שיטות לאבחון זיהום ב-HIV. כיצד מאבחנים זיהום ב-HIV? סימני מעבדה לא ספציפיים של זיהום ב-HIV

אבחון בזמן של זיהום HIV הופך למדד חשוב ביותר, שכן טיפול מוקדם יותר יכול לקבוע במידה רבה את המשך התפתחות המחלה ולהאריך את חיי המטופל. בשנים האחרונות חלה התקדמות משמעותית בתחום גילוי המחלה הנוראה הזו: מערכות הבדיקה הישנות מוחלפות במתקדמות יותר, שיטות הבדיקה נעשות נגישות יותר ודיוקן עולה משמעותית.

במאמר זה, נדבר על שיטות מודרניות לאבחון זיהום ב-HIV, אשר מועילות לדעת לטיפול בזמן בבעיה זו ושמירה על איכות החיים התקינה של המטופל.

שיטות לאבחון HIV

ברוסיה, לאבחון זיהום HIV, מתבצע הליך סטנדרטי הכולל שתי רמות:

  • מערכת בדיקת ELISA (ניתוח סקר);
  • סופג חיסון (IB).

ניתן להשתמש גם בשיטות אבחון אחרות:

  • מבחנים אקספרס.

מערכות בדיקת ELISA

בשלב הראשון של האבחון, בדיקת סקר (ELISA) משמשת לאיתור זיהום ב-HIV, המבוססת על חלבוני HIV שנוצרים במעבדות הלוכדות נוגדנים ספציפיים המיוצרים בגוף בתגובה לזיהום. לאחר האינטראקציה שלהם עם הריאגנטים (אנזימים) של מערכת הבדיקה, צבע המחוון משתנה. יתר על כן, שינויי צבע אלה מעובדים בציוד מיוחד, הקובע את תוצאת הניתוח שבוצע.

בדיקות ELISA כאלה מסוגלות להראות תוצאות תוך מספר שבועות לאחר כניסת זיהום HIV. ניתוח זה אינו קובע את נוכחות הנגיף, אלא מזהה ייצור של נוגדנים אליו. לעיתים, בגוף האדם, ייצור הנוגדנים ל-HIV מתחיל לאחר שבועיים לאחר ההדבקה, אך אצל רוב האנשים הם מיוצרים במועד מאוחר יותר, לאחר 3-6 שבועות.

ישנם ארבעה דורות של בדיקות ELISA עם רגישויות שונות. בשנים האחרונות נעשה שימוש תכוף יותר במערכות בדיקה מדור III ו-IV, המבוססות על פפטידים סינתטיים או חלבונים רקומביננטיים ובעלות ספציפיות ודיוק גבוהים יותר. ניתן להשתמש בהם כדי לאבחן זיהום ב-HIV, לנטר את שכיחות ה-HIV ולהבטיח בטיחות בעת בדיקת דם שנתרם. הדיוק של מערכות בדיקת ELISA דורות III ו-IV הוא 93-99% (רגישות יותר הן הבדיקות שמיוצרות במערב אירופה - 99%).

לביצוע בדיקת ELISA נלקחים 5 מ"ל דם מהוריד המטופל. בין הארוחה האחרונה לניתוח צריך להיות לפחות 8 שעות (ככלל, זה מבוצע בבוקר על בטן ריקה). בדיקה כזו מומלץ לבצע לא לפני 3 שבועות לאחר ההדבקה לכאורה (לדוגמה, לאחר קיום יחסי מין לא מוגנים עם בן זוג חדש).

תוצאות בדיקת ELISA מתקבלות לאחר 2-10 ימים:

  • תוצאה שלילית: מעידה על היעדר זיהום ב-HIV ואינה דורשת הפניה למומחה;
  • תוצאה שלילית שגויה: ניתן להבחין בשלבים המוקדמים של הזיהום (עד 3 שבועות), בשלבים המאוחרים יותר של איידס עם דיכוי חיסוני חמור ועם הכנת דם לא נכונה;
  • תוצאה חיובית שגויה: ניתן להבחין בה במחלות מסוימות ובמקרה של הכנת דם לא נכונה;
  • תוצאה חיובית: מעידה על הידבקות ב-HIV, מחייבת IB והפניית המטופל למומחה במרכז לאיידס.

מדוע בדיקת ELISA יכולה לתת תוצאות חיוביות שגויות?

ניתן לראות תוצאות חיוביות שגויות של בדיקת ELISA ל-HIV עם עיבוד לא תקין של דם או בחולים עם מצבים ומחלות כאלה:

  • מיאלומה נפוצה;
  • מחלות זיהומיות שנגרמו על ידי נגיף אפשטיין-בר;
  • מדינה אחרי;
  • מחלות אוטואימוניות;
  • על רקע הריון;
  • מצב לאחר חיסון.

מהסיבות שתוארו לעיל, נוגדנים לא ספציפיים בעלי תגובה צולבת עשויים להיות נוכחים בדם, שייצורם לא עורר על ידי זיהום HIV.

בשנים האחרונות ירדה באופן משמעותי תדירות התוצאות החיוביות הכוזבות עקב שימוש במערכות בדיקות מדור III ו-IV, המכילות פפטיד וחלבונים רקומביננטיים רגישים יותר (הם מסונתזים באמצעות הנדסה גנטית חוץ גופית). לאחר השימוש בבדיקות ELISA כאלה, שכיחות התוצאות החיוביות השגויות ירדה משמעותית והיא כ-0.02-0.5%.

תוצאה חיובית כוזבת אינה אומרת שאדם נגוע ב-HIV. במקרים כאלה, ארגון הבריאות העולמי ממליץ על בדיקת ELISA נוספת (דור IV חובה).

הדם של המטופל נשלח למעבדת התייחסות או בוררות המסומנת "חזרה" ונבדק על מערכת בדיקת ELISA דור IV. אם התוצאה של הניתוח החדש שלילית, אז התוצאה הראשונה מזוהה כשגויה (חיובי שגוי) ו-IB לא מבוצע. אם התוצאה חיובית או מפוקפקת במהלך הבדיקה השנייה, המטופל נדרש לעבור IB תוך 4-6 שבועות כדי לאשר או להפריך זיהום ב-HIV.

סיכה חיסונית

אבחנה סופית של זיהום ב-HIV יכולה להיעשות רק לאחר קבלת תוצאה חיובית של ספיגת מערכת החיסון (IB). ליישומו, נעשה שימוש ברצועת ניטרוצלולוזה, עליה מורחים חלבונים ויראליים.

דגימת דם ל-IB מתבצעת מוריד. לאחר מכן הוא עובר טיפול מיוחד והחלבונים הכלולים בסרום שלו מופרדים בג'ל מיוחד לפי מטען ומשקלם המולקולרי (המניפולציה מתבצעת בציוד מיוחד בהשפעת שדה חשמלי). רצועת ניטרוצלולוזה מונחת על הג'ל בסרום הדם והספיגה ("ספיגה") מתבצעת בתא מיוחד. הרצועה עוברת עיבוד ואם החומרים המשמשים מכילים נוגדנים ל-HIV, הם נקשרים לרצועות האנטיגניות ב-IB ומופיעים כקווים.

IB נחשב חיובי אם:

  • על פי קריטריונים של CDC אמריקאי - יש שתיים או שלוש שורות gp41, p24, gp120 / gp160 על הרצועה;
  • לפי קריטריונים של ה-FDA האמריקאי - יש שני קווים p24, p31 וקו gp41 או gp120 / gp160 על הרצועה.

ב-99.9% מהמקרים, תוצאה חיובית של IB מצביעה על זיהום ב-HIV.

בהיעדר שורות - IB הוא שלילי.

כאשר מזהים קווים עם gp160, gp120 ו-gp41, IB מוטל בספק. ניתן לזהות תוצאה כזו כאשר:

  • מחלות אונקולוגיות;
  • הֵרָיוֹן;
  • עירויי דם תכופים.

במקרים כאלה, מומלץ לבצע מחקר שני באמצעות ערכה של חברה אחרת. אם לאחר IB נוסף, התוצאה נותרת בספק, אזי יש צורך במעקב במשך שישה חודשים (IB מתבצע כל 3 חודשים).

תגובת שרשרת פולימראז

בדיקת PCR יכולה לזהות את ה-RNA של הנגיף. הרגישות שלו די גבוהה והוא מאפשר לזהות זיהום ב-HIV כבר 10 ימים לאחר ההדבקה. במקרים מסוימים, PCR יכול לתת תוצאות חיוביות שגויות, מכיוון שהרגישות הגבוהה שלו יכולה להגיב גם לנוגדנים לזיהומים אחרים.

טכניקת אבחון זו יקרה, דורשת ציוד מיוחד ומומחים מוסמכים ביותר. סיבות אלו אינן מאפשרות לבצע אותה במהלך בדיקות המוניות של האוכלוסייה.

PCR משמש במקרים כאלה:

  • לגלות HIV בילודים שנולדו לאמהות נגועות ב-HIV;
  • לגלות HIV ב"תקופת החלון" או במקרה של ספק IB;
  • לשלוט בריכוז HIV בדם;
  • לחקר דם תורם.

רק על ידי בדיקת PCR, האבחנה של HIV אינה מתבצעת, אלא מתבצעת כשיטת אבחון נוספת ליישוב מחלוקות.


שיטות אקספרס

אחד החידושים באבחון HIV הפך לבדיקות מהירות, שניתן להעריך את תוצאותיהן תוך 10-15 דקות. התוצאות היעילות והמדויקות ביותר מתקבלות בבדיקות אימונוכרומטוגרפיות המבוססות על עקרון הזרימה הנמית. הם רצועות מיוחדות שעליהן מורחים דם או נוזלי בדיקה אחרים (רוק, שתן). בנוכחות נוגדנים ל-HIV, לאחר 10-15 דקות, מופיע פס צבעוני ובקרה בבדיקה - תוצאה חיובית. אם התוצאה שלילית, רק שורת הבקרה מופיעה.

כמו בבדיקות ELISA, יש לאשר את תוצאות הבדיקה המהירות על ידי ניתוח IB. רק אז ניתן לאבחן זיהום ב-HIV.

יש ערכות אקספרס לבדיקה ביתית. בדיקת OraSure Technologies1 (ארה"ב) מאושרת על ידי ה-FDA, זמינה ללא מרשם וניתן להשתמש בה כדי לזהות HIV. לאחר הבדיקה, במקרה של תוצאה חיובית, מומלץ למטופל לעבור בדיקה במרכז מומחה לאישור האבחנה.

שאר הבדיקות לשימוש ביתי טרם אושרו על ידי ה-FDA והתוצאות שלהן עשויות להיות מוטלות בספק רב.

למרות העובדה שבדיקות מהירות נחותות בדייקנות מבדיקות ELISA דור IV, הן נמצאות בשימוש נרחב לבדיקות נוספות של האוכלוסייה.

ניתן להיבדק להידבקות ב-HIV בכל מרפאה, בבית החולים האזורי המרכז או במרכזי איידס מיוחדים. בשטחה של רוסיה, הם מוחזקים בסודיות מוחלטת, או בעילום שם. כל מטופל יכול לצפות לקבל ייעוץ רפואי או פסיכולוגי לפני או אחרי הניתוח. עבור בדיקות HIV תצטרכו לשלם רק במוסדות רפואיים מסחריים, ובמרפאות ציבוריות ובבתי חולים הן מתבצעות ללא תשלום.

למידע על איך אתה יכול להידבק ב-HIV ואיזה מיתוסים קיימים לגבי האפשרויות להידבק, קרא


... האבחנה של כל מחלה זיהומית מבוססת על השוואה של נתונים אפידמיולוגיים, קליניים ומעבדתיים, והפרזה בערך של אחת מקבוצות הנתונים הללו עלולה להוביל לטעויות אבחון.

אבחון זיהום ב-HIV כולל שני שלבים:
אנישלב - ביסוס העובדה האמיתית של הדבקה ב-HIV ;
IIשלב - קביעת שלב המחלה .

קביעת עובדת ההידבקות ב-HIV

ביסוס העובדה של זיהום HIV עצמו (כלומר, זיהוי אנשים נגועים ב-HIV), בתורו, כולל גם שני שלבים:
אני במה- בדיקת אימונוסורבנט מקושרת(אם): שיטת ELISA היא סקר (סלקטיבי) - בחירה של אנשים נגועים ככל הנראה, כלומר מטרתה לזהות פרטים חשודים ולסנן אנשים בריאים; נוגדנים ל-HIV מתגלים באמצעות נוגדנים אחרים לנוגדנים הרצויים (נוגדנים נגד נוגדנים אחרים). נוגדנים "עוזרים" אלו מסומנים באנזים. כל בדיקות הסקר חייבות להיות רגישות ביותר כדי לא לפספס את המטופל. בגלל זה, הספציפיות שלהם לא גבוהה במיוחד, כלומר, ELISA יכול לתת תגובה חיובית ("כנראה חולה") באנשים לא נגועים (למשל, בחולים עם מחלות אוטואימוניות: שיגרון, זאבת אריתמטית מערכתית וכו'). שכיחות תוצאות חיוביות כוזבות בעת שימוש במערכות בדיקה שונות נעה בין 0.02 ל-0.5%. אם ELISA של אדם נתן תוצאה חיובית, אז כדי לאשר את העובדה של זיהום HIV, יש צורך להיבדק עוד יותר. כאשר מבצעים ELISA ב-3-5% מהמקרים, יתכנו תוצאות שליליות כוזבות - אם הזיהום התרחש לאחרונה יחסית ורמת הנוגדנים עדיין נמוכה מאוד, או בשלב הסופני של המחלה, המאופיינת בפגיעה חמורה ב מערכת חיסון עם הפרה עמוקה של תהליך יצירת הנוגדנים. לכן, בנוכחות נתונים המצביעים על מגע עם אנשים נגועים ב-HIV, מחקרים חוזרים מבוצעים בדרך כלל לאחר חודשיים עד 3 חודשים.
שלב שני - אימונובלוטינג(בשינוי Western Blot, Western Blot): היא שיטה מורכבת יותר ומשמשת לאשר את עובדת ההדבקה. שיטה זו אינה מזהה נוגדנים מורכבים ל-HIV, אלא נוגדנים לחלבונים המבניים הבודדים שלו (p24, gp120, gp41 וכו'). התוצאות של אימונובלוטינג נחשבות חיוביות אם מתגלים נוגדנים לפחות לשלושה חלבונים, שאחד מהם מקודד על ידי גנים env, השני על ידי גנים gag, והשלישי על ידי גנים pol. אם מתגלים נוגדנים לחלבון אחד או שניים, התוצאה נחשבת בספק ודורשת אישור. ברוב המעבדות, האבחנה של זיהום ב-HIV מתבצעת אם מתגלים בו זמנית נוגדנים לחלבונים p24, p31, gp4l ו-gpl20/gp160. מהות השיטה: הנגיף מושמד למרכיבים (אנטיגנים), המורכבים משאריות חומצות אמינו מיוננות, ולכן לכל הרכיבים יש שחר השונה זה מזה; לאחר מכן, באמצעות אלקטרופורזה (זרם חשמלי), האנטיגנים מופצים על פני הרצועה - אם יש נוגדנים ל-HIV בסרום הבדיקה, הם יתקשרו עם כל קבוצות האנטיגנים, וניתן לזהות זאת.

צריך לזכורשנוגדנים ל-HIV מופיעים ב-90-95% מהנדבקים תוך 3 חודשים לאחר ההדבקה, ב-5-9% מהנדבקים מופיעים נוגדנים ל-HIV לאחר 6 חודשים וב-0.5-1% מהנדבקים נוגדנים ל-HIV מופיעים מונחים מאוחרים יותר. בשלב האיידס, מספר הנוגדנים עשוי לרדת, עד להיעלמות מוחלטת.

באימונולוגיה יש דבר כזה "חלון סרולוגי" - התקופה מההדבקה ועד להופעת מספר כזה של נוגדנים שניתן לזהות. עבור HIV, תקופה זו נמשכת בדרך כלל בין 2 ל-12 שבועות, במקרים נדירים יותר. במהלך "החלון הסרולוגי" אדם בריא לפי בדיקות, אך למעשה הוא נדבק ב-HIV. הוכח ש-DNA HIV יכול להיות בגנום האנושי לפחות שלוש שנים ללא סימני פעילות ונוגדנים ל-HIV (סמנים של זיהום ב-HIV) אינם מופיעים.

במהלך תקופה זו ("חלון סרולוגי"), ניתן לזהות נגוע ב-HIV ואף שבוע-שבועיים לאחר ההדבקה באמצעות תגובת שרשרת פולימראז(PCR).זוהי שיטה רגישה במיוחד - תיאורטית ניתן לזהות 1 DNA לכל 10 מ"ל של מדיום. מהות השיטה היא כדלקמן: באמצעות תגובת שרשרת פולימראז מתקבלים עותקים רבים של חומצת גרעין (וירוס הוא חומצת גרעין - DNA או RNA - במעטפת חלבון), אשר לאחר מכן מתגלים באמצעות אנזימים מסומנים או איזוטופים , וכן על ידי מבנה אופייני. PCR היא שיטת אבחון יקרה, ולכן היא אינה משמשת להקרנה ושגרה.

קביעת שלב המחלה

בלב האיידס הוא, קודם כל, הרס של עוזרי לימפוציטים T, המסומנים על ידי נוגדנים חד שבטיים - אשכולות של התמיינות - כמו CD4. בהקשר זה, אבחון וניטור התקדמות המחלה בלתי אפשרי ללא שליטה של ​​תת-אוכלוסיית ה-T-helper, המתבצעת בצורה נוחה ביותר באמצעות סדרן תאי לייזר.

לזיהום קל ב-HIVמספר לימפוציטים מסוג T הוא אינדיקטור משתנה ביותר. באופן כללי, ירידה במספר תאי CD4 (מוחלט ויחסי) נמצאה אצל אנשים שהדבקתם ב-HIV התרחשה לפני שנה לפחות. מצד שני, בשלבים המוקדמים של הזיהום, מספר מדכאי ה-T (CD8) גדל לעיתים קרובות בחדות הן בדם ההיקפי והן בבלוטות לימפה מוגדלות.

עם איידס קשהלרוב המוחלט של החולים יש מספר מופחת של לימפוציטים מסוג T (פחות מ-1000 ל-1 μl דם, כולל לימפוציטים CD4 - פחות מ-22 ל-1 μl, בעוד שהערך המוחלט של תכולת ה-CD8 נשאר בטווח התקין). בהתאם לכך, יחס CD4/CD8 מופחת בחדות. התגובה של לימפוציטים מסוג T במבחנה לאנטיגנים ולמיטוגנים סטנדרטיים מופחתת בהתאם לספירת CD4 המופחתת יחסית.

לאיידס מתקדםמאופיינת בלימפופניה כללית, נויטרופניה, טרומבוציטופניה (בהתאמה, ירידה במספר הלימפוציטים, נויטרופילים וטסיות הדם), אנמיה. שינויים אלה עשויים להיות תוצאה של עיכוב מרכזי של ההמטופואזה עקב התבוסה של איברים המטופואטיים על ידי הנגיף, כמו גם הרס אוטואימוני של תת אוכלוסיות תאים בפריפריה. בנוסף, איידס מתאפיין בעלייה מתונה בכמות הגמא גלובולינים עם עליה דומיננטית בתכולת ה-IgG. לחולים עם תסמינים חמורים של איידס יש לרוב רמות גבוהות של IgA. בשלבים מסוימים של המחלה, רמתם של סמני איידס כגון 1-microglobulin, אינטרפרון יציב חומצה, 1-thymosin עולה באופן משמעותי. אותו הדבר קורה עם הפרשת ניאופטרין חופשי, מטבוליט של מקרופאגים. עדיין לא ניתן להעריך את החשיבות היחסית של כל אחד מהמבחנים המפורטים, שמספרם גדל כל הזמן. לכן, יש לשקול אותם באינטראקציה עם סמנים של זיהום ב-HIV, הן אימונוווירולוגיות והן ציטולוגיות. בדיקת דם קלינית מאופיינת בלויקופניה, לימפופניה (בהתאמה ירידה במספר הלויקוציטים והלימפוציטים).

שלב 1 - " שלב הדגירה» - נוגדנים ל-HIV עדיין לא זוהו; האבחנה של זיהום ב-HIV בשלב זה נעשית על בסיס נתונים אפידמיולוגיים וחייבת להיות מאושרת במעבדה על ידי זיהוי של נגיף הכשל החיסוני האנושי, האנטיגנים שלו, חומצות גרעין HIV בסרום הדם של המטופל;
שלב 2 - " שלב של ביטויים ראשוניים» - בתקופה זו יש כבר ייצור של נוגדנים:;
שלב 2A - " אסימפטומטי» - זיהום ב-HIV מתבטא רק בייצור של נוגדנים;
שלב 2B - " זיהום חריף ב-HIV ללא מחלה משנית» - בדם של חולים, לימפוציטים פלזמה רחבים - ניתן לזהות "תאים חד-גרעיניים" ולעתים קרובות מציינת ירידה חולפת ברמת CD4-לימפוציטים (זיהום קליני חריף מתרחש ב-50-90% מהאנשים הנגועים ב-3 הראשונים חודשים לאחר ההדבקה; תחילת תקופת הזיהום החריף, ככלל, היא לפני המרת סרוק, כלומר הופעת נוגדנים ל-HIV);
שלב 2B - " זיהום חריף של HIV עם מחלות משניות» - על רקע ירידה ברמת ה-CD4-לימפוציטים והמחסור החיסוני הנובע מכך, מופיעות מחלות משניות של אטיולוגיות שונות (דלקת שקדים, דלקת ריאות חיידקית ו-pneumocystis, קנדידה, זיהום הרפס וכו ');
שלב 3 - " חָבוּי» - בתגובה להתקדמות הכשל החיסוני, התגובה החיסונית משתנה בצורה של רבייה מוגזמת של תאי CD4, ולאחריה ירידה הדרגתית ברמת הלימפוציטים CD4, בממוצע בקצב של 0.05-0.07x109/l לשנה ; נוגדנים ל-HIV נמצאים בדם;
שלב 4 - " שלב של מחלות משניות» - דלדול לימפוציטים CD4, ריכוז הנוגדנים לנגיף מופחת באופן משמעותי (בהתאם לחומרת המחלות המשניות, נבדלים שלבים 4A, 4B, 4C);
שלב 5 - " שלב מסוף» - בדרך כלל ירידה במספר תאי CD4 מתחת ל-0.05x109/l; ריכוז הנוגדנים לנגיף מופחת משמעותית או שלא יתגלו נוגדנים.

אבחון זיהום ב-HIV מתבצע כדי לקבוע אבחנה סופית. אם החולה בטוח בזיהום, אתה לא צריך לעשות תרופות עצמיות: אתה צריך להתייעץ עם מומחה.

במסווה של איידס, ניתן להסתיר מחלות רבות שניתן לרפא אותן על ידי פנייה לרופא. בדיקות זיהום הן שיטת האבחון הנפוצה והמוקדמת ביותר.

קביעת דרגת ההדבקה נמשכת במעבדה בבדיקת דם ב-ELISA או PCR.

בהקשר להידרדרות של אינדיקטורים אפידמיולוגיים לזיהום ב-HIV, הכרה מוקדמת במחלה הפכה לחשיבות רבה. הרופא עורך אבחנה מבדלת של זיהום ב-HIV, אוסף מידע אפידמיולוגי על המחלה.

בתהליך לימוד שיטות הזיהום, המומחה עורך מחקרים כגון:

  • מחקר של מנגנון ההתפתחות של זיהום HIV;
  • אבחון של מחלות נלוות.

שיטות לאבחון זיהום ב-HIV מכוונות לאיתור נוגדנים ב-ELISA, וכאשר האבחנה מאושרת, עורך המומחה עבודת הסבר עם המטופל לגבי עמידתו בכללים על מנת למנוע את התפשטות המחלה.

בדיקת איידס ניתנת לילדים שנולדו לאמהות נגועות לאחר שקיבלו טיפול אנטי-רטרו-ויראלי. בדיקות סקר מגלות נוגדנים ל-HIV 1 ו-2.

האימונובלוט מאשר ומזהה נוגדנים לחלבוני HIV.

אבחון מוקדם של כשל חיסוני מאפשר למטופל לשנות את אורח חייו תוך זמן קצר, להתחיל טיפול ולקבל עזרה פסיכולוגית. תלונות אופייניות של המטופל תמיד עוזרות לרופא לחשוד באיידס ולשלוח את הדם של המטופל למעבדה לניתוח.

דור 4 בדיקות מהירות לאיידס

אבחון מעבדה של זיהום ב-HIV, המבוצע עם בדיקות של הדור הרביעי, מאפשר לך לקבוע את המחלה בשלב החריף של המחלה. בדיקת Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo רגישה מאוד לאנטיגנים ונוגדנים בסרום של המטופל. הספציפיות של המחקר היא 99.19% עבור קו Ab, ו-99.64% עבור קו Ag, והערך הניבוי החיובי נקבע בתוך 55%.

הרגישות של הבדיקה נקבעת על ידי קביעת תוצאות ידועות קודם לכן. כאשר מקבלים נתונים חיוביים, ההסתברות למספרים שגויים מגיעה ל-45%.

בבית מבצעים בדיקת ספוגית פה. הבדיקה נוחה, פשוטה וללא כאבים למטופל. רצועת הבדיקה ImmunoChrom-½-Express משמשת לניתוח ומספקת תוצאה יציבה אם המטופל ממלא אחר ההוראות המצורפות לתרופה. אם נמצאו שני פסים סגולים זהים באזור הבדיקה ובאזור הביקורת, הבדיקה נחשבת חיובית. נוכחות של רצועה אחת מפוענחת כתוצאה שלילית של הניתוח.

הזמן המושקע במחקר הוא בין 15 ל-30 דקות.

אבחון המחלה בתקופת הדגירה

התבוסה של מערכת החיסון מתרחשת כאשר הנגיף חודר לגופו של החולה. תקופת הדגירה משתנה תוך 3 חודשים.

לאחר מגע לא רצוי ומסוכן עם בן/בת זוג, יש צורך לבצע בדיקת PCR ועל סמך התוצאות להסיק מסקנה לגבי הימצאות זיהום HIV בגוף. התקופה המקסימלית לתחילת האבחון של כשל חיסוני היא 8-9 חודשים, ובמקרים חריגים היא מתארכת לשנתיים.

לצורך האבחנה הסופית של המחלה, המחקר מתבצע במהלך השנה; כל 3 חודשים החולה תורם דם עבור HIV. מגע מיידי עם מומחה לאחר מגע מסוכן מפחית את הסבירות לזיהום ב-90%.

לאבחון מעבדתי של התקופה המוקדמת של המחלה, נעשה שימוש בשיטת התגובה הפולימראזית, הקובעת חומצות גרעין. תוצאות הניתוח מפוענחות תוך מספר שעות תוך שמירה על אנונימיות מוחלטת.

בדיקת ה-HIV/AIDS היצירתית MP-HIV ½ נעשית בבית, 4 שבועות לאחר החשיפה המסוכנת. קלטות בדיקה מזהות נוגדנים לנגיף ה-HIV מס' 1 ו-2.

שיטות אבחון ביטוי לאיידס בילדים

תינוקות שנולדו לאמהות נגועות נבדקים לגילוי נגיף האיידס. שיטות סרולוגיות לביסוס המחלה לא תמיד מאושרות בתינוקות בגילאי 5-18 חודשים, אך לתוצאה יש ערך חיובי לאחר מכן באימונובלוט.

שיטת ה-PCR הרגישה ביותר מאפשרת לקבוע את נוכחותו של נגיף האיידס בגופו של ילד.

ה-DNA של הפתוגן נמצא אצל ילד בחודש הראשון לחייו. מערכת זיהוי פרו-וירוס הכשל החיסוני נועדה לקבוע את ריכוז ה-RNA הפתוגן.

דם מלא או הכתמים המיובשים שלו מתאימים לניתוח. הדגימה מונחת במבחנה עם חומר משמר EDTA ביחס של 1:20. אחסן את החומר בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס למשך יומיים, תוך ביטול הקפאת הדם.

דגימות דם מיובשות מתקבלות על ידי מריחת נוזל שלם על נייר מיוחד. חומר לאבחון מאוחסן בטמפרטורה שאינה עולה על 8 מעלות צלזיוס. תקופת השימוש בכרטיסים אינה עולה על 8 חודשים.

בדיקת היילוד ונטילת האנליזה מתבצעת במונחים הבאים: יומיים לאחר הלידה, בגיל חודשיים, לאחר 3-6 חודשים. זיהוי של הגן פרו-וירוס HIV מספר שעות לאחר הלידה מעיד על זיהום של העובר במהלך התקופה שלפני הלידה. זיהום יכול להתרחש במהלך הלידה או בזמן הנקת תינוק.

נתונים המאשרים את נוכחות ה-DNA של הנגיף בשתי דגימות בקרה מצביעים על התפתחות של זיהום ב-HIV בתינוק.

תצפית מרפאה מבוטלת לאחר קבלת בדיקות שליליות ב-PCR 4 חודשים לאחר לידת הילד.

טעויות מחקר

ניתוח חיובי כוזב לנוכחות נגיף הכשל החיסוני בדם החולה, מסיבות רבות, מעוות את הדיוק בקביעת המחלה. טעויות מחכות למטופל במהלך הבדיקה בבית.

תוצאה שקרית מופיעה כאשר למטופל יש מצבים כמו תגובתיות צולבת, הריון, תורמי דם, זיהום בנגיף השפעת, מחלות בדרכי הנשימה, מחלות אוטואימוניות, סרטן, טרשת.

אלרגיה תורמת לייצור אנטיגנים זרים לגופו של המטופל. הם מזוהים על ידי מערכת הבדיקה עם תוצאה שקרית. זיהומים פטרייתיים ויראליים תורמים לקביעה שגויה של נוכחות נגיף האיידס.

יש לטפל בזיהום ולאחר מכן לבדוק לאיידס. כדי לקבל תוצאה איכותית של המחקר, המטופל מחויב לספר לרופא על המחלות הנלוות ועל הטיפול המתבצע.

אבחון על ידי ELISA

הספקטרום הכולל של נוגדנים שזוהה על ידי בדיקת אנזים חיסונית מופיע ב-95% מהאנשים שנדבקו בנגיף האיידס. תוצאה כפולה חיובית ב-ELISA מספקת נוכחות של שלב אישור שני - בדיקת אימונובלוט. זה מורכב מחקר נוגדנים והקשר שלהם למבני החלבון האישיים של הפתוגן. למחקר ELISA יש שתי תגובות: אנזימטיות ואימונולוגיות. הניתוח מבוסס על אינטראקציה של נוגדנים ואנטיגנים.

לקבוע באופן עקבי נוגדנים, קומפלקס חיסוני, פעילות אנזים. המומחה מפענח את נתוני הניתוח. ערכים שליליים מצביעים על היעדר זיהום ב-HIV במטופל.

בהיעדר נוגדנים וזיהום לאחרונה, הרופא קובע תוצאה שלילית כוזבת.

אם דגימות של חומר לחקר הנגיף אינן מאוחסנות ברישול, האינדיקטורים שהתקבלו עשויים להיות שקריים.

בדיקה שבוצעה לאחר חיסון המטופל היא חיובית וייתכן שאינה אמינה.

יש להכין דילול סרום כראוי, לנקות צלחות משומשות ולרכוש צבע באיכות גבוהה.

תוצאת immunobolting חיובית מתבטאת בשילוב של רצועות GP 41 ו-GP 120 ואנטיגן. תוצאה שלילית מסומנת על ידי היעדר להקות.

בעת גיבוש מסקנה אבחנתית, נלקחות בחשבון תוצאות הבדיקה, אינדיקטורים לבדיקת החולה בבית החולים והסקר האפידמיולוגי של החולה.

הראשונים נועדו לזהות את כל האנשים שנדבקו ב-HIV, השניים לזהות אנשים שאינם נגועים ב-HIV, אך שנתנו תגובה חיובית במהלך בדיקות הסקר. לכן, בדיקות הסקר הן רגישות ביותר, כלומר כמעט ללא תוצאות שליליות שגויות, ובדיקות אישור הן מאוד ספציפיות, כלומר כמעט ללא תוצאות חיוביות שגויות. יחד, בדיקות אלו מספקות תוצאות מדויקות ומהימנות שיכולות לזהות מוצרי דם מזוהמים ולאבחן זיהום ב-HIV. עם זאת, ישנם גורמים ביולוגיים המפחיתים את הדיוק של בדיקות אלו; אפשר גם שגיאות מעבדה. לכן, כל מעבדה הבודקת נוגדני HIV חייבת להיות בעלת תוכנית בקרת איכות ללא דופי לבדיקות אלו. אסור לשכוח שאמינות בדיקות המעבדה לעולם אינה מאה אחוז וכי יש להתייחס תמיד לתוצאותיהן כתוספת לאבחנה הקלינית.

תקופת חלון וגילוי מוקדם של זיהום ב-HIV:

נוגדנים ל-HIV מתחילים להיווצר זמן קצר לאחר ההדבקה, אך זמן הופעתם תלוי בגורמים רבים, בפרט, במצב המערכת החיסונית של החולה ובתכונות הנגיף. חשוב לציין כי נוגדנים עשויים להימצא בדם כבר בשלב מוקדם לאחר ההדבקה, אך ריכוזם מתחת לגבול הגילוי של חלק מהשיטות (תקופת החלון). מערכות הבדיקה הראשונות גילו נוגדנים כמעט בכל האנשים שנדבקו ב-HIV 6-12 שבועות לאחר ההדבקה. מערכות הבדיקה העדכניות ביותר, כולל מלכודת הדור השלישי ELISA, מזהות נוגדנים 3-4 שבועות לאחר ההדבקה. ניתן לקצר את הזמן בין ההדבקה לאבחון הדבקה ב-HIV בכמה ימים באמצעות שיטות זיהוי אנטיגן HIV, ועוד מספר ימים באמצעות שיטות זיהוי RNA HIV. אם משתמשים בכל השיטות המתוארות, ניתן לקבוע את האבחנה של זיהום ב-HIV ברוב החולים כבר 2-3 שבועות לאחר ההדבקה. למערכות בדיקה זמינות מסחרית לבדיקת נוגדנים ל-HIV יש רגישות גבוהה מאוד ובערך אותה רגישות, המספיקה כדי לזהות את רוב האנשים הנגועים ב-HIV (מה שנקרא רגישות אפידמיולוגית). עם זאת, מערכות בדיקה שונות נבדלות ברגישות האנליטית, כלומר, ביכולת לזהות רמות נמוכות של נוגדנים המתרחשות לפני השלמת המרה סרוקית.

ישנן מערכות בדיקה המיועדות לזהות נוגדני IgM ל-HIV, אך אין בהן שימוש נרחב באבחון מוקדם של זיהום ב-HIV, שכן נוגדני IgM לא תמיד מיוצרים מוקדם לאחר ההדבקה. חלק ממערכות הבדיקה מהדור השלישי מזהות בו-זמנית נוגדני IgM ו-IgG ל-HIV ויש להם רגישות אנליטית גבוהה יותר.

ראה גם:חשיפה של מצב HIV ללא חרטות, מחיצה חריגה, מפרצת כלי דם: איום נסתר על הבריאות, בדיקות טרום לידתי; הפרעות כרומוזומליות, פזילה סמויה (Strabismus latenta, Heterophoria), סיכון נסתר: נשים ומחלות לב, עגבת סמויה (Syphilis latens), פרוטוקול RT-PCR CDC בזמן אמת לאיתור ובדיקה של שפעת A(H1N1), חריקת שיניים (ברוקסיזם), זהירות : אלרגנים נסתרים

... האבחנה של כל מחלה זיהומית מבוססת על השוואה של נתונים אפידמיולוגיים, קליניים ומעבדתיים, והפרזה בערך של אחת מקבוצות הנתונים הללו עלולה להוביל לטעויות אבחון.

אבחון זיהום ב-HIV כולל שני שלבים:
אנישלב - ביסוס העובדה האמיתית של הדבקה ב-HIV;
IIשלב - קביעת שלב המחלה.

קביעת עובדת ההידבקות ב-HIV

ביסוס העובדה של זיהום HIV עצמו (כלומר, זיהוי אנשים נגועים ב-HIV), בתורו, כולל גם שני שלבים:
אני במהבדיקת אימונוסורבנט מקושרת(ELISA): שיטת ה-ELISA היא סקר (סלקטיבי) - בחירת פרטים ככל הנראה נגועים, כלומר מטרתה לזהות פרטים חשודים ולסנן אנשים בריאים; נוגדנים ל-HIV מתגלים באמצעות נוגדנים אחרים לנוגדנים הרצויים (נוגדנים נגד נוגדנים אחרים).

נוגדנים "עוזרים" אלו מסומנים באנזים. כל בדיקות הסקר חייבות להיות רגישות ביותר כדי לא לפספס את המטופל. בגלל זה, הספציפיות שלהם לא גבוהה במיוחד, כלומר, ELISA יכול לתת תגובה חיובית ("כנראה חולה") באנשים לא נגועים (למשל, בחולים עם מחלות אוטואימוניות: שיגרון, זאבת אריתמטית מערכתית וכו'). שכיחות תוצאות חיוביות כוזבות בעת שימוש במערכות בדיקה שונות נעה בין 0.02 ל-0.5%. אם ELISA של אדם נתן תוצאה חיובית, אז כדי לאשר את העובדה של זיהום HIV, יש צורך להיבדק עוד יותר.

כאשר מבצעים ELISA ב-3-5% מהמקרים, יתכנו תוצאות שליליות כוזבות - אם הזיהום התרחש לאחרונה יחסית ורמת הנוגדנים עדיין נמוכה מאוד, או בשלב הסופני של המחלה, המאופיינת בפגיעה חמורה ב מערכת חיסון עם פגיעה עמוקה בתהליך יצירת הנוגדנים. לכן, אם יש עדויות למגע עם אנשים נגועים ב-HIV, מחקרים חוזרים מבוצעים בדרך כלל לאחר חודשיים עד 3 חודשים.
שלב שניאימונובלוטינג(בשינוי של Western Blot, Western blot): היא שיטה מורכבת יותר ומשמשת לאשר את עובדת ההדבקה.

שיטה זו אינה מזהה נוגדנים מורכבים ל-HIV, אלא נוגדנים לחלבונים המבניים הבודדים שלו (p24, gp120, gp41 וכו').

התוצאות של אימונובלוטינג נחשבות חיוביות אם מתגלים נוגדנים לפחות לשלושה חלבונים, שאחד מהם מקודד על ידי גנים env, השני על ידי גנים gag, והשלישי על ידי גנים pol. אם מתגלים נוגדנים לחלבון אחד או שניים, התוצאה נחשבת בספק ודורשת אישור.

ברוב המעבדות, האבחנה של זיהום ב-HIV מתבצעת אם מתגלים בו זמנית נוגדנים לחלבונים p24, p31, gp4l ו-gpl20/gp160. מהות השיטה: הנגיף מושמד למרכיבים (אנטיגנים), המורכבים משאריות חומצות אמינו מיוננות, ולכן לכל הרכיבים יש שחר השונה זה מזה; לאחר מכן, באמצעות אלקטרופורזה (זרם חשמלי), האנטיגנים מופצים על פני הרצועה - אם יש נוגדנים ל-HIV בסרום הבדיקה, הם יתקשרו עם כל קבוצות האנטיגנים, וניתן לזהות זאת.

צריך לזכורשנוגדנים ל-HIV מופיעים ב-90-95% מהנדבקים תוך 3 חודשים לאחר ההדבקה, ב-5-9% מהנדבקים מופיעים נוגדנים ל-HIV לאחר 6 חודשים וב-0.5-1% מהנדבקים נוגדנים ל-HIV מופיעים מונחים מאוחרים יותר.

בשלב האיידס, מספר הנוגדנים עשוי לרדת, עד להיעלמות מוחלטת.

באימונולוגיה יש דבר כזה "חלון סרולוגי"- התקופה מההדבקה ועד להופעת מספר כזה של נוגדנים שניתן לזהות.

עבור HIV, תקופה זו נמשכת בדרך כלל בין 2 ל-12 שבועות, במקרים נדירים יותר. במהלך "החלון הסרולוגי" אדם בריא לפי בדיקות, אך למעשה הוא נדבק ב-HIV. הוכח ש-DNA HIV יכול להיות בגנום האנושי לפחות שלוש שנים ללא סימני פעילות ונוגדנים ל-HIV (סמנים של זיהום ב-HIV) אינם מופיעים.

במהלך תקופה זו ("חלון סרולוגי"), ניתן לזהות נגוע ב-HIV ואף שבוע-שבועיים לאחר ההדבקה באמצעות תגובת שרשרת פולימראז(PCR).

זוהי שיטה רגישה במיוחד - תיאורטית ניתן לזהות 1 DNA לכל 10 מ"ל של מדיום. מהות השיטה היא כדלקמן: באמצעות תגובת שרשרת פולימראז מתקבלים עותקים רבים של חומצת גרעין (וירוס הוא חומצת גרעין - DNA או RNA - במעטפת חלבון), אשר לאחר מכן מתגלים באמצעות אנזימים מסומנים או איזוטופים , וכן על ידי מבנה אופייני. PCR היא שיטת אבחון יקרה, ולכן היא אינה משמשת להקרנה ושגרה.

קביעת שלב המחלה

התפתחות האיידס מבוססת, קודם כל, על הרס של עוזרי לימפוציטים מסוג T, המסומנים על ידי נוגדנים חד שבטיים - צבירי התמיינות - כ-CD4.

בהקשר זה, אבחון וניטור התקדמות המחלה בלתי אפשרי ללא שליטה של ​​תת-אוכלוסיית ה-T-helper, המתבצעת בצורה נוחה ביותר באמצעות סדרן תאי לייזר.

לזיהום קל ב-HIVמספר לימפוציטים מסוג T הוא אינדיקטור משתנה ביותר. באופן כללי, ירידה במספר תאי CD4 (מוחלט ויחסי) נמצאה אצל אנשים שהדבקתם ב-HIV התרחשה לפני שנה לפחות.

מצד שני, בשלבים המוקדמים של הזיהום, מספר מדכאי ה-T (CD8) גדל לעיתים קרובות בחדות הן בדם ההיקפי והן בבלוטות לימפה מוגדלות.

עם איידס קשהלרוב המוחלט של החולים יש מספר מופחת של לימפוציטים מסוג T (פחות מ-1000 ל-1 μl דם, כולל לימפוציטים CD4 - פחות מ-22 ל-1 μl, בעוד שהערך המוחלט של תכולת ה-CD8 נשאר בטווח התקין).

בהתאם לכך, יחס CD4/CD8 מופחת בחדות. התגובה של לימפוציטים מסוג T במבחנה לאנטיגנים ולמיטוגנים סטנדרטיים מופחתת בהתאם לספירת CD4 המופחתת יחסית.

לאיידס מתקדםמאופיינת בלימפופניה כללית, נויטרופניה, טרומבוציטופניה (בהתאמה, ירידה במספר הלימפוציטים, נויטרופילים וטסיות הדם), אנמיה.

שינויים אלו עשויים להיות תוצאה של עיכוב מרכזי של ההמטופואזה עקב פגיעה באיברים ההמטופואטיים על ידי הנגיף, כמו גם הרס אוטואימוני של תת אוכלוסיות תאים בפריפריה. בנוסף, איידס מתאפיין בעלייה מתונה בכמות הגמא גלובולינים עם עליה דומיננטית בתכולת ה-IgG.

לחולים עם תסמינים חמורים של איידס יש לרוב רמות גבוהות של IgA. בשלבים מסוימים של המחלה, רמתם של סמני איידס כגון 1-microglobulin, אינטרפרון יציב חומצה, 1-thymosin עולה באופן משמעותי. אותו הדבר קורה עם הפרשת ניאופטרין חופשי, מטבוליט מקרופאג.

עדיין לא ניתן להעריך את החשיבות היחסית של כל אחד מהמבחנים המפורטים, שמספרם גדל כל הזמן. לכן, יש לשקול אותם באינטראקציה עם סמנים של זיהום ב-HIV, הן אימונוווירולוגיות והן ציטולוגיות.

בדיקת דם קלינית מאופיינת בלויקופניה, לימפופניה (בהתאמה ירידה במספר הלויקוציטים והלימפוציטים).

שלב 1 - " שלב הדגירה» - עדיין לא זוהו נוגדנים ל-HIV; האבחנה של זיהום ב-HIV בשלב זה נעשית על בסיס נתונים אפידמיולוגיים וחייבת להיות מאושרת במעבדה על ידי זיהוי של נגיף הכשל החיסוני האנושי, האנטיגנים שלו, חומצות גרעין HIV בסרום הדם של המטופל;
שלב 2 - " שלב של ביטויים ראשוניים»- בתקופה זו יש כבר ייצור של נוגדנים:;
שלב 2A - " אסימפטומטי» - זיהום ב-HIV מתבטא רק בייצור של נוגדנים;
שלב 2B - " זיהום חריף ב-HIV ללא מחלה משנית"- בדם של חולים, לימפוציטים פלזמה רחבים - ניתן לזהות "תאים חד-גרעיניים" ולעתים קרובות מציינת ירידה חולפת ברמת CD4-לימפוציטים (זיהום קליני חריף נצפה ב-50-90% מהאנשים הנגועים ב- 3 החודשים הראשונים לאחר ההדבקה; תחילת תקופת הזיהום החריף, ככלל, היא לפני המרה סרוקית, כלומר.

הופעת נוגדנים ל-HIV);
שלב 2B - " זיהום חריף של HIV עם מחלות משניות» - על רקע ירידה ברמת הלימפוציטים CD4 והמחסור החיסוני הנובע מכך, מופיעות מחלות משניות של אטיולוגיות שונות (דלקת שקדים, דלקת ריאות חיידקית ו-pneumocystis, קנדידה, זיהום הרפס וכו');
שלב 3 - " חָבוּי» - בתגובה להתקדמות הכשל החיסוני, התגובה החיסונית משתנה בצורה של רבייה מוגזמת של תאי CD4, ולאחריה ירידה הדרגתית ברמת הלימפוציטים CD4, בממוצע בקצב של 0.05-0.07 × 109/l לשנה; נוגדנים ל-HIV נמצאים בדם;
שלב 4 - " שלב של מחלות משניות» - דלדול של לימפוציטים CD4, ריכוז הנוגדנים לנגיף מופחת באופן משמעותי (בהתאם לחומרת המחלות המשניות, מבחינים בשלבים 4A, 4B, 4C);
שלב 5 - " שלב מסוף» - בדרך כלל ירידה במספר תאי CD4 מתחת ל-0.05 × 109 לליטר; ריכוז הנוגדנים לנגיף מופחת משמעותית או שלא יתגלו נוגדנים.

אבחון מעבדה של זיהום ב-HIV

בעת אבחון זיהום HIV, נעשה שימוש ב-4 קבוצות של שיטות:

1. קביעת נוכחות נגיף, אנטיגנים שלו או עותקי RNA בחומרים מחולי או נגוע ב-HIV

אבחון סרולוגי המבוסס על זיהוי של נוגדנים ספציפיים לחלבוני HIV על פני השטח (gp 120 ו-gp 41) ופנימיים (עמ' 18 ועמ' 24).

3. זיהוי שינויים פתוגנומוניים (ספציפיים) לזיהום ב-HIV במערכת החיסון.

אבחון מעבדה של זיהומים אופורטוניסטיים (מחלות הקשורות לאיידס).

1. אבחון וירולוגי.החומר לבידוד HIV הוא לימפוציטים מסוג T בדם, לויקוציטים של מח עצם, בלוטות לימפה, רקמות מוח, רוק, זרע, נוזל מוחי ופלסמה בדם.

החומר המתקבל משמש להדבקה של תרבית רציפה של לימפוציטים מסוג T (H9). אינדיקציה של HIV בתרבית תאים מתבצעת על ידי CPP (היווצרות סימפלסטים), כמו גם על ידי אימונופלואורסצנטי, מיקרוסקופיה אלקטרונית, על ידי פעילות טרנסקריפטאזה בולטת.

שיטות מחקר מודרניות מאפשרות לזהות לימפוציט נגוע אחד לכל 1000 תאים.

זיהוי אנטיגנים ויראליים בלימפוציטים T נגועים מתבצע באמצעות נוגדנים חד שבטיים

בשנים האחרונות, קביעת מספר העותקים של HIV RNA בפלזמה בדם בשיטת תגובת שרשרת הפולימראז (PTCR), מה שנקרא עומס נגיפי, הייתה קריטית לקביעת הפרוגנוזה וחומרת ההידבקות ב-HIV.

אם בחולים שאינם מקבלים טיפול, העומס הנגיפי נמצא מתחת לגבול הגילוי (זה פחות מ-5,000 עותקים של HIV RNA ב-1 מ"ל של פלזמה), הדבר מצביע על לא התקדמות או התקדמות איטית. מידת ההדבקה היא מינימלית. עומס ויראלי גבוה (יותר מ-10,000 עותקי RNA ב-1 מ"ל של פלזמה) בחולים עם פחות מ-300 לימפוציטים CO4 ב-1 μl תמיד מצביע על התקדמות המחלה.

אבחון סרולוגי. נכון לעכשיו, הוא זכה לתפוצה הגדולה ביותר.

חומר לחקור: 5 מ"ל. דם המופרין, שניתן לשמור בקירור 6-8 שעות לפני המסירה למעבדה, אך לא להקפיא.

לצורך אבחון סרולוגי של איידס, נעשה שימוש בעיקר בשיטות בדיקת אימונוסורבנטיות מקושרות אנזים עם מבחני אימונוסורבנט סטנדרטיים (ELISA).

זוהי שיטת מיון. עקרון הפעולה מבוסס על העיקרון הקלאסי של ELISA ישיר. Immunosorbent הם טבליות פוליסטירן עם אנטיגן מומת מומת ספציפי המתקבל מ-HIV או באופן סינתטי.

לאחר מכן מוסיפים את הסרום הנבדק בדילול. הדגירה מתבצעת בבארות עם אנטיגן. לאחר קשירה של AG ל-AT, חלבונים לא קשורים נשטפים שלוש פעמים, ולאחר מכן מוסיפים לבארות צימוד של נוגדנים לאימונוגלובולינים אנושיים עם תווית אנזים.

היווצרות קומפלקס AG + AT ספציפי מזוהה על ידי החדרת מצע לאנזים (תמיסה של אורתופנילנדיאמין ומי חמצן).

כתוצאה מכך, צבע המדיום משתנה ביחס לכמות הנוגדנים. תוצאות המחקר נלקחות בחשבון בספקטרופוטומטר.

יש לחקור עוד סרחי דם שיש להם נוגדנים ספציפיים לווירוס לפי ELISA על ידי ספיגת חיסון.

סיכה חיסונית היא בדיקת אישור, שכן היא מזהה נוגדנים לחלבוני HIV שונים.

הוא מבוסס על חלוקה ראשונית לפי משקל מולקולרי (הפרדה) של חלבוני HIV על ידי אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד ואחריו העברה של אנטיגנים לממברנת ניטרוצלולוזה. לאחר מכן מורחים את סרום הבדיקה על הממברנה. במקרה זה, נוגדנים ספציפיים יוצרים קומפלקס עם אנטיגן ספציפי (gp.120, gp.41, p.24, p.18). השלב האחרון של המחקר הוא איתור נוגדנים לחלבוני HIV שונים.

לשם כך מוסיפים למערכת נוגדנים נגד חלבונים אנושיים המסומנים באנזים או בתווית רדיואיזוטופ.

לפיכך, בנסיוב של המטופל, מתגלים (או לא מתגלים) נוגדנים ספציפיים לנגיף לכל או רוב האנטיגנים של HIV.

3. מחקרים על המצב החיסוני.מכוון לזהות:

1) ירידה ביחס של תאי CD4 / CD8 (ב-N 2 ו->, עם איידס - 0.5 ו<);

2) ירידה בתוכן של תאי CD4 (<200 клеток/мл.);

3) נוכחות של אחד מסימני המעבדה, לרבות אנמיה, לויקופניה, טרומבוציטופניה, לימפופניה;

4) עלייה בריכוז של Ig A ו-Ig G בסרום הדם;

5) ירידה בתגובה של פיצוץ גרנולציה של לימפוציטים למיטוגנים;

6) היעדר תגובת עור GTZ למספר אנטיגנים;

7) עלייה ברמת הקומפלקסים החיסוניים במחזור.

הקודם1234567891011הבא

ראה עוד:

נוגדנים ל-HIV 1/2- רכיבי פלזמה בדם, בעלי אופי חלבוני, המונעים רבייה של זיהום HIV ומנטרלים לחלוטין את השפעתם השלילית.

מהי בדיקת נוגדני HIV 1/2 (סקר)

ניתוח סקר לנוגדנים ל-HIV 1,2 - מערכת בדיקות המאפשרת לזהות אנשים שנדבקו בנגיף הכשל החיסוני. בנוסף לאלו, קיימות בדיקות כביכול מאשרות (עזר), שתפקידן לזהות אנשים שאינם נגועים בנגיף, אך עם תגובה חיובית לנגיף במהלך ההקרנה.

המהות של מחקר ההקרנה של זיהום ב-HIV היא לקבוע נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני.

המאפיין המבחין שלו הוא רגישות מוגברת - יותר מ-99.5%. הספציפיות של הבדיקה היא שהסקר יכול לתת תוצאה חיובית שגויה אם הגוף של המטופל מכיל נוגדנים עצמיים.

ניתן לזהות תוצאה זהה במקרה של חולה עם מחלת כבד, חיסון נגד שפעת או נוכחות של כל מחלה ויראלית חריפה. על בסיס זה, על מנת לקבל תוצאות מדויקות, לצד הסקר, נהוג בדרך כלל לבצע את בדיקת האישור הנ"ל.

אינדיקציות לניתוח

בפרקטיקה הרפואית, יש מגוון רחב למדי של אינדיקציות להקרנה.

המטופל רשאי לפנות למעבדה אם:

  • חשד לזיהום (אם היה מגע קרוב עם נשא של זיהום HIV);
  • עם ירידה במשקל, חום;
  • דלקת ריאות, שאינה ניתנת לטיפול קונבנציונלי;
  • מחלות בעלות אופי כרוני שנוצרו מסיבות לא ידועות;
  • לקראת ניתוח;
  • עירויי דם;
  • הריון ותכנון משפחה;
  • עם בלוטות לימפה מודלקות;
  • סקס מזדמן.

אנשים הנופלים לקבוצת סיכון מיוחדת: מכורים לסמים ואנשים המנהלים חיי מין מופקרים.

כיצד מתבצעת בדיקת נוגדני HIV 1/2

ההליך כולל ציות למספר כללים הכרחיים:

  • על החולה לתרום דם אך ורק על בטן ריקה (מותר לשתות מים);
  • לפחות שמונה שעות חייבות לעבור מאז הארוחה האחרונה;
  • יש ליידע את הרופא לגבי התרופות שהמטופל נוטל ולדעת את המינון (אם אין אפשרות אפילו לביטול לטווח קצר);
  • אם המטופל מסוגל לעכב את השימוש בתרופות, מומלץ לו לעשות זאת 10-15 ימים לפני יום המניפולציה;
  • יום לפני תחילת הבדיקה, רצוי למטופל לסרב לקחת מזון מטוגן או שומני, כמו כן נאסר עליו לשתות משקאות אלכוהוליים, לעשן ולהגביל מאמץ גופני כבד.

יש לציין שלבדיקות מעבדה לנוכחות זיהום בילדים שנולדו לאמהות שהן נשאות של נגיף הכשל החיסוני יש מאפיינים משלהן.

מכיוון שבחודשים הראשונים לחייו של ילד עלולים להופיע בדמו נוגדנים אימהיים ל-HIV, אי אפשר לקבל תמונה אובייקטיבית של מצב בריאותו של היילוד על סמך תוצאות הניתוח ואפילו תוצאה שלילית. זה בכלל לא אומר שהנגיף לא יכול לחדור את מחסום השליה.

כדי לקבל נתונים מדויקים, יש לבצע בדיקה תוך 36 חודשים לאחר לידת הילד.

שירותים בכיוון "דיאגנוסטיקה מודרנית"

מרפאות בכיוון "דיאגנוסטיקה מודרנית"

ישנן שתי מטרות רחבות אך מוגדרות היטב לבדיקה או סקר לנוגדני HIV - זיהוי מקרים ומעקב. בעת זיהוי מקרים, הצעד הראשון הוא להבהיר את מצב ה-HIV של כל פרט נתון על מנת להתחיל טיפול מתאים או מעקב באמצעים מתאימים.

מטרת המעקב האפידמיולוגי היא להעריך את שכיחות ה-HIV, התפלגות מקרי ההדבקה ומגמותיו בקבוצה או באוכלוסייה שלמה.

הרגישות של בדיקת נוגדנים ל-HIV היא מדד ליכולתה לזהות במדויק נוגדנים אלו בדגימה, בעוד שהספציפיות של בדיקה היא מדד ליכולתה לאשר במדויק את היעדר נוגדנים כאשר אף אחד מהם אינו קיים בדגימה.

באופן אידיאלי, הרגישות והספציפיות של הבדיקה צריכות להגיע ל-100%. בפועל, אף בדיקה ביולוגית לא עונה על דרישה זו, ובכל זאת הבדיקות לנוגדנים ל-HIV שנמצאות בשימוש הן מהבדיקות הרגישות והספציפיות ביותר הקיימות כיום.

אבחון מעבדה של איידס מורכב מביצוע מחקרים וירולוגיים, סרולוגיים, אימונולוגיים של חומר מחולים עם חשד לאיידס.

במחקרים וירולוגיים, ניתן להשתמש בתרביות ראשוניות של תאים חד-גרעיניים בדם כדי לבודד את הנגיף.

בידוד וזיהוי הנגיף קשים מבחינה שיטתית וניתן לבצע אותו במעבדות מיוחדות. שיטת האבחון היעילה ביותר המשמשת כיום לבדיקות המוניות שגרתיות היא גילוי נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי. נוגדנים ל-HIV עשויים להופיע בסוף החודש הראשון להדבקה. מתויק על ידי מספר מחברים, התפתחות של המרה סרוקית דורשת בין 4-7 שבועות ל-6 חודשים או יותר. נוכחות נוגדנים היא אבחנתית של איידס או מצביעה על סיכון לפתחו.

נוגדנים הם לא רק סמן סרולוגי לאיידס. הם נחשפים בשלב הפרה-קליני של המחלה, הם מאפשרים אבחון מוקדם שלה. נוכחותם מקבלת משמעות מיוחדת לאיתור נשאים.

נוגדנים מתגלים במשך שנים רבות, כמעט לאורך כל החיים. חוקרים קבעו מקבילות בזיהוי הנגיף והנוגדנים אליו, כלומר נוכחות נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני מעידה על סבירות גבוהה שאדם הוא נשא וירוס.

נוגדנים לאנטיגן HIV, שהופיעו בתקופת הדגירה, ממשיכים להיות מיוצרים באופן אינטנסיבי עם התפתחות המחלה, שכן גירוי אנטיגני מעורר הן על ידי נגיפים המשתחררים מלימפוציטים נגועים והן על ידי רכיבים תת-ווירונים הנכנסים לזרם הדם במהלך ריקבון של תאים נגועים, ועל ידי לימפוציטים נגועים.

במקביל, הפרובירוס המובנה בגנום של תאים נגועים נותר בלתי נגיש לנוגדנים ספציפיים. זה מסביר את העובדה הפרדוקסלית לכאורה: ככל שיש יותר נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי בסרום הדם, כך קל יותר לבודד את הנגיף עצמו מהמטופל.

זה קורה מכיוון שהנוגדנים המיוצרים בתגובה לזיהום בנגיף אינם מנטרלים ולכן אין להם השפעה ניכרת על הנגיף, אלא פשוט נמצאים איתו בגוף. כדי לזהות נוגדנים (AT) לנגיף האיידס פותחו מספר בדיקות המאפשרות ביצוע מחקר ברמה גבוהה מספיק של ספציפיות ורגישות. אלו הן שיטות של בדיקת רדיואימונית שלב מוצק, רדיואימוניות משקעים, אימונופלואורסצנטיות, בדיקת אנזים חיסונית וספיגה חיסונית.

שיטות בדיקת אימונוסורבנט (ELISA) המאופיינות ברגישות גבוהה, אפשרות לרישום כמותי וויזואלי של תוצאות התגובה, מצאו את היישום הרחב ביותר בפועל, מה שמנגיש את השיטה למעבדות בכל רמה.

ה-ELISA משתמש במערכות בדיקה זרות ומקומיות.

מהלך קליני של זיהום ב-HIV ואיידס

יש להיזהר בילדים שנולדו לאמהות נגועות. בהיעדר מרפאה, ילד נחשב נגוע אם AT ל-HIV נמשך לאחר שנה. עם קבלת תוצאה חיובית ב-ELISA, יש צורך לבדוק את הסרה שנתנה תוצאה חיובית בודדת שלוש פעמים, ולאשר את התוצאה החיובית במערכת עצמאית - immune soting

זיהוי AT בתגובת ELISA אינו מספק מידע מספיק, שכן אינו מעיד על מצב הנבדק, אלא רק מצביע על דגירה, מחלה או נוכחות של זיהום א-סימפטומטי.

ספיגת מערכת החיסון מספקת מידע נוסף, שכן נוכחות AT לאנטיגנים רבים של HIV אופיינית למחלה קשה, בעוד שתגובה עם 1-2 אנטיגנים אופיינית יותר לתהליך זיהומי קל.

אינפורמטיבי הוא חישוב מספר ה-T (עוזרים) והיחס בין T4 ל-Te (מדכאים) של לימפוציטים, שנקבע באמצעות נוגדנים מונו-קפונליים.

קריטריון חשוב למחלה יכול להיות עלייה חדה במספר האימונוגלובולינים, במיוחד A ו-V. בניתוח הקליני הכללי של הדם, המחלה עשויה להיות מסומנת על ידי לימפוניה, לויקופניה, אריתרופניה, טרומבוציטופניה, אאוזינופיליה.

בדיקות HIV המשמשות למעקב אפידמיולוגי אינן חייבות להיות מדויקות כמו אלו הנדרשות למטרות קליניות.

עם זאת, בשכיחות HIV נמוכה מאוד באוכלוסייה, יש לבדוק שוב את כל הדגימות החיוביות בבדיקות נוספות.

איסוף דם לבדיקת נוגדנים או סקר ל-HIV יכולה להיות מלווה ברישום שמות הנבדקים (איסוף שמות), או להתבצע ללא רישום שמות משפחה או פרטי זיהוי אישיים (איסוף אנונימי) (טבלה 1).

בדיקה אנונימית ללא פרטי זיהוי מאופיינת בנקודות הבאות: נעשה שימוש בדגימות דם שנאספו למטרות אחרות; אנונימיות מובטחת בשל העובדה שלא נאספים או נלקחים בחשבון נתוני זיהוי; אין צורך בקבלת הסכמת הנבדקים; אין צורך ביצירת קשר עם ייעוץ ושירותים חברתיים; לבסוף, והכי חשוב, טעויות באומדנים סטטיסטיים, בהתאם לרמת ההשתתפות של האוכלוסייה, ממוזערות.

למרות שניתן לקבל נתונים מדויקים יותר מבדיקת HIV אנונימית, לשיטה זו יש את החסרונות הבאים: היא אינה יכולה לבטל הטיית בחירה פוטנציאלית; נתונים על התנהגות בסיכון גבוה ומשתנים חשובים אחרים אינם זמינים ולא ניתן לאסוף אותם בדיעבד; לא ניתן ליצור קשר עם אנשים שנפגעו מ-HIV כדי ליידע אותם על מצבם; בדיקה יכולה להתבצע רק בקבוצות של אנשים שדמם נלקח למטרות אחרות.

באזורים שבהם שכיחות HIV נחשבת לנמוכה מאוד, מעקב בריאות הציבור צריך להתמקד בעיקר באנשים או באוכלוסיות עם התנהגויות בסיכון הגבוה ביותר.

דם לבדיקת HIV בקבוצת סיכון זו הוא הקל ביותר להשיג ממרכזים המתמחים בטיפול במחלות מין או מתקנים דומים.

אם גם שימוש בסמים תוך ורידי נפוץ, יש לקחת דגימות דם ממשתמשי סמים במתקנים מיוחדים.

איסוף דם אחת ל-3 או 6 חודשים בקבוצות בסיכון הגבוה ביותר מאזורים גיאוגרפיים שבהם קבוצות כאלה נמצאות בשכיחות תספיק בדרך כלל. חריגה עשויה להיות קבוצות סיכון כגון משתמשי סמים תוך ורידי, אשר עשויים לדרוש בדיקות תכופות יותר.

ארגון הבריאות העולמי מפתח כעת מערכת סיווג מחלות (סטייג'ינג) למחקר קליני, שניתן להשתמש בה גם בניסויים טיפוליים, שאולי יש להם גם ערך ניבוי.

עם זאת, מערכת כזו לא נועדה להחליף את ההגדרות הקיימות של איידס המשמשות במעקב אחר שירותי בריאות.

נכון לעכשיו, מערכות של מעקב מתוכנן (שגרתי) של HIV מפותחות בכל מקום.

מערכות אלו צריכות להיות מותאמות למצב האפידמיולוגי הנוכחי; לפיכך, שיטות הדגימה באוכלוסיות עם שכיחות נמוכה מאוד של הנגיף חייבות להיות שונות בהכרח מאלה בהן נעשה שימוש כאשר השכיחות בינונית או גבוהה.

מעקב כזה כולל סקרים שגרתיים של אוכלוסיות מוגדרות ונגישות היטב.

היא צריכה קודם כל לכלול את אותן קבוצות שנמצאות בסיכון הגבוה ביותר להידבקות, ובכל אחת מהקבוצות הללו יש לבחור מספר קבוע מראש של פרטים לבדיקה.

בשנים האחרונות, בדיקה אנונימית בקבוצות הניתנות לצפייה ללא התחשבות בנתוני זיהוי הפכה ליותר ויותר נפוצה כדרך מדויקת וחסכונית למעקב אפידמיולוגי אחר הידבקות ב-HIV במערכת הבריאות.

שיטות לאבחון מעבדתי של HIV

במעבדה מתמחה במיוחד מתבצעים:

א) קביעת נוגדנים, אנטיגנים וקומפלקסים חיסוניים שמסתובבים בדם; טיפוח הנגיף, זיהוי החומר הגנומי והאנזימים שלו;

ב) הערכה של הפונקציות של הקישור הסלולרי של מערכת החיסון.

התפקיד העיקרי שייך לשיטות של אבחון סרולוגי שמטרתן קביעת נוגדנים, כמו גם אנטיגנים פתוגנים בדם ונוזלי גוף אחרים.

בדיקת נוגדנים ל-HIV מתבצעת על מנת:

א) בטיחות עירויי דם והשתלות;

ב) מעקב, בדיקות לניטור שכיחות הדבקה ב-HIV ולחקור את הדינמיקה של שכיחותו באוכלוסייה מסוימת;

ג) אבחנה של זיהום ב-HIV, כלומר.

ה.בדיקה מרצון של סרום דם של אנשים בריאים לכאורה או חולים עם סימנים ותסמינים קליניים שונים הדומים לזיהום HIV או איידס.

המערכת לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV מבוססת על עיקרון תלת שלבי.

השלב הראשון הוא סקר, שנועד לבצע בדיקות דם ראשוניות לנוכחות נוגדנים לחלבוני HIV. השלב השני הוא רפרנציאלי - הוא מאפשר שימוש בטכניקות מתודולוגיות מיוחדות כדי להבהיר (לאשר) את התוצאה החיובית העיקרית שהתקבלה בשלב המיון. השלב השלישי - מומחה, נועד לאימות סופית של נוכחות וסגוליות של סמני זיהום HIV שזוהו בשלבים הקודמים של אבחון מעבדה.

הצורך במספר שלבים של אבחון מעבדה נובע בעיקר משיקולים כלכליים.

בפועל, מספר בדיקות משמשות לזיהוי אנשים נגועים ב-HIV במידת ודאות מספקת:

בדיקת ELISA (ELISA) (בדיקת אימונוסורבנטית מקושרת אנזים) לגילוי הרמה הראשונה מאופיינת ברגישות גבוהה, אם כי פחות ספציפיות מהרמה הבאה;

כתם חיסון (Western-blot), בדיקה מאוד ספציפית והשימושית ביותר להבדיל בין HIV-1 ל-HIV-2;

Antigenemia p25-test, יעיל בשלבים הראשונים של זיהום;

תגובת שרשרת פולימראז (PCR).

במקרים של בדיקה המונית של דגימות דם, מומלץ לבדוק תערובות של סמים מקבוצת נבדקים, המורכבות באופן שהדילול הסופי של כל דגימה לא יעלה על 1:100.

אם תערובת הסרה חיובית, כל סרום של התערובת החיובית מנותח. שיטה זו אינה מביאה לאובדן רגישות הן ב-ELISA והן באימונובלוט, אך מפחיתה את עלויות העבודה ואת עלות הבדיקה הראשונית ב-60-80%.

שיטות אימונולוגיות

מספר עוזרי T,

2. היחס בין T4 ו-T8,

3. מצב של רגישות יתר,

4. תפקוד מפצה של מערכת תאי T.

זה מתבטא בייצור יתר של אימונוגלובולינים, יש להם זיקה נמוכה וחומר הגוף נצרך אפילו יותר.

חסרונות: מופיעים מאוחר, כמה אינדיקטורים אימונולוגיים עשויים להיות עם זיהומים אחרים.

שיטות קליניות - אולי. בדומה למחלות אחרות, הביטויים האופייניים ביותר מתועדים בשלבים מאוחרים יותר, ולכן האבחנה הקלינית אינה יעילה במיוחד

השיטה העיקרית - סרולוגית - מיושמת בשני שלבים:

1 - בדיקת סקר - דגימה לסך הנוגדנים לכל חלבוני הניתוח החיסוני.

שלב זה נותן 95% תוצאות אמיתיות ו-5% חיוביות שגויות.

2 - שיטת אישור - כל הדגימות נבדקות בשיטת אישור. טכניקה זו מאפשרת לך לזהות נוגדנים לחלבון הנגיפי.

תוצאה חיובית, כאשר מתגלים נוגדנים ל-3 חלבונים ויראליים לפחות, אם ל-1 או 2 התוצאה מוטלת בספק ודורשת בדיקה נוספת.

ב-serodiagnosis הראשוני של זיהום ב-HIV, נוגדנים הכוללים נקבעים באמצעות בדיקות סקר - ELISA ותגובות אגלוטינציה.

בשלב השני (בוררות), נעשה שימוש בבדיקה מורכבת יותר - אימונובלוט, המאפשר לא רק לאשר או לדחות את המסקנה הראשונית, אלא גם לעשות זאת ברמה של קביעת נוגדנים לחלבונים בודדים של הנגיף.

פרשנות של תוצאות בדיקת נוגדני HIV

מספר רב למדי של גורמים שונים משפיעים על תוצאת ניתוח נוגדנים ל-HIV, וביניהם חשוב זמן הניתוח לאחר זיהום אפשרי.

ברוב המקרים, נוגדני HIV יכולים להתגלות 6 עד 12 שבועות לאחר ההדבקה.

תקופה זו מכניסת הנגיף לגוף ועד להופעת כמות ניתנת לזיהוי של נוגדנים נקראת תקופת ההמרה הסרוקית החיובית או תקופת ה"חלון". ישנם מקרים נדירים של נוגדנים המופיעים 6 חודשים לאחר ההדבקה, ולדיווחים על גילוי נוגדנים רק לאחר שנה אין ראיות. נכון להיום, שירות האבחון משתמש בדורות חדשים של שיטות ELISA שיכולות לזהות נוגדנים ל-HIV 3-4 שבועות לאחר ההדבקה, ושילובים מסוימים של שיטות אלו, מה שנקרא אסטרטגיות בדיקה, מצמצמים את תקופת ה"חלון" ל-2-3 שבועות. כלומר .

מאפשרים לזהות נוגדנים ל-HIV ברגע שהם מתחילים להיווצר בגוף.

תוצאה שלילית פירושה שלא נמצאו נוגדנים ל-HIV בדמו של הנבדק.

מצב זה נקרא seronegativity ובדרך כלל אומר שהאדם אינו נגוע.

תוצאה שלילית אינה נותנת ערבויות לעתיד. הוא מציין רק את המדינה בזמן הבדיקה. יש סיכוי קטן שהסקר נערך במהלך תקופת החלון. לכן, אם אדם היה בעבר בסיכון להידבק ב-HIV ונבדק שלילי, יש לבצע בדיקה חוזרת לפחות 6 חודשים לאחר אירוע הסיכון.

תוצאה חיובית פירושה שבדמו של הנבדק נמצאו נוגדנים ל-HIV.

מצב זה נקרא סרו-חיוביות - אדם נגוע ב-HIV. חשוב להבין שתוצאה חיובית מעידה רק על הידבקות ב-HIV ולא על איידס.

עם זאת, חשוב ביותר לפנות לרופא לייעוץ ובמידת הצורך לסיוע רפואי על מנת לשמור על איכות חיים טובה לאורך זמן לאחר קבלת תוצאה חיובית.

תוצאה בלתי מוגדרת. לעיתים רחוקות, התוצאה של בדיקת נוגדני HIV אינה ברורה.

המעבדה לא יכולה לדעת אם האדם סרוחיובי או סרונגטיבי. בנסיבות כאלה, יש צורך להתייעץ עם רופא ולהיבדק שוב.