BALTYMŲ MEDŽIAGOS TYRIMAS
kasos lipazės aktyvumas
Klinikinė ir diagnostinė apibrėžimo reikšmė
Pakelti veikla kasos lipazė kraujo serume su pankreatitu bet kokios kilmės, ypač ūminio pankreatito, kurio metu fermento aktyvumas padidėja ir ascitiniame skystyje. Pacientams, sergantiems pankreatitu, patartina vienu metu tirti lipazės aktyvumą kraujyje ir šlapime, nes pastariesiems jis padidėja dažniau nei kraujyje. Vaistai, provokuojantys Oddi sfinkterio spazmą (narkotikai, analgetikai, sekretinas), heparinas (stimuliuojantis lipazės išsiskyrimą), aktyvina šį fermentą.
Sergantiesiems tuberkulioze, sifiliu, vėžiu, įvairiomis infekcinėmis ligomis nustatytas mažas lipazės aktyvumas, o progresuojant patologiniam procesui, fermento aktyvumas vis labiau mažėja.
Baltymai yra didelės molekulinės masės azoto turinčios medžiagos. Yra paprasti baltymai – baltymai, susidedantys iš 20 skirtingų aminorūgščių, ir kompleksiniai baltymai – proteinai, susidedantys iš baltymo ir protezinio (nebaltyminio) komponento. Proteziniai komponentai yra nukleino rūgštys, hemas, lipidai, fosforo rūgštis ir kt. Sudėtiniams baltymams priskiriami nukleoproteinai, chromoproteinai, lipoproteinai ir fosfoproteinai.
Biocheminė analizė paprastai prasideda nuo turinio nustatymo bendro baltymo plazmoje (serumo) kraujyje.
Bendrojo baltymo lygio pokyčiai yra absoliutūs ir santykiniai. Pastarieji dažniausiai stebimi padidėjus (sumažėjus) kraujo (plazmos) tūriui. Taigi hidremija sukelia santykinę hipoproteinemiją, o dehidratacija – santykinę hiperproteinemiją. Šiuo atžvilgiu, aiškinant bendro baltymų kiekio kraujo serume (plazmoje) rodiklius, būtina atsižvelgti į vandens apykaitos sutrikimus.
Dehidratacija gali slėpti absoliučią hipoproteinemiją, nes naudojant šį derinį baltymų koncentracija kraujo plazmoje ne visada skiriasi nuo normos. Iš to išplaukia, kad hipo- ir hiperproteinemijos priežastis gali būti ne tik disbalansas tarp baltymų suvartojimo, biosintezės, jų katabolizmo ir pašalinimo, bet ir intravaskulinės erdvės tūrio pokytis dėl skystos (vandens) kraujo dalies. Akivaizdu, kad šių pokyčių patogenezė yra skirtinga.
Norint atskirti absoliučius ir santykinius plazmos baltymų kiekio pokyčius, pakanka ištirti hematokritą arba nustatyti plazmos (kraujo) tūrį.
Daugumoje lėtinių vidaus organų ligų, kurias lydi baltymų apykaitos pokyčiai, nustatoma hipoproteinemija, kuri dažniausiai yra antrinė.
Absoliuti hipoproteinemija nustatomas esant patofiziologiniams sindromams, išreikštiems biosintezės sumažėjimu, padidėjusiu katabolizmu, nenormaliais nuostoliais, patologiniu baltymų pasiskirstymu tarp atskirų kūno sektorių. Absoliučios hipoproteinemijos priežastys yra šios:
1. Nepakankamas baltymų suvartojimas iš maisto dėl bado, netinkamos mitybos, stemplės susiaurėjimo (dėl nudegimų, navikų), virškinimo trakto vientisumo ir funkcijos pažeidimų, užsitęsusių uždegiminių procesų žarnyno sienelėje ir kt. būklės, kurias lydi virškinimo ir baltymų pasisavinimo pablogėjimas. Bendro baltymų kiekio plazmoje sumažėjimas (arba polinkis vystytis hipoproteinemijai) taip pat pastebimas esant sutrikusio baltyminio maisto pasisavinimo sindromui ir aminorūgščių sudėties disbalansui.
2. Kepenų proteosintetinės funkcijos slopinimas, stebimas sergant parenchiminiu hepatitu, kepenų ciroze, taip pat intoksikacijos, kurias sukelia užsitęsę pūliniai procesai, piktybiniai navikai, tirotoksikozė, tam tikrų cheminių medžiagų toksinis poveikis.
3. Padidėjęs baltymų skaidymas organizme, atsirandantis dėl būtinybės kompensuoti dideles energijos sąnaudas, siejamas su plastiko išteklių trūkumu. Jis pastebimas esant terminiams nudegimams ir nudegimo ligoms, piktybiniams navikams.
4. Organizmo netenkama baltymų: su krauju esant ūminiam ir lėtiniam kraujavimui, su šlapimu – esant nefroziniam sindromui (nefrozė, inkstų amiloidozė).
5. Persikėlimas į kitus audinius su smarkiai padidėjusiu kapiliarų sienelės pralaidumu: susidaro plati edema, perėjimas į trečią erdvę - susidaro eksudatai, išsiliejimas į serozines ertmes, į žarnyno spindį (su volvulu, peritonitu ).
6. Defektoproteinemijos, ᴛ.ᴇ. palyginti reti paveldimi (genetiškai nulemti) kraujo baltymų sintezės sutrikimai.
7. Kūno fiziologinės būklės ypatumai . Sumažėjęs baltymų kiekis kraujo plazmoje taip pat buvo pastebėtas kai kuriomis fiziologinėmis sąlygomis: pavyzdžiui, moterims paskutiniais nėštumo mėnesiais ir žindymo laikotarpiu.
Santykinė hipoproteinemija. Yra žinoma, kad dėl gausaus gliukozės tirpalo ir kitų fiziologinių skysčių perfuzijos sumažėja baltymų koncentracija, nes padidėja skystosios kraujo dalies tūris.
Daugiau nei pusę viso plazmos baltymų kiekio (35-55 g/l) sudaro albuminas. Plazmos albuminas greitai atsinaujina: per dieną susintetinama ir suyra 10-16 g šio baltymo. Dėl didelės koncentracijos, didelio hidrofiliškumo ir mažo molekulinio dydžio albuminas atlieka svarbią funkciją palaikant koloidinį osmosinį kraujo slėgį. Taigi jis dalyvauja vandens mainuose tarp kraujo ir intersticinės erdvės. Kai albumino kiekis yra mažesnis nei 30 g/l, onkotinis slėgis sumažėja tiek, kad vanduo iš vidaus patenka į ekstravaskulinį sektorių.
Albumino kiekio plazmoje nustatymas atlieka esminį vaidmenį vertinant ligų, kurias lydi hipoalbuminemija, eigos sunkumą.
Ne mažiau svarbi diagnostinė vertė yra albumino koncentracijos šlapime nustatymas.
Albumino kiekio sumažėjimas pastebimas sergant lėtinėmis inkstų ligomis - nefroziniu sindromu, taip pat nudegimais, kraujo netekimu, infekcinėmis ligomis, pūlingais procesais, nespecifine pneumonija, plaučių tuberkulioze ir kitais organais, ūminiu poliartritu ir kitomis uždegiminėmis ligomis, piktybiniais navikais. vėžinė kacheksija), leukemija, anemija, širdies nepakankamumas, miokardo infarktas, didžiulis baltymų netekimas per žarnyną.
Baltymų atsiradimas šlapime (proteinurija) stebimas sergant daugeliu inkstų ligų. Įprasta išskirti organinę (sukelta inkstų parenchimos pažeidimų – uždegiminių ligų, nefrozinio sindromo, kartais įgimtų nefrono defektų) ir funkcinę inkstų proteinuriją, susijusią su inkstų filtro pralaidumo padidėjimu arba sulėtėjusia kraujotaka. glomerulus (patyrus hipotermiją, fizinį ir protinį pertempimą).
Prerenalinė proteinurija yra susijusi su padidėjusiu audinių baltymų irimu, sunkia hemolize; inkstų - dėl inkstų patologijos (glomerulų ir kanalėlių); postrenalinis - sukelia šlapimo takų patologija ir dažniausiai - uždegiminis eksudatas.
Įprasta skirtis trijų lygių proteinurija: vidutinio sunkumo - su baltymų praradimu iki 1 g per parą, vidutinis - nuo 1 iki 3 g ir ryškus - daugiau nei 3 g per dieną.
Pagrindinės proteinurijos priežastys:
1. padidėjęs glomerulų filtro pralaidumas plazmos baltymams (glomerulų proteinurija);
2. filtruotų baltymų kanalėlių reabsorbcijos pažeidimas (vamzdinė proteinurija);
3. paraproteinemija ir (arba) padidėjęs baltymų kiekis kraujyje;
4. inkstų hemodinamikos pokyčiai;
66 psl. iš 76
Vaizdo įrašas: reaktyvaus baltymo nustatymas serume
Bendrojo kraujo plazmos baltymo ir atskirų jo frakcijų rodikliai yra svarbūs diagnozuojant daugelį ligų.
Bendro baltymų kiekio kraujo serume nustatymas. Jis gali būti gaminamas naudojant įvairius metodus (azotometrinį, gravimetrinį, nefelometrinį, refrakcinį, spektrofotometrinį ir kt.). Iš kolorimetrinių metodų biureto metodas yra specifiškiausias, gana jautrus, tikslus ir praktiškai prieinamas. Šis metodas pateikiamas kaip vieningas viso baltymo kiekio kraujo serume nustatymo metodas. Jis pagrįstas tokiu principu: baltymai šarminėje aplinkoje reaguoja su vario sulfatu, sudarydami purpurinės spalvos junginius.
Bendro baltymų kiekio nustatymo metodas yra toks. Į 5 ml biureto reagento darbinio tirpalo (4,5 g Rošelio druskos ištirpinama 40 ml 0,2 N NaOH, pridedama 1,5 g C11SO4 5H2O ir 0,5 g K1 ir įpilama iki 100 ml 0,2 N NaOH) įpilkite 0,1 ml kraujo serumo. Po 30 minučių mėginys yra kolorimetrinis ant FEK 10 mm kiuvetėje su žalios šviesos filtru nuo kontrolės. Kontroliniam mėginiui paruošti į 5 ml biureto reagento įpilama 0,1 ml 0,9 % NaCl. Skaičiavimas atliekamas pagal kalibravimo grafiką.
Normali bendrojo baltymo koncentracija suaugusiems svyruoja nuo 62 iki 82 g/l. Duomenys pagal vaikų amžių pateikti lentelėje. 49.
Tab.g 49. Baltymų frakcijų kiekis procentais nuo bendro baltymų kiekio (vidutiniai duomenys) pagal amžių (pagal Yu. E. Veltishchev, 1979)
Dažniausios hipoproteinemijos priežastys yra nepakankamas baltymų suvartojimas organizme su maistu (baltymų badas), dideli baltymų praradimai ir kraujo baltymų biosintezės slopinimas.
Nepakankamas baltymų suvartojimas organizme stebimas esant virškinimo trakto pažeidimams (stemplės susiaurėjimas, pilorospazmas ir pylorinė stenozė, navikai, virškinimo trakto uždegimai ir kt.), mažas baltymų kiekis maiste arba nesubalansuota aminorūgščių sudėtis, ir tt
Inkstų ligos, pasireiškiančios proteinurija, ūminiu ir lėtiniu kraujavimu, dideliais eksudatais ir efuzijomis serozinėse ertmėse, nudegimais ir kt., sukelia baltymų praradimą organizme.
Hipoproteinemija, susijusi su baltymų biosintezės kepenyse sumažėjimu, pasireiškia lėtiniu hepatitu, intoksikacija, ciroze, užsitęsusiais pūliniais procesais, piktybiniais navikais ir kt.
Hiperproteinemija yra gana retas reiškinys. Pastebėta sergant egzikoze, cukriniu diabetu, žarnų nepraeinamumu, generalizuotu peritonitu, mieloma (persistuojanti iki 120 g/l).
Baltymų frakcijų kraujo serume nustatymo metodai. Atskirų baltymų frakcijų kiekybinio ryšio tyrimas turi didelę diagnostinę vertę, nes leidžia atskirti tam tikras hipo- ir hiperproteinemijos rūšis, taip pat daugybę ligų, kurių bendras baltymų kiekis nesikeičia.
Plazmos baltymų frakcionavimui naudojami sūdymas neutraliomis druskomis, elektroforezinis frakcionavimas, imunologiniai ir sedimentacijos metodai, nusodinimas etilo alkoholiu žemoje temperatūroje, chromatografija, gelio filtravimas. Dažniausiai naudojami elektroforeziniai metodai, pagrįsti skirtingu baltymų judėjimo greičiu elektriniame lauke, priklausomai nuo jų elektros krūvio ir kitų fizikinių bei cheminių savybių.
Plačiai taikomi elektroforezės ant popieriaus ir gelių – agaro, krakmolo ir kitų, ypač ant poliakrilamido gelio, iš kurio galima gauti apie 30 baltymų frakcijų, metodai. Dažniau pradėta naudoti elektroforezė ant celiuliozės acetato plėvelių. Tačiau klinikinės diagnostikos laboratorijose daugiausia naudojamas elektroforezės ant popieriaus metodas (V. G. Kolb, V. S. Kamyshnikov, 1976). Šis metodas pagrįstas tokiu principu: veikiant pastoviam elektriniam laukui, serumo baltymai, turintys elektros krūvį, juda buferiniu tirpalu sudrėkintu popieriumi greičiu, kuris priklauso nuo krūvio dydžio ir molekulinės masės. Šiuo atveju kraujo serumo baltymai skirstomi į penkias frakcijas: albuminus ir globulinus a1, a2, b, y.
Normalus albuminų ir globulinų santykis (albumino ir globulino santykis) yra maždaug 2:1. Atskirų baltymų frakcijų procentas suaugusiems ir vaikams, priklausomai nuo amžiaus, pateiktas lentelėje. 49. Bendras baltymų ir baltymų frakcijų kiekis kraujyje kinta sergant įvairiomis vaikų ligomis.
Suaugusiesiems ir vyresniems vaikams skiriami šie elektroferogramų tipai: I) ūminis uždegiminis procesas - 2) poūmis lėtinis uždegimas - 3) nefrozinių simptomų kompleksas - 4) piktybinis navikas - 5) hepatitas - 6) kepenų cirozė - 7) obstrukcinė gelta. - 8) in - ir p-globulino plazmacitomos.
Pirmajame tipe sumažėja albuminų kiekis ir padidėja a1, a2 globulinų, o vėlesnėse stadijose - y-globulinų, antrajame - vidutiniškai sumažėja albumino frakcijos ir ryškus a2 padidėjimas. - y-globulinų frakcijos; trečioje - reikšmingas albuminų kiekio sumažėjimas, a-globulinų padidėjimas su vidutinio y-globulinų kiekio sumažėjimu; ketvirtoje - albuminų sumažėjimas ir reikšmingas visų globulinų frakcijų padidėjimas; penktasis - vidutinis albuminų kiekio sumažėjimas ir y- ir (3-globulinų) padidėjimas; šeštoje - albuminų sumažėjimas su stipriu y-globulino frakcijos padidėjimu, kurio bazė išsiplėtė; septintoji - sumažėjimas. albuminuose ir vidutiniškai padidėjęs CC2-, P- ir y-globulinų kiekis; aštuntoje - bendras baltymų kiekis smarkiai padidėja, albuminų ir daugumos globulinų kiekis sumažėja, priklausomai nuo tipo, y- arba β-globulinų kiekis yra labiau padidėjęs - bulinai.
Kūdikiams yra fiziologinis y-globulinų biosintezės trūkumas. Todėl sergant infekcinėmis ligomis jų b- ir a2-globulinų padaugėja reikšmingiau nei vyresnių vaikų ir suaugusiųjų. Nuolatinis y-globulinų kiekio padidėjimas mažiems vaikams gali rodyti septinę būklę.
Baltymai yra pagrindinė organinė medžiaga, turinti azoto. Vienas gramas azoto yra 6,25 gramo baltymų (azoto santykis), t.y. baltymai yra maždaug 16% azoto. Todėl ištyrus azoto apykaitą organizme, galima įvertinti baltymų apykaitos būklę. Apie baltymų sintezės intensyvumą galima spręsti pagal į organizmą patenkančio azoto kiekį, baltymų skilimą – pagal su šlapimu ir prakaitu išsiskiriančio azoto kiekį (su prakaitu prarandamo azoto kiekis normaliomis sąlygomis yra nereikšmingas, todėl dažniausiai neatsižvelgiama į prakaito azotą). Baltymų sintezę ir skilimą galite palyginti nustatydami azoto balansą.
Azoto balansas – tai į organizmą patenkančio ir iš jo išskiriamo azoto kiekio santykis. Skiriami šie azoto balanso tipai – teigiamas, neigiamas ir azoto balansas. Teigiamas azoto balansas: azoto patekimas į organizmą viršija jo pašalinimą iš organizmo (azoto susilaikymas organizme). Tai rodo, kad baltymų sintezė viršija jo skilimą. Paprastai toks azoto balansas atsiranda kūno augimo metu, nėštumo metu, sveikstant ir priaugant raumenų masės sportuojant. Neigiamas azoto balansas – azoto suvartojama mažiau nei jo pašalinama iš organizmo. Tai rodo, kad baltymų sintezė yra mažesnė nei jo skilimas. Tokio tipo azoto balansas įvyksta šiais atvejais:
1) baltymų badas (į organizmą patenka nepakankamas baltymų kiekis arba su maistu tiekiami brokuoti baltymai. Sugedusiame baltyme nėra vienos ar kelių nepakeičiamų aminorūgščių);
2) sutrikusi aminorūgščių pasisavinimas;
3) senėjimas;
4) ligos ar būklės, kurias lydi ryškus audinių irimas (navikai, kacheksija);
5) sumažėjusi baltymų sintezė dėl fermentopatijos.
Azoto balansas – azoto suvartojimas ir išskyrimas vienodas. Tai rodo tą patį baltymų sintezės ir skilimo intensyvumą (Raguzin A.V., Setko N.P., Shirshov O.V., Fateeva T.A. 2001)
IŠVADA
Voverės(baltymai) yra sudėtingi didelės molekulinės azoto turintys junginiai, susidedantys iš aminorūgščių. Baltymų aminorūgščių rinkinys ir seka apibūdina jo biocheminį specifiškumą ir maistinę vertę. Iš dešimčių šiuo metu žinomų aminorūgščių tik 20 randama maiste.
Aminorūgštys, sudarančios baltymus, skirstomos į esmines ir neesmines. Nepakeičiamos aminorūgštys turi būti tiekiamas su maistu reikiamais kiekiais ir tam tikromis proporcijomis. Neesminės aminorūgštys organizme gali vykti abipusiai virsmai arba susiformuoti iš nepakeičiamų dėl įvairių biocheminių virsmų (transaminacijos reakcijos, sintezė iš nebaltyminių junginių, naudojant amoniaką kaip azoto šaltinį). Nepakeičiamos aminorūgštys yra argininas, valinas, histidinas, izoleucinas, leucinas, lizinas, metioninas, triptofanas, fenilalaninas, treoninas (be to, argininas ir histidinas laikomi būtiniausiais vaikams iki 3 metų). Neesminės aminorūgštys: alaninas, asparaginas, asparto rūgštis, glicinas, glutamo rūgštis, glutaminas, serinas, cistinas, tirozinas, prolinas.
Žmogaus organizmo baltymai atlieka gyvybines funkcijas: plastines, energetines, katalizines, reguliuojančias, apsaugines, transportines, receptorines.
Pagal mūsų šalyje galiojančias fiziologines mitybos normas, bendras baltymų kiekis vaikų racione turėtų būti du kartus didesnis už azoto balansą ar azoto balansą užtikrinantį kiekį, o suaugusiems gyventojams – 1,5 kiekio. Ikimokyklinukams - 53-69 g, moksleiviams - 77-98 g, suaugusiems: moterims - 58-87 g ir vyrams - 65-117 g (priklausomai nuo jų profesinės veiklos).
BIBLIOGRAFIJA
1. Raguzin A.V., Setko N.P., Shirshov O.V., Fateeva T.A. Fiziologiniai ir higieniniai medžiagų apykaitos, energijos apykaitos ir racionalios mitybos aspektai: Medicinos ir prevencijos fakulteto studentų savarankiško darbo vadovas - Orenburgas: OGAU leidybos centras, 2001. - 40 p.
2. Žmogaus fiziologija / Redagavo G.I. Kositsky - M .: "Medicina", 1985. - 560 p.
3. Biochemija: Proc. universitetams / V.P. Komovas, V.P. Švedova. – M.: Bustard, 2004. – 640 p.
4. Praktinių maisto higienos pratybų vadovas: vadovėlis. vadovas universitetams / Setko N.P., Setko A.G., Fateeva T.A., Volodina E.A., Trishina S.P., Chistyakova E.S.; po viso Red. N.P. Setko. - Orenburgas: Orgma, 2011. - 652 p.
Bendro baltymų kiekio serume/plazmoje/kraujyje ir kituose biologiniuose skysčiuose nustatymas.
Visi žinomi bendrojo baltymo koncentracijos kraujo serume nustatymo metodai yra suskirstyti į šias pagrindines grupes:
1. Azotometrinis, pagrįstas baltyminio azoto kiekio nustatymu – Kjeldahlio metodas ir jo modifikacijos.
2. Serumo tankio nustatymo metodai yra netikslūs, nes tankis priklauso ne tik nuo baltymų kiekio.
3. Svoris – kraujo serumo baltymai nusodinami, išdžiovinami iki pastovaus svorio ir pasveriami ant analitinių svarstyklių. Metodai yra sudėtingi ir reikalauja didelio serumo kiekio.
4. Refraktometrinis – netobulas, nes dalis refrakcijos atsiranda dėl kitų serumo komponentų.
5. Kolorimetrinis – labiausiai paplitęs biureto metodas, kuris yra unifikuotas.
6. Kiti metodai – nefelometrinis, poliarimetrinis, spektrofotometrinis nėra plačiai naudojami.
Vidaus pramonė pradėjo gaminti rinkinius, skirtus bendrojo baltymo koncentracijai kraujo serume tirti pagal biureto reakciją. Tuo pačiu principu matuojamas bendro baltymų kiekis biologiniuose skysčiuose, naudojant įvairių įmonių tiekiamus reagentus.
Bendro baltymų kiekio kraujo serume nustatymas biureto reakcija.
Reagentai.
1,0,9 % natrio chlorido tirpalas /0,9 g natrio chlorido 100 ml distiliuoto vandens/.
2,0,2 N natrio hidroksido tirpalas, kuriame nėra anglies dioksido /20 ml 1 N natrio hidroksido sureguliuojama iki 100 ml virintu distiliuotu vandeniu/.
3. Biureto reagentas: 4,5 g Rošelio druskos ištirpinama 40 ml 0,2 N natrio hidroksido tirpalo, po to pridedama 1,5 g vario sulfato ir 0,5 g kaustinės sodos. Laikyti tamsaus stiklo inde, tirpalas stabilus.
4,0,5 % kalio jodido tirpalas 0,2 N natrio hidroksido tirpale.
5. Darbinis biureto reagento tirpalas: 20 ml biureto reagento sumaišoma su 80 ml kalio jodido tirpalo. Stovo sprendimas.
6. Standartinis albumino tirpalas iš žmogaus ar galvijų serumo: 10 % albumino tirpalas 0,9 % natrio chlorido tirpale /1 ml tirpalo yra 0,1 g baltymų - 100 g/l/.
Metodo principas.
Baltymai šarminėje aplinkoje reaguoja su vario sulfatu, sudarydami purpurinės spalvos junginius \biureto reakcija/.
Nustatymo eiga: 0,1 ml serumo įpilama į 5 ml biureto reagento darbinio tirpalo, išmaišoma, vengiant putų susidarymo. Po 30 minučių ir ne vėliau kaip po valandos jie matuojami FEK kiuvetėje, kurios sluoksnio storis yra 1 cm, esant bangos ilgiui 540–560 nm \ žalios šviesos filtras \ prieš kontrolę.
Kontrolė: Į 5 ml biureto reagento darbinio tirpalo įpilama 0,1 ml 0,9 % natrio chlorido tirpalo, tada apdorojama kaip eksperimentas.
Skaičiavimas atliekamas pagal kalibravimo grafiką.
Normalios bendrojo baltymo vertės yra 65-85 g/l.
Kalibravimo grafiko konstravimas.
Reagentas: standartinis 10 % albumino tirpalas 0,9 % natrio chlorido tirpale, kurio 1 ml yra 0,1 g baltymų. Reagentui paruošti gali būti naudojamas liofilizuotas albuminas iš Lachem Bilirubin Standard rinkinio. Rinkinio instrukcijose nurodytas albumino kiekis mg. Pagal tai apskaičiuojame, kiek į šį albuminą reikia įpilti 0,9% natrio chlorido, kad 1 ml tirpalo gautųsi 0,1 g baltymų.
Pavyzdžiui: Rinkinio instrukcijose nurodyta, kad liofilizuotame albumine yra 160 mg albumino. Skaičiavimas: standartiniame 10% tirpale yra 10 g arba 10 000 mg 100 ml
standartiškai 160 mg X
X = 1,6 ml, t.y. Į buteliuką su albuminu įpilkite 1,6 ml 0,9% natrio chlorido ir gauname, kad 1 ml šio tirpalo yra 0,1 g baltymų.
Paruošę standartinį tirpalą, iš jo paruošiame eilę darbinių skiedimų pagal lentelę:
Baltymų koncentracijos g/l apskaičiavimas.
1 ml standartinio 10% tirpalo yra 0,1 g baltymų
1 ml tirpalo yra 0,04 g baltymų
X 1000 ml
Iš kiekvieno atitinkamos koncentracijos darbinio skiedimo į 3-4 mėgintuvėlius paimama po 0,1 ml, t.y. kiekvienas nustatymas atliekamas 3-4 lygiagrečiai ir į kiekvieną mėgintuvėlį įpilama 5 ml biureto reagento. Po 30-60 minučių kolorimetrinis FEC prieš kontrolę. Kiekvienai koncentracijai gauname 3-4 optinio tankio rodmenis. Iš jų randame aritmetinį vidurkį, prieš tai atmetę smarkiai nukrypstančius rodmenis.
Sudarome kalibravimo grafiką: ant abscisės braižome baltymų koncentraciją g/l, t.y. 40-60-80-100g\l; o išilgai y ašies – optinio tankio rodmenys, gauti pagal FEC \aritmetinis vidurkis/.
Kalibravimo kreivė turėtų atrodyti kaip prima, nubrėžta per 3 taškus. Ši kreivė tikrinama donoro serume \bent 3-4 nustatymai\. Gaunant normalius baltymų rodmenis, t.y. normos ribose; darbe naudojama sukonstruota kalibravimo kreivė.
Pastaba.
1. Kalibravimo kreivė turi būti sudaryta bent kartą per metus, taip pat kiekvieną kartą po remonto ir ant naujai gauto fotoelektrinio kolorimetro.
2. Linijinis ryšys tarp optinio tankio ir koncentracijos palaikomas iki D=0,5. Jei serume yra didesnis baltymų kiekis, serumas skiedžiamas natrio chloridu du kartus.
Karbamido nustatymas kraujyje ir šlapime.
Karbamidas yra pagrindinis azoto turintis baltymų katabolizmo produktas.
Skilstant baltymams kaupiasi amoniakas – nuodinga medžiaga. Pagrindinis amoniako neutralizavimo būdas yra karbamido sintezė kepenyse. Karbamido koncentracija kraujyje priklauso nuo jo susidarymo kepenyse greičio ir pasišalinimo iš organizmo per inkstus su šlapimu.
Daugumos pacientų karbamido susidarymo greitis atspindi ląstelės baltymo panaudojimo ir skilimo greitį.
Esant sunkiai kepenų patologijai, sutrinka hepatocitų gebėjimas sintetinti karbamidą, kaupiasi amoniakas, sumažėja šlapalo kiekis kraujyje.
Susidaręs karbamidas išsiskiria su šlapimu ir priklauso nuo inkstų išskyrimo funkcijos.
Karbamido nustatymas atliekamas šiais metodais:
1. Cheminis metodas spalvine reakcija su diacetilo monooksimu.
2. Fermentinis metodas (ureazė)
3. „Sausosios chemijos“ metodas.
Karbamido nustatymas reaguojant su diacetilo monooksimu.
Reagentai.
1. Diacetil monooksimas ir tiosemikarbazidas arba reagentas tabletėse.
2. Etaloninis arba etaloninis tirpalas, kurio 100 ml yra 100 mg karbamido arba 1 ml 1 mg.
Tirpalų ruošimas.
Reagento tirpalas: 1 tabletę kaitinant ištirpinkite 50 ml matavimo kolboje 30 ml distiliuoto vandens. Atvėsus padidinkite tūrį iki žymės. Tirpalas išlieka stabilus kelias savaites.
Sieros rūgšties tirpalas: į 250 ml matavimo kolbą įpilama 150 ml distiliuoto vandens ir 25 ml 96 % analitinės grynos sieros rūgšties. Atvėsinę pašildykite, padidinkite tūrį iki žymės. Tirpalas yra stabilus.
Reagento ir sieros rūgšties darbinis tirpalas ruošiamas prieš reakciją santykiu 1:1 (žr. apibrėžimo schemą).
Metodo principas.
Karbamidas, esant tiosemikarbazidui ir geležies druskoms, stipriai rūgščioje terpėje sudaro raudoną kompleksą su diacetilo monooksimu, spalvos intensyvumas proporcingas karbamido koncentracijai.
Apibrėžimo pažanga.
Reagentų patirties kontrolės standartas
1.serumas 0,02 - -
2.darbinis sprendimas
a\reagento tirpalas 2,0 2,0 2,0
b \ sieros tirpalas
rūgštys 2,0 2,0 2,0
3. standartinis tirpalas
karbamidas - 0,02
Inkubuokite 10 minučių verdančio vandens vonelėje. Atvėsinkite 2-3 minutes šalto vandens srove. Kolorimetrinis ne vėliau kaip 15 minučių: žalios šviesos filtras \prie bangos ilgio 490-540\, kiuvetė 1 cm, prieš kontrolinį.
Skaičiavimas: Prieš
X \u003d -------- * C st, mmol \ l, kur
Do – optinis patirties tankis;
Dst - standartinio karbamido arba etaloninio tirpalo optinis tankis;
C st – karbamido koncentracija etaloniniame tirpale;
X yra karbamido koncentracija serumo mėginyje.
Norint konvertuoti mg% į mmol / l, naudojamas koeficientas 0,1665.
Normalios karbamido vertės kraujo serume yra 2,5–8,3 mmol / l.
Pastabos.
1. Aukščiau pateiktą nustatymo eigą galima modifikuoti padidinus visų išmatuotų tirpalų tūrį 2-3 kartus, priklausomai nuo kiuvečių tūrio.
3. Karbamidas paverčiamas karbamido azotu, padauginamas iš koeficiento 0,466.
4. Tiosemikarbazidas yra nuodingas reagentas. Dirbdami su juo turite laikytis darbo su toksinėmis medžiagomis taisyklių.
Baltymų apykaitos tyrimo metodai: Elektroforezinis – pagrįstas baltymų atskyrimu pastoviame elektriniame lauke, priklausomai nuo baltymo molekulės dydžio. Ultracentrifugavimas pagrįstas skirtingu atskirų baltymų nusėdimo greičiu, priklausomai nuo jų molekulinės masės. Chromatografija: - Jonų mainų chromatografija pagrįsta skirtingu atskirų baltymų gebėjimu keistis jonų mainų dervų jonais, - Chromatografija ant molekulinių sietų (gelfiltracija) - ant Sephadex - baltymai atskiriami priklausomai nuo molekulės dydžio, - Afininė chromatografija – baltymai skirstomi į atskirus, priklausomai nuo giminingumo afinatui (kolonėlės užpildui).
Išsūdymas – pagrįstas vandens apvalkalo pašalinimu su įvairių koncentracijų šarminių ir šarminių žemių metalų druskomis bei amonio jonais. Tai senas baltymų atskyrimo metodas. Spalvinių reakcijų naudojimas – pavyzdžiui, biuretas bendram baltymui, ksantoproteinas ciklinėms aminorūgštims, spalvos intensyvumas matuojamas kolorimetriškai. Imunologiniai metodai – naudojami atskirų baltymų kiekybiniam įvertinimui. Sąveikaujant su specifiniu antiserumu susidaro drumstas tirpalas, drumstumo intensyvumas matuojamas kolorimetriškai.
Tiriamųjų pasirengimas: Kraujo mėginiai imami ryte nuo 8 iki 10 val. Neatidėliotinais atvejais kraujo mėginiai imami bet kuriuo paros metu. Kraujas imamas tuščiu skrandžiu, po 8-12 valandų badavimo. Susilaikymas nuo alkoholinių gėrimų mažiausiai 24 valandas. Neįtraukiamas fizinis stresas ir emocinis susijaudinimas, dėl kurio tiriamajam leidžiama pailsėti 15 minučių.
Biologinės medžiagos gavimas ir saugojimas: Icterinis, hemolizinis, chilotinis serumas ar plazma tyrimams netinka. Plazmai gauti veninis kraujas surenkamas į švarų, sausą mėgintuvėlį su antikoaguliantu. Rezultatus mažina EDTA druskos, heparinas, ličio heparinatas, natrio oksalatas, citratai. Centrifugavimas atliekamas įprastu režimu ne vėliau kaip per 3 valandas nuo medžiagos mėginio paėmimo.
Norint gauti kraujo serumą, veninis kraujas surenkamas į švarų, sausą mėgintuvėlį. Centrifugavimas atliekamas įprastu režimu ne vėliau kaip per 3 valandas nuo medžiagos mėginio paėmimo. Šlapimui tirti naudokite rytinę porciją. Tyrimas atliekamas ne vėliau kaip per 2 valandas po mėginio paėmimo.
Biologinės medžiagos laikymo sąlygos: Biologinės medžiagos laikomos gerai uždarytose talpyklose. Visas kraujas netinka laikyti, net jei yra konservantų. Plazmą ir serumą galima laikyti 1 dieną kambario temperatūroje, 7 dienas - 4-8 ° C temperatūroje, 3 - 6 mėnesius -20 ° C. Sandariai uždarytose talpyklose baltymas šlapime stabilus 2 dienas kambario temperatūroje, iki iki 17 dienų šaldytuve (4-8 8 C).
Pastabos: bendras baltymų kiekis gali priklausyti nuo amžiaus (mažesnis vaikams ir pagyvenusiems žmonėms), lyties (vyrams didesnis) ir dietos. Baltymų kiekio kraujyje padidėjimą sukelia šie veiksniai: ilgas buvimas vertikalioje padėtyje, stresas, alkoholio vartojimas, tam tikri vaistai (cefotaksimas, furosemidas, fenobarbitalis, prednizolonas, progesteronas). Baltymų kiekio kraujyje sumažėjimą sukelia: traumos, rūkymas, nėštumas, badavimas, alkoholio vartojimo pertrauka, netinkama mityba, nutukimas, tam tikri vaistai (dekstranas, ibuprofenas, geriamieji kontraceptikai).
Namų darbai Pustovalova L.M. Medicinos kolegijų biochemijos pagrindų puslapis
