Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю-Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.
По сравнению с иммуногистологией методы молекулярной биологии потенциально более чувствительны. Молекулярно-биологические методы могут использоваться повсеместно, предпосылкой для получения гена или его продукта гена является, по существу, только знание последовательности. Молекулярные методы позволяют проводить исследования и заявления, которые нельзя сделать с помощью обычных методов или только в ограниченной степени. Среди многих молекулярно-биологических методов на практике существуют диагностические проблемы по существу.
Кроме того, которые в настоящее время находятся в стадии разработки, вероятно, в будущем будет использоваться более широкое пространство для определения характеристик злокачественных опухолей. Несмотря на эти новые разработки и, в конечном итоге, усовершенствованную диагностику, эти методы, безусловно, не вытеснят патологический базовый диагноз, а лишь улучшат его.
При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион (хромофор) - катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители - эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители - генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них - водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим - 5-7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.
Активность секции патологоанатома играет в настоящее время уменьшающуюся роль. Это не только отражает снижающееся признание раздела среди родственников и клиницистов, но также является выражением того факта, что диагноз до и во время терапии в конечном счете намного выше при взаимодействии эндоскопии, минимально инвазивной хирургии и клинического патологоанатома Уровень безопасности, чем 20 лет назад.
Вспышка патологоанатома в клиническом контексте. Основные болезни, вызванные вторичными заболеваниями и причиной смерти. . Важным является демаркация деятельности судебных врачей, целью которых является выяснение неестественных причин смерти. Если есть признаки неприродной причины смерти, патологоанатом должен прервать этот раздел и связаться с прокурором.
Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.
При простых методах окраски используется лишь одна краска.
Важнейшей функцией клинического вскрытия является обеспечение качества диагностики и терапии. Вскрытие и последующая демонстрация результатов вскрытия, которые затем обсуждаются с клиницистами, позволяют целостный взгляд на болезнь. Аутопсия является важной частью тренинга для начинающих патологов, но также для клинически активных врачей. Для нехирургических врачей существует возможность прямого изучения связанных с болезнью изменений. Значение этого прямого осмотра неоценимо в последующей корреляции результатов с предыдущими рентгеновскими или ультразвуковыми изображениями.
С этой целью в бактериологии используются, как правило, или водный фуксин или метиленовая синька. Простые методы окраски используются для ориентировочной, предварительной, микроскопии – определения наличия в патологическом материале бактерий, определение их формы и расположения в мазке.
При сложных методах окраски используются ряд красок в определенной последовательности. Такие методы используются для выявления в патологическом материале конкретных микроорганизмов, а также определения особенностей их ультраструктуры.
Электронный обмен бинарной информацией на большие расстояния называется художественным словом телематики. В контексте патологии эти возможности обобщаются под броским термином телепатологии. Он включает в себя набор целей, которые реализуются с использованием разных методов.
В принципе, можно различить, обсуждается ли случай между двумя патологами в контексте технической консультации или не выполняется ли первичный диагноз препарата патологом непосредственно на микроскопе, а на экране компьютера. По сути, этот метод можно использовать для быстрого удаления в больницах, у которых нет патологоанатома на месте. Хотя диагностика замороженных участков с помощью телепатологии уже проводится в некоторых местах в Германии, она в значительной степени противоречива. С одной стороны, это связано с техническими и методологическими соображениями: даже изображение с высоким разрешением на экране компьютера не обеспечивает полноту деталей и обзор, как препарат, который просматривается непосредственно под микроскопом.
1. Окраска по Граму используется для определения типа строения клеточной
стенки. Это основной метод в бактериологии. В зависимости от окраски по
Грамму все бактерии подразделяются на грампо-ложительные и
грамотрицательные.
2. Окраска по Цилю-Нильсену используется для выявления кислотоустойчивых
бактерий (а именно – микобактерий), а также для обнаружения спор.
3. Окраска по Нейссеру используется для выявления цитоплазматических
включений волютина и идентификации по их наличию коринебактерий (в частности
– возбудителей дифтерии).
4. Окраска по Бури-Гинсу используется для выявления макрокапсул.
5. Окраска по Морозову используется для выявления жгутиков. Этот метод
окраски используется также для выявления трепонем. Кроме того, окраску по
Морозову используют в вирусологии – для выявления в оспенных пузырьках
вирусов натуральной и ветряной оспы.
6. Окраска по Здрадовскому используется для выявления риккетсий и хламидий.
7. Окраска по Романовскому-Гимзе также, наряду с окраской по Здрадовскому,
используется для вы-явления риккетсий и хламидий; кроме того, этот метод
окраски используется для выявления спирохет (с их идентификацией до рода в
зависимости от цвета окрашивания), а также для выявления простейших.
Особенно в трудных случаях потеря информации может предотвратить окончательный диагноз. Гораздо более решительным и связанным с юридическими и профессиональными возражениями является тот факт, что патологоанатому также приходится отказываться от личного макроскопического исследования ткани и выбора образца. В контексте телеснимка другой человек на сцене должен выполнить фактическую работу патологоанатома, в то время как эта деликатная работа должна обрабатываться патологоанатомом на другом конце линии с почти отсутствием параметров коррекции.
- Депарафинированные срезы доводят до воды.
- Окрашивают 20 мин в 1 % растворе парарозанилина или основного фуксина в 1 % уксусной кислоте (раствор красителя нагревают до кипения, охлаждают и фильтруют).
- Промывают в 3 сменах дистиллированной воды.
- Окрашивают 5 мин в 1 % кристаллического фиолетового в дистиллированной воде.
- Быстро ополаскивают в 1 % растворе хлорида натрия.
- Обрабатывают 30 с в смеси: 1 часть йода + 2 части йодида калия + 100 частей дистиллированной воды.
- Промокают фильтровальной бумагой.
- Дифференцируют, нанося на срез смесь равных объемов анилина и ксилола (1 - 2 мл); растворы сливают до тех пор, пока облачка красителя не перестанут отходить от среза.
- Проводят через 3 смены ксилола.
- Заключают в бальзам или любую смолу, растворенную в ксилоле.
Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.
Следует помнить, что быстрое сокращение имеет смысл только в том случае, если за ним следуют немедленные терапевтические и, как правило, необратимые оперативные последствия. Поэтому резание должно проводиться врачом с соответствующим опытом, то есть, по крайней мере, одним помощником в области повышения квалификации в области патологии. Делегация разреза на немедицинский персонал полностью запрещена. Обычная практика, которую хирург берет на себя, также не имеет юридической силы для решения. С одной стороны, проблема остается в том, что патологоанатом, как единственный врач, должен взять на себя юридическую ответственность за диагноз, не оказывая достаточного влияния на качество диагностики на месте.
Окраска бактерий по по Цилю-Нильсену
Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.
Методика окраски:
С другой стороны, этот подход обычно считается нарушением границ предметной области и поэтому не допускается по причинам профессионального статуса. Тем не менее, Интернет уже может использоваться осмысленно. Также можно обсуждать случаи на большом расстоянии с коллегами или специалистами в реальном времени или в разное время. Этот процесс называется телеконсультацией. Телеконсультация особенно полезна в специализированных дисциплинах, которые работают с информацией об изображении, в частности с радиологами и патологоанатомами.
Это будет в основном ограничено трудными, редкими и необычными случаями. Если случай требует специальных экзаменов, которые не хранятся на месте, телеконсультация, по крайней мере, будет вести дальнейший диагностический процесс, но не ускоряет или не улучшает его. Тем не менее, возможности электронной рассылки изображений обеспечивают платформу, на которой можно получить второе мнение, и при определенных обстоятельствах может быть подтверждено подтверждение, уточнение или даже исправление диагноза работы.
| 1. На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в в пламени до появления паров. | Карболовый фуксин-основная краска; прогревание-протрава. |
| 2. Препарат промывают водой, бумагу сбрасывают. | |
| 3. Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты. | Серная кислота-обесцвечивающий фактор. |
| 4. Промывают водой | |
| 5. Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут | Синька Леффлера - дополнительная краска |
| 6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией | Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора - синего цвета |
Окраска по по Ауески
Метод окраски спор бактерий, заключающийся в обработке препарата горячим 0,5% раствором соляной кислоты с последующей фиксацией и окраской по способу Циля - Нельсена; споры окрашиваются в рубиново-красный цвет, вегетативные формы - в синий.
Бактериоскопический метод исследования предусматривает изучение микроорганизмов в живом или фиксированном и окрашенном состоянии. Для изучения микроорганизмов в живом состоянии используют метод раздавленной капли и метод висячей капли.
Все, что делается диагностически и терапевтически, должно быть надлежащим образом документировано в письменной форме. Это в равной степени относится ко всем медицинским дисциплинам, хотя документация по многим дисциплинам, безусловно, занимает меньше места, чем практическая работа. Для патологоанатома практическая работа заключается в одновременном сборе и документировании результатов макроскопического и микроскопического исследования, т.е. во время микроскопии результаты продиктованы. Последующая транскрипция диктов обычно делается машинистами, которые специализируются на медицинской терминологии и адаптируются к конкретным языковым привычкам диктующего врача.
Наиболее часто применяют микроскопию бактерий в фиксированном и окрашенном состоянии. Для приготовления фиксированного и окрашенного препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую петлей вносят исследуемый материал и распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром около 1-1,5 см. Если исследуют жидкий материал, то его непосредственно петлей наносят на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе.
Но уже около 10 лет появилась возможность диктовать текст, преобразованный в текст непосредственно через компьютер, с помощью программ распознавания речи. Хотя вначале требовался скрытый способ говорить, теперь есть только программы, которые позволяют и даже требуют непрерывной естественной речи.
По моему мнению, возможность автоматического распознавания речи никоим образом не приведет к ненужным увольнениям и увольнениям для медицинских транскрипционистов. Это просто открывает новые возможности для врача для разработки рабочего процесса. Распознавание речи - это дополнительная технология реализации диктовки.
Для фиксации используют физические и химические методы. Для фиксации мазка физическим методом предметное стекло медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и тканей фиксируют химическим методом путем погружения их на 5-20 минут в метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова и другие фиксирующие жидкости.
Технология распознавания речи
Вы можете загрузить его в разных форматах. Признание и понимание языка - это что-то нормальное для нас, поэтому мы обычно не теряем никакого мнения о сложности, стоящей за ним. Однако развитие автоматического распознавания речи заняло более 20 лет именно из-за сложности этой очевидной банальности. Только с развитием мощных процессоров возможно распознавание речи как продукта для потребительского рынка, потому что распознавание речи требует больших и постоянных вычислительных усилий. Из устного и письменного слова бит и байты проходят много последовательных анализов и повторного анализа.
Для окрашивания микробов простые и сложные методы. При простом методе фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например, водным раствором фуксина (1-2 минуты) или метиленовым синим (3-5 минут), промывают водой, высушивают и микроскопируют. Сложные методы окрашивания предполагают использование нескольких красителей. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других.
В конце концов, более 95% времени, правильное слово находится на экране. Что происходит в компьютере в деталях? Во-первых, речь подается через микрофон в звуковой карте компьютера. Микрофон преобразует вибрации воздуха в аналоговый электрический сигнал. Хорошие микрофоны для распознавания речи отфильтровывают даже нежелательный шум. Очень низкие и очень высокие ноты не учитываются. Из-за характеристик направленности микрофона предпочтительны сигналы громкоговорителя, поскольку межсоединение нескольких микрофонов также может быть направленным на фильтрацию шума.
Окраска по Граму:
1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовый раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 2-3 минуты бумагу снимают, а краситель сливают.
2. Наносят раствор Люголя на 1-2 минуты.
3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
Очень современные настольные микрофоны даже способны отслеживать динамика, который движется, и направлять «фокус» на динамик через внутренний анализ звукового сигнала. В звуковой карте аналоговый электрический сигнал, который в принципе имеет ту же кривую, что и кривая звукового давления речевого сигнала, оцифровывается. В этом случае сигнал отбирается с постоянной частотой и с заданным разрешением. В этом случае гладкая кривая в принципе преобразуется в лестничную кривую, в которой высота каждого шага может быть выражена числом.
Типичные частоты дискретизации для распознавания речи - 11 кГц. Речевой сигнал теперь оцифровывается, т.е. кривая может быть описана как серия чисел. И поэтому звуковая карта передает информацию процессору. В процессоре теперь выполняются следующие шаги. При этом очень большие объемы данных должны в первую очередь быть значительно уменьшены, пытаясь сделать узнаваемые шаблоны. Он анализирует интенсивность, с которой происходят тоны в определенных полосах частот. Это делается математическим анализом, называемым Быстрое преобразование Фурье.
4. Промывают препарат водой.
5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой, высушивают и микроскопируют.
Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный цвет.
Структура бактериальной клетки
Структурные компоненты бактериальной клетки делят на 2 вида:
Вам не нужно это понимать подробно, есть математики. Самое главное, однако, в том, что это происходит быстро, потому что, когда компьютер анализирует поток данных, из динамика поступает больше данных, и в то же время предыдущие голосовые данные должны быть дополнительно обработаны на последующих уровнях.
За графически узнаваемыми звуками выступают фонемы, которые процессор пытается определить следующим образом. С этой целью все еще очень обширная звуковая информация уменьшается на основе характерных признаков и описывается с помощью векторов признаков. Точно так же объем данных акустической информации резко уменьшается сначала, даже перед прослушиванием, до того, как будут проанализированы комментарии. Компьютер распознавания языка выполняет соответствующий анализ каждые 10 мсек. В результате он получает 100 раз в секунду информацию, которую только что произнесла фонема.
- основные структуры (клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана с ее производными, цитоплазма с рибосомами и различными включениями, нуклеоид);
- временные структуры (капсула, слизистый чехол, жгутики, ворсинки, эндоспоры, образующиеся лишь на определенных этапах жизненного цикла бактерий).
Основные структуры.
Клеточная стенка находится с внешней стороны от цитоплазматической мембраны. Цитоплазматическая мембрана не входит в состав клеточной стенки. Функции клеточной стенки:
Защита бактерий от осмотического шока и других повреждающих факторов;
Определение формы бактерий;
Участие в метаболизме бактерий.
Клеточная стенка пронизана порами, через которые происходит транспорт экзотоксинов бактерий. Толщина клеточной стенки составляет 10–100 нм. Основной компонент клеточной стенки бактерий - пептидогликан или муреин, состоящий из чередующихся остатков N-ацетил-N-глюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных гликозидными связями.
В 1884 году Х. Грам предложил метод окраски бактерий с помощью генцианвиолета, йода, этилового спирта и фуксина. Все бактерии в зависимости от окраски по Граму подразделяют на 2 группы: грамположительные и грамотрицательные бактерии. Клеточная стенка грамположительных бактерий плотно прилегает к цитоплазматической мембране, ее толщина составляет 20-100 нм. В ней имеются тейхоевые кислоты (полимеры глицерина или рибита), а также в небольших количествах полисахариды, белки и липиды. Клеточная стенка грамотрицательных бактерий многослойна, ее толщина составляет 14-17 нм. Внутренний слой (пептидогликан) образует тонкую непрерывную сетку. Внешний слой состоит из фосфолипидов, липопротеина и белков. Белки наружной мембраны прочно связаны с пептидогликановым слоем.
В некоторых условиях бактерии лишаются способности полностью или частично синтезировать компоненты клеточной стенки, в результате чего образуются протопласты, сферопласты и L-формы бактерий. Сферопласты – это бактерии с частично разрушенной клеточной стенкой. Они наблюдаются у грамотрицательных бактерий. Протопласты - это формы, полностью лишенные клеточной стенки. Они образуются грамположительными бактериями. L-формы бактерий - это мутанты бактерий, частично или полностью утратившие способность синтезировать пептидогликан клеточной стенки (бактерии с дефектной клеточной стенкой). Свое название они получили от названия института Листера в Англии, где были открыты в 1935 году.
Цитоплазматическая мембрана (ЦПМ) и ее производные. Цитоплазматическая мембрана (плазмолемма) - это полупроницаемая липопротеидная структура бактериальной клетки, отделяющая цитоплазму от клеточной стенки. Она составляет 8-15% сухой массы клетки. Ее разрушение приводит к гибели клетки. При электронной микроскопии выявлено ее трехслойное строение. Цитоплазматическая мембрана представляет собой комплекс белков (50-75%) и липидов (15-20%). Основная масса липидов представлена фосфолипидами. Кроме того, в составе мембраны обнаружено небольшое количество углеводов.
ЦПМ бактерий выполняет следующие функции:
Барьерная функция (молекулярное “сито”);
Энергетическая;
Избирательный перенос различных органических и неорганических молекул и ионов с помощью специальных переносчиков – транслоказ или пермеаз;
Репликация и последующее разделение хромосомы.
В процессе роста клетки цитоплазматическая мембрана образует многочисленные впячивания (инвагинаты), получившие название мезосом .
Цитоплазма - это содержимое бактериальной клетки, ограниченное цитоплазматической мембраной. Она состоит из цитозоля и структурных элементов.
Цитозоль - гомогенная фракция, включающая растворимые компоненты РНК, ферменты, продукты метаболизма.
Структурные элементы - это рибосомы, внутрицитоплазматические мембраны, включения и нуклеоид.
Рибосомы - органоиды, осуществляющие биосинтез белка. Они состоят из белка и РНК. Представляют собой гранулы диаметром 15-20 нм. Одна бактериальная клетка содержит от 5000 до 50000 рибосом. Рибосомы являются местом синтеза белка.
В цитоплазме прокариотов обнаруживаются различные включения, представляющие запасные вещества клетки. Из полисахаридов в клетках откладываются гликоген, крахмал и крахмалоподобное вещество - гранулеза. Полифосфаты содержатся в гранулах, называемых волютиновыми , или метахроматиновыми , зернами.
Нуклеоид является ядром у прокариотов. Он состоит из одной замкнутой в кольцо двуспиральной нити ДНК, которую рассматривают как бактериальную хромосому. У нуклеоида отсутствует ядерная оболочка.
Кроме нуклеоида в бактериальной клетке обнаружены внехромосомные генетические элементы – плазмиды , которые представляют собой небольшие кольцевые молекулы ДНК, способные к автономной репликации. Роль плазмид состоит в том, что они кодируют дополнительные признаки, дающие клетке преимущества в определенных условиях существования. Наиболее распространены плазмиды, детерминирующие признаки антибиотикорезистентности бактерий (R-плазмиды), синтез энтеротоксинов (Ent-плазмиды) или гемолизинов (Hly-плазмиды).
К временным структурам относятся капсула, жгутики, пили, эндоспоры бактерий.
Капсула - это слизистый слой над клеточной стенкой бактерии. Вещество капсул состоит из нитей полисахаридов. Капсула синтезируется на наружной поверхности цитоплазматической мембраны и выделяется на поверхность клеточной стенки в специфических участках.
Функции капсулы:
Место локализации капсульных антигенов, определяющих вирулентность, антигенную специфичность и иммуногенность бактерий;
Защита клеток от механических повреждений, высыхания, токсических веществ, заражения фагами, действия защитных факторов макроорганизма;
Способность прикрепления клеток к субстрату.
Жгутики – это органы движения бактерий. Жгутики не являются жизненно важными структурами, поэтому могут присутствовать у бактерий или отсутствовать в зависимости от условий выращивания. Количество жгутиков и места их расположения у разных бактерий неодинаково. В зависимости от этого выделяют следующие группы жгутиковых бактерий:
- монотрихи – бактерии с одним полярно расположенным жгутиком;
- амфитрихи – бактерии с двумя полярно расположенными жгутиками или имеющие по пучку жгутиков на обоих концах;
- лофотрихи – бактерии, имеющие пучок жгутиков на одном конце клетки;
- перитрихи – бактерии с множеством жгутиков, расположенных по бокам клетки или на всей ее поверхности.
Химический состав жгутиков представлен белком флагеллином .
К поверхностным структурам бактериальной клетки относятся также ворсинки и пили . Эти структуры участвуют в адсорбции клеток на субстрате (ворсинки, пили общего типа) и в процессах переноса генетического материала (половые пили). Они образованы специфическим гидрофобным белком пилином.
У некоторых бактерий в определенных условиях образуются покоящиеся формы, которые обеспечивают переживание клеток в течение длительного времени в неблагоприятных условиях - эндоспоры . Они устойчивы к неблагоприятным факторам внешней среды.
Расположение спор в клетке:
Центральное (возбудитель сибирской язвы);
Субтерминальное - ближе к концу (возбудитель ботулизма);
Терминальное – на конце палочки (возбудитель столбняка).