Laiku diagnozuota ŽIV infekcija tampa itin svarbia priemone, nes ankstyvesnis gydymas gali iš esmės nulemti tolesnę ligos raidą ir pailginti paciento gyvenimą. Pastaraisiais metais šios baisios ligos nustatymo srityje padaryta didelė pažanga: senos tyrimų sistemos keičiamos pažangesnėmis, tyrimo metodai tampa prieinamesni, jų tikslumas gerokai padidėja.
Šiame straipsnyje kalbėsime apie šiuolaikinius ŽIV infekcijos diagnostikos metodus, kuriuos pravartu žinoti, norint laiku gydyti šią problemą ir palaikyti normalią paciento gyvenimo kokybę.
ŽIV diagnozavimo metodai
Rusijoje ŽIV infekcijai diagnozuoti atliekama standartinė procedūra, kurią sudaro du lygiai:
- ELISA testų sistema (atrankinė analizė);
- imuninis blotingas (IB).
Taip pat gali būti naudojami kiti diagnostikos metodai:
- greitieji testai.
ELISA testų sistemos
Pirmajame diagnozės etape ŽIV infekcijai nustatyti naudojamas atrankos testas (ELISA), kuris yra pagrįstas ŽIV baltymais, sukurtais laboratorijose, kurios fiksuoja specifinius antikūnus, gaminamus organizme reaguojant į infekciją. Po jų sąveikos su tiriamosios sistemos reagentais (fermentais), pasikeičia indikatoriaus spalva. Be to, šie spalvų pokyčiai apdorojami specialia įranga, kuri lemia atliktos analizės rezultatą.
Tokie ELISA tyrimai gali parodyti rezultatus per kelias savaites nuo ŽIV infekcijos įvedimo. Ši analizė nenustato viruso buvimo, bet nustato antikūnų prieš jį gamybą. Kartais žmogaus organizme antikūnai prieš ŽIV prasideda praėjus 2 savaitėms po užsikrėtimo, tačiau daugumos žmonių jie gaminasi vėliau, po 3-6 savaičių.
Yra keturios skirtingo jautrumo ELISA testų kartos. Pastaraisiais metais vis dažniau naudojamos III ir IV kartos bandymų sistemos, kurios yra pagrįstos sintetiniais peptidais arba rekombinantiniais baltymais ir pasižymi didesniu specifiškumu bei tikslumu. Jais galima diagnozuoti ŽIV infekciją, stebėti ŽIV paplitimą ir užtikrinti saugumą tiriant paaukotą kraują. III ir IV kartos ELISA testų sistemų tikslumas siekia 93-99% (jautresni testai, kurie gaminami Vakarų Europoje – 99%).
ELISA tyrimui atlikti iš paciento venos paimama 5 ml kraujo. Nuo paskutinio valgio iki analizės turi praeiti ne mažiau kaip 8 valandos (paprastai ji atliekama ryte tuščiu skrandžiu). Tokį tyrimą rekomenduojama atlikti ne anksčiau kaip po 3 savaičių po tariamos infekcijos (pavyzdžiui, po nesaugių santykių su nauju lytiniu partneriu).
ELISA tyrimo rezultatai gaunami po 2-10 dienų:
- neigiamas rezultatas: rodo, kad nėra ŽIV infekcijos ir nereikia siuntimo pas specialistą;
- klaidingai neigiamas rezultatas: gali būti stebimas ankstyvosiose infekcijos stadijose (iki 3 savaičių), vėlesnėse AIDS stadijose esant stipriam imuniteto slopinimui ir netinkamai paruošus kraują;
- klaidingai teigiamas rezultatas: jį galima pastebėti sergant kai kuriomis ligomis ir netinkamai paruošus kraują;
- teigiamas rezultatas: rodo užsikrėtimą ŽIV infekcija, reikalingas IB ir paciento siuntimas pas specialistą AIDS centre.
Kodėl ELISA testas gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus?
Klaidingai teigiami ŽIV ELISA testo rezultatai gali būti stebimi netinkamai apdorojant kraują arba pacientams, sergantiems tokiomis sąlygomis ir ligomis:
- daugybinė mieloma;
- infekcinės ligos, kurias sukelia Epstein-Barr virusas;
- būsena po ;
- autoimuninės ligos;
- nėštumo fone;
- būklė po vakcinacijos.
Dėl aukščiau aprašytų priežasčių kraujyje gali būti nespecifinių kryžmiškai reaguojančių antikūnų, kurių susidarymo neišprovokavo ŽIV infekcija.
Pastaraisiais metais klaidingai teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo, nes naudojamos III ir IV kartos testų sistemos, kuriose yra jautresnių peptidinių ir rekombinantinių baltymų (jie sintetinami naudojant in vitro genų inžineriją). Panaudojus tokius ELISA tyrimus, klaidingai teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo ir yra apie 0,02-0,5 proc.
Klaidingai teigiamas rezultatas nereiškia, kad žmogus yra užsikrėtęs ŽIV. Tokiais atvejais PSO rekomenduoja atlikti kitą ELISA testą (privalomas IV kartos).
Paciento kraujas siunčiamas į etaloninę ar arbitražo laboratoriją, pažymėtą „pakartojimas“ ir tiriamas IV kartos ELISA tyrimo sistema. Jei naujos analizės rezultatas yra neigiamas, pirmasis rezultatas pripažįstamas klaidingu (klaidingai teigiamas) ir IB neatliekamas. Jei antrojo tyrimo metu rezultatas yra teigiamas arba abejotinas, pacientas turi atlikti IB per 4–6 savaites, kad būtų patvirtinta arba paneigta ŽIV infekcija.
imuninis blotingas
Galutinė ŽIV infekcijos diagnozė gali būti nustatyta tik gavus teigiamą imuninio blotingo (IB) rezultatą. Jai įgyvendinti naudojama nitroceliuliozės juostelė, ant kurios dedami virusiniai baltymai.
IB kraujo mėginiai imami iš venos. Tada jis yra specialiai apdorojamas, o jo serume esantys baltymai atskiriami specialiame gelyje pagal jų krūvį ir molekulinę masę (manipuliacija atliekama specialia įranga, veikiant elektriniam laukui). Ant kraujo serumo gelio uždedama nitroceliuliozės juostelė ir specialioje kameroje atliekamas blotavimas („blotingas“). Juostelė yra apdorojama ir, jei naudojamose medžiagose yra antikūnų prieš ŽIV, jie prisijungia prie IB antigeninių juostų ir pasirodo kaip linijos.
IB laikomas teigiamu, jei:
- pagal Amerikos CDC kriterijus - ant juostelės yra dvi ar trys eilutės gp41, p24, gp120 / gp160;
- pagal Amerikos FDA kriterijus - ant juostelės yra dvi eilutės p24, p31 ir eilutė gp41 arba gp120 / gp160.
99,9% atvejų teigiamas IB rezultatas rodo ŽIV infekciją.
Jei nėra linijų - IB yra neigiamas.
Identifikuojant linijas su gp160, gp120 ir gp41, IB abejotina. Tokį rezultatą galima aptikti, kai:
- onkologinės ligos;
- nėštumas;
- dažni kraujo perpylimai.
Tokiais atvejais rekomenduojama atlikti antrą tyrimą naudojant kitos įmonės rinkinį. Jei po papildomo IB rezultatas išlieka abejotinas, tuomet būtinas stebėjimas šešis mėnesius (IB atliekamas kas 3 mėnesius).
polimerazės grandininė reakcija
PGR testas gali aptikti viruso RNR. Jo jautrumas yra gana didelis ir leidžia nustatyti ŽIV infekciją jau 10 dienų po užsikrėtimo. Kai kuriais atvejais PGR gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus, nes jo didelis jautrumas taip pat gali reaguoti į antikūnus prieš kitas infekcijas.
Šis diagnostikos metodas yra brangus, reikalauja specialios įrangos ir aukštos kvalifikacijos specialistų. Šios priežastys neleidžia to atlikti atliekant masinius gyventojų tyrimus.
PGR naudojama šiais atvejais:
- nustatyti ŽIV naujagimiams, kuriuos pagimdė ŽIV infekuotos motinos;
- nustatyti ŽIV „lango periodu“ arba esant abejotinam IB;
- kontroliuoti ŽIV koncentraciją kraujyje;
- donorų kraujo tyrimui.
Tik PGR testu ŽIV diagnozė nenustatoma, o atliekama kaip papildomas diagnostikos metodas ginčams spręsti.
Ekspreso metodai
Viena iš ŽIV diagnostikos naujovių tapo greitieji testai, kurių rezultatus galima įvertinti per 10-15 minučių. Efektyviausi ir tiksliausi rezultatai gaunami atliekant imunochromatografinius tyrimus, pagrįstus kapiliarinio srauto principu. Tai specialios juostelės, ant kurių užtepamas kraujas ar kiti tiriamieji skysčiai (seilės, šlapimas). Esant antikūnams prieš ŽIV, po 10-15 minučių ant testo atsiranda spalvota ir kontrolinė juostelė – teigiamas rezultatas. Jei rezultatas neigiamas, rodoma tik kontrolinė eilutė.
Kaip ir atliekant ELISA testus, greitųjų testų rezultatai turėtų būti patvirtinti IB analize. Tik tada galima diagnozuoti ŽIV infekciją.
Yra greitųjų rinkinių, skirtų testavimui namuose. OraSure Technologies1 (JAV) testas yra patvirtintas FDA, parduodamas be recepto ir gali būti naudojamas ŽIV aptikti. Po tyrimo, gavus teigiamą rezultatą, pacientui rekomenduojama atlikti tyrimą specializuotame centre, kad būtų patvirtinta diagnozė.
Likę bandymai, skirti naudoti namuose, dar nepatvirtinti FDA ir jų rezultatai gali būti labai abejotini.
Nepaisant to, kad greitieji testai yra prastesni nei IV kartos ELISA tyrimai, jie plačiai naudojami papildomam populiacijos tyrimui.
Pasitikrinti dėl ŽIV infekcijos galite bet kurioje poliklinikoje, Centrinėje regioninėje ligoninėje ar specializuotuose AIDS centruose. Rusijos teritorijoje jie laikomi visiškai konfidencialiai arba anonimiškai. Kiekvienas pacientas gali tikėtis medicininės ar psichologinės konsultacijos prieš arba po analizės. Už ŽIV tyrimus teks mokėti tik komercinėse gydymo įstaigose, o valstybinėse klinikose ir ligoninėse jie atliekami nemokamai.
Norėdami gauti informacijos apie tai, kaip galite užsikrėsti ŽIV ir kokie mitai egzistuoja apie galimybę užsikrėsti, skaitykite
... bet kurios infekcinės ligos diagnozė grindžiama epidemiologinių, klinikinių ir laboratorinių duomenų palyginimu, o vienos iš šių duomenų grupių vertės perdėjimas gali lemti diagnostikos klaidas.
ŽIV infekcijos diagnozė susideda iš dviejų etapų:
aš etapas - nustatyti faktinį užsikrėtimo ŽIV faktą
;
II etapas - ligos stadijos nustatymas
.
UŽSIKRITIMO ŽIV FAKTŲ NUSTATYMAS
Pats ŽIV užsikrėtimo fakto nustatymas (tai yra ŽIV užsikrėtusių asmenų nustatymas) taip pat apima du etapus:
Aš scenoje- susietas imunosorbentų tyrimas(JEIGU): ELISA metodas yra atranka (selektyvinė) - galimai užsikrėtusių asmenų atranka, tai yra jo tikslas yra nustatyti įtartinus asmenis ir atrinkti sveikus asmenis; antikūnai prieš ŽIV nustatomi naudojant kitus antikūnus prieš norimus antikūnus (antikūnus prieš kitus antikūnus). Šie „pagalbininkai“ antikūnai yra paženklinti fermentu. Visi atrankiniai testai turi būti labai jautrūs, kad nepraleistumėte paciento. Dėl šios priežasties jų specifiškumas nėra labai didelis, tai yra, ELISA gali duoti teigiamą atsaką ("tikriausiai serga") neinfekuotiems žmonėms (pavyzdžiui, pacientams, sergantiems autoimuninėmis ligomis: reumatu, sistemine raudonąja vilklige ir kt.). Klaidingai teigiamų rezultatų dažnis naudojant įvairias testavimo sistemas svyruoja nuo 0,02 iki 0,5%. Jei asmens ELISA davė teigiamą rezultatą, norint patvirtinti ŽIV užsikrėtimo faktą, būtina atlikti papildomą tyrimą. Atliekant ELISA 3–5% atvejų, galimi klaidingai neigiami rezultatai - jei infekcija įvyko palyginti neseniai ir antikūnų lygis vis dar yra labai mažas arba baigiamojoje ligos stadijoje, kuriai būdingas didelis pažeidimas imuninė sistema su dideliu antikūnų susidarymo proceso pažeidimu. Todėl, turint duomenų, rodančių kontaktą su ŽIV infekuotais asmenimis, pakartotiniai tyrimai dažniausiai atliekami po 2–3 mėnesių.
II etapas - imunoblotingas(Western Blot modifikacija, Western blot): yra sudėtingesnis metodas ir padeda patvirtinti infekcijos faktą. Šiuo metodu aptinkami ne kompleksiniai antikūnai prieš ŽIV, o antikūnai prieš atskirus jo struktūrinius baltymus (p24, gp120, gp41 ir kt.). Imunoblotavimo rezultatai laikomi teigiamais, jei aptinkami antikūnai prieš bent tris baltymus, iš kurių vieną koduoja env genai, kitą – gag genai, o trečią – pol genai. Jei aptinkami antikūnai prieš vieną ar du baltymus, rezultatas laikomas abejotinu ir jį reikia patvirtinti. Daugumoje laboratorijų ŽIV infekcijos diagnozė nustatoma, jei vienu metu aptinkami antikūnai prieš p24, p31, gp4l ir gpl20/gp160 baltymus. Metodo esmė: virusas suardomas į komponentus (antigenus), kurie susideda iš jonizuotų aminorūgščių liekanų, todėl visi komponentai turi skirtingą aušrą; tada, naudojant elektroforezę (elektros srovę), antigenai paskirstomi juostelės paviršiuje – jei tiriamajame serume yra antikūnų prieš ŽIV, jie sąveikaus su visomis antigenų grupėmis, ir tai galima nustatyti.
Reikėtų prisiminti kad 90-95% užsikrėtusiųjų ŽIV antikūnai atsiranda per 3 mėnesius po užsikrėtimo, 5-9% užsikrėtusiųjų ŽIV antikūnai atsiranda po 6 mėnesių, o 0,5-1% užsikrėtusiųjų antikūnai prieš ŽIV atsiranda vėliau. AIDS stadijoje antikūnų skaičius gali sumažėti iki visiško išnykimo.
Imunologijoje yra toks dalykas kaip "serologinis langas" - laikotarpis nuo užsikrėtimo iki tokio skaičiaus antikūnų, kuriuos galima aptikti, atsiradimo. ŽIV atveju šis laikotarpis paprastai trunka nuo 2 iki 12 savaičių, retais atvejais ilgiau. „Serologinio lango“ metu žmogus pagal tyrimus yra sveikas, tačiau iš tikrųjų yra užsikrėtęs ŽIV. Nustatyta, kad ŽIV DNR gali būti žmogaus genome mažiausiai trejus metus be aktyvumo požymių ir neatsiranda antikūnų prieš ŽIV (ŽIV infekcijos žymenys).
Per šį laikotarpį („serologinis langas“) galima nustatyti ŽIV užsikrėtusį asmenį ir net 1-2 savaites po užsikrėtimo naudojant polimerazės grandininė reakcija(PGR). Tai itin jautrus metodas – teoriškai galima aptikti 1 DNR 10 ml terpės. Metodo esmė tokia: naudojant polimerazės grandininę reakciją, gaunama daug nukleorūgšties kopijų (virusas yra nukleorūgštis – DNR arba RNR – baltymo apvalkale), kurios vėliau aptinkamos naudojant žymėtus fermentus arba izotopus. , taip pat būdinga struktūra. PGR yra brangus diagnostikos metodas, todėl jis nenaudojamas atrankai ir įprastai.
LIGOS ETAPOS NUSTATYMAS
AIDS esmė yra, visų pirma, T-limfocitų-pagalbininkų, pažymėtų monokloniniais antikūnais – diferenciacijos klasteriais – kaip CD4, sunaikinimas. Atsižvelgiant į tai, diagnozuoti ir stebėti ligos progresavimą neįmanoma be T pagalbininkų subpopuliacijos kontrolės, kurią patogiausia atlikti naudojant lazerinį ląstelių rūšiatorių.
Dėl lengvos ŽIV infekcijos T limfocitų skaičius yra itin kintantis rodiklis. Apskritai, CD4 ląstelių (absoliutų ir santykinį) skaičiaus sumažėjimas nustatomas asmenims, kuriems ŽIV infekcija įvyko bent prieš metus. Kita vertus, ankstyvose infekcijos stadijose T-supresorių (CD8) skaičius dažnai smarkiai padidėja tiek periferiniame kraujyje, tiek padidėjus limfmazgiams.
Su sunkiu AIDS didžiajai daugumai pacientų bendras T-limfocitų skaičius yra sumažėjęs (mažiau nei 1000 1 μl kraujo, įskaitant CD4 limfocitus – mažiau nei 22/1 μl, o absoliuti CD8 kiekio reikšmė išlieka normos ribose). Atitinkamai CD4/CD8 santykis smarkiai sumažėja. T-limfocitų atsakas in vitro į standartinius antigenus ir mitogenus sumažėja griežtai atsižvelgiant į santykinai sumažėjusį CD4 skaičių.
Pažengusiems AIDS kuriai būdinga bendra limfopenija, neutropenija, trombocitopenija (atitinkamai limfocitų, neutrofilų ir trombocitų kiekio sumažėjimas), anemija. Šie pokyčiai gali atsirasti dėl centrinio hematopoezės slopinimo, kurį sukelia virusas pažeidžiant kraujodaros organus, taip pat dėl autoimuninio periferinių ląstelių subpopuliacijų sunaikinimo. Be to, AIDS būdingas vidutinis gama globulinų kiekio padidėjimas ir dominuojantis IgG kiekio padidėjimas. Pacientams, sergantiems sunkiais AIDS simptomais, dažnai būna padidėjęs IgA kiekis. Kai kuriais ligos etapais tokių AIDS žymenų, kaip 1-mikroglobulinas, rūgščiai stabilus interferonas, 1-timozinas, lygis žymiai padidėja. Tas pats atsitinka su laisvo neopterino, makrofagų metabolito, sekrecija. Kiekvieno iš išvardytų testų santykinės svarbos įvertinti kol kas neįmanoma, jų skaičius nuolat didėja. Todėl jie turėtų būti vertinami sąveikaujant su ŽIV infekcijos žymenimis, tiek imunovirusiniais, tiek citologiniais. Klinikiniam kraujo tyrimui būdinga leukopenija, limfopenija (atitinkamai leukocitų ir limfocitų kiekio sumažėjimas).
1 etapas - " inkubacinis etapas»
- dar neaptikti antikūnai prieš ŽIV; ŽIV infekcijos diagnozė šioje stadijoje nustatoma remiantis epidemiologiniais duomenimis ir turi būti laboratoriškai patvirtinta nustačius žmogaus imunodeficito virusą, jo antigenus, ŽIV nukleino rūgštis paciento kraujo serume;
2 etapas - " pradinių apraiškų stadija»
- šiuo laikotarpiu jau gaminami antikūnai:;
2A etapas - " besimptomis»
- ŽIV infekcija pasireiškia tik antikūnų gamyba;
2B etapas - " ūminė ŽIV infekcija be antrinės ligos»
- pacientų kraujyje plačios plazmos limfocitai - galima aptikti „mononuklearines ląsteles“ ir dažnai pastebimas laikinas CD4 limfocitų kiekio sumažėjimas (ūminė klinikinė infekcija pasireiškia 50–90% užsikrėtusių asmenų per pirmuosius 3 praėjus mėnesiams po užsikrėtimo; ūminės infekcijos laikotarpis, kaip taisyklė, yra prieš serokonversiją, t. y. antikūnų prieš ŽIV atsiradimą);
2B etapas - " ūminė ŽIV infekcija su antrinėmis ligomis»
- sumažėjus CD4 limfocitų kiekiui ir dėl to atsirandančiam imunodeficitui, atsiranda įvairių etiologijų antrinės ligos (tonzilitas, bakterinė ir pneumocistitinė pneumonija, kandidozė, herpes infekcija ir kt.);
3 etapas - " latentinis»
- reaguojant į imunodeficito progresavimą, imuninis atsakas modifikuojamas pernelyg didelio CD4 ląstelių dauginimosi forma, po to palaipsniui mažėja CD4 limfocitų kiekis, vidutiniškai 0,05-0,07x109/l per metus. ; kraujyje randami antikūnai prieš ŽIV;
4 etapas - " antrinių ligų stadija»
- sumažėjus CD4 limfocitams, ženkliai sumažėja antikūnų prieš virusą koncentracija (priklausomai nuo antrinių ligų sunkumo, išskiriamos 4A, 4B, 4C stadijos);
5 etapas - " terminalo stadija»
- paprastai CD4 ląstelių skaičiaus sumažėjimas žemiau 0,05x109/l; viruso antikūnų koncentracija gerokai sumažėja arba antikūnų gali neaptikti.
ŽIV infekcijos diagnozė atliekama siekiant nustatyti galutinę diagnozę. Jei pacientas yra tikras dėl infekcijos, neturėtumėte savarankiškai gydytis: turėtumėte pasikonsultuoti su specialistu.
Prisidengiant AIDS galima paslėpti daugybę ligų, kurias galima išgydyti nuėjus pas gydytoją. Infekcijos testai yra labiausiai paplitęs ir ankstyvas diagnostikos metodas.
Infekcijos laipsnio nustatymas tęsiamas laboratorijoje, atliekant kraujo tyrimą ELISA arba PGR.
Dėl ŽIV infekcijos epidemiologinių rodiklių pablogėjimo, ankstyvas ligos atpažinimas tapo labai svarbus. Gydytojas atlieka diferencinę ŽIV infekcijos diagnostiką, renka epidemiologinę informaciją apie ligą.
Tirdamas infekcijos metodus, specialistas atlieka tokius tyrimus kaip:
- ŽIV infekcijos vystymosi mechanizmo tyrimas;
- gretutinių ligų diagnostika.
ŽIV infekcijos diagnozavimo metodai yra skirti nustatyti antikūnus ELISA, o diagnozei patvirtinus specialistas atlieka aiškinamąjį darbą su pacientu apie jo laikymąsi taisyklių, kad būtų išvengta ligos plitimo.
AIDS tyrimas atliekamas vaikams, gimusiems užsikrėtusių motinų po to, kai jiems buvo suteiktas antiretrovirusinis gydymas. Atrankos testai nustato antikūnus prieš ŽIV 1 ir 2.
Imunoblotas yra patvirtinantis ir aptinka antikūnus prieš ŽIV baltymus.
Ankstyva imunodeficito diagnostika leidžia pacientui per trumpą laiką pakeisti gyvenimo būdą, pradėti gydymą ir gauti psichologinę pagalbą. Būdingi paciento nusiskundimai visada padeda gydytojui įtarti AIDS ir paciento kraują nusiųsti į laboratoriją tyrimams.
4 kartos greitieji AIDS testai
Laboratorinė ŽIV infekcijos diagnostika, atliekama 4 kartos tyrimais, leidžia nustatyti ligą ūminėje ligos fazėje. Testas Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo yra labai jautrus antigenams ir antikūnams paciento serume. Tyrimo specifiškumas Ab linijai yra 99,19%, Ag linijai – 99,64%, o teigiama nuspėjamoji reikšmė nustatoma per 55%.
Tyrimo jautrumas nustatomas nustačius anksčiau žinomus rezultatus. Gavus teigiamus duomenis klaidingų skaičių tikimybė siekia 45%.
Namuose atliekamas burnos tepinėlio tyrimas. Tyrimas pacientui patogus, paprastas ir neskausmingas. ImmunoChrom-½-Express tyrimo juostelė naudojama analizei ir užtikrina stabilų rezultatą, jei pacientas laikosi su vaistu pateiktų nurodymų. Jei tiriamojoje ir kontrolinėje srityje aptinkamos dvi identiškos purpurinės juostelės, testas laikomas teigiamu. Vienos juostelės buvimas iššifruojamas kaip neigiamas analizės rezultatas.
Tyrimui skiriamas laikas nuo 15 iki 30 minučių.
Ligos diagnozė inkubaciniu laikotarpiu
Imuninės sistemos pralaimėjimas įvyksta, kai virusas patenka į paciento kūną. Inkubacinis laikotarpis svyruoja per 3 mėnesius.
Po nepageidaujamo ir pavojingo kontakto su partneriu būtina atlikti PGR tyrimą ir, remiantis jo rezultatais, padaryti išvadą apie ŽIV infekcijos buvimą organizme. Maksimalus imunodeficito diagnostikos pradžios laikotarpis yra 8-9 mėnesiai, o išskirtiniais atvejais jis pratęsiamas iki 2 metų.
Galutinei ligos diagnozei tyrimas atliekamas per metus; kas 3 mėnesius pacientas dovanoja kraujo ŽIV. Nedelsiant susisiekus su specialistu po pavojingo kontakto tikimybė užsikrėsti sumažėja 90%.
Ankstyvojo ligos periodo laboratorinei diagnostikai naudojamas polimerazės reakcijos metodas, kuriuo nustatomos nukleino rūgštys. Analizės rezultatai iššifruojami per kelias valandas, išlaikant visišką anonimiškumą.
Kūrybinis ŽIV/AIDS MP-ŽIV ½ testas atliekamas namuose, praėjus 4 savaitėms po pavojingo poveikio. Tyrimo kasetės aptinka antikūnus prieš ŽIV virusą Nr.1 ir Nr.2.
Greiti AIDS diagnostikos metodai vaikams
Užkrėstų motinų kūdikiai yra tiriami dėl AIDS viruso. Serologiniai ligos nustatymo metodai ne visada patvirtinami 5–18 mėnesių kūdikiams, tačiau rezultatas turi teigiamą imunobloto reikšmę.
Labai jautrus PGR metodas leidžia nustatyti AIDS viruso buvimą vaiko kūne.
Sukėlėjo DNR randama vaikui pirmąjį gyvenimo mėnesį. Imunodeficito proviruso aptikimo sistema skirta patogeno RNR koncentracijai nustatyti.
Analizei tinka visas kraujas arba jo išdžiūvusios dėmės. Mėginys dedamas į mėgintuvėlį su EDTA konservantu santykiu 1:20. Laikykite medžiagą 2–8 ° C temperatūroje dvi dienas, kad kraujas neužšaltų.
Išdžiovinti kraujo mėginiai paimami ant specialaus popieriaus užtepus visą skystį. Diagnostikai skirta medžiaga laikoma ne aukštesnėje kaip 8 °C temperatūroje. Kortelių naudojimo terminas neviršija 8 mėnesių.
Naujagimio apžiūra ir analizė atliekama tokiais terminais: 2 dienos po gimimo, sulaukus dviejų mėnesių, po 3-6 mėn. ŽIV proviruso geno aptikimas praėjus kelioms valandoms po gimimo rodo vaisiaus užsikrėtimą prenataliniu laikotarpiu. Infekcija gali atsirasti gimdymo metu arba žindant kūdikį.
Duomenys, patvirtinantys viruso DNR buvimą dviejuose kontroliniuose mėginiuose, rodo, kad kūdikiui išsivystė ŽIV infekcija.
Ambulatorinis stebėjimas atšaukiamas gavus neigiamus PGR testus praėjus 4 mėnesiams po vaiko gimimo.
Tyrimo klaidos
Klaidingai teigiama imunodeficito viruso buvimo paciento kraujyje analizė dėl daugelio priežasčių iškreipia ligos nustatymo tikslumą. Atliekant tyrimą namuose, paciento laukia klaidos.
Klaidingas rezultatas pasirodo, kai pacientas turi kryžminę reakciją, nėštumą, kraujo donorus, gripo viruso infekciją, kvėpavimo takų ligas, autoimunines ligas, vėžį, sklerozę.
Alergija prisideda prie svetimų paciento organizmui antigenų gamybos. Bandymo sistema juos atpažįsta su klaidingu rezultatu. Grybelinės, virusinės infekcijos prisideda prie neteisingo AIDS viruso buvimo nustatymo.
Infekcija turi būti gydoma, o po to atlikti AIDS tyrimą. Kad gautų kokybinį tyrimo rezultatą, pacientas privalo pasakyti gydytojui apie gretutinius negalavimus ir atliekamą gydymą.
Diagnozė ELISA metodu
Bendras antikūnų spektras, aptiktas atliekant fermentinį imuninį tyrimą, atsiranda 95% AIDS virusu užsikrėtusių asmenų. Teigiamas dvigubas ELISA rezultatas reiškia, kad yra antrasis patvirtinantis etapas - imunoblotas. Jį sudaro antikūnų ir jų ryšio su atskiromis patogeno baltymų struktūromis tyrimas. ELISA tyrimas turi dvi reakcijas: fermentinę ir imunologinę. Analizė pagrįsta antikūnų ir antigenų sąveika.
Nuosekliai nustatyti antikūnus, imuninį kompleksą, fermentų aktyvumą. Specialistas iššifruoja analizės duomenis. Neigiamos vertės rodo, kad pacientui nėra ŽIV infekcijos.
Nesant antikūnų ir neseniai užsikrėtus, gydytojas nustato klaidingai neigiamą rezultatą.
Jei medžiagos mėginiai viruso tyrimui nėra laikomi neatsargiai, gauti rodikliai gali būti klaidingi.
Tyrimas, atliktas po to, kai pacientas buvo paskiepytas, yra teigiamas ir gali būti nepatikimas.
Serumo skiedimas turi būti tinkamai paruoštas, panaudotos plokštelės nuvalytos ir įsigyti aukštos kokybės dažai.
Teigiamas imunoblokavimo rezultatas pasireiškia GP 41 ir GP 120 juostų ir antigeno deriniu. Neigiamą rezultatą rodo juostų nebuvimas.
Sudarant diagnostinę išvadą atsižvelgiama į tyrimo rezultatus, paciento apžiūros ligoninėje rodiklius, paciento epidemiologinę apklausą.
Pirmieji skirti identifikuoti visus ŽIV užsikrėtusius asmenis, antrieji – identifikuoti asmenis, kurie nėra užsikrėtę ŽIV, tačiau atrankinio tyrimo metu davė teigiamą reakciją. Todėl atrankos testai yra labai jautrūs, t. y. beveik nėra klaidingų neigiamų rezultatų, o patvirtinamieji testai yra labai specifiški, t. y. beveik nėra klaidingų teigiamų rezultatų. Kartu šie tyrimai suteikia tikslius ir patikimus rezultatus, kurie gali aptikti užkrėstus kraujo produktus ir diagnozuoti ŽIV infekciją. Tačiau yra biologinių veiksnių, mažinančių šių testų tikslumą; taip pat galimos laboratorinės klaidos. Todėl kiekviena laboratorija, kuri tiria ŽIV antikūnus, turi turėti nepriekaištingą šių tyrimų kokybės kontrolės programą. Reikia nepamiršti, kad laboratorinių tyrimų patikimumas niekada nėra šimtaprocentinis ir kad jų rezultatai visada turi būti vertinami kaip klinikinės diagnozės papildymas.
Lango laikotarpis ir ankstyvas ŽIV infekcijos nustatymas:
Antikūnai prieš ŽIV pradedami gaminti netrukus po užsikrėtimo, tačiau jų atsiradimo laikas priklauso nuo daugelio veiksnių, ypač nuo paciento imuninės sistemos būklės ir viruso savybių. Svarbu pažymėti, kad antikūnų kraujyje gali būti jau anksti po užsikrėtimo, tačiau jų koncentracija yra mažesnė už kai kurių metodų aptikimo ribą (lango periodas). Pirmosios tyrimo sistemos aptiko antikūnus beveik visiems ŽIV užsikrėtusiems žmonėms praėjus 6–12 savaičių po užsikrėtimo. Naujausios testavimo sistemos, įskaitant trečios kartos ELISA gaudyklę, aptinka antikūnus praėjus 3-4 savaitėms po užsikrėtimo. Laikas nuo užsikrėtimo iki ŽIV infekcijos diagnozavimo gali sutrumpėti keliomis dienomis, taikant ŽIV antigeno nustatymo metodus, ir dar keliomis dienomis taikant ŽIV RNR nustatymo metodus. Jei naudojami visi aprašyti metodai, daugumai pacientų ŽIV infekcijos diagnozę galima nustatyti jau praėjus 2-3 savaitėms po užsikrėtimo. Prekyboje esančios testų sistemos, skirtos ŽIV antikūnų atrankai, yra labai didelio ir maždaug vienodo jautrumo, pakankamo daugumai ŽIV užsikrėtusių žmonių nustatyti (vadinamasis epidemiologinis jautrumas). Tačiau skirtingos testavimo sistemos skiriasi analitiniu jautrumu, t. y. gebėjimu aptikti žemą antikūnų kiekį, kuris atsiranda prieš serokonversiją.
Yra tyrimų sistemų, skirtų IgM antikūnams prieš ŽIV aptikti, tačiau jos nėra plačiai naudojamos ankstyvai ŽIV infekcijos diagnostikai, nes IgM antikūnai ne visada gaminami anksti po užsikrėtimo. Kai kurios trečios kartos testavimo sistemos vienu metu aptinka IgM ir IgG antikūnus prieš ŽIV ir turi didesnį analitinį jautrumą.
Taip pat žiūrėkite:ŽIV statuso atskleidimas nesigailint, pertvaros iškrypimas, kraujagyslių aneurizma: paslėpta grėsmė sveikatai, Prenatalinė patikra; chromosomų anomalijos, latentinis žvairumas (Strabismus latenta, heterophoria), paslėpta rizika: moterys ir širdies ligos, latentinis sifilis (Syphilis latens), realaus laiko RT-PGR CDC protokolas gripo A(H1N1) aptikimui ir tyrimui, dantų griežimas (bruksizmas), kalimas : paslėpti alergenai
|
Laboratorinė ŽIV infekcijos diagnostika
Diagnozuojant ŽIV infekciją, naudojamos 4 metodų grupės:
1. Viruso, jo antigenų arba RNR kopijų buvimo medžiagose iš paciento ar ŽIV užsikrėtusio nustatymas.
Serologinė diagnostika, pagrįsta specifinių antikūnų prieš paviršinius (gp 120 ir gp 41) ir vidinius (p 18 ir p 24) ŽIV baltymus nustatymu.
3. Patognomoninių (specifinių) ŽIV infekcijos pakitimų imuninėje sistemoje nustatymas.
Oportunistinių infekcijų (su AIDS susijusių ligų) laboratorinė diagnostika.
1. Virusologinė diagnostika.ŽIV išskyrimo medžiaga yra kraujo T limfocitai, kaulų čiulpų leukocitai, limfmazgiai, smegenų audinys, seilės, sperma, smegenų skystis ir kraujo plazma.
Gauta medžiaga naudojama ištisinei T limfocitų kultūrai (H9) užkrėsti. ŽIV indikacija ląstelių kultūroje atliekama CPP (simplastų susidarymas), taip pat imunofluorescencija, elektronine mikroskopija, ryškiu atvirkštinės transkriptazės aktyvumu.
Šiuolaikiniai tyrimo metodai leidžia aptikti vieną užkrėstą limfocitą 1000 ląstelių.
Viruso antigenų aptikimas užkrėstuose T-limfocituose atliekamas naudojant monokloninius antikūnus
Pastaraisiais metais ŽIV RNR kopijų skaičiaus kraujo plazmoje nustatymas polimerazės grandininės reakcijos (PTCR) metodu, vadinamuoju virusiniu krūviu, buvo itin svarbus nustatant ŽIV infekcijos prognozę ir sunkumą.
Jei pacientams, kuriems negydoma, viruso kiekis yra mažesnis už aptikimo ribą (tai yra mažiau nei 5000 ŽIV RNR kopijų 1 ml plazmos), tai rodo neprogresavimą arba lėtą progresavimą. Infekcijos laipsnis yra minimalus. Didelis viruso kiekis (daugiau nei 10 000 RNR kopijų 1 ml plazmos) pacientams, kurių CO4 limfocitų yra mažiau nei 300 1 µl, visada rodo ligos progresavimą.
Serologinė diagnozė. Šiuo metu jis buvo plačiai paplitęs.
Tiriama medžiaga: 5 ml. heparinizuotas kraujas, kurį iki pristatymo į laboratoriją galima laikyti šaldytuve 6-8 valandas, bet neužšaldyti.
Serologinei AIDS diagnozei pirmiausia naudojami su fermentais susiję imunosorbento tyrimo metodai su standartiniais fermentais susietais imunosorbentais tyrimais (ELISA).
Tai atrankos metodas. Veikimo principas pagrįstas klasikiniu tiesioginės ELISA principu. Imunosorbentas – tai polistireno tabletės su imobilizuotu inaktyvuotu virusui specifiniu antigenu, gautu iš ŽIV arba sintetiniu būdu.
Tada tiriamas serumas pridedamas praskiedus. Inkubuojama šuliniuose su antigenu. Po to, kai AG prisijungia prie AT, nesurišti baltymai plaunami tris kartus, o po to į duobutes pridedamas antikūnų prieš žmogaus imunoglobulinus konjugatas su fermento žyma.
Specifinio AG + AT komplekso susidarymas nustatomas įvedant fermento substratą (ortofenilendiamino ir vandenilio peroksido tirpalą).
Dėl to terpės spalva kinta proporcingai antikūnų kiekiui. Į tyrimo rezultatus atsižvelgiama spektrofotometru.
Kraujo serumai, turintys virusui specifinių antikūnų pagal ELISA, turėtų būti toliau tiriami imuniniu blotingu.
Imuninis blotingas yra patvirtinantis testas, nes aptinkami antikūnai prieš įvairius ŽIV baltymus.
Jis pagrįstas preliminariu ŽIV baltymų frakcionavimu pagal molekulinę masę (atskyrimu) poliakrilamido gelio elektroforeze, po kurio antigenai perkeliami į nitroceliuliozės membraną. Tada tiriamasis serumas užtepamas ant membranos. Šiuo atveju specifiniai antikūnai sudaro kompleksą su specifiniu antigenu (gp.120, gp.41, p.24, p.18). Paskutinis tyrimo etapas – antikūnų prieš įvairius ŽIV baltymus nustatymas.
Tam į sistemą pridedami antikūnai prieš žmogaus baltymus, paženklinti fermentu arba radioizotopiniu žymeniu.
Taigi paciento serume aptinkami (arba neaptinkami) virusui specifiniai antikūnai prieš visus arba daugumą ŽIV antigenų.
3. Imuninės būklės tyrimai. Siekiama nustatyti:
1) CD4 / CD8 ląstelių santykio sumažėjimas (N 2 ir >, sergant AIDS - 0,5 ir<);
2) CD4 ląstelių kiekio sumažėjimas (<200 клеток/мл.);
3) vieno iš laboratorinių požymių buvimas, įskaitant anemiją, leukopeniją, trombocitopeniją, limfopeniją;
4) Ig A ir Ig G koncentracijos padidėjimas kraujo serume;
5) limfocitų blastinio granuliavimo atsako į mitogenus sumažėjimas;
6) GTZ odos reakcijos į kelis antigenus nebuvimas;
7) cirkuliuojančių imuninių kompleksų lygio padidėjimas.
Ankstesnis1234567891011Kitas
PERŽIŪRĖTI DAUGIAU:
Antikūnai prieš ŽIV 1/2- baltyminio pobūdžio kraujo plazmos komponentai, kurie neleidžia daugintis ŽIV infekcijai ir visiškai neutralizuoja jų neigiamą poveikį.
Kas yra ŽIV antikūnų testas 1/2 (atranka)
Antikūnų prieš ŽIV 1,2 atrankos analizė – testų sistema, leidžianti atpažinti imunodeficito virusu užsikrėtusius asmenis. Be šių, dar yra vadinamieji patvirtinamieji (pagalbiniai) tyrimai, kurių užduotis – patikros metu nustatyti asmenis, neužsikrėtusius virusu, tačiau turinčius teigiamą reakciją į virusą.
ŽIV infekcijos atrankinio tyrimo esmė – nustatyti antikūnus prieš imunodeficito virusą.
Jo skiriamasis bruožas yra padidėjęs jautrumas – daugiau nei 99,5%. Tyrimo specifiškumas yra tas, kad atranka gali duoti klaidingai teigiamą rezultatą, jei paciento organizme yra autoantikūnų.
Identiškas rezultatas gali būti nustatytas sergant kepenų liga, pasiskiepijus nuo gripo ar sergant bet kokia ūmia virusine liga. Remiantis tuo, norint gauti tikslius rezultatus, kartu su atranka paprastai yra įprasta atlikti aukščiau minėtą patvirtinamąjį tyrimą.
Indikacijos analizei
Medicinos praktikoje yra gana platus atrankos indikacijų spektras.
Pacientas gali kreiptis į laboratoriją, jei:
- įtarimas dėl infekcijos (jei buvo artimas kontaktas su ŽIV infekcijos nešiotoju);
- su svorio kritimu, karščiavimu;
- pneumonija, kuriai negalima taikyti įprastinio gydymo;
- lėtinės ligos, atsiradusios dėl nežinomų priežasčių;
- ruošiantis operacijai;
- kraujo perpylimai;
- nėštumas ir šeimos planavimas;
- Su limfmazgių uždegimu;
- Atsitiktinis seksas.
Asmenys, patenkantys į specialią rizikos grupę: narkomanai ir asmenys, gyvenantys laisvą seksualinį gyvenimą.
Kaip atliekama ŽIV antikūnų patikra 1/2
Procedūra apima kelių būtinų taisyklių laikymąsi:
- pacientas turi duoti kraujo tik tuščiu skrandžiu (galima gerti vandenį);
- nuo paskutinio valgio turi būti praėję ne mažiau kaip aštuonios valandos;
- gydytojas turi būti informuotas apie tai, kokius vaistus pacientas vartoja, ir žinoti dozę (jei nėra galimybės net trumpam atšaukti);
- jei pacientas gali atidėti vaistų vartojimą, jam rekomenduojama tai padaryti likus 10-15 dienų iki manipuliavimo dienos;
- likus dienai iki tyrimo pradžios, pacientui patartina atsisakyti kepto ar riebaus maisto, taip pat draudžiama gerti alkoholinius gėrimus, rūkyti, riboti sunkų fizinį krūvį.
Reikėtų pažymėti, kad laboratoriniai tyrimai dėl infekcijos buvimo vaikams, kurie gimė motinoms, kurios yra imunodeficito viruso nešiotojai, turi savo specifiką.
Kadangi pirmaisiais vaiko gyvenimo mėnesiais jo kraujyje gali būti motinos antikūnų prieš ŽIV, remiantis analizės rezultatais neįmanoma gauti objektyvaus naujagimio sveikatos būklės vaizdo ir net neigiamo rezultato. visiškai nereiškia, kad virusas negalėjo prasiskverbti pro placentos barjerą.
Norint gauti tikslius duomenis, tyrimus reikia atlikti per 36 mėnesius po vaiko gimimo.
Paslaugos „Šiuolaikinės diagnostikos“ kryptimi
Klinikos „Šiuolaikinės diagnostikos“ kryptimi
Yra du platūs, bet labai aiškiai apibrėžti ŽIV antikūnų tyrimo ar patikros tikslai – atvejo aptikimas ir stebėjimas. Nustačius atvejus, pirmiausia reikia išsiaiškinti kiekvieno asmens ŽIV statusą, kad būtų galima pradėti tinkamą gydymą arba imtis atitinkamų priemonių.
Epidemiologinės priežiūros tikslas – įvertinti ŽIV paplitimą, užsikrėtimo atvejų pasiskirstymą ir jo tendencijas grupėje ar visoje populiacijoje.
ŽIV antikūnų tyrimo jautrumas yra jo gebėjimo tiksliai aptikti šiuos antikūnus mėginyje matas, o tyrimo specifiškumas – jo gebėjimo tiksliai patvirtinti, kad antikūnų nėra, kai jų nėra mėginyje, matas.
Idealiu atveju tyrimo jautrumas ir specifiškumas turėtų siekti 100%. Praktikoje šio reikalavimo netenkina joks biologinis testas, tačiau naudojami antikūnų prieš ŽIV tyrimai yra vieni jautriausių ir specifinių šiuo metu prieinamų testų.
Laboratorinė AIDS diagnostika – tai virusologiniai, serologiniai, imunologiniai pacientų, kuriems įtariama AIDS, medžiagos tyrimai.
Atliekant virusologinius tyrimus, virusui išskirti gali būti naudojamos pirminės kraujo mononuklearinių ląstelių kultūros.
Viruso išskyrimas ir identifikavimas yra metodiškai sudėtingas ir gali būti atliekamas specializuotose laboratorijose. Veiksmingiausias diagnostikos metodas, šiuo metu naudojamas įprastiniams masiniams tyrimams, yra antikūnų prieš žmogaus imunodeficito virusą nustatymas. Antikūnai prieš ŽIV gali atsirasti iki pirmojo užsikrėtimo mėnesio pabaigos. Daugelio autorių teigimu, serokonversijai sukurti reikia nuo 4–7 savaičių iki 6 mėnesių ar daugiau. Antikūnų buvimas yra AIDS diagnozė arba rodo jo išsivystymo riziką.
Antikūnai yra ne tik serologinis AIDS žymuo. Atskleisti ikiklinikinėje ligos fazėje, jie leidžia anksti diagnozuoti. Jų buvimas įgyja ypatingą reikšmę nešiotojams aptikti.
Antikūnai aptinkami daugelį metų, beveik visą gyvenimą. Tyrėjai nustatė lygiagretumą nustatant virusą ir antikūnus prieš jį, t.y. antikūnų prieš imunodeficito virusą buvimas rodo didelę tikimybę, kad žmogus yra viruso nešiotojas.
Inkubaciniu laikotarpiu atsiradę antikūnai prieš ŽIV antigeną ir toliau intensyviai gaminami vystantis ligai, nes antigeninį dirginimą skatina ir iš užkrėstų limfocitų išsiskiriantys virionai, ir subvirionų komponentai, patenkantys į kraują irimo metu. užkrėstų ląstelių ir užkrėstų limfocitų.
Tuo pačiu metu provirusas, įmontuotas į užkrėstų ląstelių genomą, lieka nepasiekiamas specifiniams antikūnams. Tuo paaiškinamas iš pažiūros paradoksalus faktas: kuo daugiau antikūnų prieš žmogaus imunodeficito virusą kraujo serume, tuo lengviau iš paciento išskirti patį virusą.
Taip atsitinka todėl, kad antikūnai, gaminami reaguojant į virusinę infekciją, nėra neutralizuojantys, todėl neturi pastebimo poveikio virusui, o tiesiog yra organizme kartu su juo. AIDS viruso antikūnams (AT) nustatyti buvo sukurta nemažai testų, leidžiančių atlikti tyrimus esant pakankamai aukštam specifiškumo ir jautrumo lygiui. Tai kietosios fazės radioimuninio tyrimo, radioimunoprecipitacijos, imunofluorescencijos, fermentų imunologinio tyrimo ir imuninio blotingo metodai.
Imunofermentinio tyrimo (ELISA) metodai, pasižymintys dideliu jautrumu, galimybe kiekybiškai ir vizualiai registruoti reakcijos rezultatus, surado plačiausią pritaikymą praktikoje, todėl metodas yra prieinamas bet kokio lygio laboratorijoms.
ELISA naudoja užsienio ir vietines bandymų sistemas.
Klinikinė ŽIV infekcijos ir AIDS eiga
Reikia būti atsargiems su vaikais, gimusiomis užkrėstoms motinoms. Jei klinikos nėra, vaikas laikomas užsikrėtusiu, jei AT ŽIV išlieka po metų. Gavus teigiamą ELISA rezultatą, būtina tris kartus ištirti serumą, kuris davė vieną teigiamą rezultatą, ir patvirtinti teigiamą rezultatą nepriklausomoje sistemoje - imunoblotingu.
AT aptikimas ELISA reakcijoje nesuteikia pakankamai informacijos, nes tai nerodo tiriamojo būsenos, o tik parodo inkubaciją, ligą arba besimptomės infekcijos buvimą.
Imuninis blotingas suteikia daugiau informacijos, nes AT buvimas daugeliui ŽIV antigenų būdingas sunkiai ligai, o reakcija su 1-2 antigenais labiau būdinga lengvam infekciniam procesui.
Informacinis yra T (pagalbininkų) skaičiaus ir limfocitų T4 ir Te (supresorių) santykio apskaičiavimas, nustatytas naudojant monokponalinius antikūnus.
Svarbus ligos kriterijus gali būti staigus imunoglobulinų, ypač A ir V, skaičiaus padidėjimas. Bendroje klinikinėje kraujo analizėje ligą gali rodyti limfopenija, leukopenija, eritropenija, trombocitopenija, eozinofilija.
Epidemiologinei priežiūrai naudojami ŽIV tyrimai neturi būti tokie tikslūs, kaip tie, kurie reikalingi klinikiniais tikslais.
Tačiau esant labai mažam ŽIV paplitimui populiacijoje, visi teigiami mėginiai turi būti pakartotinai ištirti atliekant papildomus tyrimus.
Kraujo paėmimas ŽIV antikūnų tyrimui ar patikrai gali būti atliekamas kartu su tiriamųjų pavardžių registravimu (vardų rinkimas) arba be pavardžių ar asmens tapatybės nustatymo informacijos registravimo (anoniminis rinkimas) (1 lentelė).
Anoniminė patikra be tapatybės nustatymo informacijos pasižymi šiais punktais: naudojami kitais tikslais paimti kraujo mėginiai; anonimiškumas garantuojamas dėl to, kad nėra renkami identifikavimo duomenys arba į juos neatsižvelgiama; nebūtina gauti tiriamųjų sutikimo; susisiekti su konsultavimo ir socialinėmis tarnybomis nereikia; galiausiai ir svarbiausia, kad statistinių įverčių paklaidos, priklausomai nuo populiacijos dalyvavimo lygio, yra kuo mažesnės.
Nors anoniminio ŽIV tyrimo metu galima gauti tikslesnius duomenis, šis metodas turi šiuos trūkumus: jis negali pašalinti galimo atrankos šališkumo; duomenų apie rizikingą elgesį ir kitus svarbius kintamuosius nėra ir jų negalima rinkti retrospektyviai; neįmanoma užmegzti kontakto su ŽIV užsikrėtusiais asmenimis, siekiant informuoti juos apie jų būklę; apžiūra gali būti atliekama tik asmenų grupėms, kurių kraujas imamas kitais tikslais.
Srityse, kuriose ŽIV paplitimas laikomas labai mažu, visuomenės sveikatos priežiūra pirmiausia turėtų būti sutelkta į asmenis arba populiacijas, kurių elgesys yra didžiausias.
Kraujo ŽIV tyrimams šioje rizikos grupėje lengviausia gauti centruose, kurie specializuojasi gydant lytiškai plintančias ligas ar panašiose įstaigose.
Jei taip pat dažnai vartojami intraveniniai narkotikai, specializuotose įstaigose reikia paimti narkotikų vartotojų kraujo mėginius.
Dažniausiai pakaks kraujo paėmimo kartą per 3 ar 6 mėnesius didžiausios rizikos grupėse iš geografinių vietovių, kuriose tokių grupių yra daugiausia. Išimtis gali būti rizikos grupės, pavyzdžiui, intraveninių narkotikų vartotojai, kuriems gali prireikti dažniau tikrintis.
PSO šiuo metu kuria klinikinių tyrimų ligų klasifikavimo (stadavimo) sistemą, kuri gali būti naudojama ir gydymo tyrimuose, kurie taip pat gali turėti nuspėjamąją reikšmę.
Tačiau tokia sistema neketinama pakeisti esamų AIDS apibrėžimų, naudojamų sveikatos priežiūros priežiūroje.
Šiuo metu visur kuriamos planinės (rutininės) ŽIV stebėjimo sistemos.
Šios sistemos turi būti pritaikytos prie dabartinės epidemiologinės padėties; todėl mėginių ėmimo metodai populiacijose, kuriose viruso paplitimas labai mažas, būtinai turi skirtis nuo tų, kurie naudojami ten, kur paplitimas yra vidutinis arba didelis.
Tokia priežiūra apima įprastus gerai apibrėžtų ir prieinamų populiacijų tyrimus.
Pirmiausia į jį turėtų būti įtrauktos tos grupės, kurioms gresia didžiausia užsikrėtimo rizika, ir kiekvienoje iš šių grupių tirti turi būti atrenkamas pastovus iš anksto nustatytas asmenų skaičius.
Pastaraisiais metais anoniminis patikrinimas stebimose grupėse, neatsižvelgiant į identifikavimo duomenis, tapo tikslus ir ekonomiškas epidemiologinės ŽIV infekcijos stebėjimo būdas sveikatos priežiūros sistemoje.
Laboratorinės ŽIV diagnostikos metodai
Labai specializuotoje laboratorijoje atliekami:
a) kraujyje cirkuliuojančių antikūnų, antigenų ir imuninių kompleksų nustatymas; viruso auginimas, jo genominės medžiagos ir fermentų nustatymas;
b) imuninės sistemos ląstelinio ryšio funkcijų įvertinimas.
Pagrindinis vaidmuo tenka serologinės diagnostikos metodams, kuriais siekiama nustatyti antikūnus, taip pat patogenų antigenus kraujyje ir kituose kūno skysčiuose.
Antikūnų prieš ŽIV tyrimas atliekamas siekiant:
a) kraujo perpylimų ir transplantacijų sauga;
b) stebėjimas, tyrimai, skirti stebėti ŽIV infekcijos paplitimą ir tirti jos paplitimo dinamiką konkrečioje populiacijoje;
c) ŽIV infekcijos diagnostika, t.y.
e) Savanoriškas iš pažiūros sveikų žmonių arba pacientų, turinčių įvairių klinikinių požymių ir simptomų, panašių į ŽIV infekciją arba AIDS, kraujo serumo tyrimas.
Laboratorinės ŽIV infekcijos diagnostikos sistema yra pagrįsta trijų etapų principu.
Pirmasis etapas yra atranka, skirta atlikti pirminius kraujo tyrimus dėl antikūnų prieš ŽIV baltymus. Antrasis etapas yra orientacinis – leidžia naudojant specialius metodinius metodus patikslinti (patvirtinti) pirminį teigiamą rezultatą, gautą atrankos etape. Trečiasis etapas – ekspertinis, skirtas galutiniam ŽIV infekcijos žymenų, nustatytų ankstesniuose laboratorinės diagnostikos etapuose, buvimo ir specifiškumo patikrinimui.
Kelių laboratorinės diagnostikos etapų poreikį pirmiausia lemia ekonominiai sumetimai.
Praktikoje, siekiant pakankamai tiksliai nustatyti ŽIV užsikrėtusius asmenis, naudojami keli testai:
ELISA (ELISA) testas (su fermentu susietas imunosorbentinis tyrimas), skirtas pirmam lygiui nustatyti, pasižymi dideliu jautrumu, nors ir mažesniu specifiškumu nei toliau;
Imuninis blotavimas (Western-blot), labai specifinis ir dažniausiai naudojamas testas, skirtas atskirti ŽIV-1 ir ŽIV-2;
Antigenemijos p25 testas, veiksmingas pradinėse infekcijos stadijose;
Polimerazės grandininė reakcija (PGR).
Masinės kraujo mėginių patikros atvejais rekomenduojama tirti tiriamųjų grupės serumų mišinius, sudarytus taip, kad kiekvieno mėginio galutinis praskiedimas neviršytų 1:100.
Jei serumų mišinys yra teigiamas, analizuojamas kiekvienas teigiamo mišinio serumas. Šis metodas nesukelia jautrumo praradimo tiek ELISA, tiek imunobloto tyrime, tačiau sumažina darbo sąnaudas ir pradinio tyrimo išlaidas 60-80%.
Imunologiniai metodai
T pagalbininkų skaičius,
2. T4 ir T8 santykis,
3. padidėjusio jautrumo būsena,
4. T ląstelių sistemos kompensacinė funkcija.
Tai pasireiškia imunoglobulinų hiperprodukcija, jie turi mažą afinitetą, o organizmo medžiaga sunaudojama dar daugiau.
Trūkumai: atsiranda vėlai, kai kurie imunologiniai rodikliai gali būti su kitomis infekcijomis.
Klinikiniai metodai – galbūt. panašiai kaip ir kitų ligų, būdingiausios apraiškos fiksuojamos vėlesnėse stadijose, todėl klinikinė diagnostika nėra labai efektyvi
Pagrindinis metodas – serologinis – įgyvendinamas 2 etapais:
1 - atrankinis tyrimas - mėginių ėmimas, siekiant nustatyti suminius antikūnus prieš visus imuninės analizės baltymus.
Šis etapas suteikia 95% teisingų rezultatų ir 5% klaidingų teigiamų rezultatų.
2 – patvirtinamasis metodas – visi mėginiai tiriami patvirtinamuoju metodu. Šis metodas leidžia aptikti antikūnus prieš viruso baltymą.
Teigiamas rezultatas, kai aptinkami antikūnai prieš bent 3 viruso baltymus, jei 1 ar 2 rezultatas abejotinas ir reikalauja papildomo tyrimo.
Atliekant pirminę ŽIV infekcijos serodiagnozę, bendrieji antikūnai nustatomi naudojant atrankinės patikros testus – ELISA ir agliutinacijos reakcijas.
Antrajame (arbitražo) etape naudojamas sudėtingesnis testas - imunoblotas, leidžiantis ne tik patvirtinti arba atmesti pradinę išvadą, bet ir tai padaryti nustatant antikūnus prieš atskirus viruso baltymus.
ŽIV antikūnų tyrimo rezultatų aiškinimas
Antikūnų prieš ŽIV analizės rezultatui įtakos turi gana daug skirtingų veiksnių, tarp kurių svarbus ir analizės laikas po galimos infekcijos.
Daugeliu atvejų ŽIV antikūnus galima aptikti praėjus 6–12 savaičių po užsikrėtimo.
Šis laikotarpis nuo viruso patekimo į organizmą iki aptinkamo antikūnų kiekio atsiradimo vadinamas teigiamos serokonversijos periodu arba „lango“ periodu. Yra retų atvejų, kai antikūnai atsiranda praėjus 6 mėnesiams po užsikrėtimo, o pranešimai apie antikūnų aptikimą tik po 1 metų neturi įrodymų. Šiuo metu diagnostikos tarnyboje naudojami naujos kartos ELISA metodai, kuriais galima nustatyti antikūnus prieš ŽIV praėjus 3–4 savaitėms po užsikrėtimo, o tam tikri šių metodų deriniai, vadinamosios testavimo strategijos, „lango“ laikotarpį sutrumpina iki 2–3 savaičių, t.y.
leidžia aptikti antikūnus prieš ŽIV, kai tik jie pradeda gamintis organizme.
Neigiamas rezultatas reiškia, kad tiriamojo kraujyje antikūnų prieš ŽIV nerasta.
Ši būklė vadinama seronegatyvumu ir paprastai reiškia, kad asmuo nėra užsikrėtęs.
Neigiamas rezultatas nesuteikia jokių garantijų ateičiai. Jis nurodo tik būseną ekspertizės metu. Yra nedidelė tikimybė, kad apklausa buvo atlikta lango laikotarpiu. Todėl, jei asmeniui anksčiau buvo rizika užsikrėsti ŽIV, o jo testas buvo neigiamas, jis turi būti pakartotinai tikrinamas praėjus mažiausiai 6 mėnesiams po rizikos įvykio.
Teigiamas rezultatas reiškia, kad tiriamojo kraujyje buvo rasta antikūnų prieš ŽIV.
Ši būklė vadinama seropozityvumu – žmogus yra užsikrėtęs ŽIV. Svarbu suprasti, kad teigiamas rezultatas rodo tik ŽIV infekciją, o ne AIDS.
Tačiau labai svarbu kreiptis į gydytoją patarimo, o prireikus ir medicininės pagalbos, kad gavus teigiamą rezultatą ilgą laiką išliktų gera gyvenimo kokybė.
Neapibrėžtas rezultatas. Retai ŽIV antikūnų tyrimo rezultatas būna neaiškus.
Laboratorija negali pasakyti, ar asmuo seropozityvus, ar seronegatyvus. Esant tokioms aplinkybėms, būtina pasikonsultuoti su gydytoju ir dar kartą išsitirti.