עם התקדמות הרפואה המודרנית, ניתן לבצע אבחון מעמיק יותר במקרה של חשד לפתולוגיות מסוימות בחולה. אחת השיטות האינפורמטיביות של מחקר מעבדה הייתה ניתוח ELISA, המתבצע על ידי נטילת דם ורידי. כלומר, שום דבר לא משתנה עבור המטופל בכללותו. אבל עוזר המעבדה של ELISA עורך טכניקה מורכבת לחקר החומר הביולוגי שנאסף. מהן ניתוחי ELISA ומהן הדקויות של שימוש בשיטת ELISA כאבחון, אנו מבינים את החומר להלן.
מהו בדיקת אנזים חיסונית?
ייצור הנוגדנים מעורר על ידי האנטיגנים עצמם שחדרו לגוף האדם. כאשר נכנסים ל"קרב" על בריאות הגוף, נוגדנים, כביכול, מסמנים את עצמם באנטיגנים, וזה מה שעוזרת המעבדה רואה בבדיקת דם. כלומר, בחומר הביולוגי שנאסף, ניתן לעקוב לא רק אחר נוכחות של זיהום, אלא גם אחר עקבותיו לאחר התאוששות מלאה של הגוף.
לפיכך, על ידי מתן מרשם חיסוני המקושר לאנזים למטופל, הרופא המטפל יכול לעקוב אחר משך הזיהום, מידת התקדמותו, או לזהות נוכחות של חסינות לזיהום מסוים.
תהליך האבחון של ELISA נראה כך:
- הדם הוורידי שנלקח מובא במעבדה למצב של סרום דם;
- אז עוזר המעבדה משתמש במגש מיוחד עם תאים, שכל אחד מהם כבר מכיל את כל האנטיגנים הדרושים. זה מספיק רק להפיל סרום דם לתוך כל תא ולעקוב אחר התגובה של אימונוגלובולינים (נוגדנים) לאנטיגנים. נוכחות התגובה ה"רצויה" מצוינת על ידי שינוי בצבע החומר הנחקר. בעתיד, עוזר המעבדה לומד את הצפיפות האופטית של המדיום הנחקר.
- אסקריאזיס ואנטרוביאזיס (תולעים עגולות ותולעי סיכה);
- טריכינוזה;
- Opisthorchiasis בצורות אקוטיות וכרוניות;
- ג'יארדאזיס;
- אמוביוזה;
- טוקסופלזמה;
- לישמניאזיס בכל צורה שהיא.
חשוב: בדיקת אנזים חיסונית יכולה להיות גם איכותית וגם כמותית. במקרה הראשון, עוזר המעבדה רק מאשר או מפריך את נוכחותו של החומר הרצוי בדם. במקרה השני, כתוצאה מהניתוח, מצוין ריכוזו בגוף המטופל.
חסרונות השיטה
עם כל היתרונות של שיטת אבחון זו, יש להבין כי בדיקת אנזים חיסונית אינה דרך למצוא את הגורם למחלתו של המטופל, אלא רק שיטה לאישור האבחנה הנטענת על ידי הרופא המטפל. ולאור העובדה שהלימוד יקר למדי, יש להשתמש בו בתבונה. במקרה זה, יש לפרש את תוצאות המחקר רק על ידי מומחה מוסמך.
פענוח התוצאות
אחרי שפירקנו את הקיצור IFA ומה זה ─ גילה, כדאי לעבור לפירוש התוצאות. חשוב להבין כאן שאם הניתוח בוצע בצורה איכותית, אז התוצאה תהיה חיובית או שלילית בלבד. כלומר, האבחנה או מאשרת את חשדות הרופא לגבי אבחנה מסוימת, או מפריכה אותם. במקרה זה, הטופס יכיל את הסמלים "+" או "-", בהתאמה.
חשוב: תוצאת בדיקה שלילית לא תמיד מעידה על היעדר זיהום. העובדה היא שנוגדנים לאנטיגנים יכולים להיווצר תוך 14 ימים לאחר ההדבקה וסביר להניח שהם עדיין לא נוצרו.
אם מתבצעת ניתוח כמותי, אזי נקבעים כאן סוג הנוגדנים, מספרם ושלב הפעילות שלהם. בפרט, עם אבחנה כזו, נקבעים נוגדנים (אימונוגלובולינים) IgG ו-IgM, הנוצרים בתקופות שונות של התקדמות הזיהום. התוצאות הנפוצות ביותר במקרה זה הן:
- IgM מוגבר והיעדר מוחלט של IgG. תמונה זו מצביעה על זיהום אחרון ושלב חריף של הפתולוגיה.
- פעילות מוגברת של שני סוגי האימונוגלובולינים (IgM ו-IgG). הוא מדבר על מהלך ארוך טווח וכרוני של התהליך הזיהומי.
- פעילות IgG והיעדר מוחלט של IgM. ההדבקה הייתה לפחות לפני שישה חודשים וכעת הנגיף נמצא בשלב כרוני ממושך.
- היעדר נוגדני IgG ו-IgA. התוצאה לא מוגדרת.
- היעדר נוגדני IgM, IgA ו-IgG. מעיד על חוסר חסינות לזיהום ספציפי.
- פעילותם של נוגדני IgG, IgM ו-IgA מצביעה על החמרה של תהליך כרוני.
בנוסף לזיהוי סוגי נוגדנים, עוזר המעבדה בעמודה מיוחדת של הטופס מציין גם את מספרם לנפח דם. זכור, לאחר שהבנת מהי שיטת ELISA, אל תפרש את התוצאות בעצמך. את התוצאות המתקבלות ניתן לפרש בדייקנות רק על ידי הרופא המטפל, בהתאם לאבחנה המוצעת, הבנויה על בסיס התמונה הקלינית של המטופל.
התפתחות הרפואה המודרנית בעולם האבחון לא מפסיקה להדהים עם הישגיה, וכעת הרופא אינו צריך להניח הנחות לגבי אבחנה סבירה, בהסתמך רק על סימנים עקיפים. היצירה וההחדרה לעולם של מחקרי מעבדה של בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים (ELISA) מאפשרת לקבוע במהירות ובדייקנות לא רק את נוכחות הפתוגן, אלא גם מאפיינים רבים אחרים של המחלה.
היסטוריה של יצירה ופיתוח של IFA
שיטה זו של בדיקת דם החלה לשמש ברפואה המעשית באמצע המאה הקודמת - אי שם בשנות ה-60. מטרתו הראשונית הייתה מחקר מדעי בתחום ההיסטולוגיה, שהוגבל לחיפוש וחקר המבנה האנטיגני התאי של מינים ביולוגיים. בדיקת דם ELISA מבוססת על אינטראקציה של אנטיגנים קשורים (AG) ונוגדנים ספציפיים (AT), עם יצירת קומפלקס "אנטיגן-נוגדן" שנקבע על ידי אנזים.
תופעה זו גרמה למדענים להחליט שניתן להשתמש בשיטה כדי לזהות תרכובות חלבון מקבוצות שונות שנוצרות בסרום הדם כאשר פתוגן חודר לגוף. בשל מעורבותן הישירה בתפקוד מערכת החיסון, תרכובות אלו נקראו אימונוגלובולינים (IG, Ig), והתגלית הייתה פריצת הדרך הגדולה ביותר באבחון מעבדתי.
במקביל, שיטה רגישה מאוד זו החלה להיות בשימוש פעיל רק בשנות ה-80, והיא הייתה זמינה רק במוסדות רפואיים מיוחדים. תחנות ומרכזי עירוי דם, בתי חולים למין ולמחלות זיהומיות היו הראשונים שקיבלו את ההזדמנות להשתמש במנתחי אנזימים חימוניים. הדבר נבע מהתפשטות מהירה של "מגפת המאה ה-20" – איידס, ונדרשו אמצעים אבחוניים וטיפוליים דחופים.
אפשרויות הטכניקה
היקף בדיקת הדם של ELISA הוא די רחב - כרגע אי אפשר לדמיין כמה קשה יהיה לחפש את הגורמים למחלות רבות. מחקר כזה משמש כיום כמעט בכל ענפי הרפואה, אפילו באונקולוגיה. למרות שקשה להבין את חסרי הידע, בחלק מהמקרים, לאחר עריכתו, ניתן היה להציל את חייהם של חולים על ידי גילוי גידול בשלבים מוקדמים.
חָשׁוּב! ELISA היא בדיקת דם המראה סמנים האופייניים לכמה תהליכים ממאירים, המאפשרת לזהות את המחלה בשלב שבו היא אינה נתונה לשום שיטה אחרת.
במרכזי אבחון מודרניים, בדיקות מעבדה מיוצגות לא רק על ידי סמני גידול - הם מצוידים בארסנל מרשים של פאנלים לביצוע אבחנה זו. בעזרתם, אתה יכול לקבוע מצבים פתולוגיים רבים, כגון חריגות הורמונליות ותהליכים זיהומיים ממקורות שונים.
כמו כן, ביצוע ופענוח בדיקת דם ELISA יאפשרו לעקוב אחר השפעת התרופות על גופו של חולה ואף בעל חיים. זה האחרון נמצא בשימוש נרחב במרפאות וטרינריות, עוזר לשמור על בריאותם של חיות המחמד או המפרנסים שלנו, מספק אספקה יציבה של בשר, מוצרי חלב וביצים, שהם הכרחיים בתזונה.
לכן, כתוצאה מנטילת רק כמה מיליליטר של דם ורידי ואבחנתו בשיטת ELISA, הרופא, לאחר שתיאר את חומרי המחקר, יוכל לקבוע:
- מצב הורמונלי, כולל חומרים פעילים ביולוגית של המין ובלוטות התריס, כמו גם בלוטות יותרת הכליה;
- נוכחות של זיהום חיידקי ווירלי (הפטיטיס B ו-C, עגבת, הרפס, כלמידיה, שחפת, myco-ו-ureaplasmosis, HIV, TORCH) ומחלות אחרות מסוג זה;
- סימנים לפעילות חיונית של פתוגנים של התהליך הפתולוגי, שהסתיים בהחלמה ועברו לשלב היווצרות נוגדנים (תגובה חיסונית).
קומפלקסים כאלה הם הרבה יותר קל לזהות ולחסל על ידי תאי חיסון. השפעות שיוריות בצורת נוגדנים במקרים מרובים כלולים בדם לכל החיים, מה שמפחית למעשה את הסיכון להדבקה חוזרת לאפס.
זנים של אימונוגלובולינים
ישנם מספר סוגי נוגדנים, וכל אחד מהם מעורב בתהליך התגובה החיסונית בשלב מסוים. לדוגמה, אימונוגלובולינים מסוג M (IgM) הם הראשונים שנוצרים בתגובה לבליעה של אנטיגן בגוף. השיעורים הגבוהים ביותר שלהם נצפים בימים הראשונים של המחלה.
סוגי אימונוגלובולינים המשמשים ב-ELISA
לאחר מכן, המערכת החיסונית משגרת לפלסמה סוג G IGs (IgG), אשר אחראים להרס מוחלט של אנטיגנים ולהחלמה של החולה. מאוחר יותר, הם ממשיכים להיות בדם, ובכך מכינים את המערכת החיסונית לכניסה חוזרת של פתוגן זהה. כך פועל החיסון. עם החדרת אנטיגנים מוחלשים של מיקרואורגניזמים פתולוגיים, אימונוגלובולינים רבים מופיעים בפלסמה ונשארים במחזור.
האובייקטים העיקריים המעניינים לאבחון מעבדה הם מחלקות Ig M, G ו-A. לפי רמת הריכוז שלהם, אתה יכול לקבוע את שלב המחלה ולגלות אילו מחלות זיהומיות היו לאדם בחייו. לדוגמה, אתה יכול לבדוק היסטוריה של אבעבועות רוח או אדמת. כדי לברר האם קיים סוג מסוים של AT או AH בגוף המטופל או ריכוז הורמון כלשהו, אין צורך ברופא שירשם מספר בדיקות מעבדה - מספיק לכתוב הפניה ל-ELISA.
מהות הטכניקה
מתודולוגיית המחקר מבוססת על מספר אפשרויות (ישירות ועקיפות - תחרותיות ולא תחרותיות) של המשימות, שכל אחת מהן מיועדת למטרות ספציפיות. גישה זו מאפשרת לך לבצע חיפוש ממוקד, ובזמן הקצר ביותר האפשרי לזהות את הגורם לפתולוגיה מסוימת. כדי לזהות Ig של קטגוריות מחלקות שונות, נעשה שימוש בצלחת 96-בארות (פאנל פוליסטירן), ובבארות שלה ממוקמים חלבונים רקומביננטיים נספחים. הם ממלאים את התפקיד של אנטיגנים, ובשלב הראשוני נמצאים בשלב המוצק.
כאשר הם נכנסים לבאר עם פלזמת דם, אנטיגנים או נוגדנים מזהים את האובייקט בקשר לכיוון שלהם, ויוצרים קומפלקס (AG - AT). היווצרות זו מקובעת על ידי תרכובת אנזים (מצומד), אשר מתבטאת לאחר מכן כצביעה שונה של הבאר. ELISA מיוצרת על מערכות בדיקה ספציפיות המיוצרות במעבדות מיוחדות ומצוידת בסט מלא של ריאגנטים.
ניתוח זה יכול להתבצע על מכונות כביסה וספקטרומטרים לקריאה, אך הם דורשים עבודה ידנית. כמובן, זה הרבה יותר נוח ומהיר יותר עבור עוזר מעבדה לבצע את כל המניפולציות במכשירים אוטומטיים לחלוטין. בעת השימוש בהם צוות המעבדה משוחרר מכמות גדולה של פעילות מונוטונית - כביסה, הזלפה ושאר השגרה, אך לא כל המוסדות הרפואיים יכולים להרשות לעצמם ציוד כה יקר.
לכן, בתי חולים ומוסדות אבחון רבים ממשיכים לבצע ELISA בדרך הישנה - במכשירים חצי אוטומטיים.
הפרשנות של חומרי מחקר היא אך ורק בסמכותו של מומחה באבחון מעבדה - רק לו ניתן לומר את התוצאות לגבי הפרטים והדקויות של מהלך המחלה. במקרה זה, הרופא חייב בהכרח לקחת בחשבון את האפשרות לקבל תשובות שליליות שגויות או חיוביות שגויות.
תמלול חומרים
התוצאה של בדיקת אנזים אימונו איכותית צריכה להיות מסקנה חד משמעית - האם המיקרואורגניזם הרצוי נמצא או לא בדגימת דם זו. ניתוח כמותי יצביע על רמת הריכוז ויכול לבוא לידי ביטוי בשני אופנים - הערך במספרים או מספר סימני ה"+".
אינדיקטורים מנותחים
במהלך המחקר מתבצע מחקר יסודי של האימונוגלובולינים העיקריים המעורבים בתגובה החיסונית, כגון:
- IgM - זיהוי של מחלקה זו פירושו התפתחות של צורה חריפה של מחלה זיהומית. תוצאה שלילית בחיפוש אחר IgM יכולה להיות גם עדות להיעדר הפתוגן הרצוי, וגם מעבר של המחלה למהלך כרוני.
- IgA - ההגדרה של מחלקה זו בהיעדר IgM ברוב המקרים היא אות לצורה כרונית או סמויה של התפתחות מחלה זיהומית.
- IgM ו-IgA (נוכחות בו זמנית) - תוצאות חיוביות עבור שני הסוגים מצביעות על עצם השיא של הצורה החריפה של הפתולוגיה.
- IgG - נוכחותו מצביעה על הפיכת המחלה לצורה כרונית או התאוששות ויצירת חסינות לסוכן הנקבע.
הופעה והצטברות של מחלקה מסוימת של IG מתרחשת בשלבי זמן שונים. כך, למשל, IgM מופיע ראשון, בערך 5 ימים לאחר פגיעת הפתוגן. IGs נשארים בדם במשך כ 5-6 שבועות, ולאחר מכן נעלמים בהדרגה. בשלב זה, הם זמינים לקביעה על ידי ELISA. כ-3-4 שבועות לאחר הופעת המחלה מופיע IgG, אשר יכול להישאר לאחר מכן מספר חודשים. אבל בניתוח לא תמיד ניתן לזהות אותם.
IgA נוצרים בדם תוך 2-4 שבועות, כאשר 20% מהם נמצאים בסרום, ו-80% בהפרשת הריריות. ככלל, אימונוגלובולינים אלה נעלמים תוך 2-9 שבועות, מה שמעיד על הרס הפתוגן והחלמת החולה. אם ה-ELISA עדיין מראה נוכחות של IgA, אז זה מאותת על המעבר של התהליך לצורה כרונית.
אפשרויות תוצאות ניתוח
בהתאם לנתונים שהתקבלו, ניתן להוציא תגובות ELISA בטופס בצורה של טבלה עם רשימה מלאה של כל AT ו-AG וציון תגובה חיובית או שלילית. במצבים מסוימים, יוצג ערך כמותי - תוצאה חיובית חדה, חיובית, חיובית חלשה או שלילית. האפשרות השנייה מציינת את כמות הנוגדנים הכלולה בדגימת הדם הנחקרת.
גרסאות של פרשנות לחומרי ELISA
בנוסף לערכים הנ"ל, בתהליך ELISA נלמד פרמטר כמותי נוסף - מדד AT avidity, המחושב באחוזים. זה מראה כמה זמן נמשכת המחלה - כלומר, ככל שהמדד גבוה יותר, כך הפתולוגיה מתפתחת יותר זמן.
שיטת ELISA חלופית
בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים היא אבחנה ידועה ושכיחה למדי. אולי חלקם מעולם לא שמעו על זה, אבל יש גרסה אחרת של המחקר הזה, שידועה אפילו פחות למגוון רחב של אנשים, שבה נלקחת דגימת דם שאינה דם. טכניקה זו נקראת בדיקת דם סמוי בצואה, ובמקרים רבים היא נמנעת מהליכים מתישים נוספים, המלווים גם בתחושות לא נעימות.
בדיקת ELISA לדם סמוי (מולקולות המוגלובין) מאפשרת לזהות דימום של מערכת העיכול, ולו קל, שסימניו בצואה של החולה, כמו שאומרים, לא ניתן למצוא בעין בלתי מזוינת. בדיקת אנזים חיסונית של דם סמוי בצואה אנושית תוך זמן קצר יכולה להראות כיב פפטי, פוליפוזיס, דיברטיקולוזיס, גידולים, אשר בשלבים המוקדמים אינם מלווים בתסמינים מסוימים.
עד כה, נוצרו אלפי סוגים של מערכות אבחון של אנזים אימונואסאי, המספקות את היכולת למצוא AT ו-AG מתוך רשימה ענקית של פתולוגיות. לכן, ניתוח זה משמש כמעט בכל ענפי הרפואה, לכל קטגוריית גיל. וחוסר מזיק מוחלט מאפשר לך לפנות אליו הן במהלך ההריון והן לאבחון של חולים מוחלשים.
5.1 מהות וסיווג של ELISA.
ELISA הופיעה באמצע שנות ה-60 ופותחה במקור כשיטה לזיהוי אנטיגן בתכשיר היסטולוגי, כמו גם להמחשת קווי משקעים בבדיקת אימונודיפוזיה ואימונואלקטרופורזה, ולאחר מכן החלה לשמש לקביעה כמותית של אנטיגנים ו נוגדנים בנוזלים ביולוגיים. E. Engvall ור' פלמן לקחו חלק בפיתוח השיטה, וכן, ללא תלות בהם, V. Van Veeman ו-R. Schurs.
אורז. 6 העיקרון הבסיסי של ELISA:
כדי לזהות אנטיגנים; 2) לזהות נוגדנים
השיטה מבוססת על קשירה ספציפית של נוגדן לאנטיגן, כאשר אחד המרכיבים מצומד עם אנזים, כתוצאה מהתגובה עם המצע הכרומוגני המתאים, נוצר תוצר צבעוני שכמותו יכולה להיות נקבע ספקטרופוטומטרית (איור 6).
גילוי האפשרות של אימוביליזציה של אנטיגן ונוגדנים על נשאים שונים תוך שמירה על פעילות הקישור שלהם אפשרה להרחיב את השימוש ב-ELISA בתחומי הביולוגיה והרפואה השונים.
הופעת נוגדנים חד שבטיים שימשה התפתחות נוספת של ELISA, שאפשרה להגביר את הרגישות, הספציפיות ושחזור התוצאות שלה.
תיאורטית, ELISA מבוסס על הנתונים של אימונוכימיה מודרנית ואנזימולוגיה כימית, ידע על החוקים הפיזיקוכימיים של תגובת אנטיגן-נוגדנים, כמו גם על העקרונות העיקריים של כימיה אנליטית. הרגישות של ELISA ומשך הזמן שלה נקבעים על ידי מספר גורמים עיקריים: המאפיינים הקינטיים והתרמודינמיים של תגובת אנטיגן-נוגדנים, יחס הריאגנטים, פעילות האנזים והרזולוציה של שיטות הזיהוי שלה. באופן כללי, ניתן לתאר את התגובה של אנטיגן-נוגדן על ידי סכמה פשוטה:
+[AG]↔[ATAG]
מגוון אובייקטי המחקר החל מתרכובות במשקל מולקולרי נמוך ועד וירוסים וחיידקים, כמו גם מגוון רחב במיוחד של משימות הקשורות למגוון תנאים לשימוש ב-ELISA, קובעים את הפיתוח של מספר רב ביותר של גרסאות של שיטה זו. .
כל וריאנט ELISA מכיל 3 שלבי חובה:
1. שלב ההכרה של תרכובת הבדיקה על ידי נוגדן ספציפי לה, המוביל להיווצרות קומפלקס חיסוני;
2. שלב היווצרות החיבור של המצומד עם קומפלקס החיסון או אתרי קישור חופשיים;
3. שלב המרת תווית האנזים לאות רשום. הסיווג של שיטות ELISA מבוסס על מספר גישות:
1. לפי סוג הריאגנטים הקיימים בשלב הראשון של ELISA, מבדילים בין שיטות תחרותיות ולא תחרותיות.
א) ב-ELISA תחרותי, בשלב הראשון, המערכת מכילה הן את התרכובת המנותחת והן האנלוגי שלה, מסומנים עם האנזים ומתחרים על אתרי קישור ספציפיים איתו.
ב) עבור שיטות לא תחרותיות, אופיינית הנוכחות במערכת בשלב הראשון של התרכובת המנותחת בלבד ומרכזי הקישור הספציפיים לה.
2. כל שיטות ELISA מחולקות להומוגניות והטרוגניות.
אם כל שלושת השלבים של ELISA מבוצעים בתמיסה ובין השלבים העיקריים אין שלבים נוספים של הפרדה של קומפלקסים חיסוניים שנוצרו ממרכיבים שאינם מגיבים, השיטה שייכת לקבוצת ההומוגניים.
הבסיס של ELISA הומוגנית, המשמש בדרך כלל לקביעת חומרים בעלי משקל מולקולרי נמוך, הוא עיכוב פעילות האנזים כאשר הוא משולב עם אנטיגן או נוגדן. פעילות האנזים משוחזרת כתוצאה מתגובת אנטיגן-נוגדנים.
כאשר נוגדן נקשר לאנטיגן המכיל תווית אנזים, פעילות האנזים מעוכבת ב-95% ביחס למצע בעל משקל מולקולרי גבוה, דבר הנובע מהדרה סטרית של הסובסטרט מהמרכז הפעיל של האנזים. ככל שריכוז האנטיגן עולה, יותר נוגדנים נקשרים ונשמרים יותר מצומדים חופשיים של אנטיגן-אנזים שיכולים לבצע הידרוליזה של המצע במשקל מולקולרי גבוה. הניתוח מתבצע מהר מאוד, נדרשת דקה אחת לקביעה אחת. רגישות השיטה גבוהה למדי. עם זה, אתה יכול לקבוע את החומר ברמה של picomoles.
עבור שיטות הטרוגניות, אופייני לבצע אנליזה במערכת דו-פאזית בהשתתפות שלב מוצק - נשא, ושלב חובה של הפרדה של קומפלקסים חיסוניים ממרכיבים שאינם מגיבים (כביסה) הנמצאים בשלבים שונים (נוצרים קומפלקסים חיסוניים נמצאים על השלב המוצק, וקומפלקסים שאינם מגיבים נמצאים בתמיסה). שיטות הטרוגניות, שבהן היווצרות קומפלקסים חיסוניים בשלב הראשון מתבצעת על השלב המוצק, נקראות שיטות מוצקות.
שיטות מסווגות כהומוגניות-הטרוגניות, אם השלב הראשון - היווצרות של קומפלקסים ספציפיים מתרחשת בתמיסה, ולאחר מכן שלב מוצק עם מגיב מקובע משמש להפרדת הרכיבים.
3. לפי עקרון קביעת החומר הנבדק:
א) קביעה ישירה של ריכוז החומר (אנטיגן או נוגדן) לפי מספר מרכזי הקישור המתקשרים איתו. במקרה זה, תווית האנזים תהיה בקומפלקס הספציפי של AG-AT שנוצר. ריכוז האנליט יהיה פרופורציונלי ישירות לאות הרשום.
ב) קביעת ריכוז החומר לפי ההפרש בין המספר הכולל של אתרי הקישור לאתרי הקישור החופשיים הנותרים. במקרה זה, ריכוז האנליט יגדל, והאות המתועד יקטן, לכן, במקרה זה, יש תלות הפוכה בגודל האות המוקלט.
5.2 מאפיינים של הרכיבים המשמשים ב-ELISA.
אנזימים.
לתוויות האנזים יש אפקט קטליטי חזק ביותר; מולקולת אנזים אחת יכולה להגיב עם מספר רב של מולקולות מצע. לפיכך, ניתן לזהות ולכמת אנזים הקיים בכמויות זניחות על ידי יצירת תוצרים, התגובה שהוא מזרז. יתרון נוסף של שימוש באנזימים כתוויות נובע מהימצאות במולקולה של קבוצות פונקציונליות רבות (סולפהדריל, קרבוקסיל, שאריות טירזין וכו'), שדרכן ניתן לחבר מולקולות ליגנד קוולנטיות.
לסמנים אנזימטיים המשמשים ב-ELISA צריכים להיות המאפיינים הבאים:
- פעילות גבוהה ויציבות של האנזים בתנאי אנליזה, במהלך שינוי ובצימוד עם נוגדנים או חלבונים אחרים;
- נוכחות מצעים רגישים ופשטות השיטה לקביעת התוצרים או המצעים של התגובה האנזימטית;
- אפשרות התאמה של מערכות מצע לחיזוק נוסף;
- היעדר האנזים ומעכביו בנוזל הביולוגי הנחקר.
ELISA יכולה להשתמש בלפחות 15 אנזימים שונים. פרוקסידאז חזרת (HRP), פוספטאז אלקליין (AP) ו-β-D-galactosidase מצאו את השימוש הגדול ביותר, בהתאם לדרישות לעיל. שלושתם יציבים ומזרזים תגובות רגישות ביותר. בנוסף, ניתן לזהות את התוצרים הנובעים מהתגובות המזרזות על ידי אנזימים אלו, בהתאם למצע המשמש, לא רק בשיטות קולורימטריות, אלא גם בשיטות פלואורסצנטיות. אנזימים אחרים משמשים בתדירות נמוכה בהרבה. זה מוסבר על ידי פעילות ספציפית נמוכה יותר שלהם בהשוואה ל-HRP ו-AP.
מצעים.
בחירת המצע נקבעת בעיקר על ידי האנזים המשמש כתווית, שכן תגובת האנזים-סובסטרט היא מאוד ספציפית.
דרישות בסיסיות למצע:
– הבטחת רגישות גבוהה של השיטה בזיהוי האנזים המצומד;
- היווצרות של מוצרים מוגדרים היטב (למשל, צבעוניים) של תגובת האנזים-סובסטרט;
– המצע חייב להיות בטוח, זול, נגיש ונוח לשימוש.
לעתים קרובות יותר, משתמשים במצעים כרומוגניים, אשר, כאשר נהרסים, יוצרים חומר צבעוני. מבטיח שימוש במצעים עתירי אנרגיה - ניאון, כימילומינסצנטי. השימוש במצעים כאלה מאפשר באופן תיאורטי להגביר את הרגישות של ELISA בשני סדרי גודל.
היווצרות מצומדות.
מצומד הוא אנטיגן או נוגדן המסומן בתווית אנזים. היווצרות של מצומד היא אחד השלבים החשובים ב-ELISA.
בעת יצירת המצומד, נבחרת שיטה אופטימלית כזו להחדרת תווית אנזים כך ששני מרכיבי המצומד ישמרו על פעילותם הביולוגית: האנזים - יכולת האינטראקציה עם הסובסטרט, והאנטיגן או הנוגדן - אנטיגניות וקשירת אנטיגן. פעילות, בהתאמה. הנוכחות של אנטיגן מסומן ומטוהר במיוחד מאפשרת שימוש בשיטות תחרותיות. במקרה זה, ניתן למדוד בשלב הסופי את הפעילות של המצומד שאינו קשור לנוגדנים מקובעים, מה שנמנע מהליך הכביסה והופך את הניתוח לנוחה יותר. עם זאת, אנטיגנים מגוונים בתכונות הפיזיקליות ובמבנה שלהם, מה שאומר שאי אפשר לפתח שיטות אוניברסליות להשגת מצומד עם אנטיגן. במקרה זה, השגת מצומד אנטיגן-אנזים הוא אתגר נפרד. ההכנה של נוגדנים מסומנים עבור ELISA נגישה יותר מבחינה שיטתית.
צימוד של אנזים עם חלבונים פעילים מבחינה אימונוכימית מתבצע בשיטות שונות: קישור צולב כימי, קישור קוולנטי של מולקולת אנזים ל-AG או AT ויצירת תרכובות באמצעות קשרים לא קוולנטיים, למשל, כאשר החיבור בין אנזים ו-AG או AT מתבצעים באופן אימונולוגי, באמצעות אינטראקציה של אנטיגן-נוגדנים.
השיטות הקוולנטיות הנפוצות ביותר להכנת מצומדים. בחירת תגובת הקישור נקבעת לפי סוג הקבוצות הפונקציונליות הזמינות במולקולות החלבון הללו. גלוטראלדהיד, נתרן פריודאט וכו' משמשים כריאגנטים המשמשים להחדרת האנזים למולקולות אנטיגן ונוגדנים.
ישנן שיטות חד-שלביות ודו-שלביות להשגת מצומדים באמצעות גלוטאראלדהיד. יכולים להיווצר מצומדים בגדלים שונים עם פעילות אנזימטית מופחתת (15 - 60% מהאנזים החופשי). המצומד המתקבל בגודל גדול יכול לעכב באופן סטרי את קביעת החומר הנבדק. מצומדים במשקל מולקולרי נמוך יחסית מורכבים מקטע Fab וממולקולת אנזים אחת.
כתוצאה מסינתזה דו-שלבית, המורכבת מהכנת שלב אחר שלב של אנזים שעבר שינוי תחילה עם חומר מקשרים, בידוד שלו, ולאחר מכן האינטראקציה שלו עם אנטיגן (נוגדן), מולקולות של נוצר הרכב הומוגני המכיל 1-2 מולקולות אנזים לכל מולקולת אימונוגלובולין ושומר על פעילות אנזימטית ואימונולוגית גבוהה. עם זאת, הכמות של מצומדים כאלה שנוצרו קטנה (עבור פרוקסידאז חזרת היא 5-10%).
השיטה להשגת מצומדי אימונופראוקסידאז, המבוססת על חמצון של מרכיב הפחמימות באנזים עם נתרן פריודט (הקשירה של הפראוקסידאז למצומד מגיעה ל-70-90% מהכמות ההתחלתית של האנזים), מצאה את היישום המעשי הגדול ביותר.
מצומד אמין חייב להיות בעל המאפיינים הבאים:
נמר נוגדן גבוה וזיקה גבוהה לאנטיגן כך שניתן להשתמש בו בדילול גבוה ובכך להפחית קישור לא ספציפי;
ספציפיות מספקת בגידול עבודה;
הדומיננטיות של צורות מונומריות על פני אלו פולימריות, כי צורות פולימריות נוטות להיצמד באופן לא ספציפי לפלסטיק, וכתוצאה מכך רמת רקע גבוהה של תגובה;
היחס המולארי האופטימלי בין האנזים לנוגדנים (היחס האופטימלי הוא בערך 1:1);
פעילות אנזימטית מספקת של המצומד. תכונה זו נקבעת בעיקר על ידי תנאי הצימוד והיחס בין מולקולות האנזים והנוגדנים בצמוד.
5.3 שיטות ELISA הטרוגניות.
ELISA הטרוגניים (או ELISA-phase solid) כוללות שיטות שבהן האנליט נמצא בשני שלבים. כדי להפריד בין מרכיבי תגובה אימונוכימית משתמשים בפאזה מוצקה (נשא בלתי מסיס, לרוב פלסטיק) שעליו נוגדנים או אנטיגן משותק, שנשטף בכל שלב על מנת להסיר תוצרי ביניים של רכיבים שלא הגיבו.
אימוביליזציה יכולה להתבצע על ידי קשירה קוולנטית של נוגדנים (אנטיגנים) לנשא מופעל באמצעות גישות כימיות, כמו גם על ידי ספיחה פיזית של נוגדנים (אנטיגנים) על פני השטח של פולימרים מוצקים (לדוגמה, יריעות פוליסטירן). בספרות זרה, כיוון זה נקרא מבחן ELISA או מבחן האימונוסורבנט המקושר אנזים.
ELISA לא תחרותי לזיהוי אנטיגן באמצעות נוגדנים ספציפיים המסומנים באנזים ונוגדנים מקובעים כדוגמה.
תמיסה המכילה את האנטיגן המנותח מתווספת לנשא עם נוגדנים מקובעים. במהלך הדגירה נוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדנים ספציפי. לאחר מכן הנשא נשטף מאנטיגנים לא קשורים ומוסיפים נוגדנים מסומנים - המצומד. כמות המצומדים הקשורים עומדת ביחס ישר לכמות האנטיגן בדגימת הבדיקה. לאחר דגירה שנייה והסרה של עודף מצומד, מוסיפים מצע כרומוגני לאנזים בו נעשה שימוש, אשר משנה את צבעו בפעולת האנזים, כלומר מתרחשת תגובה אנזימטית עם צביעה של התמיסה בבארות. מידת הצביעה עומדת ביחס ישר למספר הנוגדנים הספציפיים המסומנים באנזים, האנזים ובהתאם לאנטיגן הנבדק. מדידות של הצפיפות האופטית של התמיסה בבארות בגל מסוים (בהתאם למצע בו נעשה שימוש) מתבצעות באמצעות ספקטרופוטומטרים מיוחדים המותאמים לקוראי מיקרופלט. ריכוז האנטיגן בדגימה נכמת על ידי השוואת התוצאות עם עקומת כיול של התלות של הצפיפות האופטית של התמיסה בריכוז תמיסת האנטיגן הסטנדרטית.
איור 7
מאחר שבשלב זיהוי קומפלקס אימונו ספציפי, האנטיגן נקשר למולקולות של נוגדנים מקובעים ומסומנים, בספרות שיטה זו מכונה לרוב שיטת "סנדוויץ'" (מהאנגלית sandvich) או שיטת ELISA דו-מרכזית (מ. מבחן שני אתרים באנגלית).
שיטה זו יכולה לשמש רק כדי לנתח אנטיגנים שיש להם לפחות שני דטרמיננטים אנטיגנים על פני השטח שלהם. זה לא מקובל לניתוח של מספר רב של אנטיגנים חד ערכיים (תרופות, חומרי הדברה וכו ').
היתרון העיקרי של שיטה זו הוא הרגישות הגבוהה שלה. גבול הגילוי של תרכובות בשיטה זו מגיע כיום לערך בסדר גודל של 10-21 מול, המתאים לזיהוי של 600 מולקולות בלבד של האנליט בדגימה. רגישות מרבית מושגת כאשר כל תגובה אימונולוגית מתבצעת במצב שיווי משקל, המשפיע על משך הניתוח, שעומד בממוצע על 4-6 שעות. ELISA לא תחרותי לגילוי נוגדנים באמצעות נוגדנים משניים המסומנים באנזים ואנטיגנים משועממים כדוגמה.
הסרום שייבדק מתווסף לאנטיגן המשובש. לאחר דגירה ושטיפת נוגדנים לא קשורים, מוסיפים נוגדנים משניים מסומנים ספציפיים לנוגדנים המנותחים. לאחר דגירה משנית והסרה של עודף נוגדנים משניים מסומנים, תכולת תווית האנזים על הנשא היא פרופורציונלית לריכוז הנוגדנים הספציפיים בסרום.
סכימה זו היא אחת ה-ELISA הנפוצות ביותר לזיהוי נוגדנים, מכיוון שהיא מאפשרת זיהוי של נוגדנים לאנטיגנים שונים.
ELISA תחרותי הטרוגנית לאיתור אנטיגן באמצעות אנטיגן מסומן ונוגדנים מקובעים כדוגמה.
לנוגדנים המקובעים על הנשא מוסיפים תמיסה המכילה את האנטיגן המנותח וריכוז קבוע של מצומד האנטיגן-אנזים. לאחר הדגירה, הנשא נשטף מאנטיגן חופשי ומסומן שאינו קשור ונרשמת הפעילות האנזימטית על הנשא, שהיא ביחס הפוך לריכוז האנטיגן הנקבע.
5.4 שיטת ELISA הומוגנית.
בדיקת אנזים הומוגניים (HIFA) הוא הסוג הפשוט ביותר של ELISA. כאשר הוא מוגדר, אחד המשתתפים בתגובה החיסונית (בדרך כלל אנטיגן בעל משקל מולקולרי נמוך) מסומן באנזים, ומהלך היווצרות קומפלקס אנטיגן-נוגדנים מנוטר על ידי רישום שינוי בפעילות האנזים.
הפרעה כזו בפעילות האנזימטית יכולה להתרחש או עקב ניתוק מרחבי של האנזים והמצע, או עקב שינויים קונפורמציוניים במולקולת האנזים הנלווים להיווצרות הקומפלקס החיסוני. ל-GIFA יש מספר יתרונות משמעותיים על פני שיטות אימונוכימיות אחרות. ראשית, ביטוי גבוה (כל הניתוח באמצעות GIFA לוקח דקות ואפילו שברירי דקות).
אורז.8 אפשרויות ELISA הומוגניות(A - השפעת ניתוק האנזים (F) והמצע (C) עקב הפרעות סטריות במהלך האינטראקציה של האנטיגן (Ag) והנוגדן (Ab); B - ההשפעה של שינוי בקונפורמציה של האנזים במהלך היווצרות קומפלקס אנטיגן-נוגדנים).
שנית, לשיטה יש שלב אחד ואינה דורשת שלבי כביסה עמלניים וגוזלים זמן. ולבסוף, שלישית, השיטה דורשת נפחים מינימליים (8-50 µl) וכמויות של דגימה ביולוגית או קלינית. עם זאת, לשיטת HIFA יש חיסרון אחד משמעותי ביותר - ניתן להשתמש בה ליצירת מערכות בדיקה אבחנתיות רק לאנטיגנים במשקל מולקולרי נמוך. רק במקרה זה, הנוגדן, באינטראקציה עם האנטיגן, יכול להגן או לשנות ביעילות את מולקולת האנזים הקשורה לאנטיגן זה. בהקשר זה (למרות הפשטות לכאורה והיתרונות הברורים על פני שיטות אחרות), על בסיס HIFA נוצרו ערכות אבחון לאיתור הורמונים, פפטידים, חומרים רפואיים ונרקוטיים בלבד, וכמה חלבונים במשקל מולקולרי נמוך.
5.5 "סנדוויץ'" - גרסה של ELISA לזיהוי אנטיגנים.
אנטיגנים המתגלים באמצעות וריאנט ELISA זה חייבים להיות בעלי אפיטופים קושרים נוגדנים מרובים או להיות בעלי אפיטופים חוזרים ומופרדים במרחב של אותה סגוליות.
בעת ביצוע גרסה זו של ELISA, נוגדנים פולי או חד שבטיים ספציפיים מאוד הנספגים על השלב המוצק מודגרים עם דגימת הבדיקה. לאחר הליך הכביסה, מוסיפים לבארות נוגדנים המסומנים באנזים (מצומד) לאותו אנטיגן, ולאחר מכן מבוצעים כל שאר שלבי התגובה. יעילות היווצרות קומפלקס ספציפי בכל שלב של הניתוח תלויה בקבוע הקישור של תגובת האנטיגן-נוגדן.
ELISA (assay immunosorbent-enzyme-linked, ELISA - אנגלית) נכנסה לחיי הרפואה המעשית במקום אחר בשנות ה-60 של המאה הקודמת. משימתו הראשונית הייתה מחקר היסטולוגי למטרות מדעיות, שהוגבל לחיפוש וזיהוי המבנה האנטיגני של תאי אורגניזם חי.
שיטת ELISA מבוססת על אינטראקציה של אנטיגנים ספציפיים (AT) ואנטיגנים קשורים (AG) עם יצירת קומפלקס אנטיגן-נוגדנים, המתגלה באמצעות אנזים. עובדה זו הובילה את המדענים לרעיון שניתן להשתמש בשיטה למטרות אבחון כדי לזהות אימונוגלובולינים ספציפיים ממעמדות שונים המעורבים בתגובה החיסונית לזיהום מסוים. וזו הייתה פריצת דרך באבחון מעבדה קליני!
השיטה החלה להיות בשימוש פעיל רק בתחילת שנות ה-80, ולאחר מכן בעיקר במוסדות מיוחדים. מנתחי ה-ELISA הראשונים סופקו למרכזים ותחנות עירוי דם, לבתי חולים זיהומיות ומין, שכן האיידס האימתני, שנולד ביבשת אפריקה, הופיע אצלנו באופק ומיד הצטרף לזיהומים "הישנים", דרש אמצעים מיידיים לאבחון ו חיפוש אחר תרופות טיפוליות שמשפיעות עליו.
היקף שיטת ELISA
האפשרויות של בדיקת אנזים אימונו הן נרחבות באמת.עכשיו קשה לדמיין איך אפשר להסתדר בלי מחקרים כאלה, המשמשים ממש בכל ענפי הרפואה. נראה ש-ELISA יכול לעשות באונקולוגיה? מסתבר שזה יכול. והרבה. יכולת הניתוח למצוא סמנים האופייניים לסוגים מסוימים של ניאופלזמות ממאירות עומדת בבסיס הגילוי המוקדם של גידול, כאשר הוא עדיין לא מזוהה בדרך אחרת בשל גודלו הקטן.
לאבחון מעבדה קליני מודרני (CDL), בנוסף לסמני הגידול, יש ארסנל משמעותי של פאנלים עבור ELISA ומשתמש בהם לאבחון מצבים פתולוגיים שונים (תהליכים זיהומיים, הפרעות הורמונליות) ולנטר תרופות פרמצבטיות על מנת לזהות את השפעתן על המטופל. גוף ודרך אגב לא רק אנושי. נכון להיום, בדיקת אנזים חיסונית נמצאת בשימוש נרחב בשירות הווטרינרי, מכיוון ש"אחינו הקטנים" גם רגישים למחלות רבות, מהן, לפעמים, הם סובלים מאוד.
לכן, ELISA, בשל הרגישות והספציפיות שלה, יכולה לקבוע מדגימת דם שנלקחה מוריד:
- מצב הורמונלי (הורמוני בלוטת התריס ואדרנל, הורמוני מין);
- נוכחות של זיהום ויראלי וחיידקי (HIV, B ו-C, כלמידיה, עגבת, וכן, כמו גם מחלות רבות אחרות הנגרמות על ידי מיקרואורגניזמים פתוגניים);
- עקבות של פעילות חיונית של מיקרואורגניזמים שהניעו את התהליך הזיהומי, שהסתיים בהצלחה ועבר לשלב היווצרות תגובה חיסונית לפתוגן זה. עקבות כאלה, כלומר נוגדנים, נשארים במקרים רבים במחזור הדם לכל החיים, מה שמגן על אדם מפני הדבקה חוזרת.
מהי המהות של IF?
שיטת האנזים האימונואסאי מאפשרת לקבוע לא רק את נוכחות הפתוגן עצמו (ניתוח איכותי), אלא גם את התוכן הכמותי שלו בסרום הדם של המטופל.
מינון ויראלי או חיידקי משפיע באופן משמעותי על מהלך התהליך הזיהומי ועל תוצאותיו, לכן, לניתוח כמותי תפקיד חשוב באבחון וטיפול במחלות בצורות ובשלבים שונים.
עם זאת, כאשר אנו מכירים מבחני אימונוסורבנט הקשורים לאנזים כשיטת ELISA, אנחנו אפילו לא חושבים על איך היא מצליחה לכסות מגוון כה רחב של מיקרואורגניזמים המאכלסים את הפלנטה שלנו, שרבים מהם מהווים איום ישיר על בריאותם וחיי בני האדם. בעלי חיים. העובדה היא של-ELISA אפשרויות רבות (לא תחרותיות ותחרותיות - ישירות ועקיפות), שכל אחת מהן פותרת את הבעיה שלה ובכך מאפשרת חיפוש ממוקד.
כדי לזהות אימונוגלובולינים ממעמד כזה או אחר, נעשה שימוש בלוח פוליסטירן מסורתי עם 96 בארות (טבליות), שבבארותיו מרוכזים חלבונים רקומביננטיים נספגים בשלב המוצק. הנוגדנים או האנטיגנים שנכנסו לבאר עם סרום הדם מוצאים חפץ "מוכר" ויוצרים איתו קומפלקס (AG - AT), אשר מקובע על ידי מצומד האנזים יתבטא כשינוי בצבע הבאר. בעת קריאת התוצאות.
בדיקת אנזים חיסונית מתבצעת על מערכות בדיקה בעלות ספציפיות מסוימת, העשויה במעבדות מיוחדות ומצוידות בכל הרכיבים המגיבים הדרושים. ניתן לבצע מחקרים באמצעות מכונות כביסה ("מכבסים") וקריאה ספקטרופוטומטרים, כאשר רוב העבודה הידנית מעורבת. במכונות אוטומטיות מלאות, שחרור המעבדה מהזלפה מונוטונית, כביסה ומשימות שגרתיות אחרות, כמובן, זה מהיר ונוח יותר לעבוד, אבל לא כל המעבדות יכולות להרשות לעצמן מותרות שכזה ולהמשיך לעבוד בדרך הישנה - במכשירים חצי אוטומטיים.
פרשנות התוצאות של ELISA היא בסמכותו של הרופא לאבחון מעבדה, בעוד שהתכונה הטבועה כמעט בכל התגובות האימונוכימיות לתת תשובות חיוביות שגויות או שליליות שקריות נלקחת בחשבון בהכרח.
וידאו: בדיקת אנזים אימונו מודרנית
תוצאות ELISA על הדוגמה של עגבת
ELISA מתאים לזיהוי של כל הצורות, ובנוסף, הוא משמש במחקרי מיון. לניתוח, נעשה שימוש בדם ורידי של המטופל שנלקח על בטן ריקה. בעבודה, צלחות עם ספציפיות מסוימת (AT class A, M, G) או סך נוגדנים משמשים.
בהתחשב בכך שנוגדנים בעגבת מיוצרים ברצף מסוים, ELISA יכולה לענות בקלות על השאלה מתי התרחש הזיהום ובאיזה שלב התהליך, וניתן להציג את פענוח התוצאות המתקבלות בצורה הבאה:
- IgM מציין את משך התהליך הזיהומי (עשוי להופיע במהלך החמרה של מחלות דלקתיות כרוניות);
- IgA קובע כי הזיהום אירע לפני יותר מחודש;
- IgG מצביע על כך שהזיהום נמצא בעיצומו או טיפול אחרון, אשר מתגלה בקלות בעת איסוף אנמנזה.
בעת בדיקת עגבת, הבארות השליליות (והביקורת השלילית) יישארו חסרות צבע, בעוד שהחיוביות (כמו הביקורת החיובית) יראו צבע צהוב עז עקב שינוי הצבע של הכרומוגן שנוסף במהלך הבדיקה. עם זאת, עוצמת הצבע לא תמיד תואמת את הבקרה, כלומר, הוא עשוי להיות מעט חיוור יותר או מעט צהבהב. מדובר בתוצאות מפוקפקות, אשר, ככלל, כפופות לבדיקה חוזרת תוך התחשבות חובה במדדים הכמותיים המתקבלים בספקטרופוטומטר, אך באופן כללי, הצבע עומד ביחס ישר למספר הקומפלקסים החיסונים (אנטיגנים ונוגדנים מקושרים אחד לשני).
המרגש ביותר מבין מבחני החיסון האנזימים - ELISA עבור HIV
ניתוח על, אולי יותר מאחרים, מעניין מגוון רחב של האוכלוסייה, כי עדיין לא ניתן לומר בוודאות שבעיות חברתיות רבות (זנות, התמכרות לסמים וכו') נעלמו. למרבה הצער, HIV משפיע לא רק על חלקים אלה של החברה האנושית, אתה יכול להידבק בנסיבות שונות שאינן קשורות להפקרות מינית או לשימוש בסמים. אבל אם יש צורך בבדיקת HIV, אז אתה לא צריך לפחד שכולם מסביב יגלו על ביקור במעבדה כזו. כעת אנשים שנדבקו ב-HIV מוגנים על פי חוק, ומי שיש לו ספקות יכול לפנות למשרדים אנונימיים שבהם הם יכולים לפתור את הבעיה ללא חשש מפרסום וגינוי.
בדיקת האנזים החיסונית המשמשת לאבחון זיהום ב-HIV הוא אחד המחקרים הסטנדרטיים העיקריים, אשר, עם זאת, דורשים תנאים מיוחדים, שכן הנושא רגיש מאוד.
הגיוני לבצע ELISA ל-HIV לאחר מגע מיני, עירוי דם, הליכים רפואיים אחרים הכרוכים בזיהום ובתום תקופת הדגירה ("חלון סרונטיבי"), אך יש לזכור כי פרק זמן זה אינו קבוע. זה יכול להסתיים תוך 14-30 ימים, או שזה יכול להימשך עד שישה חודשים, כך שהערך הממוצע נחשב למרווח בין 45 ל-90 ימים. דם נתרם עבור HIV באותו אופן כמו עבור זיהומים אחרים - מוריד על קיבה ריקה. התוצאות יהיו מוכנות בהתאם להצטברות החומר במעבדה ועומס העבודה שלו (בין יומיים ל-10 ימים), אם כי רוב המעבדות נותנות מענה באותו היום או למחרת.
מה ניתן לצפות מתוצאות HIV?
ELISA לזיהום ב-HIV מזהה נוגדנים לשני סוגים של הנגיף: HIV-1 (נפוץ יותר ברוסיה ובמדינות אחרות באירופה ובאסיה) ו-HIV-2 (נפוץ יותר במערב אפריקה).
המשימה של HIV ELISA היא לחפש נוגדנים מסוג G המתגלים בכל מערכות הבדיקה, אך בתקופה מאוחרת יותר, ונוגדנים מסוג A ו-M שזוהו בערכות בדיקה רקומביננטיות מהדור החדש, המאפשרות לזהות נוגדנים לכל המוקדם. שלבים (תקופת הדגירה היא חלון seronegative). ניתן לצפות לתשובות הבאות מ-ELISA:
- תוצאה חיובית ראשונית: הדם כפוף לבדיקה חוזרת במערכת בדיקה מאותו סוג, אך, אם אפשר, מסדרה אחרת ועל ידי אדם אחר (עוזר מעבדה);
- חוזר (+) כולל דגימת דם חדשה ממטופל עם מחקר שלה בדומה לניתוח הראשוני;
- התוצאה החיובית הבאה כפופה לניתוח התייחסות, המשתמש בערכות בדיקה ספציפיות ביותר (2-3 יח');
- תוצאה חיובית בשתי המערכות (או שלוש) נשלחת לאימונובלוטינג (אותה ELISA, אך מבוצעת בנפרד על ערכות בדיקה בעלות סגוליות גבוהה במיוחד).
המסקנה לגבי הדבקה ב-HIV נעשית רק על בסיס אימונובלוטינג. שיחה עם האדם הנגוע מתנהלת בסודיות מוחלטת. חשיפת סודות רפואיים ברוסיה, כמו גם במדינות אחרות, כפופה לענישה פלילית.
ניתוחים לכלמידיה וציטומגלווירוס על ידי בדיקת אנזים אימונו זכו אף הם לפופולריות מיוחדת, בשל העובדה שהם מאפשרים לקבוע את זמן ההדבקה, את שלב המחלה ואת היעילות של אמצעים טיפוליים.
במהלך ההקדמה, ניתן גם לצפות בהופעת נוגדנים ממעמדות שונים.בשלבים שונים של מצב פתולוגי הנגרם על ידי גורם זיהומי:
- ניתן לזהות IgM כבר שבעה ימים לאחר ההדבקה;
- IgA מצביע על כך שהזיהום חי בגוף יותר מחודש;
- IgG מאשרת את האבחנה של כלמידיה, עוזרת לעקוב אחר הטיפול ולקבוע את יעילותו. יש לציין כי נוגדנים מסוג G נשארים ומסתובבים בגוף ללא קשר למשך המחלה, לכן, לפירוש נכון של הניתוח, יש לקחת בחשבון ערכי ייחוס (נורמות), אשר על ידי הדרך, שונה עבור כל CDL: תוך התחשבות במותג של מערכת הבדיקה ובספציפיות של הריאגנטים הכלולים בסט. ערכי הנורמה מוזנים בטופס ליד תוצאת ELISA.
לגבי, כאן זה קצת שונה:נוגדנים מסוג M מופיעים בעוד כחודש וחצי, כלומר, תוצאה חיובית (IgM+) הופכת בשלב של זיהום ראשוני או במהלך הפעלה מחדש של זיהום סמוי ונשארת כזו בין 4 חודשים לשישה חודשים.
נוכחותם של נוגדנים מסוג G אופיינית להתפרצות של זיהום חריף ראשוני או זיהום חוזר. הניתוח קובע כי הנגיף קיים, אך אינו מספק מידע על שלב התהליך הזיהומי. בינתיים, קביעת נורמת הטיטר של IgG גם גורמת לקשיים, שכן היא תלויה לחלוטין במצב החיסוני של אדם מסוים, אשר, עם זאת, נקבע על ידי זיהוי של אימונוגלובולינים מסוג G. בהתחשב בהתנהגות זו של נוגדנים, באבחון של CMVI, יש צורך להעריך את יכולתם של נוגדנים מסוג G ליצור אינטראקציה עם CMV, על מנת "לנטרל" אותו מאוחר יותר (AT avidity). בשלב הראשוני של המחלה, IgG נקשר בצורה גרועה מאוד לאנטיגנים של הנגיף (תשוקה נמוכה) ורק אז הם מתחילים להראות פעילות, לכן, ניתן לדבר על עלייה בתשוקה של נוגדנים.
אנחנו יכולים לדבר על היתרונות של אנזים immunoassay במשך זמן רב, כי שיטה זו הצליחה לפתור בעיות אבחון רבות באמצעות דם ורידי בלבד. אין צורך בהמתנה ארוכה, בדאגות ובבעיות בנטילת חומר למחקר. בנוסף, מערכות הבדיקה ל-ELISA ממשיכות להשתפר והיום בו הבדיקה תיתן אמינות של 100% התוצאה לא רחוק.
וידאו: סרט חינוכי של אוניברסיטת מוסקבה לרפואה. Sechenov על היסודות של ELISA
כאשר נקבע ניתוח, בצע בדיקת ELISA לאיתור עגבת. שיטות לאבחון מעבדה. תוצאות ניתוח - כיצד לקבוע את הנורמה והסטיות. העלות של בדיקת אנזים אימונו.
ככלל, כל הזמן בעת יצירת קשר עם המרפאה, הרופאים רושמים בדיקות שונות. זה מאפשר להם לזהות זיהומים ומחלות שאדם סובל מהם. ELISA, או מה שנקרא אנזים immunoassay, היא דרך מצוינת להעריך את המערכת החיסונית של הגוף, ולזהות זיהום ושלב של המחלה על ידי נוכחות של נוגדנים.
אז מי מוקצה לבצע את הניתוח הזה ומהי בדיקת אנזים חיסונית? רופאים רושמים ניתוח זה אם לאדם יש את המחלות הבאות:
- פריחה על הגוף - תגובות אלרגיות.
- וירוסים - הרפס, ציטומגלווירוס.
- מחלות המועברות במגע מיני - עגבת, טריכומונס.
- פתולוגיה הקשורה לסרטן.
- נוירוסיפיליס.
בנוסף למחלות אלה, הניתוח נקבע כדי לקבוע את רמת ההורמון בדם. על סמך התוצאות, איכות הטיפול מוערכת. מהי עגבת כנראה כל אדם יודע, אבל לא מייצג את קנה המידה שלה, וכמה אנשים נגועים הולכים לידנו.
נכון לעכשיו, עגבת היא המחלה השכיחה ביותר. זוהי טרפונומה המשפיעה על גוף האדם. וכתוצאה מכך, כל האיברים הפנימיים של המטופל מושפעים.
זהו זיהום מסוכן מאוד, ולעתים קרובות קורה שהוא עלול לא להתבטא במשך זמן רב. לכן, אדם יכול להיות מוביל ומפיץ לאורך זמן מבלי לדעת שהוא חולה.
שיטת אבחון מעבדה
הרפואה לא עומדת במקום, ניתוחים מודרניים הפכו שונים באופן משמעותי מהשיטות הישנות לחקר הגוף. למרות שהם ביצעו את תפקידם בצורה מושלמת, לפעמים הם נאלצו לחכות שבועות וחודשים לתוצאות. זה כמובן לא היה נוח לאדם הנגוע. מהי הציפייה לתוצאה, עבר האדם החולה.
ניתוחים קלאסיים - גילוי עגבת בשיטת וסרמן, שיטת קאהן החלה לאבד את עמדותיהם והוחלפו בבדיקות כגון ELISA.
זוהי השיטה המודרנית ביותר לזיהוי זיהום בבני אדם. התוצאה מפוענחת באמצעות מחשב. זה מאפשר לך לקבוע בצורה מדויקת יותר תוצאה חיובית או בדיקה שלילית.
קרא גם בנושא
מה זה STD? תסמינים, טיפול
במהלך הפענוח מתבצע חיפוש אחר נוגדנים למחלות ספציפיות. וכתוצאה מהניתוח, ניתן היה לזהות זיהום כאשר התוצאה הייתה חיובית. שימוש ב-ELISA לאיתור עגבת מרמז על שימוש בשלוש קבוצות של אימונוגלובולינים:
- G, M, A - לאבחון הם החשובים ביותר.
- הם מיוצרים באדם נגוע אך ורק ברצף מסוים.
- קבע במהירות את שלב ההדבקה.
תוצאות ELISA - ניתוח נורמלי וחיובי
אם הוא מדבר על ניתוח ELISA עבור עגבת, אז במקרה זה קשה לומר שיש נורמה או סטייה. התוצאה בדרך כלל היא שלילית או חיובית. בנוסף, ישנם טיטרים הקובעים את כמות הנוגדנים בדם.
ישנן דקויות רבות בפענוח הניתוח, אם הוא הראה תוצאה חיובית, עדיין יהיה צורך לבצע את הניתוח מספר פעמים כדי להוציא את השיטה של תגובה חיובית כוזבת.
כפי שכבר נכתב, יש הרבה דקויות בעת פענוח הניתוח, ורק הרופא המטפל יכול לקבוע את התוצאה. אנו נותנים דוגמאות בטבלה, אשר ניתן להציג את התוצאות עבור בדיקת אנזים אימונו:
אל תתייאשו אם הניתוח הראה תוצאה חיובית. ככלל, בדיקות ובדיקות נוספות מתבצעות, בדרכים שונות, כדי לקבוע בצורה מדויקת יותר את האבחנה.
העלות של בדיקת אנזים אימונו
ככלל, העלות של ניתוח זה תלויה ישירות בניתוח עצמו ובזיהוי של זיהום ספציפי. קביעת סמנים לזיהום מסוגים שונים עולה בין 200 ל 350 רובל. וניתוח כזה מתבצע תוך יומיים.
ELISA היא השיטה הפופולרית והמודרנית ביותר לאבחון אורגניזם. השיטה הוכיחה את יעילותה באיתור זיהום, וקביעת תקופת ההדבקה המדויקת.
בהתחשב במדיניות התמחור, אנו יכולים לומר שהניתוח זמין לכל אדם בכל תקציב. זה מאפשר לרופא המטפל לקבל תמונה מלאה של הזיהום של אדם. הוא הראה את עצמו בתיק ולא אכזב את הרופאים. יחד עם זאת, לאחר שקיבל ניתוח, הרופא המטפל יכול להגיב מיד, לרשום טיפול בזמן.