Wiadomo, że mikroorganizmy, mimo swojego „małego wzrostu”, mają też „uzależnienia” od jedzenia, optymalną temperaturę, w ogóle środowisko, które im odpowiada, w którym czują się komfortowo i dobrze, w związku z czym zaczynają się intensywnie rozmnażać i rozmnażać.
Posiew bakteriologiczny lub, jak to się powszechnie nazywa w skrócie, wysiew zbiornikowy, służy do pozyskania dużej liczby drobnoustrojów tego samego gatunku (czystej kultury) w celu zbadania ich właściwości fizykochemicznych i biologicznych, aby następnie uzyskane dane mogą być wykorzystane do diagnostyki chorób zakaźnych.
Niestety, nawet obecnie popularne i inne metody, których główną wadą są wyniki fałszywie dodatnie lub fałszywie ujemne, nie zawsze pozwalają na identyfikację patogenu. Ponadto nie są w stanie wychwycić ukierunkowanych leków przeciwbakteryjnych. Podobny problem rozwiązuje zbiornik do wysiewu, który często nie spieszy się z powołaniem, powołując się na to, że np. uprawia się go powoli, a koszt analizy jest spory. Jednak zdrowie jest tego warte!
Warunki potrzebne do jedzenia i oddychania
Mikrobiolodzy wiedzą teraz, że każdy patogen potrzebuje własnego „rodzimego” środowiska, uwzględniającego jego pH, potencjał redoks, lepkość, wilgotność i właściwości osmotyczne. Środowiska mogą być miękkie i twarde, proste i złożone, uniwersalne i niezbyt wszechstronne, ale we wszystkich przypadkach muszą zapewniać odżywianie, oddychanie, reprodukcję i wzrost komórki bakteryjnej.
przykład wzrostu mikroorganizmów po zaszczepieniu zbiornika na pożywkę
Niektóre podłoża (tioglikol, Sabouraud) są odpowiednie dla szerokiego zakresu mikroorganizmów i nazywane są uniwersalnymi. Inne przeznaczone są tylko dla niektórych gatunków, np. pneumokoki i Staphylococcus aureus, produkujące hemolizyny, rosną na agarze z krwią, który służy do izolacji szczególnie „kapryśnych” i jednocześnie niebezpiecznych szczepów. Istnieje więc wiele odmian pożywek, z których każda hoduje własną gamę mikroorganizmów.
Cel hodowli mikroorganizmów i jego znaczenie diagnostyczne
Oprócz wody, powietrza, gleby, zawierających różne mikroorganizmy w różnych stężeniach, w tym chorobotwórcze (patogenne), wiele gałęzi nauk medycznych interesuje się drobnoustrojami żyjącymi na skórze i błonach śluzowych organizmu człowieka, które mogą być reprezentowane przez:
- Stałych mieszkańców, nie stwarzających zagrożenia dla człowieka, czyli normalna mikroflora organizmu, bez której po prostu nie możemy żyć. Na przykład zanik bakterii bytujących w jelitach i biorących udział w procesie trawienia prowadzi do dysbakteriozy, która nie jest łatwa do wyleczenia. To samo dzieje się z zanikiem mikroflory pochwy. Jest natychmiast zaludniany przez warunkowo patogenne mikroorganizmy, na przykład gardnerella, które powodują;
- flora warunkowo chorobotwórcza, który jest szkodliwy tylko w dużych ilościach w określonych warunkach (niedobór odporności). Wspomniana gardnerella jest przedstawicielem tego typu mikroorganizmów;
- Obecność drobnoustrojów chorobotwórczych których nie ma w zdrowym organizmie. Są one obce organizmowi człowieka, gdzie przypadkowo w kontakcie z inną (chorą) osobą wnikają i powodują rozwój procesu zakaźnego, czasem bardzo ciężkiego lub nawet śmiertelnego. Na przykład spotkanie z patogenami jest nadal w porządku, najpierw jest leczone, ale (nie daj Boże!) Wypuści cholerę, dżumę, ospę itp.
Na szczęście wielu z nich zostało pokonanych i przebywa obecnie „za siedmioma pieczęciami” w specjalnych laboratoriach, jednak ludzkość w każdej chwili musi być gotowa na inwazję niewidzialnego wroga zdolnego do zniszczenia całych narodów. Posiew bakteriologiczny odgrywa w takich przypadkach być może główną rolę w identyfikacji mikroorganizmu, czyli określeniu rodzaju, gatunku, rodzaju itp. (pozycja toksonomiczna), co jest bardzo ważne w diagnostyce procesów zakaźnych, w tym chorób przenoszonych drogą płciową.
Zatem metody siewu, podobnie jak pożywki, są różne, jednak mają ten sam cel: uzyskać czystą kulturę bez zanieczyszczeń w postaci drobnoustrojów innych klas, które żyją wszędzie: w wodzie, w powietrzu, na powierzchniach, na człowieku iw jego wnętrzu.
Kiedy wyznaczany jest siewnik i jak rozumieć odpowiedzi?
Nazwa mikroorganizmu i jego ilość
Pacjenci nie przepisują sobie analizy bakteriologicznej, robi to lekarz, jeśli ma podejrzenia, że problemy pacjenta zgłaszającego różne dolegliwości są związane z przenikaniem patogennego patogenu do organizmu lub ze zwiększoną reprodukcją mikroorganizmów, które stale żyją z człowiekiem, ale wykazują właściwości chorobotwórcze tylko w określonych warunkach. Po przejściu analizy i po pewnym czasie otrzymania odpowiedzi w swoje ręce, człowiek jest zagubiony, a czasem nawet przestraszony, gdy widzi niezrozumiałe słowa i określenia, dlatego aby tak się nie stało, chciałbym złożyć krótkie wyjaśnienie tej kwestii:
Podczas badania materiału biologicznego na obecność mikroorganizmów chorobotwórczych odpowiedź może być negatywna lub pozytywna („zły zbiornik do wysiewu”), ponieważ organizm ludzki jest dla nich tylko tymczasowym schronieniem, a nie naturalnym środowiskiem.
Czasami, w zależności od tego, jaki materiał ma być zaszczepiony, można zobaczyć liczbę mikroorganizmów wyrażoną w jednostkach tworzących kolonie na ml (jedna żywa komórka da wzrost całej kolonii) - CFU / ml. Na przykład posiew moczu do badania bakteriologicznego zwykle daje do 10 3 CFU / ml wszystkich wykrytych komórek bakteryjnych, w wątpliwych przypadkach (powtórz analizę!) - 10 3 - 10 4 CFU / ml, z procesem zapalnym pochodzenia zakaźnego - 10 5 i więcej CFU/ml O dwóch ostatnich opcjach w mowie potocznej czasami są one po prostu wyrażone: „Zły zbiornik do siewu”.
Jak „znaleźć kontrolę” nad patogennym mikroorganizmem?
Równolegle z wysiewem materiału w takich sytuacjach wysiewa się mikroflorę pod kątem wrażliwości na antybiotyki, co da lekarzowi jasną odpowiedź - jakie leki przeciwbakteryjne iw jakich dawkach „przestraszą” „intruza”. Tutaj również następuje odszyfrowanie, na przykład:
- Rodzaj mikroorganizmu, na przykład ta sama E. coli w ilości 1x10 ^ 6;
- Nazwa antybiotyku z oznaczeniem (S) wskazuje na wrażliwość patogenu na ten lek;
- Rodzaj antybiotyków, które nie działają na drobnoustroje, jest oznaczony symbolem (R).
Analiza bakteriologiczna ma szczególne znaczenie w określaniu wrażliwości na antybiotyki, ponieważ głównym problemem w walce z chlamydią, mykoplazmą, ureaplazmą itp. pozostaje dobór skutecznego leczenia, które nie szkodzi organizmowi i nie uderza w kieszeń pacjenta.
Tabela: Alternatywny przykład wyników hodowli w zbiorniku pokazujący skuteczne antybiotyki
Właściwe przygotowanie do analizy bakteriologicznej jest kluczem do uzyskania wiarygodnego wyniku
Każdy materiał biologiczny pobrany od człowieka może zostać poddany analizie bakteriologicznej.(skóra, krew, nasienie, błony śluzowe jamy ustnej, dróg oddechowych i moczowych, przewodu pokarmowego, narządy wzroku, słuchu, węchu itp.). Najczęściej zbiornik do wysiewu jest przepisywany przez ginekologów i urologów, więc powinieneś się trochę nad tym zastanowić.
Właściwe przygotowanie do posiewu bakteriologicznego będzie kluczem do uzyskania prawidłowego wyniku, gdyż w przeciwnym razie konieczne będzie ponowne wykonanie analizy i odczekanie na wyznaczony czas. Jak oddać krew do bezpłodności z żyły, jest zadaniem pracowników służby zdrowia. Z reguły nic nie zależy tutaj od pacjenta, po prostu zapewnia zgięcie łokcia, a pielęgniarka bierze go do sterylnej probówki z zachowaniem wszelkich zasad aseptyki i antyseptyki.
Inną rzeczą jest mocz lub z dróg rodnych. Tutaj pacjent musi zapewnić pierwszy etap (ogrodzenie), przestrzegając przepisanych zasad. Należy zauważyć, że mocz kobiet i mężczyzn jest nieco inny, chociaż w pęcherzu moczowym obu płci jest sterylny:
- U kobiet podczas przechodzenia przez cewkę moczową można złapać niewielką liczbę niepatogennych ziarniaków, chociaż na ogół często pozostaje ona sterylna;
- W przypadku mężczyzn sprawy mają się nieco inaczej. Przednia część cewki moczowej może zaopatrywać oddawany mocz w:
- dyfteroidy;
- gronkowce;
- niektóre niepatogenne bakterie Gram-ujemne, co zostanie następnie wykazane w analizie bakteriologicznej.
Jeśli jednak są w dopuszczalnym stężeniu (do 10 3 CFU / ml), to nie ma się czego bać, jest to wariant normy.
Aby uniknąć obecności innych mikroorganizmów i zapewnić jak największą sterylność pobranego materiału, przed analizą przeprowadza się dokładną toaletę narządów płciowych (wejście do pochwy u kobiet zamykane jest wacikiem - ochrona przed wnikanie rozdzielonych narządów płciowych). Do analizy pobiera się średnią porcję moczu (początek oddawania moczu do toalety, około 10 ml pożywki w sterylnym słoiczku, kończąc w toalecie). Pacjenci muszą wiedzieć: mocz pobrany do hodowli musi zostać przetworzony nie później niż dwie godziny, jeśli jest przechowywany w temperaturze nie wyższej niż 20 ° C, dlatego należy wziąć pod uwagę czas transportu.
Ponadto materiał do zbiornika nasiennego w razie potrzeby pobierany jest z cewki moczowej i odbytnicy u mężczyzn, z cewki moczowej, odbytnicy, pochwy, szyjki macicy i kanału szyjki macicy – u kobiet, ale dzieje się to w placówce medycznej, w której pacjent powinien przyjechać. Mycie, irygacja i stosowanie środków antyseptycznych w takich przypadkach jest zabronione.
Inne kwestie istotne dla pacjentów
Wielu pacjentów jest zainteresowanych tym, ile dni przeprowadzana jest analiza. Nie można jednoznacznie odpowiedzieć na to pytanie, wszystko zależy od tego, jaki materiał jest badany i jakiego patogenu należy szukać. Czasami odpowiedź jest gotowa w ciągu 3 dni, czasami w ciągu tygodnia lub nawet 10-14 dni, ponieważ niektóre próbki wymagają subhodowli na inną pożywkę.
Nie omijaj osób kierujących się do siewnika i pytania o cenę analizy. Przybliżony koszt w Moskwie to około 800 - 1500 rubli. Oczywiście może być wyższa i zależy od szerokości spektrum badań bakteriologicznych. Prawdopodobnie możesz bezpłatnie wykonać analizę w czasie ciąży w poradni przedporodowej lub w poradni ze szczególnych względów medycznych.
Dla kobiet w ciąży zbiornik do wysiewu jest obowiązkowy, podaje się go 2 razy(przy rejestracji i po 36 tygodniach), podczas gdy wymaz pobierany jest nie tylko z dróg rodnych, ale także z błon śluzowych nosa i gardła. Obiektem poszukiwań w tym przypadku, oprócz infekcji układu moczowo-płciowego, będzie Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), który w okresie poporodowym może przysporzyć wielu kłopotów (ropne zapalenie sutka itp.). Ponadto kobiety w ciąży są zobowiązane do wykonania posiewu moczu, zeskanowania nabłonka pochwy oraz wymazów z szyjki macicy i kanału szyjki macicy.
Wiele kobiet przed przystąpieniem do zabiegu bardzo boi się takich okropnych słów i zaczyna myśleć: „Czy to konieczne? Może nie idź”. Śpieszymy zapewnić, że badania są całkowicie bezbolesne. Wymaz z szyjki macicy i kanału szyjki macicy pobiera się sterylnym cytoszczoteczką, nie powodując absolutnie żadnego bólu u kobiety, ale później zbiornik do wysiewu z s / m i s / c ochroni zarówno przyszłą matkę, jak i płód przed możliwymi powikłaniami. Przedmiotem poszukiwań w czasie ciąży są czynniki wywołujące chlamydie, mocznik i mykoplazmę, drożdżopodobne (zwykle Candida albicans) oraz inne mikroorganizmy oportunistyczne i chorobotwórcze.
Wideo: film demonstracyjny na temat kultury zbiornika z kanału szyjki macicy
Szczególne przypadki szczególnie interesujące dla osób przystępujących do testów
Po dostaniu się do dróg rodnych mikroorganizmy chorobotwórcze po bardzo krótkim czasie zostają opanowane i rozpoczynają swoją szkodliwą działalność. Na przykład zawsze chorobotwórcze gonokoki (Neisseria), które są winowajcami dość nieprzyjemnej choroby zwanej i związanej z chorobami przenoszonymi drogą płciową, czują się „jak w domu” dosłownie trzeciego dnia. Zaczynają się aktywnie rozmnażać i odważnie przesuwać w górę dróg rodnych, zdobywając coraz więcej nowych terytoriów. Wszyscy wiedzą, że rzeżączka jest teraz dobrze leczona i prawie nikt się jej nie boi. Ale najpierw musisz go znaleźć. Główną metodą poszukiwania tej infekcji jest wysiew w zbiorniku, uprawa, identyfikacja metodą Grama, mikroskopia.
Znalezione w rozmazie pobranym „na florze” z dróg rodnych, leżące w parach „ziarna kawy” (diplokoki), nie wskazują na obecność choroby przenoszonej drogą płciową. Taka mikroflora pochwy często pojawia się w okresie pomenopauzalnym i nie oznacza nic złego. Rozmaz pobrany w warunkach niesterylnych na szkiełku podstawowym i wybarwiony błękitem metylenowym lub Romanowskim (cytologia) nie pozwala na rozróżnienie drobnoustroju. Może jedynie przyjąć i skierować pacjenta na dodatkowe badania (pobranie wyizolowanej kultury).
Należy zauważyć, że jeśli skrobanie z błon śluzowych dróg moczowych, pobrane do siewu na ureaplazmie, nie jest tak rzadkim zjawiskiem, to sami lekarze często unikają siania moczu, ponieważ trudniej jest z nim pracować.
Stwarza trudności w diagnostyce, co przynosi ogromne szkody nie tylko w czasie ciąży. Ponadto chlamydia powoduje wiele chorób, które są wspólne nie tylko dla kobiet, ale także dla męskiej populacji, dlatego jest wysiewana, uprawiana, badana, określana jest wrażliwość na antybiotykoterapię, a tym samym zwalczana.
W czasie ciąży na ogół trudno jest obejść się bez kultury bakteriologicznej, ponieważ można przeoczyć wiele mikroorganizmów zamaskowanych w rozmazie cytologicznym. Tymczasem wpływ niektórych patogenów STD na płód może być szkodliwy. Ponadto znacznie trudniej jest leczyć kobietę w ciąży, a przepisywanie antybiotyków „na oko” jest po prostu niedopuszczalne.
Metody siewu
Aby wyizolować czyste kultury patogenów, w pierwszym etapie uciekają się do ich zaszczepienia na odpowiednich podłożach, co odbywa się w specjalnych (sterylnych!) warunkach. Zasadniczo przenoszenie materiału do środowiska odbywa się za pomocą urządzeń używanych jeszcze w XIX wieku przez wielkiego Ludwika Pasteura:
- pętla bakteryjna;
- Pipeta Pasteura;
- Bagietka laboratoryjna.
Oczywiście wiele instrumentów uległo zmianom na przestrzeni 2 wieków, zastąpiły je plastikowe sterylne i jednorazowe, jednak stare nie pozostały w przeszłości, służąc naukom mikrobiologicznym do dziś.
Pierwszy etap pozyskiwania kolonii wymaga przestrzegania pewnych zasad:
- Siew odbywa się nad lampą alkoholową w pudełku wstępnie potraktowanym środkami dezynfekującymi i kwarcem lub w szafce laminarnej, która zapewnia sterylność w obszarze roboczym;
- Odzież, rękawiczki i otoczenie pracownika służby zdrowia również muszą być sterylne, ponieważ przeciwieństwo zapobiega izolacji izolowanych szczepów;
- W boksie trzeba pracować szybko, ale ostrożnie, nie można rozmawiać i być rozproszonym, a jednocześnie trzeba pamiętać o bezpieczeństwie osobistym, ponieważ materiał może być zaraźliwy.
Izolacja szczepów i badanie czystych kultur
Izolacja szczepów nie zawsze jest taka sama, ponieważ niektóre podłoża biologiczne znajdujące się w organizmie człowieka wymagają indywidualnego podejścia, np. ponieważ krew (nierozcieńczona) może zabijać mikroorganizmy, a następnie, po dniu lub dłużej, podhodowana na płytkach Petriego.
Wysiew moczu, płukanek żołądkowych i innych materiałów płynnych również ma swoją specyfikę, gdzie w celu uzyskania czystej kultury należy płyn najpierw odwirować (warunki aseptyczne!), a dopiero potem siać, a nie sam płyn, a jego osad .
Hodowlę i hodowlę kolonii prowadzi się na płytkach Petriego lub umieszcza najpierw w płynnej pożywce wlewanej do sterylnych fiolek, a następnie wyizolowane kolonie wysiewa się ponownie, ale na skośnym agarze i materiał umieszcza się w termostacie na dobę. Po upewnieniu się, że otrzymana kultura jest czysta, szczepy przenosi się na szkiełko, wykonuje się rozmaz i barwi wg Grama (najczęściej), Ziehla-Neelsena itp., a w celu zróżnicowania morfologię drobnoustroju określa się badane pod mikroskopem:
- Wielkość i kształt komórki bakteryjnej;
- Obecność kapsułek, wici, zarodników;
- Właściwości barwiące (stosunek mikroorganizmu do barwienia) *.
* Czytelnik prawdopodobnie słyszał o takim patogenie jak blady treponema? Jest to czynnik sprawczy kiły, dlatego pojawiła się jego nazwa (blady), ponieważ nie postrzega dobrze farby i pozostaje lekko różowawy po zabarwieniu według Romanowskiego. Mikroorganizmy, które nie postrzegają barwników anilinowych, nazywane są gram-ujemnymi, a postrzegające - gram-dodatnimi. Bakteriom Gram-ujemnym nadaje się kolor różowy lub czerwony poprzez barwienie metodą Grama dodatkowymi barwnikami (magenta, safranina).
Siew zbiornikowy można nazwać starożytną analizą, ale jego popularność nie spada z tego powodu, chociaż współczesna bakteriologia ma możliwość wyizolowania z niej nie tylko szczepów, ale także pojedynczej komórki, która nazywa się klon. Jednak do uzyskania klona potrzebne jest specjalne urządzenie - mikromanipulator, którego nie ma w konwencjonalnych laboratoriach, ponieważ jest używany głównie do celów badawczych (badania genetyczne).