ŽUVYS yra vienas nuostabiausių XXI amžiaus molekulinės biologijos „įrankių“. Priešimplantacinėje diagnostikoje FISH tyrimo technika naudojama aptikti chromosomų anomalijas arba chromosomų poravimosi sutrikimus naujai apvaisinimo in vitro (IVF) būdu gauto embriono ląstelėse. Jei anomalijų ar aneuploidijos požymių (poravimosi sutrikimo, chromosomų porų nebuvimo) nenustatoma, tada „dirbtinis“ embrionas laikomas gyvybingu. Jis gali būti implantuojamas į būsimos motinos gimdą.
FISH taip pat leidžia atsekti lytines savybes embriono chromosomų rinkinyje. Tai leidžia nustatyti būsimo vaiko lytį dar prieš faktinį nėštumo pradžią (jei laikytume, kad tai prasideda ne kūno pastojusio embriono implantavimu į gimdą).
Kas yra ŽUVYS?
Santrumpa reiškia: Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung arba fluorescencinė in situ hibridizacija. Stenograma, greičiausiai, nieko nepasakoja neišmanančiam skaitytojui. Todėl sudėtingą sąvoką išanalizuosime dalimis, palikdami per mažai išverstą „in situ“ paskutiniam.
Hibridizacija
Molekulinėje biologijoje šis terminas turi labai ypatingą reikšmę, kuri neturi nieko bendra su rūšių kryžminimu „įprastoje“ biologijoje.
Hibridizacija yra molekulinė genetinė technika, naudojama tiriamų ląstelių DNR ir RNR būklei įvertinti. Jis pagrįstas atskirų nukleorūgščių grandinių sujungimu į vieną molekulę. Tokiu būdu tikrinamas molekulių ar jų fragmentų komplementarumas (abipusis atitikimas) vienas kitam. Esant visiškam papildomumui, grandinės lengvai ir greitai susijungia į bendrą molekulę. Lėtas susivienijimas rodo nepakankamą papildomumą. Grandinių nekomplementarumas atsiranda būtent dėl chromosomų anomalijų (tam tikrų sričių chromosomų eilės pažeidimų), nesuporuotų chromosomų arba kai kurių porų nebuvimo.
Komplementarumo matavimo „priemonė“ yra temperatūra, kurioje DNR grandinės hibridizuojasi į bendrą molekulę. Tam pirmiausia reikia pašildyti nukleorūgščių preparatą, o po to, sumaišius su kitu pašildytu preparatu, atvėsinti. Kaitinant, vandeniliniai ryšiai tarp DNR ar RNR grandinių išnyksta, susidaro viengrandžiai molekulių fragmentai. Dviejų DNR arba RNR (arba DNR – RNR) mišrūs preparatai atšaldomi. Atvėsus, greitai atkuriami vandeniliniai ryšiai tarp komplementarių bazių, susidaro viena, hibridinė DNR molekulė (RNR arba DNR – RNR). Trūkstant papildomumo, procesas užtrunka ilgiau, nekomplementarūs fragmentai lieka neprisirišti. Vadinasi, kuo aukštesnė hibridizacijos temperatūra, tuo harmoningesnė ir teisingesnė ląstelių chromosomų struktūra. Kuo žemesnė temperatūra, tuo daugiau chromosomų anomalijų. Remiantis nekomplementarių likučių analize, galima nustatyti specifines anomalijas arba aneuploidijos sritis.
Fluorescencinis žymėjimas
Hibridizuojančios DNR (arba RNR) molekulės komplementarumui analizuoti naudojami specialūs genetiniai zondai (arba DNR zondai), kurie, žinoma, irgi turi mažai ką bendro su bendravardžiais, naudojamais, pavyzdžiui, chirurgijoje.
Genetiniai zondai yra susintetinti ir specialiai paženklinti viengrande DNR (rečiau RNR) su iš anksto nustatytomis komplementarumo savybėmis. Hibridizuodami jie susilieja su tam tikrais genetiniais fragmentais, taip patvirtindami jų papildomumą. Zondų vieta hibridizuotoje molekulėje rodo normalią arba sugedusią pradinės chromosominės medžiagos, iš kurios surinkta ši „dirbtinė struktūra“, struktūrą.
Genetiniai zondai ypač pažymėti šviečiančiomis (fluorescencinėmis) medžiagomis, todėl jie matomi specialiu fluorescenciniu mikroskopu.
Skirtingų dažų naudojimas keliems zondams leidžia vienu metu analizuoti įvairias genetines struktūras, pavyzdžiui, identifikuoti chromosomų sritis su dviem genais, esančiais vienas ant kito, ir kitas anomalijas.
Šiuo metu atliekant vieną analizę, genetiniai zondai yra paženklinti nuo penkių iki šešių skirtingų dažų, kartais net septyniais.
In situ reiškia „namuose“
Pradinė hibridizacijos technika buvo sudėtinga. Išskirta DNR buvo denatūruota specialiuose terminiuose buferiuose ir centrifugoje sumaišyta su kitais denatūruotais fragmentais. Hibridizacija taip pat buvo atlikta laboratorijoje „chemijos inde“.
Šiuolaikinės technologijos leidžia atlikti tyrimus in situ, tai yra „vietoje“, „namuose“, originaliose genetinėse struktūrose, o ne laboratoriniuose preparatuose. Tyrimo objektai buvo patys ląstelių branduoliai (išskirti poliarinių kūnų, blastomerų ir blastocistos paviršiaus ląstelių biopsijos metu).
Stebint genetinę medžiagą tiesiogiai ląstelės branduoliuose procesas pagreitėja, todėl jis tampa „švaresnis“, be išorinių poveikių ir pažeidimų, kurie nėra atmesti gaminant laboratorinius vaistus.
Tačiau yra problemų, kurios rodo neįveikiamas šio metodo ribas. Viena hibridizacija negali „apdengti“ viso chromosomų rinkinio ląstelėse. Paprastai reikalingos dvi ar trys nuoseklios hibridizacijos, leidžiančios ištirti 12-15 chromosomų porų (o žmonėms jų yra 23). Galimybė toliau hibridizuoti DNR grandines palaipsniui mažėja po kiekvienos rehibridizacijos. Tai neleidžia hibridizacijos atlikti „tiek kartų, kiek norima“, kad būtų galima išsamiai analizuoti tą pačią genetinę medžiagą.
FISH – Fluorescent in situ hibridizacijos technika buvo sukurta devintojo dešimtmečio viduryje ir naudojama norint aptikti specifinių DNR sekų buvimą arba nebuvimą chromosomose, taip pat alfa palydovinės DNR, esančios 6 chromosomos centromeroje, CEP6 (6p11. 1-11. 1).
Tai davė reikšmingą poslinkį melanocitinės kilmės onkologinių ligų diagnostikoje, nes buvo atrasti naviko antigenai. Piktybiniame fone nustatoma trijų antigenų mutacija: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) ir CMM1(1p). Šiuo atžvilgiu, ankstyvoje melanomos ir jos pirmtakų diagnostikoje didelę reikšmę turi objektyvios diferencinės diagnostikos galimybė, pagrįsta melanocitinių odos navikų genetinių savybių nustatymu.Branduolyne su normaliu tiriamų genų rinkiniu ir 6 chromosoma , stebimi du RREB1 genai, nuspalvinti raudonai, du MYB genai, geltonai, du CCND1 genai žaliai ir du 6 chromosomos centromerai mėlynai. Diagnostikos tikslais naudojami fluorescenciniai testai.
Reakcijos rezultatų įvertinimas: suskaičiuojamas raudonų, geltonų, žalių ir mėlynų signalų skaičius 30 kiekvieno mėginio branduolių, nustatomi keturi įvairių genetinių sutrikimų variantų parametrai, kuriuose mėginys genetiškai atitinka melanomą. Pavyzdžiui, mėginys atitinka melanomą, jei vidutinis CCND1 geno skaičius viename branduolyje yra ≥2,5. Kitų genų kopijų skaičius vertinamas tuo pačiu principu. Vaistas laikomas FISH teigiamu, jei tenkinama bent viena iš keturių sąlygų. Mėginiai, kurių visi keturi parametrai yra žemiau ribinių verčių, laikomi FISH neigiamais.
Specifinės DNR sekos chromosomose nustatomos biopsijos ar chirurginės medžiagos pjūviuose. Praktiškai FISH reakcija atrodo taip: tiriama medžiaga, turinti DNR melanocitų branduoliuose, yra apdorojama, kad iš dalies sunaikintų jos molekulę, kad būtų sulaužyta dvigrandė struktūra ir taip palengvintas patekimas į norimą sritį. genas. Mėginiai klasifikuojami pagal tai, kur jie yra prijungti prie DNR molekulės. Medžiaga FISH reakcijai klinikinėje praktikoje yra parafino audinių pjūviai, tepinėliai ir atspaudai.
FISH reakcija leidžia aptikti pokyčius, įvykusius DNR molekulėje dėl genų kopijų skaičiaus padidėjimo, genų praradimo, chromosomų skaičiaus pokyčių ir kokybinių pokyčių - genų lokusų judėjimo abiejose tose pačiose. chromosomos ir tarp dviejų chromosomų.
Norint apdoroti duomenis, gautus naudojant FISH reakciją, ir ištirti ryšį tarp trijų tiriamųjų grupių genų kopijų skaičiaus, naudojamas Spearman koreliacijos koeficientas.
Melanomai būdingas kopijų skaičiaus padidėjimas, palyginti su nevus ir displazijos nevus.
Paprastas nevus, palyginti su displaziniu nevus, turi mažiau kopijų skaičiaus anomalijų (t. y. normalesnis kopijų skaičius).
Sprendimų taisyklių sudarymui, leidžiančioms numatyti, ar mėginys priklauso vienai ar kitai klasei (paprastų ir displazinių nevių diferencinė diagnostika), naudojamas „sprendimų medžių“ matematinis aparatas. Šis metodas pasitvirtino praktikoje, o šio metodo naudojimo rezultatus (skirtingai nuo daugelio kitų metodų, tokių kaip neuroniniai tinklai) galima aiškiai interpretuoti kuriant sprendimo taisykles, skirtas atskirti paprastus, displazinius nevus ir melanomą. Pradiniai duomenys visais atvejais buvo keturių genų kopijų numeriai.
Diferencinės diagnostikos sprendimo taisyklės sudarymo užduotis yra padalinta į kelis etapus. Pirmajame etape melanoma ir nevus yra diferencijuojami, neatsižvelgiant į nevus tipą. Kitame etape sukuriama sprendimo taisyklė, skirta atskirti paprastus ir displazinius nevus. Galiausiai paskutiniame etape galima sukurti „sprendimų medį“, kad būtų galima nustatyti displazinio nevus displazijos laipsnį.
Toks nevi klasifikavimo užduoties suskirstymas į pogrupius leidžia pasiekti aukštą prognozių tikslumą kiekviename etape. „Sprendimų medžio“ konstravimo įvesties duomenys yra keturių genų kopijos duomenys pacientams, kuriems diagnozuota melanoma, ir pacientams, kuriems diagnozuota ne melanoma (pacientai, turintys įvairių tipų nevus - paprastą ir displazinį). Kiekvienam pacientui yra duomenų apie 30 ląstelių genų kopijų skaičių.
Taigi, diagnozės numatymo problemą suskaidžius į kelis etapus, galima sukurti labai tikslias sprendimo taisykles, skirtas ne tik atskirti melanomą nuo nevus, bet ir nustatyti nevus tipą bei nuspėti displazijos laipsnį esant displaziniam nevus. Sukonstruoti „sprendimų medžiai“ yra vizualus būdas numatyti diagnozę, remiantis informacija apie genų kopijų skaičių, ir gali būti lengvai naudojamas klinikinėje praktikoje, siekiant atskirti gerybinius, iki piktybinius ir piktybinius odos melanocitinius navikus. Siūlomas papildomas diferencinės diagnostikos metodas yra ypač svarbus, kai išpjaunami milžiniški įgimti pigmentiniai ir displaziniai nevus vaikams, nes tokiems pacientams apsilankius gydymo įstaigose, stebimas didelis diagnostinių klaidų procentas. Aprašyto metodo naudojimo rezultatai yra labai veiksmingi, jį patartina naudoti diagnozuojant pigmentinius odos navikus, ypač pacientams, sergantiems FAMM sindromu.
Invaziniai prenatalinės diagnostikos metodai leidžia ne tik pažvelgti į ateitį ir patikimai prognozuoti, ar dar negimusis kūdikis susidurs su ligomis, susijusiomis su intrauteriniais apsigimimais, bet ir išsiaiškinti įgimtų patologijų prigimtį bei priežastis.
Tačiau bet kokia informacija vertinga tik tuo atveju, jei ji pateikiama laiku. Kalbant apie vaisiaus vystymosi būklę, tyrimo rezultatų gavimo greitis tampa gyvybiškai svarbus.
Todėl FISH metodas, leidžiantis per trumpiausią laiką įvertinti dažniausiai pasitaikančių embriono vystymosi anomalijų buvimą, genetinėje diagnostikoje yra labai paklausus.
FISH yra santrumpa, iššifruojanti chromosomų anomalijų nustatymo technologijos esmę – fluorescencinė in situ hibridizacija – fluorescencinė hibridizacija „namų“ aplinkoje.
Šią techniką praėjusio amžiaus aštuntojo dešimtmečio pabaigoje pasiūlė J. Goll ir M.-L. Pardew, pagrįsta galimybe atkurti nukleorūgščių fragmentų (DNR arba RNR) seką po jų denatūravimo.
Autoriai sukūrė metodą, leidžiantį, naudojant dirbtinai sukurtų žymėtų DNR zondų (zondų) in situ hibridizaciją ir analizei paimtą citogenetinę medžiagą, nustatyti kiekybinius ir kokybinius dominančių chromosomų nuokrypius.
Praėjusio amžiaus pabaigoje sėkmingai panaudojus fluorescencinius dažus DNR zondams dažyti, FISH metodas gavo savo pavadinimą ir nuo to laiko buvo intensyviai tobulinamas ir įvairinamas.
Šiuolaikinės FISH analizės technikos siekia užtikrinti, kad vienos hibridizacijos procedūros metu būtų galima gauti kuo išsamesnę informaciją pasirinktai genetinės medžiagos analizei.
Faktas yra tas, kad po hibridizacijos galima įvertinti tik ribotą tos pačios citogenetinės medžiagos chromosomų skaičių. Gebėjimas pakartotinai hibridizuoti DNR grandines retkarčiais mažėja.
Todėl šiuo metu genetinėje diagnostikoje in situ hibridizacijos metodas dažniausiai naudojamas norint greitai atsakyti į klausimus apie esamas, dažniausiai pasitaikančias aneuploidijas 21, 13, 18 chromosomose, taip pat lytinėse X, Y chromosomose.
FISH analizei tinka bet kokie audinių ar ląstelių mėginiai.
Prenatalinėje diagnozėje tai gali būti kraujo mėginiai, ejakuliatas arba.
Rezultatų gavimo greitį užtikrina tai, kad ląstelių, gautų iš analizei paimtos medžiagos, nereikia kultivuoti maistinėse terpėse, siekiant jų pasiskirstymo iki reikiamo skaičiaus, kaip taikant klasikinį kariotipavimo metodą.
Pasirinkta medžiaga yra specialiai paruošiama, kad būtų gauta koncentruota gryna ląstelių suspensija. Toliau tiriamo mėginio DNR mėginio ir natūralios DNR denatūravimo procesas atliekamas iki vienos grandinės būsenos ir hibridizacijos procesas, kurio metu spalvoti DNR zondai inkubuojami su mėginio DNR.
Taip vizualizuojamos norimos (spalvotos) chromosomos ląstelėje, įvertinamas jų skaičius, genetinių struktūrų sandara ir kt. Specialaus fluorescencinio mikroskopo okuliaras leidžia ištirti švytinčias DNR grandines.
Šiuo metu FISH metodas plačiai naudojamas diagnostikos tikslais nustatant genetines ligas, chromosomų aberacijas reprodukcinėje medicinoje, onkologijoje, hematologijoje, biologinėje dozimetrijoje ir kt.
Kaip naudojama FISH vaisiaus diagnostika?
Reprodukcinės medicinos srityje FISH metodas, kaip vienas iš molekulinės citogenetinės diagnostikos metodų, taikomas visuose etapuose.
- pora.
Norint nustatyti būsimų tėvų kariotipą, jis atliekamas vieną kartą, nes žmogaus genomas visą gyvenimą išlieka nepakitęs.
Poros kariotipų nustatymas prieš pastojant vaiką padės nustatyti, ar tėvai yra genetinių patologijų, kurios yra paveldimos, įskaitant ir paslėptas, nešiotojai. Taip pat bendra būsimos mamos ir tėčio genomo būklė, kuri gali turėti įtakos sėkmei susilaukti kūdikio ir išnešioti nėštumą iki galo.
Diagnostika FISH metodu šiuo atveju dažnai veikia kaip papildomas tyrimas prie klasikinio kariotipų nustatymo, kai tiriamojoje medžiagoje (tėvų veniniame kraujyje) nustatomos chromosominės patologijos, jei yra įtarimas dėl mozaikiškumo.
Papildomas tyrimas FISH metodu patikimai patvirtins arba paneigs įtariamos anomalijos buvimą būsimų tėvų ląstelėse.
- Ejakuliato tyrimas.
Nurodytas sunkumams, susijusiems su reprodukcija poroje dėl „vyriško faktoriaus“. Spermos analizė FISH metodu leis įvertinti nenormalių spermatozoidų kiekį chromosomų rinkinyje, taip pat nustatyti, ar vyras yra su seksu susijusių genetinių ligų nešiotojas.
Jei pora vėliau pastojo naudojant IVF, FISH ejakuliato analizė leis atrinkti aukščiausios kokybės spermatozoidus kiaušiniui apvaisinti.
- Su IVF.
Priešimplantacinei genetinei diagnostikai (PGD). Remiantis tėvų kariotipo tyrimų rezultatais, nustatomos galimos chromosominės ir genetinės aberacijos, kurios gali būti perduotos embrionui.
Dėl FISH diagnostikos galimybių per kelias valandas prieš perkėlimą į gimdos ertmę galima atlikti gautų embrionų genetinės sveikatos tyrimą, kad būtų užtikrintas nėštumas su žinomu sveiku vaisiumi.
Be to, PGD galimybės leidžia nustatyti embrionų lytį, taigi, jei reikia, „užsakyti“ negimusio vaiko lytį.
- Nėštumo metu.
Prenatalinėje diagnostikoje: vaisiaus ląstelių, gautų taikant chorioninio gaurelio mėginių ėmimą, amniocentezę ar kordocentezę FISH metodu, analizę medicinos centrai dažniausiai siūlo greta klasikinio vaisiaus ląstelių genetinio tyrimo (kariotipo nustatymo).
Šis metodas yra būtinas, kai reikia greitai gauti atsakymą apie dažniausiai pasitaikančius vaisiaus chromosomų defektus: trisomiją 21, 18, 13 chromosomose, aberacijas X ir Y chromosomose, kartais ir 14 chromosomų aneuploidijas (arba 17), 15, 16.
FISH analizės privalumai
Genetinės analizės atlikimas naudojant FISH metodą, nors ir šiandien išlieka pagalbiniu chromosomų patologijų diagnozavimo metodu, jo įgyvendinimo galimybes lemia neginčijami pranašumai:
- ištirtų chromosomų rezultatų gavimo greitis yra per kelias valandas - ne daugiau kaip 72.
Tai gali būti svarbu, jei nėštumo likimas priklauso nuo genetikų diagnozės;
- didelis FISH metodo jautrumas ir patikimumas - galima sėkminga analizė ant nežymaus biomedžiagos kiekio - užtenka vienos ląstelės, rezultatų paklaida ne didesnė kaip 0,5%.
Tai gali būti svarbu, kai ląstelių skaičius pradiniame pavyzdyje yra ribotas, pavyzdžiui, kai jų dalijimasis prastas.
- galimybė atlikti diagnostiką FISH metodu bet kuriame nėštumo etape (nuo 7 savaitės) ir naudojant bet kokį biologinį mėginį: choriono fragmentus, vaisiaus vandenis, vaisiaus kraują ir kt.
Kur galiu nustatyti diagnozę FISH metodu?
Maskvoje vaisiaus chromosomų anomalijų prenatalinės diagnostikos FISH metodas naudojamas šiuose medicinos centruose:
Paprastai klinikose už papildomą mokestį siūlomos FISH diagnostikos paslaugos, kaip dalis viso vaisiaus kariotipų nustatymo, taikant invazinę intervenciją. Ir, kaip taisyklė, būsimi tėvai sutinka mokėti papildomai, nes FISH metodo dėka vos per porą dienų galite sužinoti svarbiausius dalykus apie savo mažylį
Galva
"Onkogenetika"
Žusina
Julija Gennadievna
Baigė Voronežo valstybinio medicinos universiteto Pediatrijos fakultetą. N.N. Burdenko 2014 m.
2015 m. - terapijos praktika VSMU Fakultetinės terapijos katedroje. N.N. Burdenko.
2015 - sertifikavimo kursas pagal specialybę „Hematologija“ Hematologijos tyrimų centre Maskvoje.
2015-2016 – terapeutas VGKBSMP Nr.1.
2016 m. - patvirtinta medicinos mokslų kandidato disertacijos tema „Ligos klinikinės eigos ir prognozių tyrimas pacientams, sergantiems lėtine obstrukcine plaučių liga su aneminiu sindromu“. Daugiau nei 10 publikuotų darbų bendraautoris. Mokslinių ir praktinių genetikos ir onkologijos konferencijų dalyvis.
2017 - išplėstinis mokymo kursas tema: „Genetinių tyrimų rezultatų interpretavimas pacientams, sergantiems paveldimomis ligomis“.
Nuo 2017 m. rezidentūra pagal specialybę „Genetika“ RMANPO pagrindu.
Galva
"Genetika"
Kanivets
Ilja Viačeslavovičius
Kanivets Ilja Viačeslavovičius, genetikas, medicinos mokslų kandidatas, medicinos genetikos centro Genomed genetikos skyriaus vadovas. Rusijos medicinos tęstinio profesinio mokymo akademijos Medicininės genetikos katedros asistentas.
2009 m. baigė Maskvos valstybinio medicinos ir odontologijos universiteto Medicinos fakultetą, o 2011 m. – to paties universiteto Medicininės genetikos katedros specialybės „Genetika“ rezidentūrą. 2017 metais apgynė disertaciją medicinos mokslų kandidato moksliniam laipsniui gauti tema: DNR sekcijų (CNV) kopijų skaičiaus variacijų molekulinė diagnostika vaikams, turintiems apsigimimų, fenotipinių anomalijų ir/ar protinį atsilikimą naudojant didelio tankio SNP. oligonukleotidų mikrogardelės“.
2011-2017 metais dirbo genetiku pavadintoje Vaikų klinikinėje ligoninėje. N.F. Filatovas, Federalinės valstybės biudžetinės įstaigos „Medicininių genetinių tyrimų centro“ mokslinis konsultacinis skyrius. Nuo 2014 m. iki dabar yra medicinos centro „Genomed“ genetikos skyriaus vedėjas.
Pagrindinės veiklos sritys: sergančiųjų paveldimomis ligomis ir įgimtais apsigimimais, epilepsija diagnostika ir gydymas, medicininis ir genetinis šeimų, kuriose gimė vaikas su paveldima patologija ar vystymosi defektais, konsultavimas, prenatalinė diagnostika. Konsultacijos metu analizuojami klinikiniai duomenys ir genealogija, siekiant nustatyti klinikinę hipotezę ir būtiną genetinių tyrimų kiekį. Remiantis apklausos rezultatais, duomenys interpretuojami ir gauta informacija paaiškinama konsultantams.
Jis yra vienas iš projekto „Genetikos mokykla“ įkūrėjų. Reguliariai skaito pranešimus konferencijose. Skaito paskaitas gydytojams genetikams, neurologams ir akušeriams-ginekologams, taip pat sergančiųjų paveldimomis ligomis tėvams. Jis yra daugiau nei 20 straipsnių ir recenzijų Rusijos ir užsienio žurnaluose autorius ir bendraautoris.
Profesinių interesų sritis – šiuolaikinių genomo masto tyrimų įgyvendinimas klinikinėje praktikoje ir jų rezultatų interpretavimas.
Priėmimo laikas: trečiadienis, penktadienis 16-19 val
Galva
"Neurologija"
Šarkovas
Artemas Aleksejevičius
Šarkovas Artiomas Aleksejevičius– neurologas, epileptologas
2012 m. studijavo pagal tarptautinę programą „Rytų medicina“ Daegu Haanu universitete Pietų Korėjoje.
Nuo 2012 m. – dalyvavimas organizuojant duomenų bazę ir genetinių testų interpretavimo algoritmą xGenCloud (https://www.xgencloud.com/, projekto vadovas – Igoris Ugarovas)
2013 m. jis baigė Rusijos nacionalinio mokslinių tyrimų medicinos universiteto Pediatrijos fakultetą, pavadintą N. I. Pirogovas.
2013–2015 metais studijavo neurologijos klinikinėje rezidentūroje Federalinėje valstybės biudžetinėje įstaigoje „Neurologijos mokslinis centras“.
Nuo 2015 metų dirba neurologu ir tyrėju akademiko Yu.E. vardu pavadintame Vaikų ligų klinikiniame institute. Veltishchev GBOU VPO RNIMU im. N.I. Pirogovas. Jis taip pat dirba neurologu ir gydytoju Epileptologijos ir neurologijos centro klinikose pavadintose vaizdo-EEG stebėjimo laboratorijoje. A.A. Kazaryanas“ ir „Epilepsijos centras“.
2015 m. baigė mokymus Italijoje mokykloje „2nd International Residential Course on Drug Resistant Epilepsies, ILAE, 2015“.
2015 m. išplėstinis mokymas - „Klinikinė ir molekulinė genetika gydytojams“, RDKB, RUSNANO.
2016 m. išplėstinis mokymas - „Molekulinės genetikos pagrindai“, vadovaujant bioinformatikui, dr. Konovalova F.A.
Nuo 2016 m. - Genomed laboratorijos neurologinės krypties vadovas.
2016 m. baigė mokymus Italijoje mokykloje „San Servolo international advanced course: Brain Exploration and Epilepsy Surger, ILAE, 2016“.
2016 metais išplėstiniai mokymai - „Inovatyvios genetinės technologijos gydytojams“, „Laboratorinės medicinos institutas“.
2017 m. – mokykla „NGS in Medical Genetics 2017“, Maskvos valstybinis tyrimų centras
Šiuo metu atlieka mokslinius tyrimus epilepsijos genetikos srityje, vadovaujant profesoriui, medicinos mokslų daktarui. Belousova E.D. ir profesorius, medicinos mokslų daktaras. Dadali E.L.
Patvirtinta medicinos mokslų kandidato disertacijos tema „Ankstyvųjų epilepsinių encefalopatijų monogeninių variantų klinikinės ir genetinės charakteristikos“.
Pagrindinės veiklos sritys – vaikų ir suaugusiųjų epilepsijos diagnostika ir gydymas. Siaura specializacija – epilepsijos chirurginis gydymas, epilepsijos genetika. Neurogenetika.
Mokslinės publikacijos
Šarkovas A., Šarkova I., Golovtejevas A., Ugarovas I. „Diferencinės diagnostikos optimizavimas ir genetinių tyrimų rezultatų interpretavimas naudojant XGenCloud ekspertų sistemą kai kurioms epilepsijos formoms. Medicinos genetika, Nr.4, 2015, p. 41.
*
Šarkovas A.A., Vorobjovas A.N., Troickis A.A., Savkina I.S., Dorofejeva M.Yu., Melikyanas A.G., Golovtejevas A.L. "Epilepsijos operacija dėl daugiažidininių smegenų pažeidimų vaikams, sergantiems gumbų skleroze". XIV Rusijos kongreso „NOVATYVIOS TECHNOLOGIJOS PEDIATRIJOJE IR VAIKŲ CHIRURGIJOJE“ tezės. Rusijos perinatologijos ir pediatrijos biuletenis, 4, 2015. - p.226-227.
*
Dadali E.L., Belousova E.D., Šarkovas A.A. "Molekuliniai genetiniai metodai diagnozuojant monogeninę idiopatinę ir simptominę epilepsiją." XIV Rusijos kongreso baigiamasis darbas „NOVATYVIOS TECHNOLOGIJOS PEDIATRIJOJE IR VAIKŲ CHIRURGIJOJE“. Rusijos perinatologijos ir pediatrijos biuletenis, 4, 2015. - p.221.
*
Sharkov A.A., Dadali E.L., Sharkova I.V. „Retas ankstyvos 2 tipo epilepsinės encefalopatijos variantas, kurį sukelia CDKL5 geno mutacijos vyrams. Konferencija „Epileptologija neuromokslų sistemoje“. Konferencijos medžiagos rinkinys: / Redagavo: prof. Neznanova N.G., prof. Michailova V.A. Sankt Peterburgas: 2015. – p. 210-212.
*
Dadali E.L., Sharkov A.A., Kanivets I.V., Gundorova P., Fominykh V.V., Sharkova I.V. Troickis A.A., Golovtejevas A.L., Polyakovas A.V. Naujas alelinis 3 tipo miokloninės epilepsijos variantas, sukeltas KCTD7 geno mutacijų // Medicinos genetika. - 2015. - T. 14. - Nr. 9. - p. 44-47
*
Dadali E.L., Sharkova I.V., Sharkov A.A., Akimova I.A. „Klinikinės ir genetinės savybės bei šiuolaikiniai paveldimų epilepsijų diagnostikos metodai“. Medžiagos rinkinys „Molekulinės biologinės technologijos medicinos praktikoje“ / Red. Narys korespondentas RAIN A.B. Maslennikova.- Klausimas. 24.- Novosibirskas: Akademizdat, 2016.- 262: p. 52-63
*
Belousova E.D., Dorofeeva M.Yu., Sharkov A.A. Epilepsija sergant gumbų skleroze. „Smegenų ligos, medicininiai ir socialiniai aspektai“, redagavo Gusev E.I., Gekht A.B., Maskva; 2016 m.; p.391-399
*
Dadali E.L., Sharkov A.A., Sharkova I.V., Kanivets I.V., Konovalov F.A., Akimova I.A. Paveldimos ligos ir sindromai, lydimi febrilinių priepuolių: klinikinės ir genetinės savybės bei diagnostikos metodai. //Russian Journal of Child Neurology.- T. 11.- Nr.2, p. 33- 41. doi: 10.17650/ 2073-8803-2016-11-2-33-41
*
Sharkov A.A., Konovalov F.A., Sharkova I.V., Belousova E.D., Dadali E.L. Molekuliniai genetiniai epilepsinės encefalopatijos diagnostikos metodai. Santraukų rinkinys „VI BALTIJOS VAIKŲ NEUROLOGIJAS KONGRESAS“ / Redagavo profesorė Guzeva V.I. Sankt Peterburgas, 2016, p. 391
*
Vaistams atsparios epilepsijos hemisferotomija vaikams, patyrusiems dvišalį smegenų pažeidimą. Zubkova N.S., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Troitsky A.A., Sharkov A.A., Golovteev A.L. Santraukų rinkinys „VI BALTIJOS VAIKŲ NEUROLOGIJAS KONGRESAS“ / Redagavo profesorė Guzeva V.I. Sankt Peterburgas, 2016, p. 157.
*
*
Straipsnis: Ankstyvųjų epilepsinių encefalopatijų genetika ir diferencijuotas gydymas. A.A. Šarkovas*, I.V. Šarkova, E.D. Belousova, E.L. Taip jie tai padarė. Neurologijos ir psichiatrijos žurnalas, 2016 m. 9; t. 2doi: 10.17116/jnevro 20161169267-73
*
Golovtejevas A.L., Šarkovas A.A., Troitskis A.A., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Kopachev D.N., Dorofejeva M.Yu. "Chirurginis epilepsijos gydymas gumbų skleroze", redagavo Dorofeeva M.Yu., Maskva; 2017 m.; p.274
*
Tarptautinės lygos prieš epilepsiją naujos tarptautinės epilepsijos ir epilepsijos priepuolių klasifikacijos. Neurologijos ir psichiatrijos žurnalas. C.C. Korsakovas. 2017. T. 117. Nr. 7. P. 99-106
Galva
"Prenatalinė diagnozė"
Kijevas
Julija Kirilovna
2011 m. ji baigė Maskvos valstybinį medicinos ir odontologijos universitetą. A.I. Evdokimova įgijo bendrosios medicinos laipsnį.Ji studijavo rezidentūrą to paties universiteto Medicininės genetikos katedroje, įgijusi genetikos specialybę.
2015 metais baigė akušerijos ir ginekologijos praktiką Federalinės valstybinės biudžetinės aukštojo profesinio mokymo įstaigos „MSUPP“ Gydytojų kvalifikacijos kėlimo medicinos institute.
Nuo 2013 metų konsultacijas veda Valstybės biudžetinėje įstaigoje „Šeimos planavimo ir reprodukcijos centre“ prie Sveikatos apsaugos departamento.
Nuo 2017 m. vadovauja „Genomed“ laboratorijos „Prenatalinės diagnostikos“ krypčiai.
Reguliariai rengia pranešimus konferencijose ir seminaruose. Skaito paskaitas įvairiems gydytojams specialistams reprodukcijos ir prenatalinės diagnostikos srityje
Teikia medicinines ir genetines konsultacijas nėščiosioms prenatalinės diagnostikos klausimais, siekiant užkirsti kelią vaikų su įgimtais apsigimimais gimimui, taip pat šeimoms, turinčioms galimai paveldimų ar įgimtų patologijų. Interpretuoja gautus DNR diagnostikos rezultatus.
SPECIALISTAI
Latypovas
Artūras Šamilevičius
Latypovas Arturas Šamilevičius yra aukščiausios kvalifikacinės kategorijos gydytojas genetikas.
1976 m. baigęs Kazanės valstybinio medicinos instituto medicinos fakultetą, daug metų dirbo medicinos genetikos kabinete gydytoju, vėliau Respublikinės Tatarstano ligoninės Medicinos-genetinio centro vadovu. Tatarstano Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos vyriausiasis specialistas ir Kazanės medicinos universiteto katedrų dėstytojas.
Daugiau nei 20 mokslinių straipsnių reprodukcinės ir biocheminės genetikos problemomis autorius, daugelio šalies ir tarptautinių kongresų bei konferencijų medicinos genetikos problemomis dalyvis. Jis į praktinį centro darbą įdiegė nėščiųjų ir naujagimių masinės patikros dėl paveldimų ligų metodus, atliko tūkstančius invazinių procedūrų dėl įtariamų paveldimų vaisiaus ligų įvairiais nėštumo etapais.
Nuo 2012 m. ji dirba Medicininės genetikos katedroje su prenatalinės diagnostikos kursu Rusijos magistrantūros akademijoje.
Mokslinių interesų sritis: vaikų medžiagų apykaitos ligos, prenatalinė diagnostika.
Priėmimo laikas: trečiadienį 12-15 val., šeštadienį 10-14 valGydytojai priimami pagal susitarimą.
Genetikas
Gabelko
Denisas Igorevičius
2009 m. baigė vardo KSMU Medicinos fakultetą. S. V. Kurašova (specialybė „Bendroji medicina“).
Stažavosi Federalinės sveikatos ir socialinės plėtros agentūros Sankt Peterburgo medicinos magistrantūros akademijoje (specialybė „Genetika“).
Stažuotė terapijoje. Pirminis perkvalifikavimas pagal specialybę „Ultragarsinė diagnostika“. Nuo 2016 m. yra Fundamentalios medicinos ir biologijos instituto Pagrindinių klinikinės medicinos principų katedros darbuotojas.
Profesinių interesų sritis: prenatalinė diagnostika, šiuolaikinių patikros ir diagnostikos metodų taikymas nustatant genetinę vaisiaus patologiją. Paveldimų ligų pasikartojimo šeimoje rizikos nustatymas.
Mokslinių ir praktinių genetikos ir akušerijos-ginekologijos konferencijų dalyvė.
Darbo patirtis 5 metai.
Konsultacija pagal susitarimąGydytojai priimami pagal susitarimą.
Genetikas
Grišina
Kristina Aleksandrovna
2015 m. ji baigė Maskvos valstybinį medicinos ir odontologijos universitetą ir įgijo bendrosios medicinos laipsnį. Tais pačiais metais ji įstojo į rezidentūrą pagal specialybę 08/30/30 „Genetika“ Federalinėje valstybės biudžetinėje įstaigoje „Medicininių genetinių tyrimų centras“.
Kompleksiškai paveldimų ligų molekulinės genetikos laboratorijoje (vadovas dr. A.V. Karpukhin) ji buvo įdarbinta mokslinio tyrimo asistente 2015 m. Nuo 2015 metų rugsėjo ji perkelta į mokslinės asistentės pareigas. Jis yra daugiau nei 10 straipsnių ir santraukų klinikinės genetikos, onkogenetikos ir molekulinės onkologijos temomis Rusijos ir užsienio žurnaluose autorius ir bendraautoris. Nuolatinis medicinos genetikos konferencijų dalyvis.
Mokslinių ir praktinių interesų sritis: pacientų, sergančių paveldima sindromine ir daugiafaktorine patologija, medicininis ir genetinis konsultavimas.
Gydytojo genetiko konsultacija leidžia atsakyti į šiuos klausimus:
Ar vaiko simptomai yra paveldimos ligos požymiai?
kokių tyrimų reikia norint nustatyti priežastį
nustatant tikslią prognozę
rekomendacijos dėl prenatalinės diagnostikos atlikimo ir rezultatų vertinimo
viskas, ką reikia žinoti planuojant šeimą
konsultacija planuojant IVF
konsultacijos vietoje ir internetu
dalyvavo mokslinėje ir praktinėje mokykloje „Inovatyvios genetinės technologijos gydytojams: taikymas klinikinėje praktikoje“, Europos žmogaus genetikos draugijos (ESHG) konferencijoje ir kitose žmogaus genetikai skirtose konferencijose.
Teikia medicinines ir genetines konsultacijas šeimoms, turinčioms įtariamų paveldimų ar įgimtų patologijų, įskaitant monogenines ligas ir chromosomų anomalijas, nustato indikacijas laboratoriniams genetiniams tyrimams, interpretuoja DNR diagnostikos rezultatus. Konsultuoja nėščiąsias dėl prenatalinės diagnostikos, kad negimtų vaikai su įgimtais apsigimimais.
Genetikas, akušeris-ginekologas, medicinos mokslų kandidatas
Kudrjavceva
Elena Vladimirovna
Genetikas, akušeris-ginekologas, medicinos mokslų kandidatas.
Reprodukcinio konsultavimo ir paveldimos patologijos specialistas.
2005 m. baigė Uralo valstybinę medicinos akademiją.
Akušerijos ir ginekologijos rezidentūra
Praktika pagal specialybę "Genetika"
Profesionalus perkvalifikavimas pagal specialybę „Ultragarsinė diagnostika“
Veikla:
- Nevaisingumas ir persileidimas Vasilisa Jurievna
Ji yra baigusi Nižnij Novgorodo valstybinės medicinos akademijos Medicinos fakultetą (specialybė „Bendroji medicina“). Ji baigė klinikinę rezidentūrą FBGNU „MGNC“, įgijusi genetikos laipsnį. 2014 metais ji atliko praktiką Motinystės ir vaikystės klinikoje (IRCCS materno infantile Burlo Garofolo, Triestas, Italija).
Nuo 2016 m. dirba gydytoju konsultantu Genomed LLC.
Nuolat dalyvauja mokslinėse ir praktinėse genetikos konferencijose.
Pagrindinės veiklos kryptys: Konsultavimas genetinių ligų klinikinės ir laboratorinės diagnostikos bei rezultatų interpretavimo klausimais. Pacientų ir jų šeimų, kuriems įtariama paveldima patologija, gydymas. Konsultavimas planuojant nėštumą, taip pat nėštumo metu, prenatalinės diagnostikos klausimais, siekiant išvengti įgimtų patologijų turinčių vaikų gimimo.
Šiuolaikinis citogenetinės analizės metodas, leidžiantis nustatyti kokybinius ir kiekybinius chromosomų pokyčius (įskaitant translokacijas ir mikrodelecijas), naudojamas piktybinių kraujo ligų ir solidinių navikų diferencinei diagnostikai.
Sinonimai rusų kalba
Fluorescencinė in situ hibridizacija
ŽUVŲ analizė
Anglų kalbos sinonimai
Fluorescencija savo vietoje hibridizacija
Tyrimo metodas
Fluorescencinė in situ hibridizacija.
Kokia biomedžiaga gali būti naudojama tyrimams?
Audinių mėginys, audinių mėginys parafino bloke.
Kaip tinkamai pasiruošti tyrimams?
Jokio pasiruošimo nereikia.
Bendra informacija apie tyrimą
Fluorescencinė in situ hibridizacija (FISH, iš anglų kalbos fluorescencija in- situ hibridizacija) yra vienas moderniausių chromosomų anomalijų diagnostikos metodų. Jis pagrįstas fluorescenciniu būdu pažymėtų DNR zondų naudojimu. DNR zondai – tai specialiai susintetinti DNR fragmentai, kurių seka papildo tiriamų aberrantinių chromosomų DNR seką. Taigi DNR tyrimai skiriasi sudėtimi: skirtingiems chromosomų anomalijams nustatyti naudojami skirtingi, specifiniai DNR tyrimai. DNR zondai taip pat skiriasi dydžiu: vieni gali būti nukreipti į visą chromosomą, kiti į tam tikrą lokusą.
Hibridizacijos proceso metu, jei tiriamame mėginyje yra aberrantinių chromosomų, jos prisijungia prie DNR zondo, kuris, tiriant fluorescenciniu mikroskopu, nustatomas kaip fluorescencinis signalas (teigiamas FISH tyrimo rezultatas). Nesant aberrantinių chromosomų, nesurišti DNR zondai yra „išplaunami“ reakcijos metu, o tai, tiriant fluorescenciniu mikroskopu, apibrėžiama kaip fluorescencinio signalo nebuvimas (neigiamas FISH tyrimo rezultatas). Metodas leidžia įvertinti ne tik fluorescencinio signalo buvimą, bet ir jo intensyvumą bei lokalizaciją. Taigi FISH testas yra ne tik kokybinis, bet ir kiekybinis metodas.
FISH testas turi daug privalumų, palyginti su kitais citogenetiniais metodais. Visų pirma, FISH tyrimai gali būti taikomi tiek metafaziniams, tiek tarpfaziniams branduoliams, tai yra, nesidalijančioms ląstelėms. Tai yra pagrindinis FISH pranašumas, palyginti su klasikiniais kariotipų nustatymo metodais (pvz., Romanowsky-Giemsa chromosomų dažymu), kurie taikomi tik metafaziniams branduoliams. Dėl to FISH yra tikslesnis būdas nustatyti chromosomų anomalijas audiniuose, kurių proliferacinis aktyvumas yra mažas, įskaitant solidinius navikus.
Kadangi FISH tyrime naudojama stabili tarpfazių branduolių DNR, tyrimui gali būti naudojamos įvairios biomedžiagos – smulkaus kampo aspiracinės biopsijos aspiratai, tepinėliai, kaulų čiulpų aspiratai, biopsijos mėginiai ir, svarbiausia, išsaugoti audinių fragmentai, pavyzdžiui, histologiniai blokai. Pavyzdžiui, FISH tyrimas gali būti sėkmingai atliktas pakartotiniams mėginiams, paimtiems iš histologinio krūties biopsijos bloko, patvirtinant krūties adenokarcinomos diagnozę ir būtinybę nustatyti naviko HER2/neu būklę. Ypač pabrėžtina, kad šiuo metu FISH tyrimas rekomenduojamas kaip patvirtinantis tyrimas, kai gaunamas neapibrėžtas imunohistocheminio naviko tyrimo rezultatas naviko žymeniui HER2/neu (IHC 2+).
Kitas FISH privalumas yra jo gebėjimas aptikti mikrodelecijas, kurios neaptinkamos klasikiniu kariotipavimu ar PGR. Tai ypač svarbu, jei įtariamas DiGeorge sindromas ir velokardiofacialinis sindromas.
FISH testas plačiai naudojamas diferencinei piktybinių ligų diagnostikai, pirmiausia onkohematologijoje. Chromosomų anomalijos kartu su klinikiniu vaizdu ir imunohistocheminių tyrimų duomenimis yra limfo- ir mieloproliferacinių ligų klasifikavimo, gydymo taktikos nustatymo ir prognozės pagrindas. Klasikiniai pavyzdžiai yra lėtinė mieloidinė leukemija – t (9;22), ūminė promielocitinė leukemija – t (15;17), lėtinė limfoleukemija – trisomija 12 ir kt. Kalbant apie solidinius navikus, FISH tyrimai dažniausiai naudojami diagnozuojant krūties vėžį, šlapimo pūslės vėžį, gaubtinės žarnos vėžį, neuroblastomą, retinoblastomą ir kt.
FISH tyrimas taip pat gali būti naudojamas prenatalinei ir preimplantacinei diagnostikai.
FISH tyrimas dažnai atliekamas kartu su kitais molekuliniais ir citogenetiniais diagnostikos metodais. Šio tyrimo rezultatas vertinamas kartu su papildomų laboratorinių ir instrumentinių duomenų rezultatais.
Kam naudojamas tyrimas?
- Piktybinių ligų (kraujo ir kietųjų organų) diferencinei diagnostikai.
Kada numatytas tyrimas?
- Jei įtariama piktybinė kraujo liga arba solidiniai navikai, kurių gydymo taktika ir prognozė priklauso nuo naviko klono chromosomų sudėties.
Ką reiškia rezultatai?
Teigiamas rezultatas:
- Aberrantinių chromosomų buvimas tiriamajame mėginyje.
Neigiamas rezultatas:
- Aberrantinių chromosomų nebuvimas tiriamame mėginyje.
Kas gali turėti įtakos rezultatui?
- Aberrantinių chromosomų skaičius.
- Imunohistocheminis klinikinės medžiagos tyrimas (naudojant 1 antikūną)
- Imunohistocheminis klinikinės medžiagos tyrimas (naudojant 4 ar daugiau antikūnų)
- Naviko HER2 būklės nustatymas FISH
- HER2 naviko būklės nustatymas CISH metodu
Kas užsako tyrimą?
Onkologas, pediatras, akušeris-ginekologas, genetikas.
Literatūra
- Wan TS, Ma ES. Molekulinė citogenetika: nepakeičiama vėžio diagnostikos priemonė. Anticancer Res. 2005 liepa-rugpjūtis;25(4):2979-83.
- Kolialexi A, Tsangaris GT, Kitsiou S, Kanavakis E, Mavrou A. Citogenetinių ir molekulinių citogenetinių tyrimų poveikis hematologinėms piktybinėms ligoms. Chang Gung Med J., 2012 m. kovas-balandis;35(2):96-110.
- Mühlmann M. Molekulinė citogenetika metafazėse ir tarpfazinėse ląstelėse vėžio ir genetiniams tyrimams, diagnostikai ir prognozėms. Naudojimas audinių sekcijose ir ląstelių suspensijose. Genet Mol Res. 2002 birželio 30 d.;1(2):117-27.