Pravočasna diagnoza okužbe s HIV postane izjemno pomemben ukrep, saj lahko zgodnje zdravljenje v veliki meri vpliva na nadaljnji razvoj bolezni in podaljša življenje bolnika. V zadnjih letih je prišlo do pomembnega napredka na področju odkrivanja te strašne bolezni: stare testne sisteme nadomeščajo naprednejši, metode preiskav postajajo dostopnejše, njihova natančnost pa se znatno poveča.
V tem članku bomo govorili o sodobnih metodah za diagnosticiranje okužbe s HIV, ki jih je koristno poznati za pravočasno zdravljenje te težave in ohranjanje normalne kakovosti življenja bolnika.
Metode za diagnosticiranje HIV
V Rusiji se za diagnozo okužbe s HIV izvaja standardni postopek, ki vključuje dve ravni:
- testni sistem ELISA (presejalna analiza);
- imunski bloting (IB).
Uporabljajo se lahko tudi druge diagnostične metode:
- ekspresni testi.
testni sistemi ELISA
V prvi fazi diagnosticiranja se za odkrivanje okužbe s HIV uporablja presejalni test (ELISA), ki temelji na v laboratorijih ustvarjenih proteinih HIV, ki zajamejo specifična protitelesa, ki nastanejo v telesu kot odgovor na okužbo. Po njihovi interakciji z reagenti (encimi) testnega sistema se barva indikatorja spremeni. Nadalje se te barvne spremembe obdelajo na posebni opremi, ki določa rezultat opravljene analize.
Takšni testi ELISA lahko pokažejo rezultate v nekaj tednih po vnosu okužbe s HIV. Ta analiza ne določa prisotnosti virusa, ampak zazna proizvodnjo protiteles proti njemu. Včasih se v človeškem telesu protitelesa proti HIV začnejo proizvajati 2 tedna po okužbi, pri večini ljudi pa se proizvajajo pozneje, po 3-6 tednih.
Obstajajo štiri generacije testov ELISA z različnimi občutljivostmi. V zadnjih letih se vse pogosteje uporabljajo testni sistemi III in IV generacije, ki temeljijo na sintetičnih peptidih ali rekombinantnih proteinih in imajo večjo specifičnost in natančnost. Uporabljajo se lahko za diagnosticiranje okužbe s HIV, spremljanje razširjenosti HIV in zagotavljanje varnosti pri testiranju darovane krvi. Natančnost testnih sistemov ELISA III in IV generacije je 93-99% (bolj občutljivi so testi, ki se proizvajajo v zahodni Evropi - 99%).
Za izvedbo testa ELISA bolniku vzamemo 5 ml krvi iz vene. Med zadnjim obrokom in analizo mora miniti najmanj 8 ur (praviloma se izvaja zjutraj na prazen želodec). Takšen test je priporočljivo opraviti ne prej kot 3 tedne po domnevni okužbi (na primer po nezaščitenem spolnem odnosu z novim spolnim partnerjem).
Rezultati ELISA testa so pridobljeni po 2-10 dneh:
- negativen rezultat: kaže na odsotnost okužbe s HIV in ne zahteva napotitve k specialistu;
- lažno negativen rezultat: lahko opazimo v zgodnjih fazah okužbe (do 3 tedne), v kasnejših fazah aidsa s hudo imunsko supresijo in z nepravilno pripravo krvi;
- lažno pozitiven rezultat: opazimo ga lahko pri nekaterih boleznih in v primeru nepravilne priprave krvi;
- pozitiven rezultat: kaže na okužbo z okužbo s HIV, zahteva IB in napotitev bolnika k specialistu v center za AIDS.
Zakaj lahko test ELISA daje lažno pozitivne rezultate?
Lažno pozitivne rezultate testa ELISA za HIV lahko opazimo z nepravilno obdelavo krvi ali pri bolnikih s takimi stanji in boleznimi:
- multipli mielom;
- nalezljive bolezni, ki jih povzroča virus Epstein-Barr;
- stanje po ;
- avtoimunske bolezni;
- v ozadju nosečnosti;
- stanje po cepljenju.
Zaradi zgoraj opisanih razlogov so lahko v krvi prisotna nespecifična navzkrižno reagirajoča protitelesa, katerih nastajanja ni izzvala okužba s HIV.
V zadnjih letih se je pogostost lažno pozitivnih rezultatov bistveno zmanjšala zaradi uporabe testnih sistemov III in IV generacije, ki vsebujejo občutljivejše peptide in rekombinantne proteine (sintetizirani so z genskim inženiringom in vitro). Po uporabi takšnih testov ELISA se je pogostost lažno pozitivnih rezultatov znatno zmanjšala in znaša približno 0,02-0,5%.
Lažno pozitiven rezultat ne pomeni, da je oseba okužena z virusom HIV. V takšnih primerih WHO priporoča drug test ELISA (obvezna IV generacija).
Krv bolnika pošljemo v referenčni ali arbitražni laboratorij z oznako »ponovi« in jo testiramo na testnem sistemu ELISA IV generacije. Če je rezultat nove analize negativen, se prvi rezultat prepozna kot napačen (lažno pozitiven) in IB se ne izvede. Če je rezultat pri drugem testu pozitiven ali dvomljiv, mora bolnik v 4-6 tednih opraviti IB, da potrdi ali ovrže okužbo s HIV.
imunski bloting
Dokončno diagnozo okužbe s HIV je mogoče postaviti šele po pozitivnem rezultatu imunskega blotinga (IB). Za njegovo izvedbo se uporablja nitrocelulozni trak, na katerega se nanesejo virusni proteini.
Odvzem krvi za IB se izvaja iz vene. Nato se podvrže posebni obdelavi in proteini, ki jih vsebuje serum, se ločijo v posebnem gelu glede na njihov naboj in molekulsko maso (manipulacija se izvaja na posebni opremi pod vplivom električnega polja). Nitrocelulozni trak se nanese na gel krvnega seruma in v posebni komori se izvede blotiranje (»blotiranje«). Trak je obdelan in če uporabljeni materiali vsebujejo protitelesa proti HIV, se vežejo na antigenske trakove na IB in se prikažejo kot črte.
IB se šteje za pozitivno, če:
- po merilih ameriškega CDC - na traku sta dve ali tri črte gp41, p24, gp120 / gp160;
- po merilih ameriške FDA - na traku sta dve črti p24, p31 in linija gp41 ali gp120 / gp160.
V 99,9 % primerov pozitiven rezultat IB kaže na okužbo s HIV.
Če črt ni, je IB negativen.
Pri identifikaciji linij z gp160, gp120 in gp41 je IB dvomljiv. Tak rezultat je mogoče zaznati, ko:
- onkološke bolezni;
- nosečnost;
- pogoste transfuzije krvi.
V takih primerih je priporočljivo izvesti drugo študijo z uporabo kompleta drugega podjetja. Če je po dodatni IB izvid dvomljiv, je potrebno spremljanje šest mesecev (IB se izvaja vsake 3 mesece).
verižna reakcija polimeraze
PCR test lahko zazna RNA virusa. Njegova občutljivost je precej visoka in omogoča odkrivanje okužbe s HIV že 10 dni po okužbi. V nekaterih primerih lahko PCR daje lažno pozitivne rezultate, saj lahko njegova visoka občutljivost reagira tudi na protitelesa proti drugim okužbam.
Ta diagnostična tehnika je draga, zahteva posebno opremo in visoko usposobljene strokovnjake. Ti razlogi ne dovoljujejo njegove izvedbe med množičnim testiranjem prebivalstva.
PCR se uporablja v takih primerih:
- za odkrivanje virusa HIV pri novorojenčkih, rojenih materam, okuženim s HIV;
- za odkrivanje HIV v "okenskem obdobju" ali v primeru dvomljive IB;
- za nadzor koncentracije HIV v krvi;
- za študij krvi darovalcev.
Samo s PCR testom se diagnoza HIV ne postavlja, ampak se izvaja kot dodatna diagnostična metoda za reševanje sporov.
Ekspresne metode
Ena od novosti v diagnostiki HIV so postali hitri testi, katerih rezultate je mogoče oceniti v 10-15 minutah. Najbolj učinkovite in natančne rezultate dobimo z imunokromatografskimi testi po principu kapilarnega pretoka. So posebni trakovi, na katere se nanese kri ali druge testne tekočine (slina, urin). V prisotnosti protiteles proti HIV se po 10-15 minutah na testu pojavi barvni in kontrolni trak - pozitiven rezultat. Če je rezultat negativen, se prikaže le kontrolna črta.
Tako kot pri testih ELISA je treba rezultate hitrega testa potrditi z analizo IB. Šele takrat je mogoče postaviti diagnozo okužbe s HIV.
Obstajajo hitri kompleti za domače testiranje. Test OraSure Technologies1 (ZDA) je odobril FDA, na voljo je brez recepta in se lahko uporablja za odkrivanje virusa HIV. Po testu, v primeru pozitivnega rezultata, se bolniku priporoča, da opravi pregled v specializiranem centru za potrditev diagnoze.
Preostalih testov za domačo uporabo FDA še ni odobrila in so lahko njihovi rezultati zelo vprašljivi.
Kljub dejstvu, da so hitri testi po natančnosti slabši od testov ELISA IV generacije, se pogosto uporabljajo za dodatno testiranje prebivalstva.
Testiranje na okužbo s HIV lahko opravite v kateri koli polikliniki, centralni regionalni bolnišnici ali v specializiranih centrih za AIDS. Na ozemlju Rusije potekajo popolnoma zaupno ali anonimno. Vsak pacient lahko pričakuje zdravniški ali psihološki nasvet pred ali po analizi. Teste na HIV boste morali plačati samo v komercialnih zdravstvenih ustanovah, v javnih klinikah in bolnišnicah pa jih izvajajo brezplačno.
Kako se lahko okužite s HIV in kakšni miti obstajajo o možnostih okužbe, preberite
... diagnoza vsake nalezljive bolezni temelji na primerjavi epidemioloških, kliničnih in laboratorijskih podatkov, pretiravanje vrednosti ene od skupin teh podatkov pa lahko povzroči diagnostične napake.
Diagnoza okužbe s HIV vključuje dve stopnji:
jaz stopnja - ugotavljanje dejanskega dejstva okužbe s HIV
;
II stopnja - določitev stopnje bolezni
.
UGOTAVLJANJE DEJSTVA OKUŽBE S HIV
Ugotavljanje samega dejstva okužbe s HIV (tj. Identifikacija ljudi, okuženih s HIV), pa vključuje tudi dve stopnji:
I faza- povezani imunosorbentni test(ČE): metoda ELISA je presejalna (selektivna) - selekcija domnevno okuženih oseb, to je njen namen je identificirati sumljive osebe in izločiti zdrave osebe; protitelesa proti HIV odkrivamo z drugimi protitelesi proti želenim protitelesom (protitelesa proti drugim protitelesom). Ta "pomočna" protitelesa so označena z encimom. Vsi presejalni testi morajo biti zelo občutljivi, da ne bi zgrešili bolnika. Zaradi tega njihova specifičnost ni zelo visoka, kar pomeni, da lahko ELISA daje pozitiven odgovor ("verjetno bolan") pri neokuženih ljudeh (na primer pri bolnikih z avtoimunskimi boleznimi: revmatizem, sistemski eritematozni lupus itd.). Pogostnost lažno pozitivnih rezultatov pri uporabi različnih testnih sistemov se giblje od 0,02 do 0,5%. Če je ELISA osebe dala pozitiven rezultat, potem je za potrditev dejstva okužbe s HIV potrebno opraviti nadaljnji pregled. Pri izvajanju ELISA v 3-5% primerov so možni lažno negativni rezultati - če je do okužbe prišlo relativno nedavno in je raven protiteles še vedno zelo nizka ali v terminalni fazi bolezni, za katero je značilna huda poškodba imunski sistem s hudo kršitvijo procesa tvorbe protiteles. Zato se ob prisotnosti podatkov, ki kažejo na stik z okuženimi z virusom HIV, ponavljajoče študije običajno izvedejo po 2 do 3 mesecih.
II stopnja - imunobloting(v modifikaciji Western Blot, Western blot): je bolj zapletena metoda in služi za potrditev dejstva okužbe. Ta metoda ne zaznava kompleksnih protiteles proti virusu HIV, temveč protitelesa proti njegovim posameznim strukturnim proteinom (p24, gp120, gp41 itd.). Rezultati imunoblotinga se štejejo za pozitivne, če so odkrita protitelesa proti vsaj trem proteinom, od katerih enega kodirajo geni env, drugega geni gag in tretjega geni pol. Če se odkrijejo protitelesa proti eni ali dvema beljakovinama, se rezultat šteje za dvomljiv in zahteva potrditev. V večini laboratorijev diagnozo okužbe s HIV postavijo, če sočasno odkrijejo protitelesa proti proteinom p24, p31, gp4l in gpl20/gp160. Bistvo metode: virus se uniči na komponente (antigene), ki so sestavljene iz ioniziranih aminokislinskih ostankov, zato imajo vse komponente zore, ki se med seboj razlikujejo; nato se z elektroforezo (električni tok) antigeni porazdelijo po površini traku - če so v testnem serumu protitelesa proti HIV, bodo delovala z vsemi skupinami antigenov in to je mogoče zaznati.
Treba si je zapomniti da se protitelesa proti HIV pojavijo pri 90-95% okuženih v 3 mesecih po okužbi, pri 5-9% okuženih se protitelesa proti HIV pojavijo po 6 mesecih in pri 0,5-1% okuženih se protitelesa proti HIV pojavijo pozneje. V fazi aidsa se lahko število protiteles zmanjša, do popolnega izginotja.
V imunologiji obstaja nekaj takega "serološko okno" - obdobje od okužbe do pojava takšnega števila protiteles, ki jih je mogoče zaznati. Pri HIV to obdobje običajno traja od 2 do 12 tednov, v redkih primerih dlje. Med »serološkim oknom« je oseba po preiskavah zdrava, v resnici pa je okužena z virusom HIV. Ugotovljeno je bilo, da je lahko HIV DNK v človeškem genomu vsaj tri leta brez znakov delovanja in se protitelesa proti HIV (markerji okužbe s HIV) ne pojavijo.
V tem obdobju (»serološko okno«) je mogoče identificirati osebo, okuženo s HIV, in celo 1-2 tedna po okužbi z verižna reakcija polimeraze(PCR). To je izjemno občutljiva metoda – teoretično je mogoče zaznati 1 DNK na 10 ml medija. Bistvo metode je naslednje: z verižno reakcijo s polimerazo pridobimo veliko kopij nukleinske kisline (virus je nukleinska kislina - DNK ali RNK - v beljakovinskem ovoju), ki jih nato detektiramo z označenimi encimi ali izotopi. , pa tudi po značilni strukturi. PCR je draga diagnostična metoda, zato se ne uporablja presejalno in rutinsko.
DOLOČITEV STADIJA BOLEZNI
V središču aidsa je, najprej uničenje T-limfocitov-pomočnikov, označenih z monoklonskimi protitelesi - grozdi diferenciacije - kot CD4. V zvezi s tem je diagnoza in spremljanje napredovanja bolezni nemogoče brez nadzora subpopulacije T-pomočnikov, ki se najprimerneje izvaja z laserskim sortirnikom celic.
Za blago okužbo s HIVštevilo T-limfocitov je zelo spremenljiv pokazatelj. Na splošno je zmanjšanje števila celic CD4 (absolutno in relativno) ugotovljeno pri osebah, ki so se okužile s HIV pred vsaj enim letom. Po drugi strani pa je v zgodnjih fazah okužbe število T-supresorjev (CD8) pogosto močno povečano tako v periferni krvi kot v povečanih bezgavkah.
S hudim aidsom velika večina bolnikov ima zmanjšano skupno število T-limfocitov (manj kot 1000 na 1 μl krvi, vključno z limfociti CD4 - manj kot 22 na 1 μl, medtem ko absolutna vrednost vsebnosti CD8 ostaja v mejah normale). V skladu s tem se razmerje CD4/CD8 močno zmanjša. Odziv T-limfocitov in vitro na standardne antigene in mitogene se zmanjša v strogem skladu z relativno zmanjšanim številom CD4.
Za napredoval AIDS značilna splošna limfopenija, nevtropenija, trombocitopenija (zmanjšanje števila limfocitov, nevtrofilcev in trombocitov), anemija. Te spremembe so lahko posledica centralne inhibicije hematopoeze zaradi poraza hematopoetskih organov z virusom, pa tudi avtoimunskega uničenja celičnih subpopulacij na periferiji. Poleg tega je za AIDS značilno zmerno povečanje količine gama globulinov s prevladujočim povečanjem vsebnosti IgG. Bolniki s hudimi simptomi aidsa imajo pogosto povišane vrednosti IgA. Na nekaterih stopnjah bolezni se raven označevalcev aidsa, kot so 1-mikroglobulin, kislinsko stabilni interferon, 1-timozin, znatno poveča. Enako se zgodi z izločanjem prostega neopterina, metabolita makrofagov. Relativnega pomena vsakega od naštetih testov, katerih število nenehno narašča, še ni mogoče oceniti. Zato jih je treba obravnavati v interakciji z označevalci okužbe s HIV, tako imunovirološkimi kot citološkimi. Za klinični krvni test je značilna levkopenija, limfopenija (zmanjšanje števila levkocitov in limfocitov).
1. stopnja - " inkubacijska stopnja»
- protitelesa proti HIV še niso odkrita; diagnoza okužbe s HIV v tej fazi se postavi na podlagi epidemioloških podatkov in mora biti laboratorijsko potrjena z odkrivanjem virusa humane imunske pomanjkljivosti, njegovih antigenov, nukleinskih kislin HIV v bolnikovem krvnem serumu;
2. stopnja - " faza začetnih manifestacij»
- v tem obdobju je že proizvodnja protiteles:;
Stopnja 2A - " asimptomatski»
- okužba s HIV se kaže samo s tvorbo protiteles;
2B stopnja - " akutna okužba s HIV brez sekundarne bolezni»
- v krvi bolnikov je mogoče odkriti širokoplazemske limfocite - "mononuklearne celice" in pogosto opaziti prehodno znižanje ravni CD4-limfocitov (akutno klinično okužbo opazimo pri 50-90% okuženih posameznikov v prvem 3 mesece po okužbi; začetek obdobja akutne okužbe je praviloma pred serokonverzijo, to je pojavom protiteles proti HIV);
2B stopnja - " akutna okužba s HIV s sekundarnimi boleznimi»
- v ozadju zmanjšanja ravni CD4-limfocitov in posledične imunske pomanjkljivosti se pojavijo sekundarne bolezni različnih etiologij (tonzilitis, bakterijska in pnevmocistična pljučnica, kandidoza, herpetična okužba itd.);
3. stopnja - " latentno»
- kot odziv na napredovanje imunske pomanjkljivosti se imunski odziv spremeni v obliki čezmernega razmnoževanja celic CD4, čemur sledi postopno zniževanje ravni limfocitov CD4, v povprečju s hitrostjo 0,05-0,07x109/l na leto. ; v krvi najdemo protitelesa proti HIV;
Faza 4 - " stopnja sekundarnih bolezni»
- izčrpavanje limfocitov CD4, koncentracija protiteles proti virusu se znatno zmanjša (odvisno od resnosti sekundarnih bolezni se razlikujejo stopnje 4A, 4B, 4C);
Stopnja 5 - " končni fazi»
- značilno zmanjšanje števila celic CD4 pod 0,05x109/l; koncentracija protiteles proti virusu je znatno zmanjšana ali protiteles morda ne bodo odkriti.
Za postavitev dokončne diagnoze se opravi diagnostika okužbe s HIV. Če je bolnik prepričan o okužbi, se ne smete samozdraviti: posvetujte se s strokovnjakom.
Pod krinko aidsa se lahko skrivajo številne bolezni, ki jih je mogoče pozdraviti z obiskom zdravnika. Testi okužbe so najpogostejša in zgodnja diagnostična metoda.
Določitev stopnje okužbe se nadaljuje v laboratoriju s krvnim testom z ELISA ali PCR.
V povezavi s poslabšanjem epidemioloških kazalcev okužbe s HIV je zgodnje prepoznavanje bolezni postalo zelo pomembno. Zdravnik izvaja diferencialno diagnozo okužbe s HIV, zbira epidemiološke podatke o bolezni.
V procesu preučevanja metod okužbe specialist izvaja študije, kot so:
- preučevanje mehanizma razvoja okužbe s HIV;
- diagnoza sočasnih bolezni.
Metode za diagnosticiranje okužbe s HIV so usmerjene v odkrivanje protiteles v ELISA, in ko je diagnoza potrjena, specialist opravi razlagalno delo s pacientom o njegovem spoštovanju pravil, da bi se izognili širjenju bolezni.
Testiranje na aids se izvaja pri otrocih, rojenih okuženim materam, potem ko so prejeli protiretrovirusno zdravljenje. Presejalni testi odkrivajo protitelesa proti HIV 1 in 2.
Imunoblot je potrditveni in odkrije protitelesa proti proteinom HIV.
Zgodnja diagnoza imunske pomanjkljivosti omogoča bolniku, da v kratkem času spremeni svoj življenjski slog, začne zdravljenje in prejme psihološko pomoč. Značilne pritožbe bolnika vedno pomagajo zdravniku sumiti na AIDS in poslati bolnikovo kri v laboratorij za raziskave.
4. generacija hitrih testov za AIDS
Laboratorijska diagnoza okužbe s HIV, ki se izvaja s testi 4. generacije, vam omogoča, da določite bolezen v akutni fazi bolezni. Test Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo je zelo občutljiv na antigene in protitelesa v bolnikovem serumu. Specifičnost študije je 99,19 % za linijo Ab in 99,64 % za linijo Ag, pozitivna napovedna vrednost pa je določena znotraj 55 %.
Občutljivost testa se določi z določitvijo predhodno znanih rezultatov. Pri prejemu pozitivnih podatkov verjetnost napačnih številk doseže 45%.
Na domu se opravi preiskava ustnega brisa. Pregled je za pacienta udoben, enostaven in neboleč. Testni listič ImmunoChrom-½-Express se uporablja za analizo in zagotavlja stabilen rezultat, če bolnik upošteva navodila, ki so priložena zdravilu. Če se na testnem in kontrolnem območju najdeta dve enaki vijolični črti, se šteje, da je test pozitiven. Prisotnost enega traku se dešifrira kot negativen rezultat analize.
Čas, porabljen za študijo, je od 15 do 30 minut.
Diagnoza bolezni v inkubacijskem obdobju
Poraz imunskega sistema se pojavi, ko virus vstopi v bolnikovo telo. Inkubacijska doba se spreminja v 3 mesecih.
Po nezaželenem in nevarnem stiku s partnerjem je potrebno opraviti PCR test in na podlagi rezultatov sklepati o prisotnosti okužbe s HIV v telesu. Najdaljše obdobje za začetek diagnoze imunske pomanjkljivosti je 8-9 mesecev, v izjemnih primerih pa se podaljša na 2 leti.
Za končno diagnozo bolezni se študija izvaja med letom; vsake 3 mesece bolnik daruje kri za HIV. Takojšnji stik s specialistom po nevarnem stiku zmanjša verjetnost okužbe za 90%.
Za laboratorijsko diagnozo zgodnjega obdobja bolezni se uporablja metoda polimerazne reakcije, ki določa nukleinske kisline. Rezultati analize so dešifrirani v nekaj urah, pri čemer se ohrani popolna anonimnost.
Ustvarjalni test HIV/AIDS MP-HIV ½ se opravi doma, 4 tedne po nevarni izpostavljenosti. Testne kasete zaznavajo protitelesa proti virusu HIV št. 1 in 2.
Ekspresne diagnostične metode za AIDS pri otrocih
Dojenčki, rojeni okuženim materam, so testirani na virus aidsa. Serološke metode za ugotavljanje bolezni niso vedno potrjene pri dojenčkih, starih od 5 do 18 mesecev, vendar ima rezultat naknadno pozitivno vrednost v imunoblotu.
Zelo občutljiva metoda PCR vam omogoča, da ugotovite prisotnost virusa aidsa v telesu otroka.
DNK patogena najdemo pri otroku v prvem mesecu življenja. Sistem za odkrivanje provirusa imunske pomanjkljivosti je zasnovan za določanje koncentracije RNA patogena.
Za analizo je primerna polna kri ali njeni posušeni delci. Vzorec damo v epruveto s konzervansom EDTA v razmerju 1:20. Material hranite pri temperaturi 2-8 ° C dva dni, s čimer preprečite zmrzovanje krvi.
Posušene vzorce krvi dobimo tako, da celotno tekočino nanesemo na poseben papir. Material za diagnostiko hranimo pri temperaturi, ki ne presega 8 °C. Rok uporabe kartic ne presega 8 mesecev.
Pregled novorojenčka in odvzem analize se izvaja v naslednjih terminih: 2 dni po rojstvu, v starosti dveh mesecev, po 3-6 mesecih. Odkrivanje gena provirusa HIV nekaj ur po rojstvu kaže na okužbo ploda v prenatalnem obdobju. Okužba se lahko pojavi med porodom ali med dojenjem otroka.
Podatki, ki potrjujejo prisotnost virusne DNK v dveh kontrolnih vzorcih, kažejo na razvoj okužbe s HIV pri otroku.
Dispanzersko opazovanje se prekine po prejemu negativnih testov PCR 4 mesece po rojstvu otroka.
Raziskovalne napake
Lažno pozitivna analiza prisotnosti virusa imunske pomanjkljivosti v pacientovi krvi zaradi številnih razlogov izkrivlja natančnost določanja bolezni. Med testom doma pacienta čakajo napake.
Napačen rezultat se pojavi, ko ima bolnik stanja, kot so navzkrižna reaktivnost, nosečnost, krvodajalci, okužba z virusom gripe, bolezni dihal, avtoimunske bolezni, rak, skleroza.
Alergija prispeva k nastanku antigenov, ki so tuje za bolnikovo telo. Testni sistem jih prepozna z napačnim rezultatom. Glivične, virusne okužbe prispevajo k nepravilnemu določanju prisotnosti virusa aidsa.
Okužbo je treba zdraviti in nato testirati na AIDS. Za pridobitev kvalitativnega rezultata študije mora pacient zdravniku povedati o sočasnih boleznih in zdravljenju, ki ga izvaja.
Diagnoza z ELISA
Celoten spekter protiteles, odkritih z encimskim imunskim testom, se pojavi pri 95% oseb, okuženih z virusom aidsa. Pozitiven dvojni rezultat ELISA zagotavlja prisotnost druge potrditvene stopnje - imunoblot testa. Sestavljen je iz študije protiteles in njihovega odnosa do posameznih beljakovinskih struktur patogena. Študija ELISA ima dve reakciji: encimsko in imunološko. Analiza temelji na interakciji protiteles in antigenov.
Dosledno določamo protitelesa, imunski kompleks, encimsko aktivnost. Specialist dešifrira podatke analize. Negativne vrednosti kažejo na odsotnost okužbe s HIV pri bolniku.
V odsotnosti protiteles in nedavni okužbi zdravnik ugotovi lažno negativen rezultat.
Če vzorci materiala za preučevanje virusa niso neprevidno shranjeni, so lahko dobljeni kazalci napačni.
Test, opravljen po cepljenju bolnika, je pozitiven in morda ni zanesljiv.
Redčenje seruma je treba ustrezno pripraviti, uporabljene ploščice očistiti in kupiti visokokakovostno barvilo.
Pozitiven rezultat imunoboltinga se kaže s kombinacijo pasov GP 41 in GP 120 ter antigena. Negativen rezultat je označen z odsotnostjo trakov.
Pri oblikovanju diagnostičnega zaključka se upoštevajo rezultati testov, kazalniki pregleda bolnika v bolnišnici in epidemiološka raziskava bolnika.
Prvi so namenjeni identifikaciji vseh oseb, okuženih s HIV, drugi pa posameznikom, ki niso okuženi s HIV, a so pri presejalnem testiranju pozitivno reagirali. Zato so presejalni testi zelo občutljivi, tj. skoraj brez lažno negativnih rezultatov, potrditveni testi pa so zelo specifični, t.j. skoraj brez lažno pozitivnih rezultatov. Ti testi skupaj zagotavljajo natančne in zanesljive rezultate, ki lahko odkrijejo kontaminirane krvne izdelke in diagnosticirajo okužbo s HIV. Vendar pa obstajajo biološki dejavniki, ki zmanjšajo natančnost teh testov; možne so tudi laboratorijske napake. Zato mora imeti vsak laboratorij, ki testira protitelesa proti HIV, brezhiben program nadzora kakovosti teh testov. Ne smemo pozabiti, da zanesljivost laboratorijskih preiskav nikoli ni stoodstotna in da je treba njihove rezultate vedno jemati kot dodatek k klinični diagnozi.
Obdobje okna in zgodnje odkrivanje okužbe s HIV:
Protitelesa proti HIV se začnejo proizvajati kmalu po okužbi, vendar je čas njihovega pojava odvisen od številnih dejavnikov, zlasti od stanja bolnikovega imunskega sistema in lastnosti virusa. Pomembno je vedeti, da so lahko protitelesa v krvi prisotna že zgodaj po okužbi, vendar je njihova koncentracija pod mejo detekcije nekaterih metod (okensko obdobje). Prvi testni sistemi so odkrili protitelesa pri skoraj vseh okuženih s HIV 6–12 tednov po okužbi. Najnovejši testni sistemi, vključno s pastjo ELISA tretje generacije, zaznajo protitelesa 3-4 tedne po okužbi. Čas od okužbe do diagnoze okužbe s HIV lahko z metodami za odkrivanje antigena HIV skrajšamo za nekaj dni, z metodami za odkrivanje RNK HIV pa še za nekaj dni. Z uporabo vseh opisanih metod lahko diagnozo okužbe s HIV pri večini bolnikov postavimo že 2-3 tedne po okužbi. Komercialno dostopni testni sistemi za odkrivanje protiteles proti HIV imajo zelo visoko in približno enako občutljivost, ki zadostuje za odkrivanje večine okuženih s HIV (ti epidemiološka občutljivost). Vendar pa se različni testni sistemi razlikujejo po analitični občutljivosti, tj. po sposobnosti zaznavanja nizkih ravni protiteles, ki se pojavijo, preden je serokonverzija končana.
Obstajajo testni sistemi, namenjeni odkrivanju protiteles IgM proti virusu HIV, vendar se pri zgodnji diagnostiki okužbe s HIV ne uporabljajo pogosto, saj protitelesa IgM ne nastanejo vedno zgodaj po okužbi. Nekateri testni sistemi tretje generacije istočasno zaznavajo protitelesa IgM in IgG proti HIV in imajo večjo analitično občutljivost.
Poglej tudi: Razkritje HIV statusa brez obžalovanja, Deviacija septuma, Vaskularna anevrizma: skrita nevarnost za zdravje, Prenatalni presejalni pregledi; kromosomske nenormalnosti, Latentni strabizem (Strabismus latenta, Heterophoria), Skrito tveganje: ženske in srčne bolezni, Latentni sifilis (Syphilis latens), Protokol CDC RT-PCR v realnem času za odkrivanje in testiranje gripe A(H1N1), Škripanje z zobmi (bruksizem), Pozor : skriti alergeni
|
Laboratorijska diagnoza okužbe s HIV
Pri diagnosticiranju okužbe s HIV se uporabljajo 4 skupine metod:
1. Določanje prisotnosti virusa, njegovih antigenov ali kopij RNA v materialih pacienta ali okuženega s HIV
Serološka diagnostika, ki temelji na dokazovanju specifičnih protiteles proti površinskim (gp 120 in gp 41) in notranjim (p 18 in p 24) proteinom HIV.
3. Identifikacija patognomoničnih (specifičnih) za okužbo s HIV sprememb v imunskem sistemu.
Laboratorijska diagnostika oportunističnih okužb (bolezni, povezane z aidsom).
1. Virološka diagnostika. Material za izolacijo HIV so krvni T-limfociti, levkociti kostnega mozga, bezgavke, možganska tkiva, slina, seme, cerebrospinalna tekočina in krvna plazma.
S pridobljenim materialom okužimo kontinuirano kulturo T-limfocitov (H9). Indikacija HIV v celični kulturi se izvaja s CPP (tvorba simplastov), pa tudi z imunofluorescenco, elektronsko mikroskopijo, z izrazito aktivnostjo reverzne transkriptaze.
Sodobne raziskovalne metode omogočajo odkrivanje enega okuženega limfocita na 1000 celic.
Odkrivanje virusnih antigenov v okuženih T-limfocitih se izvaja z uporabo monoklonskih protiteles.
V zadnjih letih je za določanje prognoze in resnosti okužbe s HIV ključno določanje števila kopij HIV RNK v krvni plazmi z metodo verižne reakcije s polimerazo (PTCR), tako imenovanega virusnega bremena.
Če je pri bolnikih, ki ne prejemajo terapije, virusna obremenitev pod mejo detekcije (to je manj kot 5000 kopij HIV RNA v 1 ml plazme), to pomeni, da napredovanja ni ali da napreduje počasi. Stopnja okužbe je minimalna. Visoka virusna obremenitev (več kot 10.000 kopij RNA v 1 ml plazme) pri bolnikih z manj kot 300 CO4-limfociti v 1 µl vedno kaže na napredovanje bolezni.
Serološka diagnoza. Trenutno je prejel največjo distribucijo.
Material za raziskovanje: 5 ml. heparinizirano kri, ki jo lahko pred dostavo v laboratorij hranite v hladilniku 6-8 ur, ne smete pa jo zamrzniti.
Za serološko diagnostiko aidsa se uporabljajo predvsem metode encimskega imunskega testa s standardnimi encimskimi imunskimi testi (ELISA).
To je presejalna metoda. Princip delovanja temelji na klasičnem principu direktne ELISA. Imunosorbent so polistirenske tablete z imobiliziranim inaktiviranim virusno specifičnim antigenom, pridobljenim iz HIV ali sintetično.
Nato dodamo testirani serum v razredčenju. Inkubacijo izvajamo v jamicah z antigenom. Po vezavi AG na AT trikrat speremo nevezane proteine, nato pa v vdolbinice dodamo konjugat protiteles proti humanim imunoglobulinom z encimsko oznako.
Tvorbo specifičnega kompleksa AG + AT zaznamo z vnosom substrata za encim (raztopina ortofenilendiamina in vodikovega peroksida).
Zaradi tega se barva gojišča spreminja sorazmerno s količino protiteles. Rezultati študije se upoštevajo na spektrofotometru.
Krvne serume, ki imajo protitelesa, specifična za virus po ELISA, je treba dodatno raziskati z imunskim blotingom.
Imunski bloting je potrditveni test, saj zaznava protitelesa proti različnim proteinom HIV.
Temelji na predhodnem frakcioniranju po molekulski masi (ločevanju) proteinov HIV z elektroforezo v poliakrilamidnem gelu, ki ji sledi prenos antigenov na nitrocelulozno membrano. Nato se na membrano nanese testni serum. V tem primeru specifična protitelesa tvorijo kompleks s specifičnim antigenom (gp.120, gp.41, str.24, str.18). Končna faza študije je odkrivanje protiteles proti različnim proteinom HIV.
Za to se sistemu dodajo protitelesa proti človeškim beljakovinam, označena z encimom ali radioizotopsko oznako.
Tako se v bolnikovem serumu odkrijejo (ali ne odkrijejo) za virus specifična protitelesa proti vsem ali večini antigenov HIV.
3. Študije imunskega statusa. Namenjen prepoznavanju:
1) zmanjšanje razmerja celic CD4 / CD8 (v N 2 in>, z aidsom - 0,5 in<);
2) zmanjšanje vsebnosti celic CD4 (<200 клеток/мл.);
3) prisotnost enega od laboratorijskih znakov, vključno z anemijo, levkopenijo, trombocitopenijo, limfopenijo;
4) povečanje koncentracije Ig A in Ig G v krvnem serumu;
5) zmanjšanje odziva blastne granulacije limfocitov na mitogene;
6) odsotnost kožne reakcije GTZ na več antigenov;
7) povečanje ravni krožečih imunskih kompleksov.
Prejšnji1234567891011Naslednji
POGLEJ VEČ:
Protitelesa proti HIV 1/2- sestavine krvne plazme, beljakovinske narave, ki preprečujejo razmnoževanje okužbe s HIV in popolnoma nevtralizirajo njihov negativni učinek.
Kaj je test protiteles proti HIV 1/2 (presejanje)
Presejalna analiza za protitelesa proti HIV 1,2 - sistem testov, ki vam omogočajo identifikacijo ljudi, okuženih z virusom imunske pomanjkljivosti. Poleg teh obstajajo še tako imenovani potrditveni (pomožni) testi, katerih naloga je identificirati posameznike, ki niso okuženi z virusom, so pa med presejanjem pozitivno reagirali na virus.
Bistvo presejalne študije okužbe s HIV je določitev protiteles proti virusu imunske pomanjkljivosti.
Njegova značilnost je povečana občutljivost - več kot 99,5%. Posebnost testiranja je, da lahko presejanje da lažno pozitiven rezultat, če bolnikovo telo vsebuje avtoprotitelesa.
Enak rezultat lahko zaznamo pri bolniku z boleznijo jeter, cepljenju proti gripi ali prisotnosti katere koli akutne virusne bolezni. Na podlagi tega je za pridobitev natančnih rezultatov skupaj s presejanjem običajno običajno opraviti zgoraj omenjeni potrditveni test.
Indikacije za analizo
V medicinski praksi obstaja precej širok spekter indikacij za presejanje.
Pacient se lahko obrne na laboratorij, če:
- sum na okužbo (če je bil tesen stik z nosilcem okužbe s HIV);
- z izgubo teže, zvišana telesna temperatura;
- pljučnica, ki ni primerna za konvencionalno terapijo;
- bolezni kronične narave, ki so se pojavile iz neznanih razlogov;
- v pripravi na operacijo;
- transfuzije krvi;
- nosečnost in načrtovanje družine;
- Z vnetimi bezgavkami;
- Občasni seks.
Osebe, ki spadajo v posebno rizično skupino: odvisniki od drog in ljudje, ki vodijo promiskuitetno spolno življenje.
Kako poteka presejanje protiteles proti HIV 1/2
Postopek vključuje upoštevanje številnih potrebnih pravil:
- bolnik mora darovati kri izključno na prazen želodec (dovoljeno je piti vodo);
- od zadnjega obroka mora preteči najmanj osem ur;
- zdravnik mora biti obveščen o tem, katera zdravila bolnik jemlje, in poznati odmerek (če ni možnosti niti za kratkotrajno odpoved);
- če pacient lahko odloži uporabo zdravil, se priporoča, da to stori 10-15 dni pred dnevom manipulacije;
- dan pred začetkom testiranja je priporočljivo, da bolnik zavrne uživanje ocvrte ali mastne hrane, prav tako mu je prepovedano piti alkoholne pijače, kaditi in omejiti težke fizične napore.
Treba je opozoriti, da imajo laboratorijski testi za prisotnost okužbe pri otrocih, rojenih materam, ki so nosilke virusa imunske pomanjkljivosti, svoje posebnosti.
Ker so lahko v prvih mesecih otrokovega življenja v njegovi krvi prisotna materina protitelesa proti virusu HIV, je nemogoče dobiti objektivno sliko o zdravstvenem stanju novorojenčka na podlagi rezultatov analize in celo negativnega rezultata. sploh ne pomeni, da virus ne more prodreti skozi placentno pregrado.
Za pridobitev točnih podatkov je treba testiranje opraviti v 36 mesecih po rojstvu otroka.
Storitve v smeri "Sodobna diagnostika"
Klinike v smeri "Sodobna diagnostika"
Obstajata dva široka, a zelo natančno opredeljena cilja testiranja ali presejanja protiteles HIV – odkrivanje primerov in nadzor. Pri prepoznavanju primerov je prvi korak razjasnitev HIV statusa vsakega posameznega posameznika, da se začne ustrezno zdravljenje ali spremljanje z ustreznimi ukrepi.
Namen epidemiološkega spremljanja je oceniti razširjenost HIV, porazdelitev primerov okužbe in njeno gibanje v skupini ali celotni populaciji.
Občutljivost testa protiteles proti virusu HIV je merilo njegove zmožnosti natančnega odkrivanja teh protiteles v vzorcu, medtem ko je specifičnost testa merilo njegove sposobnosti natančne potrditve odsotnosti protiteles, kadar protitelesa v vzorcu niso prisotna.
V idealnem primeru bi morala občutljivost in specifičnost testa doseči 100 %. V praksi noben biološki test ne izpolnjuje te zahteve, kljub temu pa so testi na protitelesa proti HIV med najobčutljivejšimi in najbolj specifičnimi testi, ki so trenutno na voljo.
Laboratorijska diagnoza aidsa je sestavljena iz izvajanja viroloških, seroloških in imunoloških študij materiala bolnikov s sumom na aids.
V viroloških študijah lahko za izolacijo virusa uporabimo primarne kulture krvnih mononuklearnih celic.
Izolacija in identifikacija virusa je metodično težavna in jo je mogoče izvesti v specializiranih laboratorijih. Najučinkovitejša diagnostična metoda, ki se trenutno uporablja za rutinske množične preglede, je odkrivanje protiteles proti virusu humane imunske pomanjkljivosti. Protitelesa proti HIV se lahko pojavijo do konca prvega meseca okužbe. Po podatkih številnih avtorjev razvoj serokonverzije zahteva od 4-7 tednov do 6 mesecev ali več. Prisotnost protiteles je diagnostika aidsa ali nakazuje tveganje za njegov razvoj.
Protitelesa niso le serološki označevalec aidsa. Odkriti v predklinični fazi bolezni omogočajo njeno zgodnjo diagnozo. Njihova prisotnost pridobi poseben pomen za odkrivanje nosilcev.
Protitelesa odkrivamo več let, skoraj vse življenje. Raziskovalci so ugotovili vzporednost pri odkrivanju virusa in protiteles proti njemu, tj. prisotnost protiteles proti virusu imunske pomanjkljivosti kaže na visoko verjetnost, da je oseba nosilec virusa.
Protitelesa proti antigenu HIV, ki so se pojavila v inkubacijskem obdobju, se še naprej intenzivno proizvajajo z razvojem bolezni, saj antigensko draženje spodbujajo tako virioni, ki se sproščajo iz okuženih limfocitov, kot komponente subvirionov, ki vstopajo v krvni obtok med razpadom limfocitov. okuženih celic in okuženih limfocitov.
Hkrati provirus, vgrajen v genom okuženih celic, ostaja nedostopen specifičnim protitelesom. To pojasnjuje na videz paradoksalno dejstvo: več kot je protiteles proti virusu človeške imunske pomanjkljivosti v krvnem serumu, lažje je izolirati sam virus od bolnika.
To se zgodi zato, ker protitelesa, ki nastanejo kot odgovor na okužbo z virusom, niso nevtralizirajoča in zato nimajo opaznega učinka na virus, ampak so preprosto prisotna v telesu z njim. Za odkrivanje protiteles (AT) proti virusu aidsa so razvili številne teste, ki omogočajo izvedbo raziskav na dovolj visoki ravni specifičnosti in občutljivosti. To so metode trdnofaznega radioimunskega testa, radioimunoprecipitacije, imunofluorescence, encimskega imunskega testa in imunskega blotinga.
Metode encimsko vezanega imunskega testa (ELISA), za katere je značilna visoka občutljivost, možnost kvantitativne in vizualne registracije reakcijskih rezultatov, so našle najširšo uporabo v praksi, zaradi česar je metoda dostopna laboratorijem katere koli ravni.
ELISA uporablja tuje in domače testne sisteme.
Klinični potek okužbe s HIV in aidsa
Pri otrocih, rojenih okuženim materam, je treba biti previden. V odsotnosti klinike se otrok šteje za okuženega, če AT na HIV vztraja po enem letu. Po prejemu pozitivnega rezultata pri testu ELISA je treba serume, ki so dali enkraten pozitiven rezultat, trikrat testirati in pozitiven rezultat potrditi v neodvisnem sistemu - imunski bloting.
Odkrivanje AT v ELISA reakciji ne daje dovolj informacij, saj ne kaže na stanje preiskovanca, temveč le na inkubacijo, bolezen ali prisotnost asimptomatske okužbe.
Imunski bloting zagotavlja več informacij, saj je prisotnost AT pri številnih antigenih HIV značilna za hudo bolezen, medtem ko je reakcija z 1-2 antigenoma bolj značilna za blag infekcijski proces
Informativno je izračun števila T (pomočnikov) in razmerja T4 proti Te (supresorji) limfocitov, določenih z uporabo mono-kponalnih protiteles.
Pomemben kriterij za bolezen je lahko močno povečanje števila imunoglobulinov, zlasti A in V. V splošni klinični analizi krvi lahko bolezen kaže limfopenija, levkopenija, eritropenija, trombocitopenija, eozinofilija.
Ni nujno, da so testi na HIV, ki se uporabljajo za epidemiološki nadzor, tako natančni kot tisti, ki se zahtevajo za klinične namene.
Vendar pa je pri zelo nizki razširjenosti HIV v populaciji treba vse pozitivne vzorce ponovno testirati z dodatnimi testi.
Odvzem krvi za testiranje na protitelesa proti HIV ali presejanje lahko spremlja registracija imen preiskovancev (imenski odvzem) ali pa se izvede brez registracije priimkov ali individualnih identifikacijskih podatkov (anonimni odvzem) (tabela 1).
Za anonimno presejanje brez identifikacijskih podatkov so značilne naslednje točke: uporabijo se vzorci krvi, odvzeti za druge namene; anonimnost je zagotovljena zaradi dejstva, da se identifikacijski podatki ne zbirajo in ne upoštevajo; ni treba pridobiti soglasja subjektov; stik s svetovalnimi in socialnimi službami ni potreben; končno in kar je najpomembnejše, napake v statističnih ocenah, odvisno od stopnje udeležbe prebivalstva, so zmanjšane na minimum.
Čeprav je mogoče pridobiti natančnejše podatke z anonimnim testiranjem na HIV, ima ta metoda naslednje pomanjkljivosti: ne more odpraviti morebitne pristranskosti pri izbiri; podatki o tveganem vedenju in drugih pomembnih spremenljivkah niso na voljo in jih ni mogoče zbirati za nazaj; ni mogoče vzpostaviti stika z osebami, okuženimi s HIV, da bi jih seznanili z njihovim stanjem; preiskava se lahko izvaja le pri skupinah oseb, ki jim jemljemo kri za druge namene.
Na območjih, kjer velja, da je razširjenost virusa HIV zelo nizka, bi se moral nadzor javnega zdravja osredotočiti predvsem na posameznike ali populacije z najbolj tveganim vedenjem.
Kri za testiranje na HIV v tej rizični skupini je najlažje dobiti v centrih, specializiranih za zdravljenje spolno prenosljivih bolezni, ali podobnih ustanovah.
Če je pogosta tudi intravenska uporaba drog, je treba uporabnikom drog odvzeti vzorce krvi v specializiranih ustanovah.
Običajno zadostuje odvzem krvi enkrat na 3 ali 6 mesecev pri najbolj ogroženih skupinah z geografskih območij, kjer je takih skupin največ. Izjema so lahko rizične skupine, kot so intravenski uživalci drog, ki morda potrebujejo pogostejše preglede.
Svetovna zdravstvena organizacija trenutno razvija sistem za razvrščanje bolezni (stadije) za klinične raziskave, ki se lahko uporablja tudi v preskušanjih zdravljenja, kar ima lahko tudi napovedno vrednost.
Vendar pa tak sistem ni namenjen nadomestitvi obstoječih definicij aidsa, ki se uporabljajo pri nadzoru zdravstvenega varstva.
Trenutno se povsod razvijajo sistemi načrtovanega (rutinskega) nadzora HIV.
Te sisteme je treba prilagoditi trenutni epidemiološki situaciji; zato morajo biti metode vzorčenja v populacijah z zelo nizko razširjenostjo virusa nujno drugačne od tistih, ki se uporabljajo pri zmerni ali visoki razširjenosti.
Takšen nadzor vključuje rutinske raziskave natančno opredeljenih in dostopnih populacij.
Vključevati naj bi najprej tiste skupine, ki so najbolj ogrožene za okužbo, v vsaki od teh skupin pa je treba izbrati stalno vnaprej določeno število posameznikov za pregled.
V zadnjih letih je anonimno presejanje v opazovanih skupinah brez upoštevanja identifikacijskih podatkov vse pogostejše kot natančen in stroškovno učinkovit način epidemiološkega spremljanja okužbe s HIV v sistemu zdravstvenega varstva.
Metode laboratorijske diagnoze HIV
V visoko specializiranem laboratoriju se izvajajo:
a) določanje protiteles, antigenov in imunskih kompleksov, ki krožijo v krvi; gojenje virusa, odkrivanje njegovega genomskega materiala in encimov;
b) ocena funkcij celične povezave imunskega sistema.
Glavna vloga pripada metodam serološke diagnostike, katerih cilj je določanje protiteles, pa tudi antigenov patogenov v krvi in drugih telesnih tekočinah.
Testiranje na protitelesa proti HIV se izvaja z namenom:
a) varnost transfuzij in presaditev krvi;
b) nadzor, testiranje za spremljanje razširjenosti okužbe s HIV in proučevanje dinamike njene razširjenosti v določeni populaciji;
c) diagnoza okužbe s HIV, tj.
e) Prostovoljno testiranje krvnega seruma na videz zdravih ljudi ali bolnikov z različnimi kliničnimi znaki in simptomi, podobnimi okužbi s HIV ali aidsu.
Sistem za laboratorijsko diagnostiko okužbe s HIV temelji na tristopenjskem principu.
Prva faza je presejanje, namenjeno opravljanju primarnih krvnih preiskav za prisotnost protiteles proti proteinom HIV. Druga stopnja je referenčna - omogoča uporabo posebnih metodoloških tehnik za razjasnitev (potrditev) primarnega pozitivnega rezultata, pridobljenega na stopnji presejanja. Tretja stopnja - ekspertna, je namenjena dokončnemu preverjanju prisotnosti in specifičnosti označevalcev okužbe s HIV, ugotovljenih v prejšnjih fazah laboratorijske diagnostike.
Potreba po več stopnjah laboratorijske diagnostike je predvsem posledica ekonomskih razlogov.
V praksi se uporablja več testov za dovolj zanesljivo identifikacijo okuženih s HIV:
ELISA (ELISA) test (encimsko vezan imunski test) za odkrivanje prve stopnje je značilna visoka občutljivost, čeprav manj specifičnosti od naslednjih;
Imunski blot (Western-blot), zelo specifičen in najpogosteje uporabljen test za razlikovanje med HIV-1 in HIV-2;
Antigenemični p25-test, učinkovit v začetnih fazah okužbe;
Verižna reakcija s polimerazo (PCR).
V primerih množičnega presejanja vzorcev krvi je priporočljivo testirati mešanice serumov skupine preiskovancev, sestavljene tako, da končna razredčitev posameznega vzorca ne presega 1:100.
Če je mešanica serumov pozitivna, se analizira vsak serum pozitivne mešanice. Ta metoda ne vodi do izgube občutljivosti tako pri ELISA kot pri imunoblotu, vendar zmanjša stroške dela in stroške začetnega pregleda za 60-80%.
Imunološke metode
število T-pomočnikov,
2. razmerje T4 in T8,
3. stanje preobčutljivosti,
4. kompenzatorna funkcija sistema T celic.
Kaže se s hiperprodukcijo imunoglobulinov, ki imajo nizko afiniteto in se material telesa še bolj porablja.
Slabosti: pojavijo se pozno, nekateri imunološki kazalci so lahko z drugimi okužbami.
Klinične metode - morda. Podobno kot pri drugih boleznih so najbolj značilne manifestacije zabeležene v kasnejših fazah, zato klinična diagnoza ni zelo učinkovita
Glavna metoda - serološka - se izvaja v dveh fazah:
1 - presejalni pregled - odvzem vzorcev na skupna protitelesa proti vsem proteinom imunske analize.
Ta stopnja daje 95 % resničnih rezultatov in 5 % lažno pozitivnih rezultatov.
2 - potrditvena metoda - vsi vzorci se pregledajo s potrditveno metodo. Ta tehnika vam omogoča odkrivanje protiteles proti virusnemu proteinu.
Pozitiven rezultat, ko so odkrita protitelesa proti vsaj 3 virusnim beljakovinam, če do 1 ali 2, je rezultat dvomljiv in zahteva dodatno preiskavo.
Pri primarni serodiagnozi okužbe s HIV določimo skupna protitelesa s presejalnimi presejalnimi testi - ELISA in aglutinacijskimi reakcijami.
Na drugi (arbitražni) stopnji se uporablja bolj zapleten test - imunoblot, ki omogoča ne le potrditev ali zavrnitev prvotnega zaključka, temveč tudi to na ravni določanja protiteles proti posameznim beljakovinam virusa.
Interpretacija rezultatov testa protiteles proti HIV
Na rezultat analize protiteles proti HIV vpliva precej veliko število različnih dejavnikov, med njimi pa je pomemben čas analize po morebitni okužbi.
V večini primerov lahko protitelesa proti HIV odkrijemo 6 do 12 tednov po okužbi.
To obdobje od vstopa virusa v telo do pojava zaznavne količine protiteles imenujemo obdobje pozitivne serokonverzije ali obdobje »okna«. Obstajajo redki primeri, ko se protitelesa pojavijo 6 mesecev po okužbi, poročila o odkritju protiteles šele po 1 letu pa nimajo dokazov. Trenutno diagnostična služba uporablja nove generacije metod ELISA, ki omogočajo odkrivanje protiteles proti HIV 3–4 tedne po okužbi, določene kombinacije teh metod, tako imenovane strategije testiranja, pa skrajšajo obdobje »okna« na 2–3 tedne, tj.
omogočajo odkrivanje protiteles proti HIV takoj, ko začnejo nastajati v telesu.
Negativen rezultat pomeni, da v krvi osebe niso bila najdena protitelesa proti HIV.
To stanje imenujemo seronegativnost in običajno pomeni, da oseba ni okužena.
Negativen rezultat ne daje nobenih zagotovil za prihodnost. Navede samo stanje ob pregledu. Obstaja majhna verjetnost, da je bila raziskava izvedena v obdobju okna. Torej, če je bila oseba v preteklosti v nevarnosti, da se okuži z virusom HIV in je bil test negativen, jo je treba ponovno testirati vsaj 6 mesecev po tveganem dogodku.
Pozitiven rezultat pomeni, da so bila v krvi osebe najdena protitelesa proti HIV.
To stanje imenujemo seropozitivnost – oseba je okužena z virusom HIV. Pomembno je razumeti, da pozitiven rezultat kaže samo na okužbo s HIV in ne na aids.
Vendar pa je izjemno pomembno obiskati zdravnika za nasvet in, če je potrebno, zdravniško pomoč, da bi ohranili dobro kakovost življenja še dolgo po prejemu pozitivnega rezultata.
Nedoločen rezultat. Redko je rezultat testa protiteles proti HIV nejasen.
Laboratorij ne more ugotoviti, ali je oseba seropozitivna ali seronegativna. V takšnih okoliščinah se je treba posvetovati z zdravnikom in ponovno opraviti test.