपूर्ति प्रदान करता है, जो आहार में अपरिहार्य हैं।

तो, केवल कुछ मिलीलीटर शिरापरक रक्त लेने और एलिसा विधि का उपयोग करके इसका निदान करने के परिणामस्वरूप, डॉक्टर, अनुसंधान सामग्री का वर्णन करते हुए, यह निर्धारित करने में सक्षम होंगे:

• हार्मोनल स्थिति, जिसमें सेक्स और थायरॉयड ग्रंथियों के जैविक रूप से सक्रिय पदार्थ, साथ ही अधिवृक्क ग्रंथियां शामिल हैं;
• एक जीवाणु और वायरल संक्रमण (हेपेटाइटिस बी और सी, सिफलिस, हर्पीस, क्लैमाइडिया, तपेदिक, माइको- और यूरियाप्लाज्मोसिस, एचआईवी, टीओआरसीएच) और इस प्रकृति की अन्य बीमारियों की उपस्थिति;
• रोग प्रक्रिया के रोगजनकों की महत्वपूर्ण गतिविधि के संकेत, जो वसूली में समाप्त हो गए और एंटीबॉडी (प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया) के गठन के चरण में चले गए।

ऐसे कॉम्प्लेक्स को प्रतिरक्षा कोशिकाओं द्वारा पहचानना और ख़त्म करना बहुत आसान होता है। कई मामलों में एंटीबॉडी के रूप में अवशिष्ट प्रभाव जीवन भर के लिए रक्त में समाहित हो जाते हैं, जो व्यावहारिक रूप से पुन: संक्रमण के जोखिम को शून्य कर देता है।

इम्युनोग्लोबुलिन की किस्में

एंटीबॉडी कई प्रकार के होते हैं, और उनमें से प्रत्येक एक निश्चित चरण में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की प्रक्रिया में शामिल होता है। उदाहरण के लिए, क्लास एम इम्युनोग्लोबुलिन (आईजीएम) शरीर में एंटीजन के अंतर्ग्रहण की प्रतिक्रिया में सबसे पहले बनते हैं। उनकी उच्चतम दर बीमारी के पहले दिनों में देखी जाती है।

एलिसा में प्रयुक्त इम्युनोग्लोबुलिन के प्रकार

इसके बाद प्रतिरक्षा प्रणाली प्लाज्मा में क्लास जी आईजी (आईजीजी) लॉन्च करती है, जो एंटीजन के पूर्ण विनाश और रोगी की रिकवरी के लिए जिम्मेदार होते हैं। बाद में, वे रक्त में बने रहते हैं, जिससे प्रतिरक्षा प्रणाली एक समान रोगज़नक़ के पुन: प्रवेश के लिए तैयार होती है। इस तरह टीकाकरण काम करता है. पैथोलॉजिकल सूक्ष्मजीवों के कमजोर एंटीजन की शुरूआत के साथ, कई इम्युनोग्लोबुलिन प्लाज्मा में दिखाई देते हैं और प्रसारित होते रहते हैं।

प्रयोगशाला निदान के लिए रुचि की मुख्य वस्तुएं आईजी वर्ग एम, जी और ए हैं। उनकी एकाग्रता के स्तर से, आप बीमारी के चरण को निर्धारित कर सकते हैं और पता लगा सकते हैं कि किसी व्यक्ति को अपने जीवन में कौन से संक्रामक रोग हुए हैं। उदाहरण के लिए, आप चिकनपॉक्स या रूबेला के इतिहास की जांच कर सकते हैं। यह पता लगाने के लिए कि क्या रोगी के शरीर में एक निश्चित प्रकार का एटी या एएच मौजूद है या किसी हार्मोन की सांद्रता है, डॉक्टर को कई प्रयोगशाला परीक्षण लिखने की आवश्यकता नहीं है - यह एलिसा के लिए एक रेफरल लिखने के लिए पर्याप्त है।

तकनीक का सार

अनुसंधान पद्धति कार्यों के कई विकल्पों (प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष - प्रतिस्पर्धी और गैर-प्रतिस्पर्धी) पर आधारित है, जिनमें से प्रत्येक को विशिष्ट उद्देश्यों के लिए डिज़ाइन किया गया है। यह दृष्टिकोण आपको एक लक्षित खोज करने और कम से कम समय में किसी विशेष विकृति के कारण की पहचान करने की अनुमति देता है। विभिन्न वर्ग श्रेणियों के आईजी का पता लगाने के लिए, एक 96-वेल प्लेट (पॉलीस्टाइरीन पैनल) का उपयोग किया जाता है, और इसके कुओं में अधिशोषित पुनः संयोजक प्रोटीन स्थित होते हैं। वे एंटीजन की भूमिका निभाते हैं, और प्रारंभिक चरण में ठोस चरण में होते हैं।

जब वे रक्त प्लाज्मा के साथ कुएं में प्रवेश करते हैं, तो एंटीजन या एंटीबॉडी उनके अभिविन्यास के संबंध में वस्तु की पहचान करते हैं, और एक कॉम्प्लेक्स (एजी - एटी) बनाते हैं। यह गठन एक एंजाइम यौगिक (संयुग्म) द्वारा तय किया जाता है, जो बाद में कुएं के परिवर्तित धुंधलापन के रूप में प्रकट होता है। एलिसा का उत्पादन विशेष प्रयोगशालाओं में निर्मित विशिष्ट परीक्षण प्रणालियों पर किया जाता है और यह अभिकर्मकों के पूरे सेट से सुसज्जित होता है।

यह विश्लेषण वॉशर और रीडआउट स्पेक्ट्रोमीटर पर किया जा सकता है, लेकिन इसके लिए मैन्युअल श्रम की आवश्यकता होती है। बेशक, एक प्रयोगशाला सहायक के लिए पूरी तरह से स्वचालित उपकरणों पर सभी जोड़तोड़ करना कई गुना अधिक सुविधाजनक और तेज़ है। उनका उपयोग करते समय, प्रयोगशाला कर्मचारियों को बड़ी मात्रा में नीरस गतिविधि - धुलाई, टपकाना और बाकी दिनचर्या से मुक्त किया जाता है, लेकिन सभी चिकित्सा संस्थान इतने महंगे उपकरण नहीं खरीद सकते हैं।

इसलिए, कई अस्पताल और नैदानिक ​​संस्थान पुराने तरीके से - अर्ध-स्वचालित उपकरणों पर एलिसा करना जारी रखते हैं।

अनुसंधान सामग्री की व्याख्या विशेष रूप से प्रयोगशाला निदान में एक विशेषज्ञ की क्षमता है - केवल उसे ही रोग के पाठ्यक्रम की बारीकियों और सूक्ष्मताओं के बारे में परिणाम बताया जा सकता है। इस मामले में, डॉक्टर को आवश्यक रूप से गलत नकारात्मक या गलत सकारात्मक उत्तर प्राप्त करने की संभावना को ध्यान में रखना चाहिए।

सामग्रियों का प्रतिलेखन

उच्च गुणवत्ता वाले एंजाइम इम्यूनोएसे का परिणाम एक स्पष्ट निष्कर्ष होना चाहिए - इस रक्त नमूने में वांछित सूक्ष्मजीव पाया गया था या नहीं। मात्रात्मक विश्लेषण एकाग्रता के स्तर को इंगित करेगा और इसे दो तरीकों से व्यक्त किया जा सकता है - संख्याओं में मूल्य या "+" संकेतों की संख्या।

संकेतकों का विश्लेषण किया गया

शोध के दौरान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में शामिल मुख्य इम्युनोग्लोबुलिन का गहन अध्ययन किया जाता है, जैसे:

• आईजीएम - इस वर्ग का पता लगाने का मतलब संक्रामक रोग के तीव्र रूप का विकास है। आईजीएम की खोज में एक नकारात्मक परिणाम वांछित रोगज़नक़ की अनुपस्थिति का प्रमाण और रोग के क्रोनिक कोर्स में संक्रमण दोनों हो सकता है।
• आईजीए - ज्यादातर मामलों में आईजीएम की अनुपस्थिति में इस वर्ग की परिभाषा एक संक्रामक रोग के विकास के क्रोनिक या अव्यक्त रूप का संकेत है।
• आईजीएम और आईजीए (एक साथ उपस्थिति) - दोनों प्रकार के सकारात्मक परिणाम पैथोलॉजी के तीव्र रूप के चरम शिखर का संकेत देते हैं।
• आईजीजी - इसकी उपस्थिति रोग के जीर्ण रूप में परिवर्तन या ठीक होने और निर्धारित किए जा रहे एजेंट के प्रति प्रतिरक्षा के गठन का संकेत देती है।

आईजी के एक निश्चित वर्ग की उपस्थिति और संचय अलग-अलग समय चरणों में होता है। इसलिए, उदाहरण के लिए, आईजीएम पहली बार रोगज़नक़ के संपर्क में आने के लगभग 5 दिन बाद दिखाई देता है। आईजी रक्त में लगभग 5-6 सप्ताह तक रहते हैं, और फिर धीरे-धीरे गायब हो जाते हैं। इस समय, वे एलिसा द्वारा निर्धारण के लिए उपलब्ध हैं। रोग की शुरुआत के लगभग 3-4 सप्ताह बाद आईजीजी प्रकट होता है, जो बाद में कई महीनों तक बना रह सकता है। लेकिन विश्लेषण में उनका पता लगाना हमेशा संभव नहीं होता है।

IgA रक्त में 2-4 सप्ताह की अवधि में बनता है, जबकि उनमें से 20% सीरम में और 80% श्लेष्म झिल्ली के स्राव में निहित होते हैं। एक नियम के रूप में, ये इम्युनोग्लोबुलिन 2-9 सप्ताह के भीतर गायब हो जाते हैं, जो रोगज़नक़ के विनाश और रोगी के ठीक होने का संकेत देता है। यदि एलिसा अभी भी आईजीए की उपस्थिति दिखाता है, तो यह प्रक्रिया के जीर्ण रूप में संक्रमण का संकेत देता है।

विश्लेषण परिणाम विकल्प

प्राप्त आंकड़ों के आधार पर, एलिसा प्रतिक्रियाएं सभी एटी और एजी की पूरी सूची और सकारात्मक या नकारात्मक प्रतिक्रिया के संकेत के साथ एक तालिका के रूप में जारी की जा सकती हैं। कुछ स्थितियों में, एक मात्रात्मक मान प्रदर्शित किया जाएगा - एक तीव्र सकारात्मक, सकारात्मक, कमजोर रूप से सकारात्मक या नकारात्मक परिणाम। दूसरा विकल्प अध्ययन किए गए रक्त नमूने में निहित एंटीबॉडी की मात्रा को इंगित करता है।

एलिसा सामग्री की व्याख्या के प्रकार

उपरोक्त मूल्यों के अलावा, एलिसा की प्रक्रिया में, एक और मात्रात्मक पैरामीटर की जांच की जाती है - एटी एविडिटी इंडेक्स, प्रतिशत के रूप में गणना की जाती है। यह दर्शाता है कि बीमारी कितने समय तक रहती है - यानी, संकेतक जितना अधिक होगा, पैथोलॉजी विकसित होने में उतना ही अधिक समय लगेगा।

वैकल्पिक एलिसा विधि

एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख एक काफी प्रसिद्ध और सामान्य निदान है। शायद कुछ लोगों ने इसके बारे में कभी नहीं सुना होगा, लेकिन इस अध्ययन का एक और संस्करण है, जिसके बारे में बहुत से लोगों को कम जानकारी है, जिसमें एक गैर-रक्त का नमूना लिया जाता है। इस तकनीक को फेकल गुप्त रक्त परीक्षण कहा जाता है, और कई मामलों में यह अतिरिक्त दुर्बल करने वाली प्रक्रियाओं से बचाती है, जो अप्रिय संवेदनाओं के साथ भी होती हैं।

गुप्त रक्त (हीमोग्लोबिन अणुओं) के लिए एलिसा परीक्षण से पाचन तंत्र के रक्तस्राव का पता लगाना संभव हो जाता है, यहां तक ​​​​कि मामूली रक्तस्राव भी, जिसके लक्षण रोगी के मल में, जैसा कि वे कहते हैं, नग्न आंखों से नहीं पाए जा सकते हैं। मानव मल में गुप्त रक्त का एंजाइम इम्यूनोएसे थोड़े समय में पेप्टिक अल्सर, पॉलीपोसिस, डायवर्टीकुलोसिस, ट्यूमर दिखा सकता है, जो शुरुआती चरणों में कुछ लक्षणों के साथ नहीं होते हैं।

आज तक, हजारों प्रकार के एंजाइम इम्यूनोएसे डायग्नोस्टिक परीक्षण सिस्टम बनाए गए हैं, जो पैथोलॉजी की एक विशाल सूची से एटी और एजी को खोजने की क्षमता प्रदान करते हैं। इसलिए, इस विश्लेषण का उपयोग चिकित्सा की लगभग सभी शाखाओं में, किसी भी आयु वर्ग के लिए किया जाता है। और पूर्ण हानिरहितता आपको गर्भावस्था के दौरान और कमजोर रोगियों के निदान के लिए इसका सहारा लेने की अनुमति देती है।

5.1 एलिसा का सार और वर्गीकरण।

एलिसा 60 के दशक के मध्य में सामने आया और इसे मूल रूप से एक हिस्टोलॉजिकल तैयारी में एंटीजन की पहचान करने के लिए एक विधि के रूप में विकसित किया गया था, साथ ही इम्यूनोडिफ्यूजन और इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस परीक्षण में वर्षा रेखाओं को देखने के लिए, और फिर एंटीजन के मात्रात्मक निर्धारण के लिए उपयोग किया जाने लगा और जैविक तरल पदार्थों में एंटीबॉडी। ई. एंग्वाल और आर. पेलमैन ने विधि के विकास में भाग लिया, साथ ही, उनमें से स्वतंत्र रूप से, वी. वैन वीमन और आर. शूर्स ने भाग लिया।

चावल। 6 एलिसा का मूल सिद्धांत:

एंटीजन का पता लगाने के लिए; 2) एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए

विधि एक एंटीजन के साथ एक एंटीबॉडी के विशिष्ट बंधन पर आधारित है, जबकि घटकों में से एक एक एंजाइम के साथ संयुग्मित होता है; संबंधित क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट के साथ प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, एक रंगीन उत्पाद बनता है, जिसकी मात्रा हो सकती है स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिकल रूप से निर्धारित (चित्र 6)।

विभिन्न वाहकों पर उनकी बाध्यकारी गतिविधि को बनाए रखते हुए एंटीजन और एंटीबॉडी स्थिरीकरण की संभावना की खोज ने जीव विज्ञान और चिकित्सा के विभिन्न क्षेत्रों में एलिसा के उपयोग का विस्तार करना संभव बना दिया है।

मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की उपस्थिति ने एलिसा के आगे के विकास के रूप में कार्य किया, जिससे इसकी संवेदनशीलता, विशिष्टता और परिणामों की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता को बढ़ाना संभव हो गया।

सैद्धांतिक रूप से, एलिसा आधुनिक इम्यूनोकैमिस्ट्री और रासायनिक एंजाइमोलॉजी के डेटा, एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया के भौतिक रासायनिक कानूनों के ज्ञान के साथ-साथ विश्लेषणात्मक रसायन विज्ञान के मुख्य सिद्धांतों पर आधारित है। एलिसा की संवेदनशीलता और इसकी अवधि कई मुख्य कारकों द्वारा निर्धारित की जाती है: एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया की गतिज और थर्मोडायनामिक विशेषताएं, अभिकर्मकों का अनुपात, एंजाइम गतिविधि और इसके पता लगाने के तरीकों का संकल्प। सामान्य तौर पर, एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया को एक सरल योजना द्वारा वर्णित किया जा सकता है:

+[एजी]↔[एटीएजी]

कम आणविक भार वाले यौगिकों से लेकर वायरस और बैक्टीरिया तक अध्ययन की वस्तुओं की विविधता, साथ ही एलिसा के उपयोग के लिए विभिन्न स्थितियों से जुड़े कार्यों की असामान्य रूप से विस्तृत श्रृंखला, इस पद्धति के बहुत बड़ी संख्या में वेरिएंट के विकास को निर्धारित करती है। .

किसी भी एलिसा संस्करण में 3 अनिवार्य चरण होते हैं:

1. विशिष्ट एंटीबॉडी द्वारा परीक्षण यौगिक की पहचान का चरण, जो एक प्रतिरक्षा परिसर के गठन की ओर जाता है;

2. प्रतिरक्षा परिसर या मुक्त बंधन स्थलों के साथ संयुग्म के संबंध के गठन का चरण;

3. एंजाइम लेबल को पंजीकृत सिग्नल में परिवर्तित करने का चरण। एलिसा विधियों का वर्गीकरण कई दृष्टिकोणों पर आधारित है:

1. एलिसा के पहले चरण में मौजूद अभिकर्मकों के प्रकार के अनुसार, प्रतिस्पर्धी और गैर-प्रतिस्पर्धी तरीकों को प्रतिष्ठित किया जाता है।

ए) प्रतिस्पर्धी एलिसा में, पहले चरण में, सिस्टम में विश्लेषण किए गए यौगिक और उसके एनालॉग दोनों शामिल होते हैं, जो एंजाइम के साथ लेबल होते हैं और इसके साथ विशिष्ट बाध्यकारी साइटों के लिए प्रतिस्पर्धा करते हैं।

बी) गैर-प्रतिस्पर्धी तरीकों के लिए, सिस्टम में पहले चरण में केवल विश्लेषण किए गए यौगिक और इसके लिए विशिष्ट बाध्यकारी केंद्रों की उपस्थिति विशेषता है।

2. सभी एलिसा विधियों को सजातीय और विषम में विभाजित किया गया है।

यदि एलिसा के सभी तीन चरणों को समाधान में किया जाता है और मुख्य चरणों के बीच अप्रभावित घटकों से गठित प्रतिरक्षा परिसरों को अलग करने का कोई अतिरिक्त चरण नहीं है, तो विधि सजातीय लोगों के समूह से संबंधित है।

सजातीय एलिसा का आधार, जो आमतौर पर कम आणविक भार वाले पदार्थों को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है, एंजाइम गतिविधि का निषेध है जब इसे एंटीजन या एंटीबॉडी के साथ जोड़ा जाता है। एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप एंजाइम गतिविधि बहाल हो जाती है।

जब एक एंटीबॉडी एक एंजाइम लेबल वाले एंटीजन से जुड़ता है, तो उच्च आणविक भार सब्सट्रेट के संबंध में एंजाइम गतिविधि 95% तक बाधित हो जाती है, जो एंजाइम के सक्रिय केंद्र से सब्सट्रेट के स्टेरिक बहिष्करण के कारण होता है। जैसे-जैसे एंटीजन की सांद्रता बढ़ती है, अधिक एंटीबॉडीज जुड़ती हैं और अधिक मुक्त एंटीजन-एंजाइम संयुग्म बने रहते हैं जो उच्च आणविक भार सब्सट्रेट को हाइड्रोलाइज कर सकते हैं। विश्लेषण बहुत तेजी से किया जाता है, एक निर्धारण के लिए 1 मिनट की आवश्यकता होती है। विधि की संवेदनशीलता काफी अधिक है. इसकी मदद से आप पिकोमोल्स के स्तर पर पदार्थ का निर्धारण कर सकते हैं।

विषम तरीकों के लिए, एक ठोस चरण की भागीदारी के साथ दो-चरण प्रणाली में विश्लेषण करना विशिष्ट है - एक वाहक, और अप्रयुक्त घटकों (धोने) से प्रतिरक्षा परिसरों को अलग करने का एक अनिवार्य चरण जो विभिन्न चरणों में होते हैं (गठित) प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स ठोस चरण में हैं, और अप्रतिक्रियाशील कॉम्प्लेक्स समाधान में हैं)। विषम विधियाँ, जिनमें पहले चरण में प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण ठोस चरण पर होता है, ठोस चरण विधियाँ कहलाती हैं।

विधियों को सजातीय-विषम के रूप में वर्गीकृत किया जाता है, यदि पहला चरण - विशिष्ट परिसरों का निर्माण समाधान में होता है, और फिर घटकों को अलग करने के लिए एक स्थिर अभिकर्मक के साथ एक ठोस चरण का उपयोग किया जाता है।

3. परीक्षण पदार्थ के निर्धारण के सिद्धांत के अनुसार:

ए) किसी पदार्थ (एंटीजन या एंटीबॉडी) की सांद्रता का उसके साथ परस्पर क्रिया करने वाले बंधन केंद्रों की संख्या द्वारा प्रत्यक्ष निर्धारण। इस मामले में, एंजाइम लेबल परिणामी विशिष्ट एजी-एटी कॉम्प्लेक्स में होगा। विश्लेषक की सांद्रता पंजीकृत सिग्नल के सीधे आनुपातिक होगी।

बी) बंधन स्थलों की कुल संख्या और शेष मुक्त बंधन स्थलों के बीच अंतर से किसी पदार्थ की सांद्रता का निर्धारण। इस मामले में, विश्लेषक की एकाग्रता बढ़ जाएगी, और रिकॉर्ड किए गए सिग्नल कम हो जाएंगे, इसलिए, इस मामले में, रिकॉर्ड किए गए सिग्नल के परिमाण पर विपरीत निर्भरता होती है।

5.2 एलिसा में प्रयुक्त घटकों के लक्षण।

एंजाइम।

एंजाइम लेबल में अत्यंत शक्तिशाली उत्प्रेरक प्रभाव होता है; एक एंजाइम अणु बड़ी संख्या में सब्सट्रेट अणुओं के साथ प्रतिक्रिया कर सकता है। इस प्रकार, नगण्य मात्रा में मौजूद एक एंजाइम का पता लगाया जा सकता है और उत्पादों के निर्माण, उसके द्वारा उत्प्रेरित प्रतिक्रिया द्वारा मात्रा निर्धारित की जा सकती है। एंजाइमों को लेबल के रूप में उपयोग करने का एक अन्य लाभ अणु में कई कार्यात्मक समूहों (सल्फहाइड्रील, कार्बोक्सिल, टायराज़िन अवशेष, आदि) की उपस्थिति के कारण होता है, जिसके माध्यम से लिगैंड अणुओं को सहसंयोजक रूप से जोड़ा जा सकता है।

एलिसा में प्रयुक्त एंजाइमैटिक मार्करों में निम्नलिखित गुण होने चाहिए:

- विश्लेषण की शर्तों के तहत, संशोधन के दौरान और एंटीबॉडी या अन्य प्रोटीन के साथ संयुग्मित होने पर एंजाइम की उच्च गतिविधि और स्थिरता;

- संवेदनशील सब्सट्रेट्स की उपस्थिति और एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया के उत्पादों या सब्सट्रेट्स को निर्धारित करने की विधि की सादगी;

- सब्सट्रेट सिस्टम को और अधिक मजबूत करने के लिए अनुकूलन की संभावना;

- अध्ययन किए गए जैविक द्रव में एंजाइम और उसके अवरोधकों की अनुपस्थिति।

एलिसा कम से कम 15 विभिन्न एंजाइमों का उपयोग कर सकती है। उपरोक्त आवश्यकताओं के अनुसार हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी), क्षारीय फॉस्फेट (एपी) और β-डी-गैलेक्टोसिडेज का सबसे बड़ा उपयोग पाया गया है। ये तीनों स्थिर हैं और अत्यधिक संवेदनशील प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करते हैं। इसके अलावा, उपयोग किए गए सब्सट्रेट के आधार पर, इन एंजाइमों द्वारा उत्प्रेरित प्रतिक्रियाओं से उत्पन्न उत्पादों का पता न केवल वर्णमिति विधियों द्वारा, बल्कि फ्लोरोसेंट विधियों द्वारा भी लगाया जा सकता है। अन्य एंजाइमों का उपयोग बहुत कम बार किया जाता है। इसे एचआरपी और एपी की तुलना में उनकी कम विशिष्ट गतिविधि द्वारा समझाया गया है।

सबस्ट्रेट्स।

सब्सट्रेट की पसंद मुख्य रूप से लेबल के रूप में उपयोग किए जाने वाले एंजाइम द्वारा निर्धारित की जाती है, क्योंकि एंजाइम-सब्सट्रेट प्रतिक्रिया अत्यधिक विशिष्ट होती है।

सब्सट्रेट के लिए बुनियादी आवश्यकताएँ:

- संयुग्म में एंजाइम का पता लगाने में विधि की उच्च संवेदनशीलता सुनिश्चित करना;

- एंजाइम-सब्सट्रेट प्रतिक्रिया के अच्छी तरह से परिभाषित (उदाहरण के लिए, रंगीन) उत्पादों का गठन;

- सब्सट्रेट सुरक्षित, सस्ता, सुलभ और उपयोग में सुविधाजनक होना चाहिए।

अधिक बार, क्रोमोजेनिक सबस्ट्रेट्स का उपयोग किया जाता है, जो नष्ट होने पर एक रंगीन पदार्थ बनाते हैं। उच्च-ऊर्जा सबस्ट्रेट्स - फ्लोरोसेंट, केमिलुमिनसेंट का उपयोग आशाजनक है। ऐसे सबस्ट्रेट्स का उपयोग सैद्धांतिक रूप से एलिसा की संवेदनशीलता को परिमाण के दो आदेशों तक बढ़ाना संभव बनाता है।

संयुग्मी गठन.

संयुग्म एक एंटीजन या एंटीबॉडी है जिसे एंजाइम लेबल के साथ लेबल किया जाता है। संयुग्म का निर्माण एलिसा में महत्वपूर्ण चरणों में से एक है।

संयुग्म बनाते समय, एंजाइम लेबल को पेश करने के लिए ऐसी इष्टतम विधि का चयन किया जाता है ताकि संयुग्म के दोनों घटक अपनी जैविक गतिविधि बनाए रखें: एंजाइम - सब्सट्रेट के साथ बातचीत करने की क्षमता, और एंटीजन या एंटीबॉडी - एंटीजेनेसिटी और एंटीजन-बाइंडिंग गतिविधि, क्रमशः. लेबल किए गए, अत्यधिक शुद्ध एंटीजन की उपस्थिति प्रतिस्पर्धी तरीकों के उपयोग की अनुमति देती है। इस मामले में, स्थिर एंटीबॉडी से बंधे संयुग्म की गतिविधि को अंतिम चरण में मापा जा सकता है, जो धोने की प्रक्रिया से बचाता है और विश्लेषण को अधिक सुविधाजनक बनाता है। हालाँकि, एंटीजन अपने भौतिक-रासायनिक गुणों और संरचना में विविध हैं, जिसका अर्थ है कि एंटीजन के साथ संयुग्म प्राप्त करने के लिए सार्वभौमिक तरीके विकसित करना असंभव है। इस मामले में, एंटीजन-एंजाइम संयुग्म प्राप्त करना एक अलग चुनौती है। एलिसा के लिए लेबल एंटीबॉडी की तैयारी विधिपूर्वक अधिक सुलभ है।

इम्यूनोकेमिकल रूप से सक्रिय प्रोटीन के साथ एक एंजाइम का संयुग्मन विभिन्न तरीकों से किया जाता है: रासायनिक क्रॉस-लिंकिंग, एक एंजाइम अणु का एजी या एटी के साथ सहसंयोजक बंधन, और गैर-सहसंयोजक बांड के माध्यम से यौगिकों का निर्माण, उदाहरण के लिए, जब के बीच संबंध होता है एंजाइम और एजी या एटी को एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरैक्शन के माध्यम से प्रतिरक्षात्मक रूप से किया जाता है।

संयुग्मों की तैयारी के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली सहसंयोजक विधियाँ। बाइंडिंग प्रतिक्रिया का विकल्प इन प्रोटीन अणुओं में उपलब्ध कार्यात्मक समूहों के प्रकार से निर्धारित होता है। ग्लूटाराल्डिहाइड, सोडियम पीरियडेट आदि का उपयोग अभिकर्मकों के रूप में किया जाता है जो एंजाइम को एंटीजन और एंटीबॉडी अणुओं में पेश करने के लिए उपयोग किया जाता है।

ग्लूटाराल्डिहाइड का उपयोग करके संयुग्म प्राप्त करने के लिए एक-चरणीय और दो-चरणीय विधियाँ हैं। कम एंजाइमेटिक गतिविधि (मुक्त एंजाइम का 15 - 60%) के साथ विभिन्न आकारों के संयुग्मों का निर्माण किया जा सकता है। परिणामी बड़े आकार का संयुग्म परीक्षण पदार्थ के निर्धारण में बाधा उत्पन्न कर सकता है। अपेक्षाकृत कम आणविक भार संयुग्मों में एक फैब टुकड़ा और एक एंजाइम अणु होता है।

दो-चरणीय संश्लेषण के परिणामस्वरूप, जिसमें एक एंजाइम की चरण-दर-चरण तैयारी शामिल होती है जिसे पहले एक क्रॉस-लिंकिंग एजेंट के साथ संशोधित किया जाता है, इसका अलगाव होता है, और फिर एक एंटीजन (एंटीबॉडी) के साथ इसकी बाद की बातचीत होती है, एक के अणु सजातीय संरचना प्रति इम्युनोग्लोबुलिन अणु में 1-2 एंजाइम अणुओं से युक्त होती है और एक उच्च एंजाइमेटिक और इम्यूनोलॉजिकल गतिविधि को बनाए रखती है। हालाँकि, बनने वाले ऐसे संयुग्मों की मात्रा कम होती है (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज के लिए यह 5-10% है)।

सोडियम पीरियोडेट के साथ एंजाइम के कार्बोहाइड्रेट घटक के ऑक्सीकरण (संयुग्म के साथ पेरोक्सीडेज का बंधन एंजाइम की प्रारंभिक मात्रा के 70-90% तक पहुंच जाता है) के आधार पर इम्यूनोपरोक्सीडेज संयुग्म प्राप्त करने की विधि ने सबसे बड़ा व्यावहारिक अनुप्रयोग पाया है।

एक विश्वसनीय संयुग्म में निम्नलिखित गुण होने चाहिए:

उच्च एंटीबॉडी बाघ और एंटीजन के लिए उच्च आत्मीयता ताकि इसका उपयोग उच्च तनुकरण में किया जा सके और इस प्रकार गैर-विशिष्ट बंधन को कम किया जा सके;

कार्यशील प्रजनन में पर्याप्त विशिष्टता;

बहुलक रूपों की तुलना में मोनोमेरिक रूपों की प्रधानता, क्योंकि पॉलिमरिक रूप प्लास्टिक से गैर-विशेष रूप से चिपकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप उच्च पृष्ठभूमि स्तर की प्रतिक्रिया होती है;

एंजाइम और एंटीबॉडी के बीच इष्टतम दाढ़ अनुपात (इष्टतम अनुपात लगभग 1:1 है);

संयुग्म की पर्याप्त एंजाइमेटिक गतिविधि। यह गुण मुख्य रूप से संयुग्मन की स्थितियों और संयुग्म में एंजाइम और एंटीबॉडी अणुओं के अनुपात से निर्धारित होता है।

5.3 विषम एलिसा विधियाँ।

विषमांगी एलिसा (या ठोस-चरण एलिसा) में वे विधियाँ शामिल हैं जिनमें विश्लेषण दो चरणों में होता है। एक इम्यूनोकेमिकल प्रतिक्रिया के घटकों को अलग करने के लिए, एंटीबॉडी या उस पर स्थिर एंटीजन के साथ एक ठोस चरण (एक अघुलनशील वाहक, आमतौर पर प्लास्टिक) का उपयोग किया जाता है, जिसे अप्रयुक्त घटकों के मध्यवर्ती उत्पादों को हटाने के लिए प्रत्येक चरण में धोया जाता है।

रासायनिक तरीकों का उपयोग करके एक सक्रिय वाहक के साथ एंटीबॉडी (एंटीजन) को सहसंयोजक रूप से बांधकर और साथ ही ठोस पॉलिमर (उदाहरण के लिए, पॉलीस्टीरिन प्लेट्स) की सतह पर एंटीबॉडी (एंटीजन) के भौतिक सोखना द्वारा स्थिरीकरण किया जा सकता है। विदेशी साहित्य में, इस दिशा को एलिसा परीक्षण या एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख कहा जाता है।

उदाहरण के तौर पर एंजाइम-लेबल विशिष्ट एंटीबॉडी और स्थिर एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन का पता लगाने के लिए गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा।

विश्लेषण किए गए एंटीजन युक्त एक समाधान को स्थिर एंटीबॉडी के साथ वाहक में जोड़ा जाता है। ऊष्मायन के दौरान, एक विशिष्ट एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है। फिर वाहक को अनबाउंड एंटीजन से धोया जाता है और लेबल किए गए एंटीबॉडी जोड़े जाते हैं - संयुग्म। बाध्य संयुग्म की मात्रा परीक्षण नमूने में एंटीजन की मात्रा के सीधे आनुपातिक है। दूसरे ऊष्मायन और अतिरिक्त संयुग्म को हटाने के बाद, उपयोग किए गए एंजाइम के लिए एक क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट जोड़ा जाता है, जो एंजाइम की कार्रवाई के तहत रंग बदलता है, यानी, कुओं में समाधान के धुंधला होने के साथ एक एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया होती है। धुंधला होने की डिग्री एंजाइम-लेबल वाले विशिष्ट एंटीबॉडी, एंजाइम और, तदनुसार, परीक्षण एंटीजन की संख्या के सीधे आनुपातिक है। एक निश्चित तरंग (इस्तेमाल किए गए सब्सट्रेट के आधार पर) पर कुओं में समाधान के ऑप्टिकल घनत्व का माप माइक्रोप्लेट रीडर के लिए अनुकूलित विशेष स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके किया जाता है। नमूने में एंटीजन की सांद्रता को मानक एंटीजन समाधान की एकाग्रता पर समाधान के ऑप्टिकल घनत्व की निर्भरता के अंशांकन वक्र के साथ परिणामों की तुलना करके निर्धारित किया जाता है।

चित्र 7

चूंकि एक विशिष्ट इम्युनोकॉम्पलेक्स की पहचान करने के चरण में, एंटीजन स्थिर और लेबल किए गए एंटीबॉडी के अणुओं से बंधा होता है, साहित्य में इस विधि को अक्सर "सैंडविच" विधि (अंग्रेजी सैंडविच से) या दो-केंद्र एलिसा विधि (से) कहा जाता है। अंग्रेजी दो-साइट परख)।

इस विधि का उपयोग केवल उन एंटीजन का विश्लेषण करने के लिए किया जा सकता है जिनकी सतह पर कम से कम दो एंटीजेनिक निर्धारक होते हैं। यह बड़ी संख्या में मोनोवालेंट एंटीजन (दवाएं, कीटनाशक, आदि) के विश्लेषण के लिए अस्वीकार्य है।

इस विधि का मुख्य लाभ इसकी उच्च संवेदनशीलता है। इस विधि द्वारा यौगिकों का पता लगाने की सीमा वर्तमान में 10-21 मोल के क्रम के मूल्य तक पहुंचती है, जो नमूने में विश्लेषण के केवल 600 अणुओं का पता लगाने से मेल खाती है। अधिकतम संवेदनशीलता तब प्राप्त होती है जब प्रत्येक प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रिया एक संतुलन मोड में की जाती है, जो विश्लेषण की अवधि को प्रभावित करती है, जो औसतन 4-6 घंटे होती है। उदाहरण के तौर पर एंजाइम-लेबल वाले माध्यमिक एंटीबॉडी और स्थिर एंटीजन का उपयोग करके एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा।

परीक्षण किए जाने वाले सीरम को स्थिर एंटीजन में जोड़ा जाता है। ऊष्मायन और अनबाउंड एंटीबॉडीज को धोने के बाद, लेबल किए गए माध्यमिक एंटीबॉडीज जो विश्लेषण किए गए एंटीबॉडीज के लिए विशिष्ट होते हैं, जोड़े जाते हैं। द्वितीयक ऊष्मायन और अतिरिक्त लेबल वाले द्वितीयक एंटीबॉडी को हटाने के बाद, वाहक पर एंजाइम लेबल की सामग्री सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी की एकाग्रता के समानुपाती होती है।

यह योजना एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए सबसे आम एलिसा में से एक है, क्योंकि यह विभिन्न एंटीजन के लिए एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देती है।

उदाहरण के तौर पर लेबल किए गए एंटीजन और स्थिर एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन का पता लगाने के लिए विषम प्रतिस्पर्धी एलिसा।

विश्लेषण किए गए एंटीजन और एंटीजन-एंजाइम संयुग्म की एक निश्चित सांद्रता वाला एक समाधान वाहक पर स्थिर एंटीबॉडी में जोड़ा जाता है। ऊष्मायन के बाद, वाहक को अनबाउंड मुक्त और लेबल किए गए एंटीजन से धोया जाता है और वाहक पर एंजाइमेटिक गतिविधि दर्ज की जाती है, जो निर्धारित किए जा रहे एंटीजन की एकाग्रता के व्युत्क्रमानुपाती होती है।



5.4 सजातीय एलिसा विधि।

सजातीय एंजाइम इम्यूनोएसे (HIFA) एलिसा का सबसे व्यवस्थित रूप से सरल प्रकार है। जब इसे सेट किया जाता है, तो प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (आमतौर पर कम आणविक भार एंटीजन) में प्रतिभागियों में से एक को एक एंजाइम के साथ लेबल किया जाता है, और एंजाइम गतिविधि में परिवर्तन दर्ज करके एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन के पाठ्यक्रम की निगरानी की जाती है।

एंजाइमेटिक गतिविधि का ऐसा व्यवधान या तो एंजाइम और सब्सट्रेट के स्थानिक अनयुग्मन के कारण हो सकता है, या प्रतिरक्षा परिसर के गठन के साथ एंजाइम अणु में गठन संबंधी परिवर्तनों के कारण हो सकता है। अन्य इम्यूनोकेमिकल तरीकों की तुलना में जीआईएफए के कई महत्वपूर्ण फायदे हैं। सबसे पहले, उच्च अभिव्यक्ति (जीआईएफए का उपयोग करके संपूर्ण विश्लेषण में मिनट और यहां तक ​​कि मिनटों का अंश भी लगता है)।

चावल।8 सजातीय एलिसा विकल्प(ए - एंटीजन (एजी) और एंटीबॉडी (एबी) की बातचीत के दौरान स्थैतिक बाधाओं के कारण एंजाइम (एफ) और सब्सट्रेट (सी) के अनयुग्मन का प्रभाव; बी - एंजाइम की संरचना में बदलाव का प्रभाव एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के निर्माण के दौरान)।

दूसरे, विधि में एक ही चरण होता है और इसमें श्रमसाध्य और समय लेने वाले धुलाई चरणों की आवश्यकता नहीं होती है। और अंत में, तीसरा, विधि के लिए न्यूनतम मात्रा (8-50 μl) और जैविक या नैदानिक ​​​​नमूने की मात्रा की आवश्यकता होती है। हालाँकि, HIFA पद्धति में एक अत्यंत महत्वपूर्ण खामी है - इसका उपयोग केवल कम आणविक भार एंटीजन के लिए नैदानिक ​​परीक्षण प्रणाली बनाने के लिए किया जा सकता है। केवल इस मामले में, एंटीबॉडी, एंटीजन के साथ बातचीत करके, इस एंटीजन से जुड़े एंजाइम अणु को प्रभावी ढंग से ढाल या संशोधित कर सकती है। यह इस संबंध में है कि (अन्य तरीकों की तुलना में सरलता और स्पष्ट लाभ के बावजूद), एचआईएफए के आधार पर, केवल हार्मोन, पेप्टाइड्स, औषधीय और मादक पदार्थों और कुछ कम आणविक भार प्रोटीन का पता लगाने के लिए डायग्नोस्टिक किट बनाए गए थे।

5.5 "सैंडविच" - एंटीजन का पता लगाने के लिए एलिसा का एक प्रकार।

इस एलिसा वैरिएंट का उपयोग करके पता लगाए गए एंटीजन में कई एंटीबॉडी-बाध्यकारी एपिटोप होने चाहिए या एक ही विशिष्टता के दोहराव, स्थानिक रूप से अलग किए गए एपिटोप होने चाहिए।

एलिसा के इस प्रकार को अंजाम देते समय, ठोस चरण पर अधिशोषित अत्यधिक विशिष्ट पॉली- या मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को परीक्षण नमूने के साथ जोड़ा जाता है। धोने की प्रक्रिया के बाद, उसी एंटीजन में एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी (संयुग्म) को कुओं में जोड़ा जाता है, और फिर प्रतिक्रिया के अन्य सभी चरणों को पूरा किया जाता है। विश्लेषण के प्रत्येक चरण में एक विशिष्ट परिसर के गठन की दक्षता एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया के बाध्यकारी स्थिरांक पर निर्भर करती है।

एलिसा (एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख, एलिसा - अंग्रेजी) ने पिछली शताब्दी के 60 के दशक में कहीं और व्यावहारिक चिकित्सा के जीवन में प्रवेश किया। उनका प्रारंभिक कार्य वैज्ञानिक उद्देश्यों के लिए हिस्टोलॉजिकल अनुसंधान था, जो जीवित जीव की कोशिकाओं की एंटीजेनिक संरचना की खोज और पहचान तक सीमित था।

एलिसा विधि एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन के साथ विशिष्ट (एटी) और संबंधित एंटीजन (एजी) की बातचीत पर आधारित है, जिसे एक एंजाइम का उपयोग करके पता लगाया जाता है। इस तथ्य ने वैज्ञानिकों को इस विचार की ओर प्रेरित किया कि इस पद्धति का उपयोग किसी विशेष संक्रमण के प्रति प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में शामिल विभिन्न वर्गों के विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन की पहचान करने के लिए नैदानिक ​​उद्देश्यों के लिए किया जा सकता है। और यह नैदानिक ​​प्रयोगशाला निदान में एक सफलता थी!

इस पद्धति का सक्रिय रूप से उपयोग केवल 80 के दशक की शुरुआत में और फिर मुख्य रूप से विशिष्ट संस्थानों में किया जाने लगा। पहले एलिसा विश्लेषकों को रक्त आधान केंद्रों और स्टेशनों, संक्रामक और यौन अस्पतालों में आपूर्ति की गई थी, क्योंकि अफ्रीकी महाद्वीप पर पैदा हुआ भयानक एड्स, हमारे साथ क्षितिज पर दिखाई दिया और तुरंत "पुराने" संक्रमणों में शामिल हो गया, निदान के लिए तत्काल उपायों की आवश्यकता थी और उस पर असर करने वाली चिकित्सीय दवाओं की खोज की जा रही है।

एलिसा पद्धति का दायरा

एंजाइम इम्यूनोएसे की संभावनाएं वास्तव में व्यापक हैं।अब यह कल्पना करना कठिन है कि कोई ऐसे अध्ययनों के बिना कैसे कर सकता है, जिनका उपयोग चिकित्सा की सभी शाखाओं में शाब्दिक रूप से किया जाता है। ऐसा लगता है कि एलिसा ऑन्कोलॉजी में क्या कर सकता है? यह पता चला है कि यह हो सकता है। और बहुत कुछ. कुछ प्रकार के घातक नियोप्लाज्म की विशेषता वाले मार्करों को खोजने के लिए विश्लेषण की क्षमता एक ट्यूमर का शीघ्र पता लगाने का आधार बनती है, जब इसके छोटे आकार के कारण अभी तक किसी अन्य तरीके से इसका पता नहीं लगाया जा सका है।

आधुनिक नैदानिक ​​​​प्रयोगशाला निदान (सीडीएल), ट्यूमर मार्करों के अलावा, एलिसा के लिए पैनलों का एक महत्वपूर्ण शस्त्रागार है और उनका उपयोग विभिन्न रोग स्थितियों (संक्रामक प्रक्रियाओं, हार्मोनल विकारों) का निदान करने और रोगी पर उनके प्रभाव की पहचान करने के लिए फार्मास्युटिकल दवाओं की निगरानी करने के लिए करता है। शरीर और, वैसे, केवल मानव ही नहीं है। वर्तमान में, पशु चिकित्सा सेवा में एंजाइम इम्यूनोएसे का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, क्योंकि "हमारे छोटे भाई" भी कई बीमारियों के प्रति संवेदनशील होते हैं, जिनसे, कभी-कभी, वे बहुत अधिक पीड़ित होते हैं।

इस प्रकार, एलिसा, अपनी संवेदनशीलता और विशिष्टता के कारण, नस से लिए गए रक्त के नमूने से निर्धारित कर सकती है:

• हार्मोनल स्थिति (थायराइड और अधिवृक्क हार्मोन, सेक्स हार्मोन);
• एक वायरल और बैक्टीरियल संक्रमण (एचआईवी, बी और सी, क्लैमाइडिया, सिफलिस, और, साथ ही रोगजनक सूक्ष्मजीवों के कारण होने वाली कई अन्य बीमारियां) की उपस्थिति;
• सूक्ष्मजीवों की महत्वपूर्ण गतिविधि के निशान जिन्होंने संक्रामक प्रक्रिया शुरू की, जो सफलतापूर्वक समाप्त हुई और इस रोगज़नक़ के प्रति प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के गठन के चरण में चली गई। ऐसे निशान, यानी एंटीबॉडी, कई मामलों में जीवन भर रक्त में घूमते रहते हैं, जो व्यक्ति को दोबारा संक्रमण से बचाते हैं।

IF का सार क्या है?

एंजाइम इम्यूनोएसे विधि न केवल रोगज़नक़ की उपस्थिति (गुणात्मक विश्लेषण) निर्धारित करना संभव बनाती है, बल्कि रोगी के रक्त सीरम में इसकी मात्रात्मक सामग्री भी निर्धारित करती है।

एक वायरल या बैक्टीरियल खुराक संक्रामक प्रक्रिया के पाठ्यक्रम और उसके परिणाम को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करती है, इसलिए, मात्रात्मक विश्लेषण विभिन्न रूपों और चरणों में रोगों के निदान और उपचार में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है।

हालाँकि, एंजाइम से जुड़े इम्युनोसॉरबेंट परीक्षण को एलिसा विधि के रूप में जानते हुए, हम यह भी नहीं सोचते हैं कि यह हमारे ग्रह पर रहने वाले सूक्ष्मजीवों की इतनी विस्तृत श्रृंखला को कैसे कवर करता है, जिनमें से कई मनुष्यों के स्वास्थ्य और जीवन के लिए सीधा खतरा पैदा करते हैं। जानवरों। तथ्य यह है कि एलिसा के पास कई विकल्प हैं (गैर-प्रतिस्पर्धी और प्रतिस्पर्धी - प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष), जिनमें से प्रत्येक अपनी समस्या का समाधान करता है और इस प्रकार, लक्षित खोज की अनुमति देता है।

एक या दूसरे वर्ग के इम्युनोग्लोबुलिन का पता लगाने के लिए, एक पारंपरिक 96-वेल पॉलीस्टाइन पैनल (टैबलेट) का उपयोग किया जाता है, जिसके कुओं में ठोस चरण में सोखने वाले पुनः संयोजक प्रोटीन केंद्रित होते हैं। रक्त सीरम के साथ कुएं में प्रवेश करने वाले एंटीबॉडी या एंटीजन एक "परिचित" वस्तु ढूंढते हैं और इसके साथ एक कॉम्प्लेक्स (एजी - एटी) बनाते हैं, जो एंजाइम संयुग्म द्वारा तय किया जाता है, जो कुएं के रंग में बदलाव के रूप में प्रकट होगा। परिणाम पढ़ते समय.

एंजाइम इम्यूनोएसे एक निश्चित विशिष्टता के परीक्षण प्रणालियों पर किया जाता है, जो विशेष प्रयोगशालाओं में बनाया जाता है और सभी आवश्यक प्रतिक्रियाशील घटकों से सुसज्जित होता है। अध्ययन वॉशर ("वॉशर") और रीडिंग स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके किया जा सकता है, जहां अधिकांश शारीरिक श्रम शामिल होता है। पूर्ण स्वचालित मशीनों पर, प्रयोगशाला सहायक को नीरस इंस्टिलेशन, धुलाई और अन्य नियमित कार्यों से मुक्त करना, निश्चित रूप से काम करने के लिए तेज़ और अधिक सुविधाजनक है, लेकिन सभी प्रयोगशालाएं इस तरह की विलासिता बर्दाश्त नहीं कर सकती हैं और पुराने तरीके से काम करना जारी रख सकती हैं - अर्ध-स्वचालित उपकरणों पर.

एलिसा के परिणामों की व्याख्या प्रयोगशाला निदान के डॉक्टर की क्षमता के भीतर है, जबकि गलत सकारात्मक या गलत नकारात्मक उत्तर देने के लिए लगभग सभी इम्यूनोकेमिकल प्रतिक्रियाओं में निहित संपत्ति को आवश्यक रूप से ध्यान में रखा जाता है।

वीडियो: आधुनिक एंजाइम इम्यूनोपरख

सिफलिस के उदाहरण पर एलिसा परिणाम

एलिसा सभी रूपों का पता लगाने के लिए उपयुक्त है, और, इसके अलावा, इसका उपयोग स्क्रीनिंग अध्ययन में किया जाता है। विश्लेषण के लिए खाली पेट लिए गए रोगी के शिरापरक रक्त का उपयोग किया जाता है। कार्य में, एक निश्चित विशिष्टता (एटी वर्ग ए, एम, जी) या कुल एंटीबॉडी वाली प्लेटों का उपयोग किया जाता है।

यह ध्यान में रखते हुए कि सिफलिस में एंटीबॉडी एक विशिष्ट क्रम में उत्पन्न होते हैं, एलिसा आसानी से इस सवाल का जवाब दे सकता है कि संक्रमण कब हुआ और प्रक्रिया किस चरण में है, और प्राप्त परिणामों की डिकोडिंग निम्नलिखित रूप में प्रस्तुत की जा सकती है:

• आईजीएम संक्रामक प्रक्रिया की अवधि को इंगित करता है (पुरानी सूजन संबंधी बीमारियों के तेज होने के दौरान प्रकट हो सकता है);
• आईजीए का कहना है कि संक्रमण एक महीने से अधिक समय पहले हुआ था;
• आईजीजी संकेत देता है कि संक्रमण पूरे जोरों पर है या हाल ही में इलाज हुआ है, जिसका इतिहास एकत्र करते समय आसानी से पता चल जाता है।

सिफलिस के लिए परीक्षण करते समय, नकारात्मक कुएं (और नकारात्मक नियंत्रण) रंगहीन रहेंगे, जबकि सकारात्मक (सकारात्मक नियंत्रण की तरह) परीक्षण के दौरान जोड़े गए क्रोमोजेन के रंग परिवर्तन के कारण चमकदार पीला रंग दिखाएगा। हालाँकि, रंग की तीव्रता हमेशा नियंत्रण से मेल नहीं खाती है, अर्थात यह थोड़ा पीला या थोड़ा पीला हो सकता है। ये संदिग्ध परिणाम हैं, जो, एक नियम के रूप में, स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पर प्राप्त मात्रात्मक संकेतकों के अनिवार्य विचार के साथ पुन: जांच के अधीन हैं, लेकिन सामान्य तौर पर, रंग सीधे प्रतिरक्षा परिसरों (एंटीजन और एंटीबॉडी से जुड़े) की संख्या के लिए आनुपातिक होता है एक दूसरे से)।

एचआईवी के लिए एंजाइम इम्यूनोएसेज़ में सबसे रोमांचक - एलिसा

इस पर विश्लेषण, शायद दूसरों की तुलना में, जनसंख्या की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए रुचिकर है, क्योंकि यह निश्चित रूप से कहना अभी तक संभव नहीं है कि कई सामाजिक समस्याएं (वेश्यावृत्ति, नशीली दवाओं की लत, आदि) गायब हो गई हैं। दुर्भाग्य से, एचआईवी न केवल मानव समाज के इन वर्गों को प्रभावित करता है, आप विभिन्न परिस्थितियों में संक्रमित हो सकते हैं जो यौन संकीर्णता या नशीली दवाओं के उपयोग से संबंधित नहीं हैं। लेकिन अगर एचआईवी परीक्षण की आवश्यकता है, तो आपको डरना नहीं चाहिए कि ऐसी प्रयोगशाला में जाने के बारे में आसपास के सभी लोगों को पता चल जाएगा। अब एचआईवी संक्रमित लोग कानून द्वारा संरक्षित हैं, और जिन लोगों को संदेह है वे गुमनाम कार्यालयों का रुख कर सकते हैं जहां वे प्रचार और निंदा के डर के बिना समस्या का समाधान कर सकते हैं।

एचआईवी संक्रमण का निदान करने के लिए उपयोग किया जाने वाला एंजाइम इम्यूनोएसे प्राथमिक मानक अध्ययनों में से एक है, हालांकि, इसके लिए विशेष परिस्थितियों की आवश्यकता होती है, क्योंकि विषय बहुत संवेदनशील है।

यौन संपर्क, रक्त आधान, संक्रमण से जुड़ी अन्य चिकित्सा प्रक्रियाओं और ऊष्मायन अवधि ("सेरोनिगेटिव विंडो") के अंत में एचआईवी के लिए एलिसा करना समझ में आता है, लेकिन यह ध्यान में रखना चाहिए कि यह अवधि स्थिर नहीं है. यह 14-30 दिनों में समाप्त हो सकता है, या छह महीने तक रह सकता है, इसलिए औसत मान 45 से 90 दिनों का अंतराल माना जाता है। एचआईवी के लिए रक्त उसी तरह दान किया जाता है जैसे अन्य संक्रमणों के लिए - खाली पेट नस से। परिणाम प्रयोगशाला में सामग्री के संचय और उसके कार्यभार (2 से 10 दिनों तक) के आधार पर तैयार होंगे, हालांकि अधिकांश प्रयोगशालाएं उसी दिन या अगले दिन प्रतिक्रिया प्रदान करती हैं।

एचआईवी परिणामों से क्या उम्मीद की जा सकती है?

एचआईवी संक्रमण के लिए एलिसा दो प्रकार के वायरस के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाता है: एचआईवी-1 (रूस और अन्य यूरोपीय और एशियाई देशों में अधिक आम) और एचआईवी-2 (पश्चिम अफ्रीका में अधिक आम)।

एचआईवी एलिसा का कार्य वर्ग जी एंटीबॉडी की खोज करना है जो सभी परीक्षण प्रणालियों पर पाए जाते हैं, लेकिन बाद की अवधि में, और वर्ग ए और एम एंटीबॉडी नई पीढ़ी के पुनः संयोजक परीक्षण किटों पर पाए जाते हैं, जो जल्द से जल्द एंटीबॉडी का पता लगाना संभव बनाते हैं। चरण (ऊष्मायन अवधि सेरोनिगेटिव विंडो है)। एलिसा से निम्नलिखित उत्तरों की अपेक्षा की जा सकती है:

1. प्राथमिक सकारात्मक परिणाम: रक्त एक ही प्रकार की परीक्षण प्रणाली पर दोबारा जांच के अधीन है, लेकिन, यदि संभव हो तो, एक अलग श्रृंखला का और किसी अन्य व्यक्ति (प्रयोगशाला सहायक) द्वारा;
2. बार-बार (+) में प्राथमिक विश्लेषण के समान एक रोगी से एक नया रक्त नमूना लेना शामिल होता है;
3. अगला सकारात्मक परिणाम एक संदर्भ विश्लेषण के अधीन है, जो अत्यधिक विशिष्ट परीक्षण किट (2-3 पीसी) का उपयोग करता है;
4. दोनों (या तीन) प्रणालियों में एक सकारात्मक परिणाम इम्यूनोब्लॉटिंग (समान एलिसा, लेकिन विशेष रूप से उच्च विशिष्टता के परीक्षण किटों पर व्यक्तिगत रूप से किया जाता है) के लिए भेजा जाता है।

इम्युनोब्लॉटिंग के आधार पर ही एचआईवी संक्रमण के बारे में निष्कर्ष निकाला जाता है। संक्रमित व्यक्ति से पूरी गोपनीयता से बातचीत की जाती है। रूस के साथ-साथ अन्य देशों में भी चिकित्सा रहस्यों का खुलासा आपराधिक दंड के अधीन है।

एंजाइम इम्यूनोएसे द्वारा क्लैमाइडिया और साइटोमेगालोवायरस के विश्लेषण ने भी विशेष लोकप्रियता हासिल की है, इस तथ्य के कारण कि वे आपको संक्रमण का समय, रोग की अवस्था और चिकित्सीय उपायों की प्रभावशीलता निर्धारित करने की अनुमति देते हैं।

परिचय के दौरान, विभिन्न वर्गों के एंटीबॉडी की उपस्थिति का निरीक्षण करना भी संभव है।किसी संक्रामक एजेंट के कारण होने वाली रोग संबंधी स्थिति के विभिन्न चरणों में:

• संक्रमण के सात दिन बाद ही आईजीएम का पता लगाया जा सकता है;
• आईजीए इंगित करता है कि संक्रमण एक महीने से अधिक समय से शरीर में रह रहा है;
• आईजीजी क्लैमाइडिया के निदान की पुष्टि करता है, उपचार की निगरानी करने और इसकी प्रभावशीलता निर्धारित करने में मदद करता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि वर्ग जी एंटीबॉडी रोग की अवधि की परवाह किए बिना शरीर में रहते हैं और प्रसारित होते हैं, इसलिए, विश्लेषण की सही व्याख्या के लिए, संदर्भ मूल्यों (मानदंडों) को ध्यान में रखा जाना चाहिए, जो कि, प्रत्येक सीडीएल के लिए तरीके अलग-अलग हैं: परीक्षण प्रणाली के ब्रांड और सेट में शामिल अभिकर्मकों की विशिष्टता को ध्यान में रखते हुए। मानक मान एलिसा परिणाम के आगे वाले फॉर्म में दर्ज किए जाते हैं।

जहाँ तक, यहाँ यह थोड़ा अलग है:वर्ग एम एंटीबॉडी लगभग डेढ़ महीने में दिखाई देते हैं, यानी, एक सकारात्मक परिणाम (आईजीएम +) प्राथमिक संक्रमण के चरण में या अव्यक्त संक्रमण के पुनर्सक्रियन के दौरान बन जाता है और 4 महीने से छह महीने तक रहता है।

कक्षा जी एंटीबॉडी की उपस्थिति प्राथमिक तीव्र संक्रमण या पुन: संक्रमण की शुरुआत की विशेषता है। विश्लेषण में कहा गया है कि वायरस मौजूद है, लेकिन संक्रामक प्रक्रिया के चरण के बारे में जानकारी नहीं देता है। इस बीच, आईजीजी टिटर मानदंड का निर्धारण भी कठिनाइयों का कारण बनता है, क्योंकि यह पूरी तरह से किसी विशेष व्यक्ति की प्रतिरक्षा स्थिति पर निर्भर करता है, जो, हालांकि, कक्षा जी इम्युनोग्लोबुलिन का पता लगाने से स्थापित होता है। एंटीबॉडी के इस व्यवहार को देखते हुए, सीएमवीआई के निदान में, सीएमवी के साथ बातचीत करने के लिए कक्षा जी एंटीबॉडी की क्षमता का आकलन करना आवश्यक हो जाता है, ताकि बाद में इसे "निष्प्रभावी" किया जा सके (एटी एविडिटी)। रोग के प्रारंभिक चरण में, आईजीजी वायरस के एंटीजन (कम अम्लता) से बहुत खराब तरीके से बंधता है और उसके बाद ही वे गतिविधि दिखाना शुरू करते हैं, इसलिए, हम एंटीबॉडी की अम्लता में वृद्धि के बारे में बात कर सकते हैं।

हम लंबे समय तक एंजाइम इम्यूनोएसे के फायदों के बारे में बात कर सकते हैं, क्योंकि यह विधि केवल शिरापरक रक्त का उपयोग करके कई नैदानिक ​​​​समस्याओं को हल करने में कामयाब रही है। शोध के लिए सामग्री लेने में लंबे इंतजार, चिंता और समस्याओं की कोई आवश्यकता नहीं है। इसके अलावा, एलिसा के लिए परीक्षण प्रणालियों में सुधार जारी है और वह दिन दूर नहीं है जब परीक्षण परिणाम की 100% विश्वसनीयता देगा।

वीडियो: मॉस्को स्टेट मेडिकल यूनिवर्सिटी की शैक्षिक फिल्म। एलिसा की मूल बातें पर सेचेनोव

जब एक विश्लेषण निर्धारित किया जाता है, तो सिफलिस के लिए एलिसा परीक्षण लें। प्रयोगशाला निदान के तरीके. विश्लेषण परिणाम - मानदंड और विचलन का निर्धारण कैसे करें। एंजाइम इम्यूनोपरख की लागत.

एक नियम के रूप में, क्लिनिक से संपर्क करने पर डॉक्टर लगातार विभिन्न परीक्षण लिखते हैं। यह उन्हें उन संक्रमणों और बीमारियों की पहचान करने की अनुमति देता है जिनसे कोई व्यक्ति पीड़ित है। एलिसा, या तथाकथित एंजाइम इम्यूनोएसे, शरीर की प्रतिरक्षा प्रणाली का आकलन करने और एंटीबॉडी की उपस्थिति से संक्रमण और रोग के चरण की पहचान करने का एक उत्कृष्ट तरीका है।

तो, यह विश्लेषण करने के लिए किसे नियुक्त किया गया है और एंजाइम इम्यूनोएसे क्या है? यदि किसी व्यक्ति को निम्नलिखित बीमारियाँ हैं तो डॉक्टर यह विश्लेषण लिखते हैं:

• शरीर पर दाने - एलर्जी प्रतिक्रियाएं।
• वायरस - हर्पीस, साइटोमेगालावायरस।
• यौन संचारित रोग - सिफलिस, ट्राइकोमोनास।
• कैंसर से जुड़ी विकृति विज्ञान.
• न्यूरोसिफिलिस.

इन बीमारियों के अलावा, रक्त में हार्मोन के स्तर को निर्धारित करने के लिए विश्लेषण निर्धारित है। परिणामों के आधार पर चिकित्सा की गुणवत्ता का आकलन किया जाता है। सिफलिस क्या है, यह शायद हर व्यक्ति जानता है, लेकिन इसके पैमाने का प्रतिनिधित्व नहीं करता है, और कितने संक्रमित लोग हमारे बगल में चलते हैं।

वर्तमान में सिफलिस सबसे आम बीमारी है। यह एक ट्रेपोनोमा है जो मानव शरीर को प्रभावित करता है। और परिणामस्वरूप, रोगी के सभी आंतरिक अंग प्रभावित होते हैं।

यह एक बहुत ही खतरनाक संक्रमण है और अक्सर ऐसा होता है कि यह लंबे समय तक खुद को प्रकट नहीं कर पाता है। इसलिए, एक व्यक्ति यह जाने बिना कि वह बीमार है, लंबे समय तक वाहक और वितरक बन सकता है।

प्रयोगशाला निदान की विधि

दवा अभी भी खड़ी नहीं है, आधुनिक विश्लेषण शरीर के अध्ययन के पुराने तरीकों से काफी अलग हो गए हैं। हालाँकि उन्होंने अपनी भूमिका बखूबी निभाई, कभी-कभी उन्हें परिणामों के लिए हफ्तों और महीनों तक इंतजार करना पड़ता था। यह स्वाभाविक रूप से संक्रमित व्यक्ति के लिए अनुकूल नहीं था। परिणाम की आशा क्या है, बीमार व्यक्ति से गुजर गया।

शास्त्रीय विश्लेषण - वासरमैन विधि द्वारा सिफलिस का पता लगाना, काह्न विधि ने अपनी स्थिति खोना शुरू कर दिया और एलिसा जैसे परीक्षणों द्वारा प्रतिस्थापित किया गया।

यह इंसानों में संक्रमण का पता लगाने का सबसे आधुनिक तरीका है। परिणाम को कंप्यूटर का उपयोग करके डिक्रिप्ट किया जाता है। यह आपको सकारात्मक परिणाम या नकारात्मक परीक्षण को अधिक सटीक रूप से निर्धारित करने की अनुमति देता है।

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डिकोडिंग के दौरान, विशिष्ट बीमारियों के प्रति एंटीबॉडी की खोज की जाती है। और विश्लेषण के परिणामस्वरूप, परिणाम सकारात्मक होने पर संक्रमण का पता लगाना संभव हो सका। सिफलिस का पता लगाने के लिए एलिसा का उपयोग करने से इम्युनोग्लोबुलिन का तीन-वर्ग का उपयोग होता है:

• जी, एम, ए - निदान के लिए सबसे महत्वपूर्ण हैं।
• वे एक संक्रमित व्यक्ति में एक निश्चित क्रम में सख्ती से उत्पन्न होते हैं।
• संक्रमण की अवस्था का तुरंत निर्धारण करें।

एलिसा परिणाम - सामान्य और सकारात्मक विश्लेषण

यदि वह सिफलिस के लिए एलिसा के विश्लेषण के बारे में बात करते हैं, तो इस मामले में यह कहना मुश्किल है कि कोई मानक है या विचलन। परिणाम आमतौर पर या तो नकारात्मक या सकारात्मक होता है। इसके अलावा, ऐसे टाइटर्स भी होते हैं जो रक्त में एंटीबॉडी की मात्रा निर्धारित करते हैं।

विश्लेषण को समझने में कई सूक्ष्मताएं हैं, यदि यह सकारात्मक परिणाम दिखाता है, तो झूठी सकारात्मक प्रतिक्रिया की विधि को बाहर करने के लिए विश्लेषण को अभी भी कई बार दोबारा लेना होगा।

जैसा कि पहले ही लिखा जा चुका है, विश्लेषण को समझने में बहुत सारी सूक्ष्मताएँ होती हैं, और केवल उपस्थित चिकित्सक ही परिणाम निर्धारित कर सकता है। हम तालिका में उदाहरण देते हैं, एंजाइम इम्यूनोपरख के लिए कौन से परिणाम दिखाए जा सकते हैं:

यदि विश्लेषण सकारात्मक परिणाम दिखाता है तो निराश न हों। एक नियम के रूप में, निदान को अधिक सटीक रूप से स्थापित करने के लिए, विभिन्न तरीकों से अतिरिक्त परीक्षण और परीक्षण किए जाते हैं।

एंजाइम इम्यूनोपरख की लागत

एक नियम के रूप में, इस विश्लेषण की लागत सीधे विश्लेषण और एक विशिष्ट संक्रमण की पहचान पर निर्भर करती है। विभिन्न प्रकार के संक्रमण के लिए मार्करों के निर्धारण की लागत 200 से 350 रूबल तक होती है। और ऐसा विश्लेषण दो दिनों के भीतर किया जाता है।

किसी जीव के निदान के लिए एलिसा सबसे लोकप्रिय और आधुनिक तरीका है। इस विधि ने संक्रमण का पता लगाने और संक्रमण की सटीक अवधि निर्धारित करने में अपनी प्रभावशीलता दिखाई है।

मूल्य निर्धारण नीति को देखते हुए, हम कह सकते हैं कि विश्लेषण किसी भी बजट वाले प्रत्येक व्यक्ति के लिए उपलब्ध है। यह उपस्थित चिकित्सक को किसी व्यक्ति के संक्रमण की पूरी तस्वीर प्राप्त करने की अनुमति देता है। उन्होंने इस केस में खुद को दिखाया और डॉक्टरों को निराश नहीं किया. उसी समय, एक विश्लेषण प्राप्त करने के बाद, उपस्थित चिकित्सक समय पर उपचार निर्धारित करते हुए तुरंत प्रतिक्रिया दे सकता है।