التلقيح الدموي

تراص الدم(من اليونانية haima blood وlat. agglutinatio الإلتصاق)، لصق وترسيب خلايا الدم الحمراء تحت تأثير البكتيريا والفيروسات والسموم وما إلى ذلك، القادرة على الامتصاص على سطح خلايا الدم الحمراء، وكذلك الهيماجلوتينين. يمكن أن تتراكم خلايا الدم الحمراء لحيوان ما في مصل حيوان آخر بسبب وجود إيزوهيماجلوتينين طبيعي (أجسام مضادة) فيه. باستخدام رد الفعل ز.ثَبَّتَ . ظاهرة ز.تستخدم في الدراسات الميكروبيولوجية والمناعية.

هناك مباشرة، أو نشطة، وغير مباشرة، أو سلبية، ز.مستقيم ز.ناجمة عن التأثير المباشر للعوامل البكتيرية والفيروسية على خلايا الدم الحمراء. في هذه الحالة، تتفاعل الهيماجلوتينين، باستخدام إنزيم موسيناز، مع مستقبلات البروتين المخاطي الموجودة على سطح كريات الدم الحمراء، مما يسبب امتصاص المستضد. ونتيجة لذلك، يشكل تعليق خلايا الدم الحمراء (على سبيل المثال، الدجاج) رواسب واسعة على شكل مظلة ذات حواف خشنة. هذا التفاعل ليس محددًا ويحدث دون مشاركة المصل المناعي. مباشر ز.يستخدم في الدراسات المصلية، وخاصة عند تحديد التخفيف العامل للمستضد المستخدم في تفاعل التثبيط ز.، والذي يعتمد على تأخير تأثير التراص الدموي للمستضد بواسطة مصل مناعي محدد. مباشر ز.كما أنها تستخدم للتشخيص المبدئي لبعض الأمراض الفيروسية (أنفلونزا الخيول، طاعون الطيور، مرض نيوكاسل، أنفلونزا البط). غير مباشر ز.يعتمد (RNGA) على قدرة كريات الدم الحمراء الحساسة (عن طريق امتزاز المستضد عليها) على التراص مع الأجسام المضادة المتماثلة للمصل المناعي. بسبب الحساسية العالية والخصوصية غير المباشرة ز.يتم استخدامه لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية والبكتيرية والريكتسيات. هناك عدة تعديلات غير مباشرة ز.تفاعلات التثبيط، والتأخير، وتحييد الأجسام المضادة، وما إلى ذلك. باستخدام RNGA وتعديلاته، يمكن اكتشاف كل من الأجسام المضادة في مصل الدم لدى الحيوانات والبشر (باستخدام كريات الدم الحمراء المتحسسة بمستضد معروف) والمستضد (باستخدام كريات الدم الحمراء المتحسسة بأجسام مضادة معينة) . . للتفاعل، يتم استخدام كريات الدم الحمراء المغسولة من أنواع حيوانية مختلفة (في أغلب الأحيان كريات الدم الحمراء من الأغنام والدجاج). تزداد قدرة كريات الدم الحمراء على امتصاص مستضدات البروتين الجزيئية الكبيرة بعد معالجتها بالتانين. لزيادة العمر الافتراضي لخلايا الدم الحمراء، يتم حفظها بالفورمالدهيد. يمكن للتشخيصات التي تم الحصول عليها من كريات الدم الحمراء الرسمية أن تحتفظ بنشاطها لفترة طويلة. مع توافر تشخيصات كرات الدم الحمراء الجاهزة، يتم تبسيط صياغة التفاعل إلى حد كبير. في الممارسة البيطرية، يتم استخدام RNGA لتشخيص بعض الأمراض الحيوانية (الفيروسية بشكل أساسي) - طاعون الطيور الكلاسيكي - مرض نيوكاسل، جدري البقر، أنفلونزا الخيول، أنفلونزا الخنازير والبط، داء البوليور - تيفوس الطيور، وما إلى ذلك. انظر أيضًا.

الأدب:
البحوث المخبرية في الطب البيطري، م.، 1971؛
دليل طرق البحث الميكروبيولوجية والفيروسية، أد. إم أو بيرغر الطبعة الثانية، م، 1973.

القاموس الموسوعي البيطري. - م: "الموسوعة السوفيتية". رئيس التحرير ف.ب. شيشكوف. 1981 .

المرادفات:

ترى ما هو "HAEMAGLUTINATION" في القواميس الأخرى:

تراص الدم- التراص الدموي... كتاب مرجعي القاموس الإملائي

تراص الدم- الازدحام والتراص قاموس المرادفات الروسية. اسم تراص دموي، عدد مرادفاته: 2 تراص (3) ... قاموس المرادفات

التلقيح الدموي- (من الهيمو... واللاتينية. لصق agglutinatio) لصق وترسب خلايا الدم الحمراء المعلقة في السائل تحت تأثير عوامل مختلفة، على سبيل المثال، الأجسام المضادة أو البكتيريا أو الفيروسات. يتم استخدام تفاعل التراص الدموي للتشخيص... ... القاموس الموسوعي الكبير

التراص الدموي- عملية لصق خلايا الدم الحمراء في تجمعات مرئية بالعين المجردة. G. ناجم عن: 1) القيمة المطلقة إلى كريات الدم الحمراء والأجسام غير المتجانسة. 2) مستضد إلى مستضدات غريبة عن كريات الدم الحمراء، ممتزة على سطحها (انظر تفاعل التراص الدموي، السلبي)؛ 3) ... قاموس علم الأحياء الدقيقة

التلقيح الدموي- التراص الدموي، تراص (تكتل) خلايا الدم الحمراء عند مزجها مع الأمصال المتماثلة. إذا تم استبدال خلايا الدم الحمراء البشرية بمصل من نفس الشخص، فعند رجها، سيتم الحصول على تعليق موحد. إذا كانت كريات الدم الحمراء لشخص واحد...... الموسوعة الطبية الكبرى

تراص الدم- الظاهرة الكامنة وراء طريقة تحديد الأجسام المضادة، والتي تعتمد على تراصها في كريات الدم الحمراء نتيجة الارتباط إما بمستضدات كريات الدم الحمراء نفسها، أو بمستضدات أخرى مرتبطة بشكل صناعي بسطح كريات الدم الحمراء.... ... دليل المترجم الفني- (الهيم + التراص) تراص كريات الدم الحمراء ... قاموس طبي كبير

التراص الدموي- من اليونانية هيماء الدم واللات. agglutinatio الإلتصاق)، عملية الإلتصاق والترسيب اللاحق لخلايا الدم الحمراء؛ تسببها الراصة الدموية (انظر الهيماجلوتينين) والبكتيريا والفيروسات، وهي عوامل قادرة على الامتصاص على... ... الموسوعة السوفيتية الكبرى

تراص الدم- التصاق (تراص) خلايا الدم الحمراء. يتطور، بما في ذلك أثناء نقل الدم غير المتوافق.

تفاعل التراص الدموي (HRA)

يعتمد RGA على حقيقة أن بعض أنواع البكتيريا والفيروسات لديها القدرة على الامتصاص على سطح خلايا الدم الحمراء لأنواع مختلفة من الحيوانات (والطيور)، مما يجعلها تلتصق ببعضها البعض وتشكل تراصًا (RGA المباشر).

لا يتجلى دائمًا امتزاز المستضد (البكتيريا والفيروسات) على سطح كريات الدم الحمراء في تكوين راسب مرئي. بالإضافة إلى ذلك، فإن RHA غير محدد لأن خلايا الدم الحمراء من نفس النوع الحيواني يمكنها امتصاص مستضدات مختلفة.

تفاعل التراص الدموي السلبي (غير المباشر) (RPHA) محدد. لتنفيذ هذا الإجراء، يتم أولاً إعداد تشخيص كريات الدم الحمراء (كريات الدم الحمراء التي يتم امتصاص المستضد فيها). ولهذا الغرض، يتم الحصول على دم الأغنام (أو الديك) بشكل معقم، وإزالة رجفانه وغسله عدة مرات في محلول مخزن بالفوسفات (درجة الحموضة 7.2) باستخدام الطرد المركزي 3-5 أضعاف. تتم إزالة الطاف، ويتم ضبط تركيز كريات الدم الحمراء إلى 2.5٪ (1:40). إلى معلق 2.5% من كريات الدم الحمراء، يضاف حجم مساوٍ (1 مل أو 0.5 مل) من معلق البكتيريا من أنواع الميكروبات قيد الدراسة بتركيز 5-10 مليار خلية لكل 1 مل. تمتص خلايا الدم الحمراء مستضدات السكاريد بسهولة. لامتصاص مستضد البروتين، تتم معالجة كريات الدم الحمراء مسبقًا بالتانين عند تخفيف 1: 20000. تُترك كريات الدم الحمراء مع المستضد المضاف للتوعية (الامتزاز) لمدة ساعتين في منظم الحرارة (37 درجة مئوية)، ثم يتم طردها بالطرد المركزي. مرة أخرى عند 3-4 آلاف دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق بمحلول منظم الفوسفات (الشكل 9.13).

يتم وضع تشخيص كريات الدم الحمراء الناتج في أنابيب اختبار (أو آبار في لوح زجاجي) ويضاف إليها مصل المناعة القياسي.

في الحالات الإيجابية، سيحدث RHA - فقدان خلايا الدم الحمراء على شكل رواسب قشارية أو حبيبية مميزة موزعة على كامل سطح الجزء السفلي من أنبوب الاختبار (الهيماجلوتينات). وهذا يعني أن نوع الميكروب قيد الدراسة (المستضد) خاص بالأجسام المضادة للمصل المناعي. في الحالات السلبية، تستقر خلايا الدم الحمراء غير الملتصقة في الأسفل على شكل دائرة صغيرة متساوية.

لمزيد من الموثوقية للنتائج، يتم تنفيذ RPGA تأخير رد الفعل(الكبح) ظاهرة التراص الدموي(RZGA) أو تعديله - رد فعل تحييد الأجسام المضادة(ريا).

أرز. 9.13. تفاعل التراص الدموي السلبي (المخطط): Er - خلايا الدم الحمراء: AG - المستضد: AT - الجسم المضاد

جوهر RZGAيتكون من حقيقة أن تفاعل التراص يتم إجراؤه باستخدام مصل تشخيصي محدد ومستضد اختبار (يتم استخدام نوع الميكروب الذي تتم دراسته كمستضد). يتم الاحتفاظ بهذا الخليط لمدة 1-2 ساعة عند 37 درجة مئوية، ثم يتم إضافة خلايا الدم الحمراء. إذا كان مستضد الاختبار متماثلًا مع الأجسام المضادة الموجودة في المصل التشخيصي، فإنها تتفاعل مع بعضها البعض ولا تتراكم خلايا الدم الحمراء المضافة - وتكون نتيجة التفاعل إيجابية. إذا لم يكن مستضد الاختبار متماثلًا مع الأجسام المضادة في المصل أو لم يكن موجودًا في المادة، فإن كريات الدم الحمراء المضافة تمتص المستضد ويحدث RGA - نتيجة RGA سلبية، ولم يتم تحديد نوع الميكروب (المستضد) الذي يتم اختباره.

منهجية تحديد الرقم الهيدروجيني Aتتمثل في أخذ كميات متساوية وخلط المصل المناعي التشخيصي مع تخفيفات مختلفة من مادة الاختبار (المستضد المرغوب فيه)، وتركه للتلامس لمدة 1-2 ساعة، ثم إضافة خلايا الدم الحمراء المتحسسة بمستضد معين (معروف) خاص بالأجسام المضادة في المصل. (تشخيص كريات الدم الحمراء). عندما يتفاعل المستضد المرغوب مع الأجسام المضادة في المصل، يتم تحييدها ولا تتراكم خلايا الدم الحمراء المضافة، ولا يحدث RHA - وتكون نتيجة RHA إيجابية. إذا كانت مادة الاختبار لا تحتوي على مستضد خاص بالأجسام المضادة للمصل المستخدم، فلن يحدث تحييد الأجسام المضادة. لذلك، عند إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء، يظهر تراص كريات الدم الحمراء (تراص الدم)، وتكون نتيجة الحمض النووي الريبي (RNA) سلبية. يعد تفاعل تحييد الجسم المضاد طريقة حساسة للغاية للكشف عن المستضد ليس فقط في معلقات البكتيريا الحية (أو المقتولة)، ولكن أيضًا في معلقات الأنسجة الأرضية لمختلف الأعضاء، والإفرازات الأصلية والساخنة وفضلات كائن حي مريض.

1. رد فعل التراص الدموي

(آر جي إيه)

طريقة لكشف وتحديد الفيروسات، بناءً على قدرة بعض الفيروسات على تراص خلايا الدم الحمراء لأنواع معينة من الحيوانات بشكل انتقائي.

يعتمد RGA على ظاهرة التصاق خلايا الدم الحمراء، والتي تحدث تحت تأثير عوامل مختلفة. هناك التراص الدموي المباشر وغير المباشر. في تفاعل التراص الدموي المباشر، تلتصق خلايا الدم الحمراء معًا عندما يتم امتصاص مستضدات معينة، مثل الفيروسات، عليها.

في الدراسات المصلية، يتم استخدام تفاعل تثبيط التراص الدموي المباشر، عندما يتم تحييد الفيروس المعزول من المريض بمصل مناعي محدد ثم دمجه مع خلايا الدم الحمراء. يشير غياب التراص الدموي إلى تماسك الفيروس والمصل المناعي المستخدم.

يتم ملاحظة تفاعل التراص الدموي غير المباشر (التراص الدموي السلبي) في الحالات التي يتم فيها إضافة مصل مناعي أو مصل مريض يحتوي على أجسام مضادة مناسبة إلى خلايا الدم الحمراء التي تم علاجها (توعية) مسبقًا بمستضدات مختلفة. يحدث التصاق محدد لخلايا الدم الحمراء، والتراص الدموي السلبي.

يتفوق تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي في الحساسية والنوعية على الطرق المصلية الأخرى، ويستخدم في تشخيص الالتهابات التي تسببها البكتيريا، والريكتسيا، والأوالي.

تتكون طريقة إجراء تفاعل التراص الدموي غير المباشر من عدة مراحل. أولاً، يتم غسل خلايا الدم الحمراء بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، ثم، إذا لزم الأمر (عند استخدام مستضدات البروتين)، يتم معالجتها بمحلول التانين بنسبة 1: 20000 ويتم حساسيتها بمستضدات قابلة للذوبان. بعد الغسيل بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، يصبح مستضد كريات الدم الحمراء جاهزًا للاستخدام. يتم تخفيف أمصال الاختبار بمحلول متساوي التوتر من كلوريد الصوديوم في أنابيب اختبار أو ألواح بلاستيكية خاصة ذات فتحات، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء إلى كل تخفيف للمصل. وتؤخذ نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر بعين الاعتبار طبيعة رواسب خلايا الدم الحمراء المتكونة في قاع الأنبوب. تعتبر نتيجة التفاعل التي تغطي فيها خلايا الدم الحمراء الجزء السفلي من الأنبوب بالكامل بالتساوي إيجابية. في رد الفعل السلبي، توجد خلايا الدم الحمراء على شكل قرص صغير أو “زر” في منتصف الجزء السفلي من أنبوب الاختبار.

باستخدام RGA

يستخدم RGA للإشارة (الكشف) عن الفيروسات أثناء التشخيص الأولي، ولمعايرة الفيروسات وفقًا لخصائص التراص الدموي (إنشاء وحدات التراص الدموي - AE).

امتصاص الفيروسات

أساس ظاهرة التراص التي تسببها الفيروسات هو امتزاز الفيروسات على سطح خلايا الدم الحمراء، مصحوبًا بالتصاق (تراص) الأخيرة وهطول الأمطار.

مستضد لـ RGA

أي مادة (مادة مرضية على شكل معلق من الأعضاء، مادة من EC مصابة، مزارع الأنسجة، وما إلى ذلك) يشتبه في وجود فيروس فيها يتم أخذها كمستضد لـ RGA. يجب أن تكون المادة سائلة، دون جزيئات كبيرة.

إعداد RGA تقريبي

لإعداد RGA تقريبي، يتم وضع قطرة واحدة من مادة تحتوي على فيروس على شريحة زجاجية نظيفة ومزيلة الشحوم جيدًا، وتضاف إليها قطرة واحدة من معلق 5٪ من خلايا الدم الحمراء وتخلط بقضيب زجاجي.

تقييم رد فعل RGA

يتم تقييم رد الفعل في الصلبان (الإيجابيات). عند تقييم رد الفعل في الصلبان، انتبه إلى طبيعة الرواسب. إذا استقرت خلايا الدم الحمراء في طبقة رقيقة بالتساوي على طول الجزء السفلي من أنبوب الاختبار (على شكل مظلة)، يتم تسجيل التفاعل كأربعة تقاطعات

2. رد فعل تثبيط التراص الدموي- تفاعل مصلي يعتمد على قدرة الأجسام المضادة على منع تراص كريات الدم الحمراء عن طريق أنواع الفيروسات الملتصقة بالدم (الفيروسات الغدانية، والفيروسات المفصلية، وبعض الفيروسات المعوية، وفيروسات الأنفلونزا ونظير الأنفلونزا، والحصبة، والفيروسات الرجعية). تتفاعل الأجسام المضادة المحددة المضادة للفيروسات مع جزيئات الراصة الدموية السطحية لفيروسات هذه الفيروسات وتمنع ارتباطها بالجزيئات المكملة لغشاء كرات الدم الحمراء.

في الآونة الأخيرة، تم استخدام التفاعل على نطاق واسع في مختبرات علم الفيروسات السريرية لتحديد عيارات الأجسام المضادة المحددة لبعض الفيروسات، وكذلك لتحديد الهوية المصلية وكتابة معزولات الفيروس من المواد السريرية من المرضى. استخدامها محدود إلى حد ما بسبب وجود مثبطات فيروسية غير محددة في مصل الدم البشري، وكذلك الأجسام المضادة الطبيعية - الراصات.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI). على الرغم من اسمه، فإن مبدأ التفاعل يشبه في كثير من النواحي الرقم الهيدروجيني للفيروسات، لأنه يعتمد على قدرة AT على ربط الفيروسات المختلفة وتحييدها، مما يجعل من المستحيل تراص خلايا الدم الحمراء. بصريا، يتجلى هذا التأثير في "تثبيط" التراص الدموي. يستخدم RTGA في تشخيص الالتهابات الفيروسية لتحديد مضادات الراصة الدموية المحددة والتعرف على الفيروسات المختلفة عن طريق الراصة الدموية الخاصة بها، والتي تظهر خصائص Ag.

رد فعل تثبيط التراص الدموي

(رتجا)

طريقة للتعرف على الفيروس أو الكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات في مصل دم المريض، تعتمد على ظاهرة غياب تراص كريات الدم الحمراء بواسطة دواء يحتوي على فيروس في وجود مصل دم محصن ضده.

رد فعل تثبيط التراص الدموي. الآلية والاستخدام العملي.

العديد من الفيروسات لديها القدرة على تراص خلايا الدم الحمراء لأنواع محددة بدقة من الثدييات والطيور. وهكذا، فإن فيروسات الأنفلونزا والنكاف تعمل على تراص كريات الدم الحمراء في الدجاج والخنازير الغينية والبشر، بينما تعمل الفيروسات الغدية على تراص كريات الدم الحمراء في الجرذان والفئران. وفي هذا الصدد، الكشف عنها في مادة المرضى أو مزارع الخلايا والأجنة والحيوانات، رد فعل التراص الدموي(آر جي إيه). للقيام بذلك، يتم تحضير تخفيفات مضاعفة للمواد والسوائل المحتوية على الفيروسات في آبار الصفائح، مضيفًا إليها معلقات من كريات الدم الحمراء NaCl المغسولة بمحلول متساوي التوتر. للتحكم في التراص التلقائي، يتم خلط خلايا الدم الحمراء بكمية متساوية من محلول NaCl متساوي التوتر. يتم تحضين المخاليط في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية أو في درجة حرارة الغرفة.

يتم أخذ نتائج تحليل الأشعة السينية في الاعتبار حسب طبيعة تراص كريات الدم الحمراء بعد 30-60 دقيقة، عندما يتم ترسيبها بالكامل في التحكم. يشار إلى رد الفعل الإيجابي بالإيجابيات. "++++" - رواسب على شكل "مظلة"، "+++" - رواسب ذات شمعة، "++" - رواسب ذات شمعة كبيرة، "+" - رواسب ندفية محاطة بمنطقة من كريات الدم الحمراء المجعدة و "-" - نفس رواسب كريات الدم الحمراء المحددة بشكل حاد على شكل "زر" كما في عنصر التحكم

نظرًا لكونه خاصًا بالمجموعة، فإن RGA لا يجعل من الممكن تحديد أنواع الفيروسات. يتم التعرف عليهم باستخدام تفاعلات تثبيط التراص الدموي(رتجا). لإعداده، يتم استخدام الأمصال المناعية المضادة للفيروسات المعروفة، والتي يتم تخفيفها بتركيزات متناقصة مضاعفة في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر وتصب في الآبار. تتم إضافة كمية متساوية من السائل المحتوي على الفيروس إلى كل تخفيف. والسيطرة هي تعليق الفيروس في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر. يتم حفظ الأطباق التي تحتوي على خليط من الأمصال والفيروس في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة أو في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين، ثم يتم إضافة معلق من خلايا الدم الحمراء إلى كل منها. بعد 30 دقيقة، يتم تحديد عيار المصل المعادل للفيروس (أي الحد الأقصى للتخفيف)، والذي تسبب في تأخير تراص كريات الدم الحمراء.

يستخدم RTGA في التشخيص المصلي للأمراض الفيروسية، وخاصة الأنفلونزا والعدوى الفيروسية الغدانية. من الأفضل استخدامه بنفس طريقة استخدام RN، مع الأمصال المقترنة. تؤكد الزيادة بمقدار أربعة أضعاف في عيار الأجسام المضادة في المصل الثاني التشخيص المفترض

3. الدراسة المصليةيسمح لك بإجراء التشخيص إذا تم اكتشاف أجسام مضادة محددة في مصل المرضى. بالنسبة للتفاعلات المصلية، يتم استخدام الأمصال المقترنة، والتي يتم أخذها في الأيام الأولى من بداية المرض وبعد 1-3 أسابيع، ولكن يتم دراستها في وقت واحد. إن زيادة عيار الأجسام المضادة بمقدار 4 مرات أو أكثر له أهمية تشخيصية. يتم استخدام RTGA، RN، RSK، RTGads، RIF، RIA، ELISA مع المستضدات (التشخيصات) المحضرة من سلالات مرجعية للفيروسات المقابلة.

4. مقترن - وهذا يعني أنه يتم أخذ الدم مرتين بفاصل زمني معين. من خلال زيادة عيار الأجسام المضادة، يتم تحديد حدوث العدوى. إذا لم يتغير عيار الأجسام المضادة، فهذا يعني أن هذه الأجسام المضادة موجودة في الجسم لفترة طويلة، ولا توجد عدوى جديدة.

القيمة التشخيصية الأكبر هي دراسة الأمصال المقترنة المأخوذة من الحيوانات في بداية المرض ونهايته (بفاصل 14-21 يومًا). يتم جمع المصل في أنابيب معقمة وتخزينه للاختبار.

وصف

تم تصميم مجموعة تشخيص مرض فيروس بارفو الخنازير للكشف عن مستضد فيروس بارفو في تعليق الأعضاء الداخلية للأجنة المجهضة في تفاعل التراص الدموي (HIA) والأجسام المضادة المحددة في مصل دم الخنازير، وكذلك الخنازير حديثي الولادة (قبل تلقي اللبأ ) في تفاعل تثبيط التراص الدموي (HIA). ويتم التفاعل باستخدام الطريقة الدقيقة في آبار ألواح البوليسترين. لوحات البوليسترين 96-جيدا للتفاعلات المناعية؛ مستضد معطل محدد ذو نشاط تراص دموي لا يقل عن 1:128؛ مصل محدد مع نشاط في RTGA لا يقل عن 1:256؛ المصل طبيعي (السيطرة السلبية).

وقت التحليل:

RGA - 2.5-3.5 ساعة، RTGA - 3.5-4.5 ساعة (دون مراعاة وقت إعداد المواد للدراسة).

مبدأ الطريقة:

يعتمد تفاعل التراص الدموي (HRA) على لصق خلايا الدم الحمراء المعلقة في السائل تحت تأثير خصائص التراص الدموي للفيروس وتكوين رواسب سائبة على شكل مظلة. يتمثل جوهر RTHA في تحييد خصائص التراص الدموي للفيروس باستخدام أجسام مضادة محددة موجودة في مصل الدم، ونتيجة لذلك لا تلتصق خلايا الدم الحمراء ببعضها البعض وتستقر في القاع، وتشكل رواسب كثيفة على شكل زر.

شروط التخزين

يتم تخزين المجموعة في مكان جاف، محمي من الضوء، عند درجة حرارة من 2 إلى 8 درجات مئوية. بمجرد إذابتها، يمكن تخزين مكونات المجموعة مجمدة لمدة شهر واحد، ولا يسمح بإعادة التجميد.

الافضل قبل الموعد

تتفاعل خلايا الدم الحمراء (أو جزيئات اللاتكس) مع المستضدات الممتزة عليها مع الأجسام المضادة المقابلة في مصل الدم، مما يتسبب في التصاق خلايا الدم الحمراء معًا وتساقطها في قاع أنبوب الاختبار أو الخلية على شكل صدفي الرواسب. وفي رد الفعل السلبي، تستقر خلايا الدم الحمراء على شكل زر. رد فعل التراصيمكن إجراؤها في نسخة مجهرية في خلايا لوحة مكونة من 96 بئرًا للدراسات المناعية ذات القاع المخروطي. أضف 0.05 مل من برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7.2-7.4) إلى آبار اللوحة وقم بإعداد التخفيفات المزدوجة لأمصال الدم الاختبارية من 1:2 وما فوق. ثم يضاف 0.005 مل من معلق الخلايا الفطرية إلى كل خلية بتركيز 100 ألف خلية فطرية لكل 1 مل. يتم رج القرص بعناية وحفظه في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين، ثم عند 4 درجات مئوية لمدة 16-18 ساعة. يتم استخدام مصل الدم الطبيعي (السلبي) وبرنامج تلفزيوني كعنصر تحكم سلبي. تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار باستخدام المجهر وبصريا ويتم تحديدها بشكل متقاطع وفقا للمخطط التالي: (++++) - تصفية السائل بالكامل وتكوين مادة تراصية في قاع البئر على شكل "مظلة" مقلوبة، وعند اهتزازها تتكسر "المظلة" إلى رقائق؛ (+++) - تصفية غير كاملة للسائل و"مظلة" محددة جيدًا؛ (++) - تصفية السائل بشكل ملحوظ، يتم التعبير عن "المظلة" بشكل معتدل؛ (+) - تصفية السائل بالكاد ملحوظة، يتم التعبير عن "المظلة" بشكل ضعيف؛ (-) - نتيجة سلبية، السائل لم يصفى، هناك رواسب على شكل زر في قاع البئر، مع الاهتزاز اللطيف يتكون تعليق موحد. تم أخذ التخفيف الأخير لمصل الاختبار الذي حدث فيه تراص لاثنين على الأقل من الصلبان (++) على أنه عيار الجسم المضاد.

رد فعل التراصهو رد فعل مناعي لتفاعل المستضد مع الأجسام المضادة في وجود الشوارد، ويكون المستضد في حالة جسيمية (كريات الدم الحمراء، البكتيريا، جزيئات اللاتكس مع المستضدات الممتزة). أثناء التراص، يتم لصق المستضدات الجسيمية معًا بواسطة الأجسام المضادة، وهو ما يتجلى في تكوين راسب ندف. يحدث تكوين الرقائق بسبب حقيقة أن الأجسام المضادة لها مركزان نشطان، والمستضدات متعددة التكافؤ، أي. لديها العديد من المحددات المستضدية. يستخدم RA للتعرف على العامل الممرض المعزول من مادة المريض، وكذلك للكشف عن الأجسام المضادة للعامل الممرض في مصل دم المريض (على سبيل المثال، تفاعل رايت وهيدلسون لداء البروسيلات، تفاعل فيدال لحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية).

إن أبسط طريقة لتشخيص التهاب المفاصل الروماتويدي هي التفاعل على الزجاج، وهو مرض تقريبي يستخدم لتحديد العامل الممرض المعزول من المريض. عندما يتم تحديد التفاعل، يتم تطبيق المصل التشخيصي المتراص على شريحة زجاجية (عند تخفيف بنسبة 1:10 أو 1:20)، ثم تتم إضافة مزرعة من المريض. يكون رد الفعل إيجابيًا إذا ظهرت رواسب ندفية في القطرة. يتم وضع عنصر التحكم في مكان قريب: بدلا من المصل، يتم تطبيق قطرة من محلول كلوريد الصوديوم. إذا لم يتم امتصاص مصل التراص التشخيصي 1، فسيتم تخفيفه (إلى العيار - التخفيف الذي يجب أن يحدث التراص فيه)، أي. يتم وضع RA الموسع في أنابيب الاختبار مع تخفيفات متزايدة من المصل المتراص، والتي تضاف إليها 2-3 قطرات من تعليق العامل الممرض المعزول من المريض. يؤخذ التراص في الاعتبار بكمية الرواسب ودرجة تصفية السائل في أنابيب الاختبار. يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا لوحظ التراص في تخفيف قريب من عيار المصل التشخيصي. يصاحب التفاعل ضوابط: يجب أن يكون المصل المخفف بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر شفافًا، ويجب أن يكون تعليق الميكروبات في نفس المحلول غائمًا بشكل موحد، بدون رواسب.

لتحديد الأجسام المضادة للعامل الممرض في مصل دم المريض، يتم استخدام RA واسع النطاق. عند إعداده، يتم تخفيف مصل دم المريض في أنابيب الاختبار وتضاف كمية مساوية من المعلق التشخيصي (معلق الميكروبات المقتولة) إلى أنابيب الاختبار. بعد الحضانة، يتم تحديد أعلى تخفيف للمصل حدث عنده التراص، أي. تشكل راسب (عيار المصل). في هذه الحالة، يحدث تفاعل التراص مع O-diagnosticum (البكتيريا التي تم قتلها بالتسخين، مع الاحتفاظ بمستضد O القابل للحرارة) في شكل تراص دقيق الحبيبات. يكون تفاعل التراص مع H-diagnosticum (البكتيريا التي يتم قتلها بواسطة الفورمالديهايد، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي القابل للحرارة) خشنًا ويستمر بشكل أسرع.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي).(RNGA أو RPGA) هو نوع من RA. هذه الطريقة حساسة للغاية. بمساعدة RNGA، يمكن حل مشكلتين: تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض، والتي يضاف إليها تشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية، وهي كريات الدم الحمراء التي يتم امتصاص المستضدات المعروفة فيها؛ تحديد وجود المستضدات في مادة الاختبار. في هذه الحالة، يسمى التفاعل أحيانًا تفاعل التراص الدموي العكسي غير المباشر (RONHA). أثناء الإجراء، تتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء (كريات الدم الحمراء ذات الأجسام المضادة الممتزة على سطحها) إلى مادة الاختبار. في هذا التفاعل، تعمل خلايا الدم الحمراء كحاملات وتشارك بشكل سلبي في تكوين المجاميع المناعية. مع رد فعل إيجابي، تغطي خلايا الدم الحمراء الملتصقة بشكل سلبي الجزء السفلي من الحفرة بطبقة متساوية ذات حواف صدفية ("المظلة")؛ وفي غياب التراص، تتراكم خلايا الدم الحمراء في التجويف المركزي للثقب، لتشكل "زرًا" مدمجًا ذو حواف محددة بشكل حاد.

رد فعل التخثريستخدم لتحديد الخلايا المسببة للأمراض (المستضدات) باستخدام الأجسام المضادة الممتصة المكورات العنقودية الذهبية،يحتوي على البروتين A. البروتين A له صلة بجزء Fc من الغلوبولين المناعي. بفضل هذا، ترتبط الأجسام المضادة بالمكورات العنقودية بشكل غير مباشر من خلال جزء Fc، ويتم توجيه أجزاء Fab نحو الخارج وتكون قادرة على التفاعل مع الميكروبات المقابلة المعزولة من المرضى. في هذه الحالة، يتم تشكيل رقائق.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI)يستخدم في تشخيص الالتهابات الفيروسية، وفقط الالتهابات الناجمة عن الفيروسات المتخثرة للدم. تحتوي هذه الفيروسات على بروتين على سطحها - الهيماجلوتينين، وهو المسؤول عن تفاعل التراص الدموي (HRA) عند إضافة خلايا الدم الحمراء إلى الفيروسات. يتضمن RTGA حجب المستضدات الفيروسية بالأجسام المضادة، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص خلايا الدم الحمراء.

رد فعل كومز - RA لتحديد الأجسام المضادة غير المكتملة. في بعض الأمراض المعدية، مثل داء البروسيلات، تنتشر الأجسام المضادة غير الكاملة للعامل الممرض في مصل دم المريض. تسمى الأجسام المضادة غير المكتملة بالأجسام المضادة الحاصرة لأنها تحتوي على موقع ربط واحد للمستضد، وليس موقعين، مثل الأجسام المضادة الكاملة. لذلك، عند إضافة تشخيص مستضدي، ترتبط الأجسام المضادة غير المكتملة بالمستضدات، ولكنها لا تلصقها معًا. لإظهار التفاعل، يتم إضافة مصل مضاد الجلوبيولين (الأجسام المضادة للجلوبيولين المناعي البشري)، مما سيؤدي إلى تراص المجمعات المناعية (التشخيص المستضدي + الأجسام المضادة غير المكتملة) التي تكونت في المرحلة الأولى من التفاعل.

يتم استخدام تفاعل كومبس غير المباشر في المرضى الذين يعانون من انحلال الدم داخل الأوعية الدموية. في بعض هؤلاء المرضى، تم اكتشاف أجسام مضادة أحادية التكافؤ غير مكتملة للريسوس. وهي تتفاعل على وجه التحديد مع كريات الدم الحمراء الموجبة لعامل Rh، ولكنها لا تسبب تراصها. لذلك، يتم إضافة مصل مضاد الجلوبيولين إلى نظام الأجسام المضادة لـ Rh + كريات الدم الحمراء الموجبة لـ Rh، مما يسبب تراص كريات الدم الحمراء. باستخدام تفاعل كومبس، يتم تشخيص الحالات المرضية المرتبطة بالتحلل داخل الأوعية الدموية لكريات الدم الحمراء ذات الأصل المناعي، على سبيل المثال، مرض انحلالي عند الوليد الناجم عن صراع العامل الريسوسي.

RA لتحديد فصائل الدميعتمد على تراص كريات الدم الحمراء بواسطة الأجسام المضادة في المصل المناعي لمستضدات فصيلة الدم A(II)، B(III). عنصر التحكم هو المصل الذي لا يحتوي على أجسام مضادة، أي. فصيلة الدم AB (IV) ومستضدات كريات الدم الحمراء من المجموعتين A (P) و B (III). تُستخدم خلايا الدم الحمراء من المجموعة 0 (I) كعنصر تحكم سلبي لأنها لا تحتوي على مستضدات.

لتحديد عامل Rh، يتم استخدام الأمصال المضادة لـ Rh (سلسلتان مختلفتان على الأقل). إذا كان هناك مستضد Rh على غشاء كريات الدم الحمراء قيد الدراسة، يحدث تراص هذه الخلايا.

رد فعل امتصاص الدم(رغاد). الامتزاز الدموي هو اتصال كريات الدم الحمراء بسطح الخلايا المصابة بالفيروس، بناءً على ألفة مستقبلات الفيروس الموجودة على سطح الخلية المصابة مع مستقبلات كريات الدم الحمراء، مما يؤدي إلى التصاقها المتبادل بشكل يشبه تفاعل التراص الدموي. وميزة هذا التفاعل هو أنه يصبح إيجابيا حتى قبل ظهور تغيرات خلوية مميزة في الخلايا المصابة.

لوحظت اختلافات في نوع الامتزاز (منتشر، بؤري)، ونوع كريات الدم الحمراء الممتصة (إنسان، قرد، خنزير غينيا، إلخ)، ودرجة الحرارة التي يحدث عندها التفاعل (37 درجة مئوية، 0 درجة مئوية)، ووجود من الشطف (نعم، لا). يمكن تثبيط G. عن طريق الحضانة الأولية للخلايا المصابة بالفيروس باستخدام مصل مضاد للفيروس. يستخدم تفاعل تثبيط G. للتعرف على الفيروسات.