Tyrimas ifa dekodavimo metodu. ELISA: koks tyrimas, kada ir kaip jis atliekamas ir ką jis parodo? V

Tobulėjant šiuolaikinei medicinai, įtarus tam tikras paciento patologijas, galima atlikti gilesnę diagnostiką. Vienas iš informacinių laboratorinių tyrimų metodų buvo ELISA analizė, kuri atliekama imant veninį kraują. Tai yra, niekas nesikeičia visam pacientui. Tačiau ELISA laboratorijos asistentas atlieka sudėtingą surinktos biomedžiagos tyrimo metodą. Kas yra ELISA analizės ir kokios yra ELISA metodo, kaip diagnostikos, naudojimo subtilybės, mes suprantame toliau pateiktą medžiagą.

Kas yra fermentinis imunologinis tyrimas?

Antikūnų gamybą provokuoja patys antigenai, patekę į žmogaus organizmą. Įeinant į „kovą“ dėl organizmo sveikatos, antikūnai tarsi pasižymi antigenais, ką laborantas mato kraujo tyrime. Tai yra, surinktoje biomedžiagoje galima sekti ne tik infekcijos buvimą, bet ir jos pėdsakus po to, kai kūnas visiškai atsigavo.


Taigi, skirdamas pacientui su fermentais susietą imunosorbentinį tyrimą, gydantis gydytojas gali sekti infekcijos trukmę, jos progresavimo laipsnį arba nustatyti imuniteto buvimą konkrečiai infekcijai.

ELISA diagnostikos procesas atrodo taip:

  • Paimtas veninis kraujas laboratorijoje atnešamas į kraujo serumo būseną;
  • Tada laborantas naudoja specialų dėklą su ląstelėmis, kurių kiekvienoje jau yra visi reikalingi antigenai. Pakanka į kiekvieną ląstelę įlašinti kraujo serumą ir sekti imunoglobulinų (antikūnų) reakciją į antigenus. „Norimos“ reakcijos buvimą rodo tiriamos medžiagos spalvos pasikeitimas. Ateityje laborantė tiria tiriamos terpės optinį tankį.
  • Askaridozė ir enterobiozė (apvaliosios kirmėlės ir pinworms);
  • Trichineliozės;
  • Opisthorchiazė ūminėje ir lėtinėje formoje;
  • Giardiazė;
  • Amebiozė;
  • Toksoplazmozė;
  • Leišmaniozė bet kokia forma.

Svarbu: fermentinis imunologinis tyrimas gali būti ir kokybinis, ir kiekybinis. Pirmuoju atveju laborantas tik patvirtina arba paneigia norimos medžiagos buvimą kraujyje. Antruoju atveju, atlikus analizę, nurodoma jo koncentracija paciento organizme.

Metodo trūkumai

Atsižvelgiant į visus šio diagnostikos metodo privalumus, reikia suprasti, kad fermentinis imunologinis tyrimas nėra būdas nustatyti paciento ligos priežastį, o tik būdas patvirtinti gydančio gydytojo nurodytą diagnozę. Ir atsižvelgiant į tai, kad tyrimas yra gana brangus, jį reikia naudoti protingai. Tokiu atveju tyrimo rezultatus turėtų interpretuoti tik kvalifikuotas specialistas.


Rezultatų iššifravimas

Po to, kai išmontavome santrumpą IFA ir kas tai yra ─ išsiaiškinus, verta pereiti prie rezultatų interpretavimo. Čia svarbu suprasti, kad jei analizė buvo atlikta kokybiškai, rezultatas bus tik teigiamas arba neigiamas. Tai yra, diagnozė arba patvirtina gydytojo įtarimus dėl tam tikros diagnozės, arba juos paneigia. Tokiu atveju formoje bus atitinkamai simboliai „+“ arba „-“.


Svarbu: neigiamas tyrimo rezultatas ne visada rodo, kad nėra infekcijos. Faktas yra tas, kad antikūnai prieš antigenus gali susidaryti per 14 dienų po užsikrėtimo ir tikėtina, kad jie dar nesusidarė.

Jei atliekama kiekybinė analizė, čia nustatomas antikūnų tipas, jų skaičius ir aktyvumo stadija. Visų pirma, esant tokiai diagnozei, nustatomi antikūnai (imunoglobulinai) IgG ir IgM, kurie susidaro skirtingais infekcijos progresavimo laikotarpiais. Dažniausi rezultatai šiuo atveju yra šie:

  • Padidėjęs IgM ir visiškas IgG nebuvimas. Šis paveikslėlis rodo neseną infekciją ir ūminę patologijos fazę.
  • Padidėjęs abiejų tipų imunoglobulinų (IgM ir IgG) aktyvumas. Jis kalba apie ilgalaikę ir lėtinę infekcinio proceso eigą.
  • IgG aktyvumas ir visiškas IgM nebuvimas. Infekcija buvo bent prieš šešis mėnesius, o dabar virusas yra užsitęsusios lėtinės stadijos.
  • IgG ir IgA antikūnų nebuvimas. Rezultatas neapibrėžtas.
  • IgM, IgA ir IgG antikūnų nebuvimas. Nurodo imuniteto trūkumą konkrečiai infekcijai.
  • IgG, IgM ir IgA antikūnų aktyvumas rodo lėtinio proceso paūmėjimą.

Be antikūnų tipų nustatymo, laboratorijos asistentas specialiame formos stulpelyje taip pat nurodo jų skaičių viename kraujo tūryje. Atminkite, kad supratę, kas yra ELISA metodas, patys neinterpretuokite rezultatų. Gautus rezultatus gali tiksliai interpretuoti tik gydantis gydytojas, atsižvelgdamas į siūlomą diagnozę, sukurtą remiantis paciento klinikiniu įvaizdžiu.

Šiuolaikinės medicinos raida diagnostikos pasaulyje nenustoja stebinti savo pasiekimais, o dabar gydytojui nereikia daryti prielaidų dėl galimos diagnozės, pasikliaujant tik netiesioginiais požymiais. Sukūrus ir įvedant į laboratorinių tyrimų pasaulį su fermentais susieto imunosorbento tyrimo (ELISA) tyrimas leidžia greitai ir tiksliai nustatyti ne tik patogeno buvimą, bet ir daugelį kitų ligos savybių.

IFA kūrimo ir plėtros istorija

Šis kraujo tyrimo metodas praktinėje medicinoje pradėtas taikyti praėjusio amžiaus viduryje – kažkur 60-aisiais. Pradinis jos tikslas buvo moksliniai tyrimai histologijos srityje, kurie apsiribojo biologinių rūšių ląstelinės antigeninės struktūros paieška ir tyrimais. ELISA kraujo tyrimas pagrįstas susijusių antigenų (AG) ir specifinių antikūnų (AT) sąveika, susidarant „antigeno-antikūno“ kompleksui, kurį nustato fermentas.

Šis reiškinys paskatino mokslininkus nuspręsti, kad šiuo metodu galima atpažinti įvairių klasių baltymų junginius, kurie susidaro kraujo serume patogenui patekus į organizmą. Dėl tiesioginio dalyvavimo imuninės sistemos veikloje šie junginiai buvo pavadinti imunoglobulinais (IG, Ig), o atradimas buvo didžiausias proveržis laboratorinėje diagnostikoje.

Tuo pačiu metu šis labai jautrus metodas buvo pradėtas aktyviai naudoti tik devintajame dešimtmetyje ir buvo prieinamas tik labai specializuotose medicinos įstaigose. Stotys ir kraujo perpylimo centrai, venerinių ir infekcinių ligų ligoninės buvo pirmosios, kuriose atsirado galimybė naudoti fermentų imunologinius analizatorius. Tai lėmė sparčiai plintantis „XX amžiaus maras“ – AIDS, todėl prireikė skubių diagnostinių ir terapinių priemonių.

Technikos galimybės

ELISA kraujo tyrimo apimtis gana plati – šiuo metu neįsivaizduojama, kaip sunku būtų ieškoti daugelio ligų priežasčių. Toks tyrimas dabar taikomas beveik visose medicinos šakose, net ir onkologijoje. Nors neinformuotiems tai sunkiai suprantama, kai kuriais atvejais jį atlikus pavyko išgelbėti pacientų gyvybes, ankstyvose stadijose aptikus naviką.

Svarbu! ELISA yra kraujo tyrimas, parodantis kai kuriems piktybiniams procesams būdingus žymenis, leidžiančius aptikti ligą tuo metu, kai jai netaikomas joks kitas metodas.

Šiuolaikiniuose diagnostikos centruose laboratorinius tyrimus reprezentuoja ne tik naviko žymenys - jie aprūpinti įspūdingu skydų arsenalu šiai diagnozei atlikti. Su jų pagalba galite nustatyti daugybę patologinių būklių, tokių kaip hormoniniai sutrikimai ir įvairios kilmės infekciniai procesai.

Be to, ELISA kraujo tyrimo atlikimas ir iššifravimas leis stebėti vaistų poveikį sergančio žmogaus ir net gyvūno kūnui. Pastarasis plačiai naudojamas veterinarijos klinikose, padedantis išlaikyti mūsų augintinių ar maitintojų sveikatą, užtikrinantis stabilų mėsos, pieno produktų ir kiaušinių, kurie yra nepamainomi racione, tiekimą.

Taigi, paėmęs vos kelis mililitrus veninio kraujo ir diagnozavęs jį ELISA metodu, gydytojas, aprašęs tyrimo medžiagą, galės nustatyti:

  • hormoninė būklė, įskaitant biologiškai aktyvias lyties ir skydliaukės medžiagas, taip pat antinksčius;
  • bakterinės ir virusinės infekcijos (hepatitas B ir C, sifilis, herpesas, chlamidija, tuberkuliozė, miko- ir ureaplazmozė, ŽIV, TORCH) ir kitų tokio pobūdžio ligų buvimas;
  • patologinio proceso patogenų gyvybinės veiklos požymiai, kurie baigėsi atsigavimu ir perėjo į antikūnų susidarymo stadiją (imuninis atsakas).

Tokius kompleksus daug lengviau atpažįsta ir pašalina imuninės ląstelės. Likutinis poveikis antikūnų pavidalu daugeliu atvejų yra kraujyje visą gyvenimą, o tai praktiškai sumažina pakartotinio užsikrėtimo riziką iki nulio.

Imunoglobulinų veislės

Yra keletas antikūnų tipų, ir kiekvienas iš jų tam tikrame etape dalyvauja imuninio atsako procese. Pavyzdžiui, M klasės imunoglobulinai (IgM) yra pirmieji, kurie susidaro reaguojant į antigeno patekimą į organizmą. Didžiausias jų rodiklis stebimas pirmosiomis ligos dienomis.

ELISA naudojami imunoglobulinų tipai

Tada imuninė sistema į plazmą paleidžia G klasės IG (IgG), kurios yra atsakingos už visišką antigenų sunaikinimą ir paciento pasveikimą. Vėliau jie ir toliau yra kraujyje, taip paruošdami imuninę sistemą identiško patogeno pakartotiniam patekimui. Taip veikia vakcinacija. Įvedus susilpnėjusius patologinių mikroorganizmų antigenus, daug imunoglobulinų atsiranda plazmoje ir lieka cirkuliuoti.

Pagrindiniai laboratorinės diagnostikos objektai yra Ig klasės M, G ir A. Pagal jų koncentracijos lygį galima nustatyti ligos stadiją ir sužinoti, kokiomis infekcinėmis ligomis žmogus sirgo gyvenime. Pavyzdžiui, galite patikrinti vėjaraupių ar raudonukės istoriją. Norint išsiaiškinti, ar paciento organizme yra tam tikros rūšies AT ar AH, ar kokio nors hormono koncentracija, gydytojui nereikia skirti kelių laboratorinių tyrimų – pakanka išrašyti siuntimą ELISA tyrimui.

Technikos esmė

Tyrimo metodika paremta keliais užduočių variantais (tiesioginiu ir netiesioginiu – konkurenciniu ir nekonkurenciniu), kurių kiekvienas yra skirtas konkretiems tikslams. Šis metodas leidžia atlikti tikslinę paiešką ir per trumpiausią įmanomą laiką nustatyti konkrečios patologijos priežastį. Įvairių klasių kategorijų Ig aptikimui naudojama 96 šulinėlių plokštelė (polistireno plokštė), kurios šuliniuose yra adsorbuoti rekombinantiniai baltymai. Jie atlieka antigenų vaidmenį, o pradiniame etape yra kietoje fazėje.

Kai jie patenka į šulinį su kraujo plazma, antigenai arba antikūnai identifikuoja objektą, susijusį su jų orientacija, ir sudaro kompleksą (AG - AT). Šis darinys fiksuojamas fermento junginiu (konjugatu), kuris vėliau pasireiškia kaip pakitęs šulinio dažymas. ELISA atliekama naudojant specialias testavimo sistemas, pagamintas specializuotose laboratorijose ir aprūpintas visu reagentų rinkiniu.

Šią analizę galima atlikti su poveržlėmis ir rodmenų spektrometrais, tačiau jiems reikia rankų darbo. Žinoma, laboratorijos asistentui kelis kartus patogiau ir greičiau atlikti visas manipuliacijas visiškai automatizuotais įrenginiais. Jas naudojant laboratorijos darbuotojai išsivaduoja nuo didelio monotoniško užsiėmimo – plovimo, lašinimo ir likusios rutinos, tačiau ne visos gydymo įstaigos gali sau leisti tokią brangią įrangą.

Todėl daugelis ligoninių ir diagnostikos įstaigų ELISA ir toliau atlieka senamadiškai – pusiau automatiniais prietaisais.

Tyrimų medžiagos interpretavimas yra išskirtinai laboratorinės diagnostikos specialisto kompetencija – tik jam gali būti pasakomi rezultatai apie ligos eigos specifiką ir subtilybes. Tokiu atveju gydytojas būtinai turi atsižvelgti į galimybę gauti klaidingai neigiamus arba klaidingai teigiamus atsakymus.

Medžiagų transkripcija

Kokybiško fermentinio imunologinio tyrimo rezultatas turėtų būti neabejotina išvada – ar šiame kraujo mėginyje rastas norimas mikroorganizmas, ar ne. Kiekybinė analizė parodys koncentracijos lygį ir gali būti išreikšta dviem būdais – reikšme skaičiais arba „+“ ženklų skaičiumi.

Analizuojami rodikliai

Tyrimo metu atliekamas išsamus pagrindinių imunoglobulinų, dalyvaujančių imuniniame atsake, tyrimas, pavyzdžiui:

  • IgM - šios klasės nustatymas reiškia ūminės infekcinės ligos formos išsivystymą. Neigiamas IgM paieškos rezultatas gali būti ir norimo patogeno nebuvimo, ir ligos perėjimo į lėtinę eigą įrodymas.
  • IgA - šios klasės apibrėžimas, kai nėra IgM, daugeliu atvejų yra lėtinės ar latentinės infekcinės ligos vystymosi signalas.
  • IgM ir IgA (vienu metu buvimas) - teigiami abiejų tipų rezultatai rodo patį ūminės patologijos formos piką.
  • IgG - jo buvimas rodo ligos transformaciją į lėtinę formą arba pasveikimą ir imuniteto formavimąsi nustatytam sukėlėjui.

Tam tikros IG klasės atsiradimas ir kaupimasis vyksta skirtingais laiko etapais. Taigi, pavyzdžiui, IgM atsiranda pirmiausia, praėjus maždaug 5 dienoms po patogeno patekimo. IG kraujyje išlieka apie 5–6 savaites, o vėliau palaipsniui išnyksta. Šiuo metu juos galima nustatyti ELISA metodu. Maždaug po 3–4 savaičių nuo ligos pradžios atsiranda IgG, kuris vėliau gali išlikti kelis mėnesius. Tačiau analizuojant juos ne visada įmanoma aptikti.

IgA kraujyje susidaro per 2-4 savaites, 20 % jų yra serume, 80 % – gleivinės sekrete. Paprastai šie imunoglobulinai išnyksta per 2–9 savaites, o tai rodo patogeno sunaikinimą ir paciento pasveikimą. Jei ELISA vis dar rodo IgA buvimą, tai rodo proceso perėjimą į lėtinę formą.

Analizės rezultatų parinktys

Priklausomai nuo gautų duomenų, ELISA atsakymai gali būti pateikiami formoje lentelės forma su visu AT ir AG sąrašu ir teigiamos ar neigiamos reakcijos nuoroda. Tam tikrose situacijose bus rodoma kiekybinė reikšmė – ryškiai teigiamas, teigiamas, silpnai teigiamas arba neigiamas rezultatas. Antrasis variantas rodo antikūnų kiekį tiriamame kraujo mėginyje.


ELISA medžiagų interpretavimo variantai

Be minėtų verčių, ELISA procese tiriamas dar vienas kiekybinis parametras – AT avidumo indeksas, skaičiuojamas procentais. Tai parodo, kiek laiko trunka liga – tai yra, kuo rodiklis didesnis, tuo patologija vystosi ilgiau.

Alternatyvus ELISA metodas

Su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas yra gana gerai žinoma ir dažna diagnozė. Galbūt kai kurie apie tai nėra girdėję, tačiau yra ir kita šio tyrimo versija, dar mažiau žinoma daugeliui žmonių, kurios metu imamas ne kraujo mėginys. Ši technika vadinama slapto kraujo išmatų tyrimu ir daugeliu atvejų išvengiama papildomų sekinančių procedūrų, kurias lydi ir nemalonūs pojūčiai.

Slaptojo kraujo (hemoglobino molekulių) ELISA tyrimas leidžia aptikti net ir nedidelį virškinimo sistemos kraujavimą, kurio požymių paciento išmatose, kaip sakoma, plika akimi aptikti nepavyksta. Fermentinis imunologinis slaptojo kraujo žmogaus išmatose tyrimas per trumpą laiką gali parodyti pepsinę opą, polipozę, divertikulozę, navikus, kurie ankstyvosiose stadijose nėra lydimi tam tikrų simptomų.

Iki šiol buvo sukurta tūkstančiai įvairių fermentų imunologinių tyrimų diagnostinių testų sistemų, kurios suteikia galimybę rasti AT ir AG iš didžiulio patologijų sąrašo. Todėl ši analizė naudojama beveik visose medicinos srityse, bet kuriai amžiaus kategorijai. Ir absoliutus nekenksmingumas leidžia jį naudoti tiek nėštumo metu, tiek diagnozuojant susilpnėjusius pacientus.

5.1 ELISA esmė ir klasifikacija.

ELISA pasirodė šeštojo dešimtmečio viduryje ir iš pradžių buvo sukurtas kaip metodas antigenui identifikuoti histologiniame preparate, taip pat nusodinimo linijų vizualizavimui imunodifuzijos ir imunoelektroforezės teste, o vėliau pradėtas naudoti kiekybiniam antigenų ir antigenų nustatymui. antikūnai biologiniuose skysčiuose. Kuriant metodą dalyvavo E. Engvall ir R. Pelman, taip pat, nepriklausomai nuo jų, V. Van Veeman ir R. Schurs.

Ryžiai. 6 Pagrindinis ELISA principas:

    aptikti antigenus; 2) aptikti antikūnus

Metodas pagrįstas specifiniu antikūno prisijungimu prie antigeno, kai vienas iš komponentų yra konjuguotas su fermentu; dėl reakcijos su atitinkamu chromogeniniu substratu susidaro spalvotas produktas, kurio kiekis gali būti nustatyta spektrofotometriškai (6 pav.).

Antigeno ir antikūnų imobilizacijos ant įvairių nešėjų, išlaikant jų surišimo aktyvumą, atradimas leido išplėsti ELISA naudojimą įvairiose biologijos ir medicinos srityse.

Monokloninių antikūnų atsiradimas buvo tolesnis ELISA tobulinimas, kuris leido padidinti jos jautrumą, specifiškumą ir rezultatų atkuriamumą.

Teoriškai ELISA remiasi šiuolaikinės imunochemijos ir cheminės enzimologijos duomenimis, antigeno-antikūno reakcijos fizikinių ir cheminių dėsnių žiniomis, taip pat pagrindiniais analitinės chemijos principais. ELISA jautrumą ir trukmę lemia keli pagrindiniai veiksniai: antigeno-antikūno reakcijos kinetinės ir termodinaminės charakteristikos, reagentų santykis, fermentų aktyvumas, jo nustatymo metodų skiriamoji geba. Apskritai antigeno ir antikūno reakciją galima apibūdinti pagal paprastą schemą:

+[AG]↔[ATAG]

Tyrimų objektų įvairovė nuo mažos molekulinės masės junginių iki virusų ir bakterijų, taip pat neįprastai platus užduočių spektras, susijęs su įvairiomis ELISA naudojimo sąlygomis, lemia itin daug šio metodo variantų. .

Bet kurį ELISA variantą sudaro 3 privalomi etapai:

1. tiriamojo junginio atpažinimo pagal jam specifinį antikūną stadija, dėl kurios susidaro imuninis kompleksas;

2. konjugato jungties su imuniniu kompleksu arba laisvosiomis jungimosi vietomis susidarymo stadija;

3. fermento etiketės pavertimo registruotu signalu etapas. ELISA metodų klasifikacija grindžiama keliais metodais:

1. Pagal pirmajame ELISA etape esančių reagentų tipą išskiriami konkurenciniai ir nekonkurenciniai metodai.

A) Atliekant konkurencinį ELISA, pirmajame etape sistemoje yra ir analizuojamas junginys, ir jo analogas, pažymėti fermentu ir konkuruojantys dėl specifinių surišimo vietų.

B) Nekonkurenciniams metodams būdingas tik analizuojamo junginio ir jam būdingų surišimo centrų buvimas sistemoje pirmajame etape.

2. Visi ELISA metodai skirstomi į homogeninius ir nevienalyčius.

Jei visi trys ELISA etapai atliekami tirpale ir tarp pagrindinių etapų nėra papildomų susidariusių imuninių kompleksų atskyrimo nuo nesureagavusių komponentų etapų, metodas priklauso vienarūšių grupei.

Vienalytės ELISA, kuri dažniausiai naudojama mažos molekulinės masės medžiagoms nustatyti, pagrindas yra fermento aktyvumo slopinimas, kai jis derinamas su antigenu arba antikūnu. Dėl antigeno ir antikūnų reakcijos atkuriamas fermentų aktyvumas.

Kai antikūnas jungiasi prie antigeno, turinčio fermento žymę, fermento aktyvumas yra slopinamas 95 % didelės molekulinės masės substrato atžvilgiu, o tai yra dėl substrato sterinio išskyrimo iš aktyvaus fermento centro. Didėjant antigeno koncentracijai, jungiasi daugiau antikūnų ir lieka daugiau laisvų antigeno-fermento konjugatų, kurie gali hidrolizuoti didelės molekulinės masės substratą. Analizė atliekama labai greitai, vienam nustatymui reikia 1 minutės. Metodo jautrumas yra gana didelis. Su juo galite nustatyti medžiagą pikomolių lygiu.

Heterogeniškiems metodams būdinga atlikti analizę dviejų fazių sistemoje, dalyvaujant kietajai fazei - nešikliui, ir privaloma imuninių kompleksų atskyrimo nuo nesureagavusių komponentų (plovimo), kurie yra skirtingose ​​fazėse (susidarę). imuniniai kompleksai yra kietoje fazėje, o nesureagavę kompleksai yra tirpale). Heterogeniniai metodai, kai imuninių kompleksų susidarymas pirmajame etape vyksta kietoje fazėje, vadinami kietosios fazės metodais.

Metodai priskiriami homogeniniams-heterogeniniams, jei 1 etapas - tirpale susidaro specifiniai kompleksai, o tada komponentams atskirti naudojama kieta fazė su imobilizuotu reagentu.

3. Pagal bandomosios medžiagos nustatymo principą:

A) Tiesioginis medžiagos (antigeno arba antikūno) koncentracijos nustatymas pagal su ja sąveikaujančių surišimo centrų skaičių. Tokiu atveju fermento etiketė bus gautame specifiniame AG-AT komplekse. Analitės koncentracija bus tiesiogiai proporcinga užregistruotam signalui.

B) Medžiagos koncentracijos nustatymas pagal skirtumą tarp bendro surišimo vietų skaičiaus ir likusių laisvųjų jungimosi vietų. Tokiu atveju analitės koncentracija padidės, o įrašytas signalas sumažės, todėl šiuo atveju yra atvirkštinė priklausomybė nuo įrašyto signalo dydžio.

5.2 ELISA naudojamų komponentų charakteristikos.

Fermentai.

Fermentinės etiketės turi itin galingą katalizinį poveikį, viena fermento molekulė gali reaguoti su daugybe substrato molekulių. Taigi, fermentą, esantį nedideliais kiekiais, galima aptikti ir kiekybiškai įvertinti pagal produktų susidarymą, jo katalizuojamą reakciją. Kitas fermentų naudojimo kaip etiketės pranašumas yra dėl to, kad molekulėje yra daugybė funkcinių grupių (sulfhidrilo, karboksilo, tirazino liekanų ir kt.), per kurias kovalentiškai gali būti prijungtos ligandų molekulės.

ELISA naudojami fermentiniai žymenys turi turėti šias savybes:

– didelis fermento aktyvumas ir stabilumas analizės sąlygomis, modifikavimo metu ir konjugato su antikūnais ar kitais baltymais;

– jautrių substratų buvimas ir fermentinės reakcijos produktų arba substratų nustatymo metodo paprastumas;

– galimybė pritaikyti pagrindo sistemas tolimesniam stiprinimui;

- fermento ir jo inhibitorių nebuvimas tiriamame biologiniame skystyje.

ELISA gali naudoti mažiausiai 15 skirtingų fermentų. Krienų peroksidazė (HRP), šarminė fosfatazė (AP) ir β-D-galaktozidazė buvo panaudota pagal aukščiau nurodytus reikalavimus. Visi trys yra stabilūs ir katalizuoja labai jautrias reakcijas. Be to, šių fermentų katalizuojamų reakcijų produktus, priklausomai nuo naudojamo substrato, galima aptikti ne tik kolorimetriniais, bet ir fluorescenciniais metodais. Kiti fermentai naudojami daug rečiau. Tai paaiškinama mažesniu jų specifiniu aktyvumu, palyginti su HRP ir AP.

Substratai.

Substrato pasirinkimą pirmiausia lemia fermentas, naudojamas kaip etiketė, nes fermento ir substrato reakcija yra labai specifinė.

Pagrindiniai substrato reikalavimai:

– didelio metodo jautrumo užtikrinimas nustatant fermentą konjugate;

– aiškiai apibrėžtų (pavyzdžiui, spalvotų) fermento-substrato reakcijos produktų susidarymas;

– substratas turi būti saugus, pigus, prieinamas ir patogus naudoti.

Dažniau naudojami chromogeniniai substratai, kuriuos sunaikinus susidaro spalvota medžiaga. Perspektyvus yra didelės energijos substratų – fluorescencinių, chemiliuminescencinių – naudojimas. Tokių substratų naudojimas leidžia teoriškai padidinti ELISA jautrumą dviem dydžiais.

konjugato susidarymas.

Konjugatas yra antigenas arba antikūnas, pažymėtas fermento etikete. Konjugato susidarymas yra vienas iš svarbių ELISA žingsnių.

Formuojant konjugatą, parenkamas toks optimalus fermento etiketės įvedimo būdas, kad abu konjugato komponentai išlaikytų savo biologinį aktyvumą: fermentas - gebėjimas sąveikauti su substratu, o antigenas arba antikūnas - antigeniškumas ir antigeno surišimas. veikla, atitinkamai. Pažymėto, labai išgryninto antigeno buvimas leidžia naudoti konkurencinius metodus. Tokiu atveju konjugato, nesusijusio su imobilizuotais antikūnais, aktyvumą galima išmatuoti paskutiniame etape, todėl išvengiama plovimo procedūros ir analizė tampa patogesnė. Tačiau antigenai skiriasi savo fizikinėmis ir cheminėmis savybėmis bei struktūra, o tai reiškia, kad neįmanoma sukurti universalių metodų konjugatui su antigenu gauti. Šiuo atveju antigeno ir fermento konjugato gavimas yra atskiras iššūkis. Pažymėtų antikūnų paruošimas ELISA tyrimui yra metodiškai prieinamesnis.

Fermento konjugacija su imunochemiškai aktyviais baltymais atliekama įvairiais būdais: cheminiu kryžminiu ryšiu, kovalentiniu fermento molekulės surišimu su AG arba AT ir junginių susidarymu nekovalentiniais ryšiais, pavyzdžiui, kai ryšys tarp fermentas ir AG arba AT atliekami imunologiškai, per antigeno ir antikūno sąveiką.

Plačiausiai naudojami kovalentiniai konjugatų paruošimo metodai. Ryšio reakcijos pasirinkimą lemia šiose baltymų molekulėse esančių funkcinių grupių tipas. Glutaraldehidas, natrio perjodatas ir kt. naudojami kaip reagentai, naudojami fermentui įvesti į antigeno ir antikūnų molekules.

Yra vieno ir dviejų pakopų metodai, skirti gauti konjugatus naudojant glutaraldehidą. Gali susidaryti įvairaus dydžio konjugatai su sumažintu fermentiniu aktyvumu (15 - 60 % laisvo fermento). Susidaręs didelio dydžio konjugatas gali steriškai trukdyti nustatyti bandomąją medžiagą. Santykinai mažos molekulinės masės konjugatai susideda iš Fab fragmento ir vienos fermento molekulės.

Dėl dviejų etapų sintezės, kurią sudaro fermento, pirmiausia modifikuoto kryžminio ryšio agentu, etapų paruošimas, jo išskyrimas, o vėliau sąveika su antigenu (antikūnu), susidaro vienalytė kompozicija, kurioje yra 1-2 fermentų molekulės vienoje imunoglobulino molekulėje ir išlaikomas aukštas fermentinis ir imunologinis aktyvumas. Tačiau tokių konjugatų susidaro nedaug (krienų peroksidazei – 5–10%).

Imunoperoksidazės konjugatų gavimo būdas, pagrįstas fermento angliavandenių komponento oksidavimu natrio perjodatu (peroksidazės prisijungimas prie konjugato siekia 70-90% pradinio fermento kiekio), buvo pritaikytas didžiausiu praktiniu pritaikymu.

Patikimas konjugatas turi turėti šias savybes:

Didelis antikūnų tigras ir didelis afinitetas antigenui, kad jį būtų galima naudoti dideliu praskiedimu ir taip sumažinti nespecifinį surišimą;

Pakankamas darbinio veisimo specifiškumas;

Monomerinių formų vyravimas prieš polimerines, nes polimerinės formos linkusios nespecifiškai prilipti prie plastiko, todėl susidaro aukštas foninis reakcijos lygis;

Optimalus molinis santykis tarp fermento ir antikūnų (optimalus santykis yra apie 1:1);

Pakankamas konjugato fermentinis aktyvumas. Šią savybę daugiausia lemia konjugacijos sąlygos ir fermentų bei antikūnų molekulių santykis konjugate.

5.3 Heterogeniniai ELISA metodai.

Heterogeniniai ELISA (arba kietosios fazės ELISA) apima metodus, kuriuose analitė yra dviejų fazių. Imunocheminės reakcijos komponentams atskirti naudojama kieta fazė (netirpus nešiklis, dažniausiai plastikas) su antikūnais arba ant jos imobilizuotas antigenas, kuris kiekviename etape plaunamas, kad būtų pašalinti tarpiniai nesureagavusių komponentų produktai.

Imobilizacija gali būti atliekama kovalentiškai surišant antikūnus (antigenus) su aktyvuotu nešikliu, naudojant cheminius metodus, taip pat fiziškai adsorbuojant antikūnus (antigenus) ant kietų polimerų (pavyzdžiui, polistireno lakštų) paviršiaus. Užsienio literatūroje ši kryptis vadinama ELISA testu arba su fermentais susijusiu imunosorbentiniu tyrimu.

Nekonkurencinė ELISA antigenų aptikimui, kaip pavyzdį naudojant fermentu pažymėtus specifinius antikūnus ir imobilizuotus antikūnus.

Tirpalas, kuriame yra analizuojamas antigenas, pridedamas prie nešiklio su imobilizuotais antikūnais. Inkubacijos metu susidaro specifinis antigeno-antikūno kompleksas. Tada nešiklis nuplaunamas nuo nesurištų antigenų ir pridedami žymėti antikūnai – konjugatas. Surišto konjugato kiekis yra tiesiogiai proporcingas antigeno kiekiui tiriamajame mėginyje. Po antrojo inkubavimo ir konjugato pertekliaus pašalinimo pridedamas chromogeninis panaudoto fermento substratas, kuris, veikiant fermentui, keičia spalvą, t. Dažymo laipsnis yra tiesiogiai proporcingas fermentu pažymėtų specifinių antikūnų, fermento ir atitinkamai tiriamojo antigeno skaičiui. Tirpalo optinio tankio matavimai šuliniuose esant tam tikrai bangai (priklausomai nuo naudojamo substrato) atliekami naudojant specialius spektrofotometrus, pritaikytus mikroplokštelių skaitytuvams. Antigeno koncentracija mėginyje kiekybiškai įvertinama rezultatus lyginant su tirpalo optinio tankio priklausomybės nuo standartinio antigeno tirpalo koncentracijos kalibravimo kreive.

7 pav

Kadangi specifinio imunokomplekso nustatymo etape antigenas yra prijungiamas prie imobilizuotų ir paženklintų antikūnų molekulių, literatūroje šis metodas dažnai vadinamas „sumuštinio“ metodu (iš anglų kalbos sandvich) arba dviejų centrų ELISA metodu (nuo angliškas dviejų vietų tyrimas).

Šis metodas gali būti naudojamas tik tiems antigenams, kurių paviršiuje yra bent du antigeninius determinantus, analizuoti. Tai nepriimtina analizuojant daug monovalentinių antigenų (vaistų, pesticidų ir kt.).

Pagrindinis šio metodo privalumas yra didelis jautrumas. Šiuo metu junginių aptikimo riba šiuo metodu siekia 10–21 molį, o tai atitinka tik 600 analitės molekulių mėginyje aptikimą. Didžiausias jautrumas pasiekiamas, kai kiekviena imunologinė reakcija vykdoma pusiausvyros režimu, o tai turi įtakos analizės trukmei, kuri vidutiniškai yra 4-6 valandos. Nekonkurencinė ELISA, skirta antikūnams aptikti, kaip pavyzdį naudojant fermentu pažymėtus antrinius antikūnus ir imobilizuotus antigenus.

Tiriamas serumas pridedamas prie imobilizuoto antigeno. Po inkubacijos ir neprisijungusių antikūnų nuplovimo pridedami žymėti antriniai antikūnai, kurie yra specifiniai analizuojamiems antikūnams. Po antrinės inkubacijos ir žymėtų antrinių antikūnų pertekliaus pašalinimo fermento etiketės kiekis ant nešiklio yra proporcingas specifinių antikūnų koncentracijai serume.

Ši schema yra viena iš labiausiai paplitusių ELISA antikūnų aptikimui, nes ji leidžia aptikti antikūnus prieš skirtingus antigenus.

Heterogeninis konkurencinis ELISA tyrimas, skirtas antigenui aptikti, kaip pavyzdį naudojant pažymėtą antigeną ir imobilizuotus antikūnus.

Tirpalas, kuriame yra analizuojamas antigenas ir fiksuota antigeno-fermento konjugato koncentracija, pridedama prie antikūnų, imobilizuotų ant nešiklio. Po inkubacijos nešiklis nuplaunamas nuo nesurišto laisvo ir žymėto antigeno ir registruojamas fermentinis aktyvumas ant nešiklio, kuris yra atvirkščiai proporcingas nustatomo antigeno koncentracijai.


5.4 Homogeninis ELISA metodas.

Homogeninio fermento imunologinis tyrimas (HIFA) yra metodiškai paprasčiausias ELISA tipas. Jį nustačius, vienas iš imuninės reakcijos dalyvių (dažniausiai mažos molekulinės masės antigenas) paženklinamas fermentu, o antigeno-antikūno komplekso formavimosi eiga stebima registruojant fermento aktyvumo pokytį.

Toks fermentinio aktyvumo sutrikimas gali atsirasti dėl erdvinio fermento ir substrato atsiejimo, arba dėl fermento molekulės konformacinių pokyčių, lydinčių imuninio komplekso susidarymą. GIFA turi daug reikšmingų pranašumų, palyginti su kitais imunocheminiais metodais. Pirma, didelė išraiška (visa analizė naudojant GIFA užtrunka minutes ir net minučių dalis).

Ryžiai.8 Homogeninės ELISA parinktys(A – fermento (F) ir substrato (C) atsiejimo poveikis dėl sterinių kliūčių antigeno (Ag) ir antikūno (Ab) sąveikos metu; B – fermento konformacijos pasikeitimo poveikis. formuojantis antigeno-antikūno kompleksui).

Antra, metodas turi vieną etapą ir nereikalauja daug pastangų reikalaujančių ir daug laiko reikalaujančių plovimo etapų. Ir galiausiai, trečia, metodas reikalauja minimalių tūrių (8-50 µl) ir kiekių biologinio ar klinikinio mėginio. Tačiau HIFA metodas turi vieną itin reikšmingą trūkumą – juo galima kurti diagnostinių tyrimų sistemas tik mažos molekulinės masės antigenams. Tik šiuo atveju antikūnas, sąveikaujantis su antigenu, gali veiksmingai apsaugoti arba modifikuoti su šiuo antigenu susijusią fermento molekulę. Būtent dėl ​​to (nepaisant iš pažiūros paprastumo ir akivaizdžių pranašumų prieš kitus metodus), HIFA pagrindu buvo sukurti diagnostikos rinkiniai, skirti aptikti tik hormonus, peptidus, vaistines ir narkotines medžiagas bei kai kuriuos mažos molekulinės masės baltymus.

5.5 "Sumuštinis" - ELISA variantas, skirtas antigenams aptikti.

Antigenai, aptikti naudojant šį ELISA variantą, turi turėti kelis antikūnus surišančius epitopus arba pasikartojančius, erdviškai atskirtus to paties specifiškumo epitopus.

Atliekant šį ELISA variantą, labai specifiniai poli- arba monokloniniai antikūnai, adsorbuoti ant kietosios fazės, yra inkubuojami su tiriamuoju mėginiu. Po plovimo į duobutes dedami fermentu pažymėti antikūnai (konjugatas) prieš tą patį antigeną, o tada atliekami visi kiti reakcijos etapai. Konkretaus komplekso susidarymo efektyvumas kiekviename analizės etape priklauso nuo antigeno-antikūno reakcijos surišimo konstantos.

ELISA (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA – angl.) į praktinės medicinos gyvenimą įžengė kažkur kitur praėjusio amžiaus 60-aisiais. Pradinė jo užduotis buvo histologiniai tyrimai mokslo tikslais, kurie apsiribojo gyvo organizmo ląstelių antigeninės struktūros paieška ir identifikavimu.

ELISA metodas pagrįstas specifinių (AT) ir susijusių antigenų (AG) sąveika su antigeno-antikūno komplekso susidarymu, kuris nustatomas naudojant fermentą. Šis faktas paskatino mokslininkus suprasti, kad šis metodas gali būti naudojamas diagnostikos tikslais, siekiant nustatyti specifinius įvairių klasių imunoglobulinus, susijusius su imuniniu atsaku į tam tikrą infekciją. Ir tai buvo proveržis klinikinėje laboratorinėje diagnostikoje!

Metodas buvo pradėtas aktyviai naudoti tik devintojo dešimtmečio pradžioje, o vėliau daugiausia specializuotose įstaigose. Pirmieji ELISA analizatoriai buvo pristatyti kraujo perpylimo centrams ir stotims, infekcinėms ir venerinėms ligoninėms, nes kartu su mumis horizonte pasirodė Afrikos žemyne ​​gimęs didžiulis AIDS ir iškart prisijungė prie „senųjų“ infekcijų, todėl reikėjo skubių priemonių diagnozuoti ir ieško jį veikiančių terapinių vaistų.

ELISA metodo taikymo sritis

Fermentinio imunologinio tyrimo galimybės yra tikrai plačios. Dabar sunku įsivaizduoti, kaip apsieiti be tokių studijų, kurios pažodžiui naudojamos visose medicinos šakose. Atrodo, kad ELISA gali padaryti onkologijoje? Pasirodo, gali. Ir daug. Analizės gebėjimas rasti žymenis, būdingus tam tikroms piktybinių navikų rūšims, yra pagrindas anksti aptikti naviką, kai dėl mažo dydžio jis dar nėra aptiktas kitu būdu.

Šiuolaikinė klinikinė laboratorinė diagnostika (CDL), be navikų žymenų, turi nemažą ELISA panelių arsenalą ir naudoja jomis diagnozuojant įvairias patologines sąlygas (infekcinius procesus, hormoninius sutrikimus) ir stebint farmacinius vaistus, siekiant nustatyti jų poveikį paciento organizmui. kūno ir, beje, ne tik žmogaus. Šiuo metu veterinarinėje tarnyboje plačiai taikomas fermentinis imunologinis tyrimas, nes „mūsų mažesnieji broliai“ taip pat yra imlūs daugeliui ligų, nuo kurių kartais labai kenčia.

Taigi, ELISA dėl savo jautrumo ir specifiškumo iš kraujo mėginio, paimto iš venos, gali nustatyti:

  • Hormoninė būklė (skydliaukės ir antinksčių hormonai, lytiniai hormonai);
  • Virusinės ir bakterinės infekcijos buvimas (ŽIV, B ir C, chlamidijos, sifilis ir daugelis kitų ligų, kurias sukelia patogeniniai mikroorganizmai);
  • Mikroorganizmų gyvybinės veiklos pėdsakai, kurie inicijavo infekcinį procesą, kuris baigėsi sėkmingai ir perėjo į imuninio atsako į šį sukėlėją formavimosi stadiją. Tokie pėdsakai, tai yra antikūnai, daugeliu atvejų lieka cirkuliuoti kraujyje visą gyvenimą, o tai apsaugo žmogų nuo pakartotinio užsikrėtimo.

Kokia IF esmė?

Fermentinio imunologinio tyrimo metodas leidžia nustatyti ne tik paties patogeno buvimą (kokybinė analizė), bet ir kiekybinį jo kiekį paciento kraujo serume.

Viruso ar bakterijų dozė reikšmingai įtakoja infekcinio proceso eigą ir jo baigtį, todėl kiekybinė analizė vaidina svarbų vaidmenį diagnozuojant ir gydant įvairių formų ir stadijų ligas.

Tačiau žinant su fermentais susietus imunosorbentus tyrimus kaip ELISA metodą, net nesusimąstome, kaip jis sugeba aprėpti tokį platų mūsų planetoje gyvenančių mikroorganizmų spektrą, kurių daugelis kelia tiesioginę grėsmę žmonių sveikatai ir gyvybei. gyvūnai. Faktas yra tas, kad ELISA turi daugybę galimybių (nekonkurencinių ir konkurencinių – tiesioginių ir netiesioginių), kurių kiekviena išsprendžia savo problemą ir leidžia atlikti tikslinę paiešką.

Vienos ar kitos klasės imunoglobulinams aptikti naudojama tradicinė 96 šulinėlių polistireno plokštė (tabletė), kurios duobutėse kietoje fazėje koncentruojami adsorbuoti rekombinantiniai baltymai. Antikūnai ar antigenai, patekę į šulinėlį su kraujo serumu, randa „pažįstamą“ objektą ir sudaro su juo kompleksą (AG - AT), kuris, fiksuotas fermento konjugatu, pasireikš kaip duobutės spalvos pasikeitimas. skaitant rezultatus.

Fermentinis imunologinis tyrimas atliekamas naudojant tam tikro specifiškumo testavimo sistemas, pagamintas specialiose laboratorijose ir aprūpintas visais reikalingais reaguojančiais komponentais. Tyrimai gali būti atliekami naudojant poveržles ("poveržles") ir skaitymo spektrofotometrus, kur daugiausia dirbama rankomis. Visiškai automatinėse mašinose, išlaisvinant laborantą nuo monotoniško lašinimo, plovimo ir kitų įprastų užduočių, dirbti, žinoma, yra greičiau ir patogiau, tačiau ne visos laboratorijos gali sau leisti tokią prabangą ir toliau dirbti senamadiškai - pusiau automatiniuose įrenginiuose.

ELISA rezultatų interpretavimas priklauso laboratorinės diagnostikos gydytojo kompetencijai, tuo tarpu būtinai atsižvelgiama į beveik visoms imunocheminėms reakcijoms būdingą savybę duoti klaidingai teigiamus arba klaidingai neigiamus atsakymus.

Vaizdo įrašas: šiuolaikinis fermentinis imunologinis tyrimas

ELISA rezultatai sifilio pavyzdžiu

ELISA tinka visų formų aptikimui, be to, jis naudojamas atrankos tyrimuose. Analizei naudojamas veninis paciento kraujas, paimtas tuščiu skrandžiu. Darbe naudojamos tam tikro specifiškumo plokštelės (AT klasės A, M, G) arba suminiai antikūnai.

Atsižvelgiant į tai, kad sifilio antikūnai gaminami tam tikra seka, ELISA gali lengvai atsakyti į klausimą, kada įvyko infekcija ir kokiame proceso etape, o gautų rezultatų dekodavimas gali būti pateiktas tokia forma:

  • IgM nurodo infekcinio proceso trukmę (gali atsirasti paūmėjus lėtinėms uždegiminėms ligoms);
  • IgA teigia, kad infekcija įvyko daugiau nei prieš mėnesį;
  • IgG rodo, kad infekcija įsibėgėjo arba neseniai gydoma, o tai nesunku sužinoti renkant anamnezę.

Atliekant tyrimą dėl sifilio, neigiamos duobutės (ir neigiama kontrolė) išliks bespalvės, o teigiamos (kaip ir teigiamos kontrolės) spalva bus ryškiai geltona dėl testo metu pridėto chromogeno spalvos pasikeitimo. Tačiau spalvos intensyvumas ne visada atitinka kontrolinį, tai yra, ji gali būti šiek tiek blyškesnė arba šiek tiek gelsva. Tai abejotini rezultatai, kurie, kaip taisyklė, turi būti iš naujo tikrinami, privalomai atsižvelgiant į kiekybinius rodiklius, gautus spektrofotometru, tačiau apskritai spalva yra tiesiogiai proporcinga imuninių kompleksų (susijusių antigenų ir antikūnų) skaičiui. vienas kitam).

Labiausiai jaudinantis fermentų imunologinis tyrimas – ŽIV ELISA

Analizė, galbūt labiau nei kiti, domina platų gyventojų ratą, nes dar negalima tvirtai teigti, kad daugelis socialinių problemų (prostitucija, narkomanija ir kt.) išnyko. Deja, ŽIV paliečia ne tik šiuos visuomenės sluoksnius, užsikrėsti galima įvairiomis aplinkybėmis, nesusijusiomis su seksualiniu palaidumu ar narkotikų vartojimu. Bet jei reikia atlikti ŽIV testą, neturėtumėte bijoti, kad visi aplinkiniai sužinos apie apsilankymą tokioje laboratorijoje. Dabar ŽIV infekuotus žmones saugo įstatymai, o abejojantys gali kreiptis į anoniminius biurus, kur gali išspręsti problemą nebijodami viešumo ir pasmerkimo.

Fermentinis imunologinis tyrimas, naudojamas ŽIV infekcijai diagnozuoti, yra vienas iš pirminių standartinių tyrimų, tačiau tam reikalingos specialios sąlygos, nes tema labai jautri.

Tikslinga atlikti ŽIV ELISA tyrimą po lytinio kontakto, kraujo perpylimo, kitų medicininių procedūrų, susijusių su infekcija, ir pasibaigus inkubaciniam periodui („seronegatyvus langas“), tačiau reikia nepamiršti, kad šiuo laikotarpiu nėra pastovus. Jis gali baigtis per 14–30 dienų arba gali trukti iki šešių mėnesių, todėl vidutinė vertė laikoma intervalu nuo 45 iki 90 dienų. Dėl ŽIV kraujas dovanojamas taip pat, kaip ir nuo kitų infekcijų – iš venos tuščiu skrandžiu. Rezultatai bus paruošti priklausomai nuo medžiagos sukaupimo laboratorijoje ir jos darbo krūvio (nuo 2 iki 10 dienų), nors dauguma laboratorijų atsakymą pateikia tą pačią arba kitą dieną.

Ko galima tikėtis iš ŽIV rezultatų?

ŽIV infekcijos ELISA metu nustatomi antikūnai prieš dviejų tipų virusus: ŽIV-1 (dažniau Rusijoje ir kitose Europos bei Azijos šalyse) ir ŽIV-2 (dažniau Vakarų Afrikoje).

ŽIV ELISA užduotis yra ieškoti G klasės antikūnų, kurie aptinkami visose tyrimo sistemose, bet vėliau, ir A bei M klasės antikūnų, aptiktų naujos kartos rekombinantinių tyrimų rinkiniuose, kurie leidžia aptikti antikūnus anksčiausiai. etapai (inkubacinis laikotarpis yra seronegatyvus langas). Iš ELISA galima tikėtis šių atsakymų:

  1. Pirminis teigiamas rezultatas: kraują pakartotinai tikrina tos pačios rūšies, bet, jei įmanoma, kitos serijos tyrimo sistema ir kitas asmuo (laborantas);
  2. Pakartotinis (+) apima naują paciento kraujo mėginį, kurio tyrimas panašus į pirminę analizę;
  3. Kitas teigiamas rezultatas atliekamas etaloninėje analizėje, kurioje naudojami labai specifiniai testų rinkiniai (2-3 vnt.);
  4. Teigiamas rezultatas abiejose (arba trijose) sistemose siunčiamas imunoblotuoti (ta pati ELISA, bet atliekama atskirai su ypač didelio specifiškumo testų rinkiniais).

Išvada apie ŽIV infekciją daroma tik remiantis imunoblotingu. Pokalbis su užkrėstu asmeniu vyksta visiškai konfidencialiai. Už medicininių paslapčių atskleidimą Rusijoje, kaip ir kitose šalyse, gresia baudžiamoji atsakomybė.

Chlamidijų ir citomegaloviruso analizės naudojant fermentinį imuninį tyrimą taip pat įgijo ypatingą populiarumą dėl to, kad jie leidžia nustatyti užsikrėtimo laiką, ligos stadiją ir gydymo priemonių efektyvumą.

Įvado metu taip pat galima stebėti įvairių klasių antikūnų atsiradimą.įvairiose infekcinio agento sukeltos patologinės būklės fazėse:

  • IgM galima nustatyti jau praėjus septynioms dienoms po užsikrėtimo;
  • IgA rodo, kad infekcija organizme gyvena ilgiau nei mėnesį;
  • IgG patvirtina chlamidijų diagnozę, padeda stebėti gydymą ir nustatyti jo efektyvumą. Pažymėtina, kad G klasės antikūnai organizme išlieka ir cirkuliuoja nepriklausomai nuo ligos trukmės, todėl norint teisingai interpretuoti analizę, reikia atsižvelgti į pamatines vertes (normas), kurios būdas, yra skirtingi kiekvienam CDL: atsižvelgiant į bandymo sistemos prekės ženklą ir į rinkinį įtrauktų reagentų specifiškumą. Normos reikšmės įvedamos į formą šalia ELISA rezultato.

Kalbant apie tai, čia viskas šiek tiek kitaip: M klasės antikūnai atsiranda maždaug per pusantro mėnesio, tai yra, teigiamas rezultatas (IgM +) tampa pirminės infekcijos fazėje arba latentinės infekcijos reaktyvacijos metu ir išlieka nuo 4 mėnesių iki šešių mėnesių.

G klasės antikūnų buvimas būdingas pirminės ūminės infekcijos ar pakartotinės infekcijos atsiradimui. Analizė teigia, kad virusas yra, tačiau nepateikiama informacija apie infekcinio proceso stadiją. Tuo tarpu IgG titro normos nustatymas taip pat kelia keblumų, nes tai visiškai priklauso nuo konkretaus žmogaus imuninės būklės, tačiau tai nustatoma aptikus G klasės imunoglobulinus. Atsižvelgiant į tokį antikūnų elgesį, diagnozuojant CMVI, tampa būtina įvertinti G klasės antikūnų gebėjimą sąveikauti su CMV, siekiant vėliau jį „neutralizuoti“ (AT avidiškumas). Pradinėje ligos stadijoje IgG labai silpnai jungiasi su viruso antigenais (mažas avidiškumas) ir tik tada jie pradeda rodyti aktyvumą, todėl galime kalbėti apie antikūnų avidiškumo padidėjimą.

Apie fermentinio imunologinio tyrimo privalumus galime kalbėti ilgai, nes šiuo metodu pavyko išspręsti daugybę diagnostinių problemų naudojant tik veninį kraują. Nereikia ilgai laukti, nerimauti ir problemų paimant medžiagą tyrimams. Be to, ELISA testų sistemos ir toliau tobulėja, o diena, kai testas duos 100% rezultato patikimumą, jau netoli.

Vaizdo įrašas: mokomasis Maskvos valstybinio medicinos universiteto filmas. Sechenovą apie ELISA pagrindus

Kai paskiriama analizė, atlikite ELISA testą dėl sifilio. Laboratorinės diagnostikos metodai. Analizės rezultatai – kaip nustatyti normą ir nukrypimus. Fermentinio imunologinio tyrimo kaina.

Paprastai, nuolat kreipdamiesi į kliniką, gydytojai skiria įvairius tyrimus. Tai leidžia jiems nustatyti infekcijas ir ligas, kuriomis žmogus serga. ELISA, arba vadinamasis fermentinis imunologinis tyrimas, yra puikus būdas įvertinti organizmo imuninę sistemą ir nustatyti infekciją bei ligos stadiją pagal antikūnų buvimą.

Taigi, kas yra paskirtas atlikti šią analizę ir kas yra fermentinis imunologinis tyrimas? Gydytojai skiria šią analizę, jei asmuo serga šiomis ligomis:

  • Bėrimas ant kūno – alerginės reakcijos.
  • Virusai – herpesas, citomegalavirusas.
  • Lytiniu keliu plintančios ligos – sifilis, trichomonozė.
  • Patologija, susijusi su vėžiu.
  • Neurosifilis.

Be šių ligų, atliekama analizė, siekiant nustatyti hormono kiekį kraujyje. Remiantis gautais rezultatais, įvertinama terapijos kokybė. Kas yra sifilis turbūt žino kiekvienas, bet neatspindi jo masto ir kiek užsikrėtusių vaikšto šalia mūsų.

Šiuo metu sifilis yra labiausiai paplitusi liga. Tai treponoma, pažeidžianti žmogaus kūną. Ir dėl to pažeidžiami visi paciento vidaus organai.

Tai labai pavojinga infekcija, dažnai atsitinka taip, kad ji gali nepasireikšti ilgą laiką. Todėl žmogus gali ilgai būti vežėju ir platintoju, nežinodamas, kad serga.

Laboratorinės diagnostikos metodas

Medicina nestovi vietoje, šiuolaikinės analizės gerokai skiriasi nuo senųjų kūno tyrimo metodų. Nors jie puikiai atliko savo vaidmenį, kartais rezultatų tekdavo laukti savaites ir mėnesius. Tai, žinoma, nebuvo palanku užsikrėtusiam asmeniui. Ko tikimasi rezultato, išgyveno sergantis žmogus.

Klasikinės analizės - sifilio nustatymas Wasserman metodu, Kahno metodas pradėjo prarasti savo pozicijas ir buvo pakeistas tokiais tyrimais kaip ELISA.

Tai moderniausias būdas nustatyti infekciją žmonėms. Rezultatas iššifruojamas naudojant kompiuterį. Tai leidžia tiksliau nustatyti teigiamą rezultatą arba neigiamą testą.

Taip pat skaitykite susijusius

Kas yra STD? Simptomai, gydymas

Dekodavimo metu atliekama antikūnų prieš konkrečias ligas paieška. Ir dėl analizės buvo galima nustatyti infekciją, kai rezultatas buvo teigiamas. ELISA tyrimas sifiliui aptikti reiškia trijų klasių imunoglobulinų naudojimą:

  • G, M, A - diagnozei yra svarbiausi.
  • Jie gaminami užsikrėtusiam asmeniui griežtai tam tikra seka.
  • Greitai nustatykite infekcijos stadiją.

ELISA rezultatai – normali ir teigiama analizė

Jei jis kalba apie ELISA analizę dėl sifilio, tada šiuo atveju sunku pasakyti, kad yra norma ar nuokrypis. Rezultatas dažniausiai būna neigiamas arba teigiamas. Be to, yra titrai, kurie nustato antikūnų kiekį kraujyje.

Iššifruojant analizę yra daug subtilybių, jei rezultatas buvo teigiamas, analizę vis tiek reikės pakartoti keletą kartų, kad būtų pašalintas klaidingai teigiamos reakcijos metodas.

Kaip jau rašyta, iššifruojant analizę yra daug subtilybių, o rezultatą gali nustatyti tik gydantis gydytojas. Lentelėje pateikiame pavyzdžius, kurių rezultatai gali būti parodyti atliekant fermentinį imuninį tyrimą:

Nenusiminkite, jei analizė parodė teigiamą rezultatą. Paprastai, siekiant tiksliau nustatyti diagnozę, įvairiais būdais atliekami papildomi tyrimai ir tyrimai.

Fermentinio imunologinio tyrimo kaina

Paprastai šios analizės kaina tiesiogiai priklauso nuo pačios analizės ir konkrečios infekcijos nustatymo. Įvairių tipų infekcijos žymenų nustatymas kainuoja nuo 200 iki 350 rublių. Ir tokia analizė atliekama per dvi dienas.

ELISA yra populiariausias ir moderniausias organizmo diagnostikos metodas. Metodas parodė savo veiksmingumą nustatant infekciją ir nustatant tikslų infekcijos laikotarpį.

Atsižvelgiant į kainų politiką, galime teigti, kad analizė prieinama kiekvienam asmeniui, turinčiam bet kokį biudžetą. Tai leidžia gydančiam gydytojui gauti išsamų vaizdą apie asmens infekciją. Jis parodė save byloje ir nenuvylė gydytojų. Tuo pačiu metu, gavęs analizę, gydantis gydytojas galėtų operatyviai reaguoti, paskirti savalaikį gydymą.