Znano je, da imajo mikroorganizmi kljub svoji »majhni rasti« tudi »zasvojenosti« s hrano, optimalno temperaturo, nasploh okolje, ki jim popolnoma ustreza, kjer se počutijo udobno in dobro, zato se začnejo intenzivno razmnoževati in rasti.
Bakteriološko sejanje ali, kot ga običajno imenujemo krajše - tankovsko sejanje, se uporablja za pridobivanje večjega števila mikrobov iste vrste (čista kultura) z namenom proučevanja njihovih fizikalno-kemijskih in bioloških lastnosti, da bi nato pridobljene podatke lahko uporabimo za diagnozo nalezljivih bolezni.
Na žalost tudi zdaj priljubljene in druge metode, katerih glavna pomanjkljivost so lažno pozitivni ali lažno negativni rezultati, ne morejo vedno identificirati patogena. Poleg tega ne morejo izbrati ciljnih antibakterijskih zdravil. Podobno težavo rešuje rezervoar za setev, ki se pogosto ne mudi z imenovanjem, sklicujoč se na dejstvo, da se na primer počasi goji, stroški analize pa so precejšnji. Vendar pa je zdravje vredno!
Potrebni pogoji za hrano in dihanje
Mikrobiologi zdaj vedo, da vsak patogen potrebuje svoje "domače" okolje, pri čemer upošteva njegov pH, redoks potencial, viskoznost, vlažnost in osmotske lastnosti. Okolja so lahko mehka in trda, enostavna in zapletena, univerzalna in manj vsestranska, v vseh primerih pa morajo zagotavljati prehrano, dihanje, razmnoževanje in rast bakterijske celice.
primer rasti mikroorganizmov po inokulaciji rezervoarja v hranilni medij
Nekateri mediji (tioglikol, Sabouraud) so primerni za široko paleto mikroorganizmov in jih imenujemo univerzalni. Drugi so namenjeni samo določenim vrstam, na primer pnevmokoki in zlati stafilokoki, ki proizvajajo hemolizine, rastejo na krvnem agarju, ki služi za izolacijo posebej "muhastih" in hkrati nevarnih sevov. Tako obstaja veliko vrst gojišč, kjer vsak od njih goji svoj nabor mikroorganizmov.
Namen gojenja mikroorganizmov in njegov pomen za diagnostiko
Poleg vode, zraka, prsti, ki vsebujejo različne mikroorganizme v različnih koncentracijah, tudi tiste, ki povzročajo bolezni (patogene), številne veje medicinske znanosti zanimajo mikrobi, ki živijo na koži in sluznicah človeškega telesa, kar lahko predstavljamo avtor:
- Stalni prebivalci, ki ne predstavljajo nobene nevarnosti za človeka, torej normalno mikrofloro telesa, brez katere preprosto ne moremo živeti. Na primer, izginotje bakterij, ki živijo v črevesju in sodelujejo v procesu prebave, vodi do disbakterioze, ki je ni enostavno zdraviti. Enako se zgodi z izginotjem vaginalne mikroflore. Takoj ga naselijo pogojno patogeni mikroorganizmi, na primer gardnerella, ki povzročajo;
- pogojno patogena flora, ki je škodljiv le v velikih količinah pod določenimi pogoji (imunska pomanjkljivost). Zgoraj omenjena gardnerella je predstavnik te vrste mikroorganizmov;
- Prisotnost patogenih mikrobov ki jih v zdravem telesu ni. Človeškemu telesu so tuje, kamor po naključju pridejo ob stiku z drugo (bolno) osebo in povzročijo razvoj infekcijskega procesa, včasih precej hudega ali celo usodnega. Na primer, srečanje s patogeni je še vedno v redu, sprva se zdravi, vendar (Bog ne daj!) Izpusti kolero, kugo, črne koze itd.
Na srečo so bili številni med njimi poraženi in so trenutno "za sedmimi pečati" v posebnih laboratorijih, vendar mora biti človeštvo kadar koli pripravljeno na invazijo nevidnega sovražnika, ki je sposoben uničiti cele narode. Bakteriološko sejanje v takih primerih igra morda glavno vlogo pri identifikaciji mikroorganizma, to je določitvi rodu, vrste, vrste itd. (toksonomski položaj), ki je zelo pomemben za diagnostiko infekcijskih procesov, tudi spolno prenosljivih bolezni.
Tako so metode setve, tako kot hranilni mediji, različne, vendar imajo isti cilj: pridobiti čisto kulturo brez nečistoč v obliki mikrobov drugih razredov, ki živijo povsod: v vodi, v zraku, na površinah, na človeku in v njem.
Kdaj je imenovan rezervoar za setev in kako razumeti odgovore?
Ime mikroorganizma in njegova količina
Bolniki sami ne predpisujejo bakteriološke analize, to opravi zdravnik, če sumi, da so težave bolnika z različnimi pritožbami povezane s prodiranjem patogena v telo ali s povečanim razmnoževanjem mikroorganizmov, ki stalno živijo. z osebo, vendar kažejo patogene lastnosti le v določenih pogojih. Po opravljeni analizi in čez nekaj časa, ko je prejel odgovor v svojih rokah, je oseba izgubljena in včasih celo prestrašena, ko vidi nerazumljive besede in oznake, zato, da se to ne bi zgodilo, bi rad dal kratko pojasnilo o tem vprašanju:
Pri pregledu biološkega materiala na prisotnost patogenih mikroorganizmov je odgovor lahko negativen ali pozitiven (»slaba posoda za sejanje«), saj je človeško telo zanje le začasno zatočišče in ne naravni habitat.
Včasih, odvisno od materiala, ki ga želite inokulirati, lahko vidite število mikroorganizmov, izraženo v enotah za tvorbo kolonij na ml (ena živa celica bo povzročila rast celotne kolonije) - CFU / ml. Na primer, kultura urina za bakteriološko preiskavo običajno daje do 10 3 CFU / ml vseh odkritih bakterijskih celic, v dvomljivih primerih (ponovite analizo!) - 10 3 - 10 4 CFU / ml, z vnetnim procesom infekcijskega izvora - 10 5 in več CFU/ml O zadnjih dveh možnostih v pogovornem govoru se včasih preprosto izrazita: "Slab rezervoar za sejanje."
Kako "najti nadzor" nad patogenim mikroorganizmom?
Hkrati s setvijo materiala v takih situacijah se mikroflora poseje za občutljivost na antibiotike, kar bo dalo jasen odgovor zdravniku - katera protibakterijska zdravila in v kakšnih odmerkih bodo "prestrašila" "vsiljivca". Tudi tukaj je na primer dešifriranje:
- Vrsta mikroorganizma, na primer enaka E. coli v količini 1x10 ^ 6;
- Ime antibiotika z oznako (S) označuje občutljivost patogena na to zdravilo;
- Vrsta antibiotikov, ki ne delujejo na mikroorganizem, je označena s simbolom (R).
Bakteriološka analiza je še posebej pomembna pri določanju občutljivosti na antibiotike, saj glavna težava v boju proti klamidiji, mikoplazmi, ureaplazmi itd. ostaja izbira učinkovitega zdravljenja, ki ne škoduje telesu in ne udari v žep bolnika.
Tabela: Alternativni primer rezultatov kulture v rezervoarju, ki prikazuje učinkovite antibiotike
Pravilna priprava na bakteriološko analizo je ključ do zanesljivega rezultata
Vsak biološki material, vzet od osebe, se lahko podvrže bakteriološki analizi.(koža, kri, seme, sluznice ustne votline, dihal in sečil, prebavil, organi vida, sluha in voha itd.). Najpogosteje rezervoar za setev predpišejo ginekologi in urologi, zato se morate malo ustaviti.
Ustrezna priprava na bakteriološko kulturo bo ključ do pravilnega rezultata, sicer bo treba analizo ponoviti in počakati na določen čas. Kako darovati kri za sterilnost iz vene, je naloga zdravstvenih delavcev. Tu praviloma ni nič odvisno od pacienta, on preprosto naredi upogib komolca, medicinska sestra pa ga vzame v sterilno epruveto v skladu z vsemi pravili asepse in antisepse.
Druga stvar je urin ali iz genitalnega trakta. Tu mora pacient zagotoviti prvo stopnjo (ograjo) po predpisanih pravilih. Treba je opozoriti, da je urin žensk in moških nekoliko drugačen, čeprav je v mehurju obeh spolov sterilen:
- Pri ženskah, ko gredo skozi sečnico, je mogoče zajeti majhno število nepatogenih kokov, čeprav na splošno pogosto ostane sterilen;
- Pri moških so stvari nekoliko drugačne. Sprednji del sečnice lahko dovaja urin z naslednjim:
- difteroidi;
- stafilokoki;
- nekatere nepatogene gramnegativne bakterije, kar bo naknadno pokazala bakteriološka analiza.
Če pa so v sprejemljivi koncentraciji (do 10 3 CFU / ml), potem se ni treba bati, to je različica norme.
Da bi se izognili prisotnosti drugih mikroorganizmov in čim bolj zagotovili sterilnost odvzetega materiala, pred analizo opravimo temeljito toaleto spolnih organov (vhod v nožnico pri ženskah zapremo z vatirano palčko – zaščita pred vdor ločenih spolnih organov). Za analizo se vzame povprečna količina urina (začetek uriniranja v stranišče, približno 10 ml medija v sterilnem kozarcu, ki se konča v stranišču). Bolniki morajo vedeti: urin, odvzet za kulturo, je treba obdelati najpozneje v dveh urah, če ga shranite pri temperaturi do 20 ° C, zato morate upoštevati čas prevoza.
Poleg tega se material za sejalno posodo po potrebi vzame iz sečnice in danke pri moških, iz sečnice, danke, nožnice, materničnega vratu in cervikalnega kanala - pri ženskah, vendar se to zgodi v zdravstveni ustanovi, kjer bi moral bolnik prispeti. Umivanje, izpiranje in uporaba antiseptikov v takih primerih je prepovedano.
Druga vprašanja, ki skrbijo bolnike
Mnogi bolniki se zanimajo, koliko dni se analiza opravi. Na to vprašanje je nemogoče nedvoumno odgovoriti, vse je odvisno od tega, kateri material se proučuje in kateri patogen je treba iskati. Včasih je odgovor pripravljen v 3 dneh, včasih v tednu ali celo 10-14 dneh, saj nekateri vzorci zahtevajo subkulturo v drug medij.
Ne obidite ljudi, ki se odpravljajo v rezervoar za sejanje, in vprašanja o ceni analize. Približni stroški v Moskvi so približno 800 - 1500 rubljev. Seveda je lahko višji in je odvisen od širine spektra bakteriološkega iskanja. Verjetno lahko brezplačno opravite analizo med nosečnostjo v predporodni kliniki ali na kliniki zaradi posebnih zdravstvenih razlogov.
Za nosečnice je posoda za sejanje obvezna, daje se 2-krat(pri registraciji in pri 36 tednih), medtem ko se bris vzame ne samo iz genitalnega trakta, temveč tudi iz sluznice nosu in grla. Predmet iskanja v tem primeru bo poleg urogenitalnih okužb tudi Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus), ki lahko v poporodnem obdobju povzroči veliko težav (gnojni mastitis itd.). Poleg tega morajo nosečnice opraviti urinokulturo, strganje vaginalnega epitelija in brise iz materničnega vratu in cervikalnega kanala.
Mnoge ženske se pred posegom zelo bojijo tako groznih besed in začnejo razmišljati: »Ali je to potrebno? Mogoče ne pojdi." Hitro zagotavljamo, da so testi popolnoma neboleči. Bris iz materničnega vratu in cervikalnega kanala se vzame s sterilno citoščetko, ki ženski ne povzroča nobene bolečine, kasneje pa bo rezervoar za setev iz s / m in s / c zaščitil bodočo mater in plod pred morebitnimi zapleti. Predmet iskanja med nosečnostjo so povzročitelji klamidije, sečnine in mikoplazme, kvasovkam (običajno Candida albicans) in drugi oportunistični in patogeni mikroorganizmi.
Video: predstavitveni video o kulturi rezervoarja iz cervikalnega kanala
Posebni primeri, ki so posebej zanimivi za tiste, ki opravljajo teste
Ko pridejo v genitalni trakt, se patogeni mikroorganizmi po zelo kratkem času obvladajo in začnejo svojo škodljivo dejavnost. Na primer, vedno patogeni gonokoki (Neisseria), ki so povzročitelji precej neprijetne bolezni, imenovane in povezane s spolno prenosljivimi boleznimi, se dobesedno tretji dan počutijo "doma". Začnejo se aktivno množiti in se pogumno premikati po genitalnem traktu, zajemajo vedno več novih ozemelj. Vsi vedo, da je gonoreja zdaj dobro zdravljena in se je skoraj nihče ne boji. Toda najprej ga morate najti. Glavna metoda iskanja te okužbe je setev v rezervoarju, gojenje, identifikacija z barvanjem po Gramu, mikroskopija.
Najdeno v brisu, odvzetem "na floro" iz genitalnega trakta, ki leži v parih "kavna zrna" (diplokoki), ne kažejo na prisotnost spolno prenosljive bolezni. Takšna mikroflora nožnice se pogosto pojavi v postmenopavzi in ne pomeni nič slabega. Bris, odvzet v nesterilnih pogojih na stekelcu in obarvan z metilen modrim ali Romanovsky (citologija), ne more razlikovati mikroorganizma. Lahko samo domneva in bolnika napoti na dodatne raziskave (pridobitev izolirane kulture).
Treba je opozoriti, da če strganje iz sluznice sečil, vzeto za setev na ureaplazmo, ni tako redek pojav, se zdravniki sami pogosto izogibajo sejanju urina, saj je z njim težje delati.
Ustvarja težave pri diagnozi, kar prinaša veliko škodo ne le med nosečnostjo. Poleg tega klamidija povzroča številne bolezni, ki so značilne ne le za ženske, ampak tudi za moško populacijo, zato jo sejemo, gojimo, preučujemo, ugotavljamo občutljivost na antibiotično terapijo in se tako borimo proti njej.
Med nosečnostjo je na splošno težko brez bakteriološke kulture, saj lahko veliko mikroorganizmov, prikritih v citološkem brisu, zgrešimo. Medtem pa je lahko učinek nekaterih povzročiteljev spolno prenosljivih bolezni na plod škodljiv. Poleg tega je veliko težje zdraviti nosečnico in predpisovanje antibiotikov "na oko" je preprosto nesprejemljivo.
Metode setve
Za izolacijo čistih kultur patogenov se na prvi stopnji zatečejo k njihovi inokulaciji na ustreznih medijih, ki se izvajajo v posebnih (sterilnih!) pogojih. V bistvu prenos materiala v okolje poteka s pomočjo naprav, ki jih je že v 19. stoletju uporabljal veliki Louis Pasteur:
- bakterijska zanka;
- Pasteurjeva pipeta;
- Steklena palica.
Seveda so se številni instrumenti v 2 stoletjih spremenili, nadomestili so jih plastični sterilni in za enkratno uporabo, vendar stari niso ostali v preteklosti, ampak še danes služijo mikrobiološki znanosti.
Prva faza pridobivanja kolonij zahteva upoštevanje določenih pravil:
- Setev se izvaja nad alkoholno svetilko v škatli, predhodno obdelani z razkužili in obdelavo s kremenom, ali v laminarni omari, ki zagotavlja sterilnost delovnega območja;
- Sterilni morajo biti tudi oblačila, rokavice in okolje zdravstvenega delavca, saj nasprotno preprečuje izolacijo izoliranih sevov;
- V boksu morate delati hitro, vendar previdno, ne smete govoriti in biti moteni, medtem ko se morate spomniti na osebno varnost, saj je material lahko nalezljiv.
Izolacija sevov in študija čistih kultur
Izolacija sevov ni vedno enaka, saj nekatera biološka gojišča, ki so v človeškem telesu, zahtevajo individualen pristop, na primer hemokulturo (kri) najprej v tekočem mediju (razmerje 1:10) nekoliko »odraste«, ker lahko kri (nerazredčena) uniči mikroorganizme, nato pa po enem dnevu ali več subkulturiramo na petrijevkah.
Sejanje urina, izpiranje želodca in drugih tekočih materialov ima tudi svoje značilnosti, kjer je treba za pridobitev čiste kulture tekočino najprej centrifugirati (aseptični pogoji!), In šele nato sejati, in ne same tekočine, temveč njen sediment .
Gojenje in gojenje kolonij izvajamo na petrijevkah ali najprej damo v tekoči medij, vlijemo v sterilne viale, nato pa izolirane kolonije ponovno posejemo, vendar na poševnem agarju in material postavimo v termostat za en dan. Ko se prepričamo, da je nastala kultura čista, seve prenesemo na predmetno stekelce, naredimo razmaz in ga obarvamo po Gramu (najpogosteje), Ziehl-Neelsenu itd., za razlikovanje pa določimo morfologijo mikroba. preučevali pod mikroskopom:
- Velikost in oblika bakterijske celice;
- Prisotnost kapsul, bičkov, spor;
- Tinktorialne lastnosti (razmerje med mikroorganizmom in obarvanjem) *.
* Bralec je verjetno slišal za takega patogena kot bledo treponemo? To je povzročitelj sifilisa, zato se je pojavilo njegovo ime (bledo), ker slabo zazna barvo in ostane rahlo rožnato, ko je obarvan po Romanovskem. Mikroorganizmi, ki ne zaznavajo anilinskih barvil, se imenujejo gram-negativni, zaznavni pa gram-pozitivni. Gramnegativne bakterije dobijo rožnato ali rdečo barvo z barvanjem po Gramu z dodatnimi barvili (magenta, safranin).
Setev v rezervoarju lahko imenujemo starodavna analiza, vendar njena priljubljenost od tega ne pade, čeprav ima sodobna bakteriologija možnost izolirati ne le seve, ampak tudi eno samo celico iz nje, ki se imenuje klon. Za pridobitev klona pa je potrebna posebna naprava - mikromanipulator, ki je v običajnih laboratorijih ni, saj se uporablja predvsem v raziskovalne namene (genetske študije).