FISH הוא אחד ה"כלים" המדהימים ביותר של הביולוגיה המולקולרית במאה ה-21. באבחון טרום השרשה, טכניקת המחקר FISH משמשת לאיתור הפרעות כרומוזומליות או הפרעות בזיווג כרומוזומים בתאי העובר שזה עתה הושג בהפריה חוץ גופית (IVF). אם לא נמצאו חריגות או סימנים לאנופלואידיה (הפרעות זיווג, חוסר בזוגות כרומוזומים), אזי העובר ה"מלאכותי" נחשב בר-קיימא. ניתן להשתיל אותו ברחם של אם לעתיד.
FISH גם מאפשר להתחקות אחר מאפיינים מיניים במערך הכרומוזומים של העובר. זה מאפשר לקבוע את מין הילד שטרם נולד עוד לפני תחילת ההיריון בפועל (אם ניקח בחשבון את זה כתחילת ההשתלה של עובר שהרה חוץ-גופו לתוך הרחם).
מה זה FISH?
הקיצור מייצג: Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung, או הכלאה fluorescent in-situ. התמליל, ככל הנראה, אינו אומר לקורא הנבער דבר. לכן, ננתח את המושג המורכב בחלקים, ונשאיר את ה"in-situ" הלא מתורגם לסוף.
הַכלָאָה
בביולוגיה מולקולרית יש למונח הזה משמעות מאוד מיוחדת, שאין לה שום קשר להצלבת מינים בביולוגיה "רגילה".
הכלאה היא טכניקה גנטית מולקולרית המשמשת להערכת מצב ה-DNA וה-RNA של התאים הנחקרים. הוא מבוסס על חיבור של שרשראות בודדות של חומצות גרעין למולקולה אחת. לפיכך, נבדקת ההשלמה (התכתבות הדדית) של מולקולות או שבריהן זו לזו. עם השלמה מלאה, השרשראות משולבות בקלות ובמהירות למולקולה משותפת. אסוציאציה איטית מעידה על חוסר השלמה מספקת. אי-ההשלמה של השרשראות נובעת בדיוק ממומים כרומוזומליים (הפרות בסדר סידור הכרומוזומים באזורים מסוימים), כרומוזומים לא מזווגים או היעדר כמה זוגות.
ה"כלי" למדידת השלמה הוא הטמפרטורה שבה גדילי DNA מתכלאים למולקולה משותפת. כדי לעשות זאת, תחילה עליך לחמם את תכשיר חומצת הגרעין, ולאחר מכן, לאחר ערבובו עם תכשיר מחומם אחר, לקרר אותו. בחימום נעלמים קשרי מימן בין שרשראות DNA או RNA, נוצרים שברי מולקולות חד-גדיליים. תכשירים מעורבים של שני DNA או RNA (או DNA - RNA) מקוררים. לאחר קירור, קשרי מימן בין בסיסים משלימים משוחזרים במהירות, נוצרת מולקולת DNA היברידית אחת (RNA או DNA - RNA). עם חוסר השלמה, התהליך נמשך זמן רב יותר, שברים לא משלימים נשארים לא מחוברים. לכן, ככל שטמפרטורת ההכלאה גבוהה יותר, כך המבנה הכרומוזומלי של התאים הרמוני ומתוקן יותר. ככל שהטמפרטורה נמוכה יותר, כך יותר חריגות בכרומוזומים. בהתבסס על ניתוח של שאריות לא משלימות, ניתן לזהות חריגות ספציפיות או אזורים של אנופלואידיות.
תיוג פלורסנטי
כדי לנתח את ההשלמה של מולקולת DNA (או RNA) הכלאה, נעשה שימוש בבדיקות גנטיות (או בדיקות DNA) מיוחדות, אשר, כמובן, גם מעט מן המשותף עם שמותיהם המשמשים, למשל, בניתוח.
בדיקות גנטיות מסונתזות ומסומנות במיוחד DNA חד-גדילי (רק לעיתים רחוקות RNA) עם תכונות משלימות קבועות מראש. כשהכלאה, הם מתמזגים עם שברים גנטיים מסוימים, ובכך מאשרים את ההשלמה שלהם. מיקומם של הגשושיות במולקולה המוכלאה מעיד על המבנה התקין או הפגום של החומר הכרומוזומלי המקורי שממנו מורכב "מבנה מלאכותי" זה.
בדיקות גנטיות מסומנות, במיוחד, בחומרים זוהרים (פלורסנטים), מה שהופך אותם לנראים מתחת לעדשת מיקרוסקופ פלואורסצנטי מיוחד.
השימוש בצבעים שונים עבור מספר בדיקות מאפשר ניתוח בו-זמנית של מבנים גנטיים שונים, למשל, לזהות אזורי כרומוזומים עם שני גנים המונחים זה על זה וחריגות אחרות.
נכון לעכשיו, בעת ביצוע ניתוח יחיד, בדיקות גנטיות מסומנות בחמישה או שישה צבעים שונים, לפעמים אפילו שבעה.
In-situ פירושו "בבית"
טכניקת ההכלאה המקורית הייתה מסורבלת. ה-DNA המופק עבר דנטורציה במאגרים תרמיים מיוחדים, מעורבב בצנטריפוגה עם שברים דנטורטיים אחרים. גם במעבדה בוצע הכלאה, "בכלי זכוכית כימיים".
הטכנולוגיה המודרנית מאפשרת לבצע ניתוחים במקום, כלומר "במקום", "בבית", במבנים הגנטיים המקוריים, ולא בתכשירים שנעשו במעבדה. מטרות המחקר היו גרעיני התא עצמם (גופים קוטביים, בלסטומרים, תאי שטח של הבלסטוציסט שחולצו במהלך הביופסיה).
התבוננות בחומר הגנטי ישירות בגרעיני התאים מזרזת את התהליך, הופכת אותו ל"נקי" יותר, נקי מהשפעות ונזקים חיצוניים, שאינם נכללים בייצור תכשירי מעבדה.
עם זאת, ישנן בעיות המצביעות על הגבולות הבלתי עבירים של שיטה זו. הכלאה בודדת לא יכולה "לכסות" את כל מערך הכרומוזומים בתאים. בדרך כלל יש צורך בשניים או שלושה הכלאות עוקבות, המאפשרות מחקר של 12-15 זוגות כרומוזומים (ויש 23 בבני אדם). היכולת להכלאה נוספת בשרשראות ה-DNA לאחר כל הכלאה מחדש פוחתת בהדרגה. זה לא מאפשר הכלאה "כמה פעמים שתרצה" לניתוח ממצה של אותו חומר גנטי.
טכניקת ה-FISH, Fluorescent in situ hybridization, פותחה באמצע שנות ה-80 ומשמשת לזיהוי נוכחות או היעדר רצפי DNA ספציפיים בכרומוזומים, כמו גם לוויין אלפא DNA הממוקם בצנטרומר של כרומוזום 6, CEP6 (6p11.1-q11.1).
זה נתן שינוי משמעותי באבחון של מחלות אונקולוגיות ממקור מלנוציטי עקב זיהוי אנטיגנים של גידול. על רקע הממאירות נקבעת מוטציה בשלושה אנטיגנים: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) ו-CMM1(1p). בהקשר זה, לאפשרות של אבחנה מבדלת אובייקטיבית, המבוססת על קביעת המאפיינים הגנטיים של הגידולים המלנוציטיים של העור, ישנה חשיבות רבה באבחון מוקדם של מלנומה וקודמותיה, בגרעין עם סט נורמלי של גנים נלמדים וכרומוזום 6 ישנם שני גנים RREB1 צבועים בגן צהוב, 6 CCND 1 צבועים בגן צהוב, שניים 6 רומסצנטים. על ידי כחול. למטרות אבחון, משתמשים בדגימות פלורסנט.
הערכת תוצאות התגובה: מספר האותות האדומים, הצהובים, הירוקים והכחולים ב-30 גרעינים מכל דגימה נספר, מזוהים ארבעה פרמטרים של וריאנטים שונים של הפרעות גנטיות, שבהם הדגימה תואמת גנטית למלנומה. לדוגמה, דגימה מתאימה למלנומה אם המספר הממוצע של גן CCND1 לגרעין הוא ≥2.5. מספר ההעתקים של גנים אחרים מוערך על פי אותו עיקרון. תרופה נחשבת ל-FISH חיובית אם מתקיים לפחות אחד מארבעת התנאים. דגימות שבהן כל ארבעת הפרמטרים נמצאים מתחת לנקודות השבירה נחשבות ל-FISH שליליות.
קביעת רצפי DNA ספציפיים על כרומוזומים מתבצעת על קטעים של דגימות ביופסיה או חומר כירורגי. ביישום מעשי, תגובת ה-FISH היא כדלקמן: חומר הבדיקה המכיל DNA בגרעיני המלנוציטים עובר עיבוד להרס חלקי של המולקולה שלו על מנת לשבור את המבנה הדו-גדילי ובכך להקל על הגישה לאזור הגן הרצוי. דגימות מסווגות לפי מקום ההתקשרות למולקולת ה-DNA. החומר לתגובת FISH בתרגול קליני הם קטעי רקמת פרפין, מריחות והדפסים.
תגובת ה-FISH מאפשרת לאתר שינויים שחלו במולקולת ה-DNA כתוצאה מעלייה במספר העותקים של גן, אובדן גן, שינוי במספר הכרומוזומים ושינויים איכותיים – תנועת לוקוסי הגנים הן באותו כרומוזום והן בין שני כרומוזומים.
כדי לעבד את הנתונים המתקבלים באמצעות תגובת FISH ולחקור את הקשר בין מספר ההעתקים של הגנים של שלוש הקבוצות שנחקרו, נעשה שימוש במקדם המתאם של Spearman.
מלנומה מאופיינת בעלייה במספר ההעתקים בהשוואה ל-nevus ו-dysplastic nevus.
נבוס פשוט, בהשוואה לנבוס דיספלסטי, יש פחות חריגות במספר העתקות (כלומר, יותר עותקים תקינים).
כדי לבנות כללי החלטה כדי לחזות אם מדגם שייך למחלקה מסוימת (אבחון דיפרנציאלי של nevi פשוט ודיספלסטי), נעשה שימוש במנגנון המתמטי של "עצי החלטה". גישה זו הוכיחה את עצמה בפועל, ואת התוצאות של יישום שיטה זו (בניגוד לשיטות רבות אחרות, כגון רשתות עצביות) ניתן לפרש בבירור כדי לבנות כללי החלטה להבחנה בין נבי פשוט, דיספלסטי ומלנומה. הנתונים הראשוניים בכל המקרים היו מספרי ההעתקים של ארבעה גנים.
המשימה של בניית כלל החלטה לאבחון דיפרנציאלי מחולקת למספר שלבים. בשלב הראשון מבדילים בין מלנומה ונבוס, מבלי לקחת בחשבון את סוג הנבוס. בשלב הבא, נבנה כלל החלטה להפרדת נבי פשוט ודיספלסטי. לבסוף, בשלב האחרון, ניתן לבנות "עץ החלטות" לקביעת מידת הדיספלסיה של נבוס דיספלסטי.
חלוקה כזו של המשימה של סיווג nevi לתת-משימות מאפשרת להשיג דיוק גבוה של התחזיות בכל אחד מהשלבים. נתוני הקלט לבניית עץ ההחלטות הם נתונים על מספר ההעתקים של ארבעה גנים עבור חולים שאובחנו עם מלנומה וחולים שאובחנו כסובלים ממלנומה שאינה מלנומה (חולים עם סוגים שונים של נבוס - פשוט ודיספלסטי). עבור כל מטופל, מספרי העתק גנים זמינים עבור 30 תאים.
לפיכך, חלוקת משימת חיזוי האבחנה למספר שלבים מאפשרת לנו לבנות כללי החלטה בעלי דיוק גבוה לא רק להבחנה בין מלנומה לנבי, אלא גם לקביעת סוג הנבי ולניבוי מידת הדיספלסיה של נבוס דיספלסטי. "עצי ההחלטה" הבנויים הם דרך ברורה לחזות אבחנה המבוססת על מספרי העתק גנים וניתן להשתמש בהם בקלות בפרקטיקה הקלינית כדי להבדיל בין גידולי עור מלנוציטיים שפירים, קדם ממאירים וממאירים. השיטה הנוספת המוצעת לאבחנה מבדלת חשובה במיוחד בכריתת נבי פיגמנט מולד ענקי ונבי דיספלסטי בחולים ילדים, שכן חולים כאלה מבקרים במוסדות רפואיים עם אחוז גבוה של טעויות אבחון. תוצאות השימוש בשיטה המתוארת הינן יעילות ביותר, רצוי להשתמש בה באבחון גידולי עור פיגמנטיים, במיוחד בחולים עם תסמונת FAMM.
שיטות פולשניות של אבחון טרום לידתי מאפשרות לא רק להסתכל אל העתיד ולחזות באופן אמין אם התינוק שטרם נולד עדיין מצפה למחלות הקשורות למומים תוך רחמיים, אלא גם לברר את הטבע והגורמים לפתולוגיות מולדות.
עם זאת, כל מידע הוא בעל ערך רק כאשר הוא מגיע בזמן. בכל הנוגע למצב ההתפתחות של העובר, למהירות קבלת תוצאות הבדיקה יש חשיבות חיונית.
לכן, שיטת FISH, המאפשרת להעריך את נוכחותן של החריגות ההתפתחותיות השכיחות ביותר בעובר בזמן הקצר ביותר, מבוקשת מאוד באבחון גנטי.
FISH הוא קיצור המפענח את מהות הטכנולוגיה לזיהוי הפרעות כרומוזומליות - fluorescence in situ hybridization - היברידית פלואורסצנטית בסביבה "ביתית".
טכניקה זו, שהוצעה בסוף שנות ה-70 של המאה הקודמת על ידי ג'יי גול ומ.-ל. פארדו מבוסס על האפשרות לשחזר את רצף שברי חומצות הגרעין (DNA או RNA) לאחר הדנטורציה שלהם.
המחברים פיתחו שיטה המאפשרת, באמצעות הכלאה באתרו של בדיקות DNA מסומנות (בדיקות) שנוצרו באופן מלאכותי וחומר ציטוגנטי שנלקח לניתוח, לזהות סטיות כמותיות ואיכותיות של הכרומוזומים המעניינים.
בסוף המאה הקודמת, לאחר שימוש מוצלח בצבעי פלורסנט לצביעה של בדיקות DNA, קיבלה שיטת FISH את שמה ומאז שופרה ושונתה באופן אינטנסיבי.
שיטות מודרניות של ניתוח FISH שואפות לספק את האפשרות לקבל את המידע המלא ביותר לניתוח החומר הגנטי שנאסף בהליך הכלאה יחיד.
העובדה היא שרק מספר מוגבל של כרומוזומים מאותו חומר ציטוגנטי ניתן להעריך פעם אחת לאחר ההכלאה. היכולת לעשות הכלאה מחדש של שרשראות DNA פוחתת מעת לעת.
לכן, כרגע באבחון גנטי, שיטת ההכלאה באתרו משמשת לרוב כדי לענות במהירות על שאלות לגבי האנופלואידיות הנפוצות ביותר עבור כרומוזומים 21, 13, 18, כמו גם עבור כרומוזומי מין X, Y.
כל דגימת רקמה או תא מתאימה לניתוח FISH.
באבחון טרום לידתי, אלה עשויים להיות דגימות דם, שפיכה או.
מהירות השגת התוצאות מובטחת על ידי העובדה שהתאים המתקבלים מהחומר שנלקח לניתוח אינם צריכים להיות מעובדים במדיה תזונתית, תוך השגת חלוקתם למספר הנדרש, כמו בשיטה הקלאסית של קריוטיפ.
החומר הנבחר מוכן במיוחד לקבלת תרחיף תאים טהור מרוכז. לאחר מכן, מתבצע תהליך הדנטורציה של בדיקת ה-DNA וה-DNA המקורי של דגימת הבדיקה למצב חד-גדילי ותהליך ההכלאה, במהלכו מודגרים בדיקות ה-DNA הצבועות עם ה-DNA של הדגימה.
כך, הכרומוזומים הרצויים (המוכתמים) בתא מומחשים, מספרם, מבנה המבנים הגנטיים וכו'. העינית של מיקרוסקופ פלואורסצנטי מיוחד מאפשרת לשקול את שרשראות ה-DNA הזוהרות.
כיום, שיטת FISH נמצאת בשימוש נרחב למטרות אבחון לאיתור מחלות גנטיות, סטיות כרומוזומליות ברפואת הרבייה, אונקולוגיה, המטולוגיה, דוסימטריה ביולוגית וכו'.
כיצד משתמשים ב-FISH-אבחון של העובר?
בתחום רפואת הרבייה נעשה שימוש בכל השלבים בשיטת FISH, כאחת משיטות האבחון הציטוגנטי המולקולרי.
- זוּג.
כדי לקבוע את הקריוטיפ של הורים עתידיים, זה מתבצע פעם אחת, מכיוון שהגנום האנושי אינו משתנה לאורך כל החיים.
קריוטיפ של זוג לפני הריון יעזור לזהות האם ההורים הם נשאים של פתולוגיות גנטיות שעוברות בתורשה, כולל נסתרות. כמו גם המצב הכללי של הגנום של אמהות ואבות לעתיד, שיכול להשפיע על הצלחת הריון ונשיאת הריון.
במקרה זה, אבחון FISH משמש לעתים קרובות כבדיקה נוספת לקריוטיפינג קלאסי, כאשר מתגלות פתולוגיות כרומוזומליות בחומר הבדיקה (דם ורידי של ההורים), אם יש חשד לפסיפס.
בדיקה נוספת בשיטת FISH תאשר או תפריך בצורה מהימנה את הימצאות החשד לאנומליה בתאי ההורה העתידי.
- לימוד שפיכה.
זה מסומן לקשיים עם רבייה בזוג עקב "הגורם הגברי". ניתוח זרע בשיטת FISH יאפשר לכם להעריך את רמת הזרע הבלתי תקינה מבחינת מערך הכרומוזומים, וכן לקבוע האם גבר הוא נשא של מחלות גנטיות הקשורות למין.
אם בני הזוג יפנו מאוחר יותר להתעברות באמצעות IVF, ניתוח FISH של השפיכה יאפשר לכם לבחור את הזרע האיכותי ביותר להפריית ביצית.
- עם IVF.
לאבחון גנטי טרום השרשה (PGD). על פי תוצאות מחקרים על הקריוטיפ של ההורים, נקבעות סטיות כרומוזומליות וגנטיות אפשריות שניתן להעביר לעובר.
הודות ליכולות האבחון של FISH, ניתן לבצע את חקר הבריאות הגנטית של העוברים המתקבלים תוך מספר שעות לפני ההעברה לחלל הרחם על מנת להבטיח את תחילת ההריון עם עובר בריא ידוע.
בנוסף, האפשרויות של PGD מאפשרות לקבוע את מין העוברים, וכתוצאה מכך, "לסדר" את מין הילד שטרם נולד, במידת הצורך.
- במהלך תקופת ההיריון.
באבחון טרום לידתי: ניתוח תאי עובר המתקבלים על ידי ביופסיה כוריוני, בדיקת מי שפיר או קורדוקנטה בשיטת FISH, מרכזים רפואיים מציעים בדרך כלל בנוסף למחקר הגנטי הקלאסי של תאי עובר (קריוטיפינג).
שיטה זו הכרחית כאשר יש צורך לקבל תשובה מהירה לגבי הימצאות הפגמים הכרומוזומליים הנפוצים ביותר בעובר: טריזומיה בכרומוזומים 21, 18, 13, סטיות בכרומוזומים X ו-Y, לעיתים גם אנופלואידיות בכרומוזומים 14 (או 17), 15, 15.
יתרונות ניתוח FISH
ביצוע ניתוח גנטי בשיטת FISH, למרות שהיא נותרה כיום שיטת עזר לאבחון פתולוגיות כרומוזומליות, עם זאת, כדאיות יישומו קובעת את היתרונות שאין להכחישה:
- מהירות השגת התוצאות לגבי הכרומוזומים שנבדקו - תוך מספר שעות - לא יותר מ-72.
זה עשוי להיות חשוב אם גורל ההריון תלוי באבחנה של גנטיקאים;
- רגישות ואמינות גבוהות של שיטת FISH - ניתוח מוצלח אפשרי על כמות קטנה באופן זניח של ביולוגי - מספיק תא אחד, השגיאה בתוצאות היא לא יותר מ-0.5%.
זה עשוי להיות חשוב כאשר מספר התאים בדגימה הראשונית מוגבל, למשל, כאשר החלוקה שלהם גרועה.
- אפשרות לאבחון FISH בכל שלב של ההריון (החל מהשבוע ה-7) ובכל דגימה ביולוגית: שברי כוריון, מי שפיר, דם עוברי וכו'.
היכן אוכל לקבל אבחון FISH?
במוסקבה, שיטת FISH לאבחון טרום לידתי של הפרעות כרומוזומליות בעובר משמשת במרכזים הרפואיים הבאים:
ככלל, מרפאות מציעות שירות אבחון FISH במסגרת קריוטיפ שלם של העובר בהתערבות פולשנית בתוספת תשלום. וככלל, הורים לעתיד מסכימים לשלם תוספת, כי הודות לשיטת FISH, תוך מספר ימים אתה יכול לגלות את הדבר החשוב ביותר על התינוק שלך
ראש
"אונקוגנטיקה"
ז'וסינה
יוליה גנאדייבנה
בוגר הפקולטה לרפואת ילדים של האוניברסיטה הממלכתית לרפואה של וורונז'. נ.נ. ברדנקו בשנת 2014.
2015 - התמחות בטיפול על בסיס המחלקה לטיפול בפקולטה של האוניברסיטה הרפואית הממלכתית של וורונז'. נ.נ. ברדנקו.
2015 - קורס הסמכה בהתמחות "המטולוגיה" על בסיס מרכז המחקר ההמטולוגי במוסקבה.
2015-2016 – מטפלת של VGKBSMP מס' 1.
2016 - אושר נושא עבודת הגמר לתואר מועמד למדעי הרפואה "מחקר המהלך הקליני של המחלה ופרוגנוזה בחולים עם מחלת ריאות חסימתית כרונית עם תסמונת אנמית". מחבר שותף של יותר מ-10 פרסומים. משתתפת בכנסים מדעיים ומעשיים בנושאי גנטיקה ואונקולוגיה.
2017 - השתלמויות בנושא: "פרשנות תוצאות מחקרים גנטיים בחולים עם מחלות תורשתיות".
משנת 2017 תושבות בהתמחות "גנטיקה" על בסיס RMANPO.
ראש
"גנטיקה"
קניבטס
איליה ויאצ'סלבוביץ'
קניבץ איליה ויאצ'סלבוביץ', גנטיקאי, מועמד למדעי הרפואה, ראש המחלקה הגנטית של המרכז הגנטי הרפואי Genomed. עוזרת המחלקה לגנטיקה רפואית של האקדמיה הרפואית הרוסית לחינוך מקצועי מתמשך.
הוא סיים את לימודיו בפקולטה לרפואה של האוניברסיטה הממלכתית של מוסקבה לרפואה ורפואת שיניים בשנת 2009, ובשנת 2011 סיים התמחות בהתמחות "גנטיקה" במחלקה לגנטיקה רפואית של אותה אוניברסיטה. בשנת 2017 הגן על התזה שלו לתואר מועמד למדעי הרפואה בנושא: אבחון מולקולרי של וריאציות של מספר העתקים של מקטעי DNA (CNVs) בילדים עם מומים מולדים, אנומליות פנוטיפ ו/או פיגור שכלי באמצעות SNP high-density oligonucleotide microarrays»
בשנים 2011-2017 עבד כגנטיקאי בבית החולים הקליני לילדים. נ.פ. פילטוב, מחלקת ייעוץ מדעי של המוסד המדעי התקציבי של המדינה הפדרלית "מרכז מחקר גנטי רפואי". משנת 2014 ועד היום, הוא היה אחראי על המחלקה הגנטית של MHC Genomed.
פעילויות עיקריות: אבחון וניהול חולים עם מחלות תורשתיות ומומים מולדים, אפילפסיה, ייעוץ גנטי רפואי למשפחות בהן נולד ילד עם פתולוגיה תורשתית או מומים, אבחון טרום לידתי. במהלך הייעוץ מתבצע ניתוח נתונים קליניים וגניאלוגיה לקביעת ההשערה הקלינית וכמות הבדיקות הגנטיות הנדרשות. על סמך תוצאות הסקר, הנתונים מתפרשים והמידע המתקבל מוסבר ליועצים.
הוא אחד ממייסדי פרויקט בית הספר לגנטיקה. עושה באופן קבוע מצגות בכנסים. הוא מרצה עבור גנטיקאים, נוירולוגים ומיילדות-גינקולוגים, וכן עבור הורים לחולים במחלות תורשתיות. הוא המחבר והמחבר של יותר מ-20 מאמרים וסקירות בכתבי עת רוסיים וזרים.
תחום האינטרסים המקצועיים הוא הכנסת מחקרים מודרניים רחבי גנום לפרקטיקה הקלינית, פרשנות התוצאות שלהם.
שעות קבלת קהל: ד', ו' 16-19
ראש
"נוירולוגיה"
שרקוב
ארטם אלכסייביץ'
שרקוב ארטיום אלכסייביץ'– נוירולוג, אפילפטולוג
בשנת 2012, הוא למד במסגרת התוכנית הבינלאומית "רפואה מזרחית" באוניברסיטת Daegu Haanu בדרום קוריאה.
מאז 2012 - השתתפות בארגון מסד הנתונים והאלגוריתם לפירוש בדיקות גנטיות של xGenCloud (https://www.xgencloud.com/, מנהל פרויקט - איגור אוגארוב)
בשנת 2013 סיים את לימודיו בפקולטה לרפואת ילדים של האוניברסיטה הלאומית למחקר רפואי ברוסיה על שם N.I. פירוגוב.
משנת 2013 עד 2015 הוא למד בהתמחות קלינית בנוירולוגיה במוסד המדעי של תקציב המדינה הפדרלי "המרכז המדעי לנוירולוגיה".
מאז 2015 הוא עובד כנוירולוג, חוקר במכון המחקר המדעי לרפואת ילדים על שם האקדמיה יו.אי. Veltishchev GBOU VPO RNIMU אותם. נ.א. פירוגוב. הוא גם עובד כנוירולוג ורופא במעבדה לניטור וידאו-EEG במרפאות המרכז לאפילפטולוגיה ונוירולוגיה על שם א.י. A.A. Ghazaryan" ו"מרכז לאפילפסיה".
בשנת 2015, למד באיטליה בבית הספר "קורס מגורים בינלאומי שני בנושא אפילפסיות עמידות לתרופות, ILAE, 2015".
בשנת 2015 השתלמויות - "גנטיקה קלינית ומולקולרית לרופאים עוסקים", RCCH, RUSNANO.
בשנת 2016 השתלמויות - "יסודות הגנטיקה המולקולרית" בהנחיית ביואינפורמטיקה, Ph.D. Konovalova F.A.
מאז 2016 - ראש הכיוון הנוירולוגי של המעבדה "Genomed".
בשנת 2016 למד באיטליה בבית הספר "קורס מתקדם בינלאומי בסן סרולו: חקר מוח ומנתח אפילפסיה, ILAE, 2016".
בשנת 2016 השתלמויות - "טכנולוגיות גנטיות חדשניות לרופאים", "המכון לרפואת מעבדה".
בשנת 2017 - בית הספר "NGS בגנטיקה רפואית 2017", המרכז המדעי של מוסקבה
כיום, הוא עורך מחקר מדעי בתחום הגנטיקה לאפילפסיה בהדרכתו של פרופסור, MD. Belousova E.D. ופרופסור, ד.מ.ס. דדאלי א.ל.
אושר נושא עבודת הגמר לתואר מועמד למדעי הרפואה "מאפיינים קליניים וגנטיים של וריאנטים מונוגניים של אנצפלופתיה אפילפטית מוקדמת".
תחומי הפעילות העיקריים הם אבחון וטיפול באפילפסיה בילדים ומבוגרים. התמחות צרה - טיפול כירורגי באפילפסיה, גנטיקה של אפילפסיה. נוירוגנטיקה.
פרסומים מדעיים
Sharkov A., Sharkova I., Golovteev A., Ugarov I. "אופטימיזציה של אבחון דיפרנציאלי ופרשנות של תוצאות של בדיקות גנטיות על ידי מערכת מומחה XGenCloud בצורות מסוימות של אפילפסיה". גנטיקה רפואית, מס' 4, 2015, עמ'. 41.
*
Sharkov A.A., Vorobyov A.N., Troitsky A.A., Savkina I.S., Dorofeeva M.Yu., Melikyan A.G., Golovteev A.L. "ניתוח לאפילפסיה בנגעים מולטיפוקליים במוח בילדים עם טרשת שחפת". תקצירים של הקונגרס הרוסי ה-14 "טכנולוגיות חדשניות ברפואת ילדים וכירורגיית ילדים". עלון רוסי לפרינאטולוגיה ורפואת ילדים, 4, 2015. - עמ' 226-227.
*
Dadali E.L., Belousova E.D., Sharkov A.A. "גישות גנטיות מולקולריות לאבחון של אפילפסיה אידיופטית וסימפטומטית מונוגנית". תקציר הקונגרס הרוסי ה-14 "טכנולוגיות חדשניות ברפואת ילדים וכירורגיית ילדים". עלון רוסי לפרינאטולוגיה ורפואת ילדים, 4, 2015. - עמ' 221.
*
Sharkov A.A., Dadali E.L., Sharkova I.V. "גרסה נדירה של אנצפלופתיה אפילפטית מוקדמת מסוג 2 הנגרמת על ידי מוטציות בגן CDKL5 בחולה זכר." כנס "אפילפטולוגיה במערכת מדעי המוח". אוסף חומרי הכנס: / עריכה: פרופ. Neznanova N.G., פרופ. מיכאילובה V.A. סנט פטרסבורג: 2015. - עמ'. 210-212.
*
Dadali E.L., Sharkov A.A., Kanivets I.V., Gundorova P., Fominykh V.V., Sharkova I.V. Troitsky A.A., Golovteev A.L., Polyakov A.V. וריאנט אללי חדש של אפילפסיה מסוג 3 myoclonus הנגרמת על ידי מוטציות בגן KCTD7 // Medical Genetics.-2015.- v.14.-№9.- p.44-47
*
Dadali E.L., Sharkova I.V., Sharkov A.A., Akimova I.A. "מאפיינים קליניים וגנטיים ושיטות מודרניות לאבחון אפילפסיה תורשתית". אוסף חומרים "טכנולוגיות ביולוגיות מולקולריות בפרקטיקה רפואית" / אד. חבר מקביל RANEN A.B. Maslennikova.- גיליון. 24.- נובוסיבירסק: Academizdat, 2016.- 262: p. 52-63
*
Belousova E.D., Dorofeeva M.Yu., Sharkov A.A. אפילפסיה בטרשת שחפת. ב"מחלות מוח, היבטים רפואיים וחברתיים" בעריכת Gusev E.I., Gekht A.B., Moscow; 2016; עמ' 391-399
*
Dadali E.L., Sharkov A.A., Sharkova I.V., Kanivets I.V., Konovalov F.A., Akimova I.A. מחלות ותסמונות תורשתיות המלוות בעוויתות חום: מאפיינים קליניים וגנטיים ושיטות אבחון. //Russian Journal of Children's Neurology.- ת' 11.- מס' 2, עמ'. 33-41. doi: 10.17650/ 2073-8803-2016-11-2-33-41
*
Sharkov A.A., Konovalov F.A., Sharkova I.V., Belousova E.D., Dadali E.L. גישות גנטיות מולקולריות לאבחון של אנצפלופתיה אפילפטית. אוסף תקצירים "VI BALTIC CONGRESS ON CHILDREN'S NEUROLOGY" / בעריכת פרופסור גוזבה V.I. סנט פטרסבורג, 2016, עמ'. 391
*
המיספרוטומיה באפילפסיה עמידה לתרופות בילדים עם נזק מוחי דו-צדדי Zubkova N.S., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Troitsky A.A., Sharkov A.A., Golovteev A.L. אוסף תקצירים "VI BALTIC CONGRESS ON CHILDREN'S NEUROLOGY" / בעריכת פרופסור גוזבה V.I. סנט פטרסבורג, 2016, עמ'. 157.
*
*
מאמר: גנטיקה וטיפול מובחן באנצפלופתיה אפילפטית מוקדמת. א.א. שרקוב*, I.V. שרקובה, E.D. בלוסובה, א.ל. דדאלי. כתב עת לנוירולוגיה ופסיכיאטריה, 9, 2016; נושא. 2doi:10.17116/jnevro20161169267-73
*
Golovteev A.L., Sharkov A.A., Troitsky A.A., Altunina G.E., Zemlyansky M.Yu., Kopachev D.N., Dorofeeva M.Yu. "טיפול כירורגי באפילפסיה בטרשת שחפת" בעריכת Dorofeeva M.Yu., מוסקבה; 2017; עמ' 274
*
סיווגים בינלאומיים חדשים של אפילפסיה והתקפי אפילפסיה של הליגה הבינלאומית נגד אפילפסיה. כתב עת לנוירולוגיה ופסיכיאטריה. C.C. קורסקוב. 2017. ו' 117. מס' 7. ש' 99-106
ראש
"אבחון טרום לידתי"
קייב
יוליה קירילובנה
בשנת 2011 סיימה את לימודיה באוניברסיטה הממלכתית לרפואה ושיניים במוסקבה. א.י. אבדוקימובה בעלת תואר ברפואה כללית למדה במחלקה לגנטיקה רפואית של אותה אוניברסיטה עם תואר בגנטיקה
בשנת 2015, היא השלימה התמחות במיילדות וגינקולוגיה במכון הרפואי להשכלה רפואית לתארים מתקדמים של המוסד הפדרלי לחינוך תקציבי להשכלה מקצועית גבוהה "MGUPP"
משנת 2013 עורך מינוי ייעוץ במרכז לתכנון ורבייה משפחתית, דז"מ
משנת 2017 הוא ראש מחלקת "אבחון טרום לידתי" במעבדת הגנומד
מעביר באופן קבוע מצגות בכנסים וסמינרים. מקריא הרצאות לרופאים בהתמחויות שונות בתחום הרבייה ואבחון טרום לידתי
עורכת ייעוץ גנטי רפואי לנשים בהריון באבחון טרום לידתי על מנת למנוע לידת ילדים עם מומים מולדים וכן משפחות עם פתולוגיות תורשתיות או מולדות ככל הנראה. מבצע פרשנות של התוצאות המתקבלות של אבחון DNA.
מומחים
לאטיפוב
ארתור שמילביץ'
לטיפוב ארתור שמילביץ' - רופא גנטיקאי מקטגוריית ההסמכה הגבוהה ביותר.
לאחר שסיים את לימודיו בפקולטה לרפואה של המכון הרפואי הממלכתי של קאזאן בשנת 1976, במשך שנים רבות עבד תחילה כרופא במשרד לגנטיקה רפואית, ולאחר מכן כראש המרכז הגנטי הרפואי של בית החולים הרפובליקני של טטרסטן, מומחה ראשי של משרד הבריאות של הרפובליקה של טטרסטן, מורה במחלקות של האוניברסיטה הרפואית של קאזאן.
מחברם של יותר מ-20 מאמרים מדעיים על בעיות הגנטיקה הרבייה והביוכימית, משתתף בקונגרסים וכנסים מקומיים ובינלאומיים רבים בנושא בעיות הגנטיקה הרפואית. הוא הכניס לעבודה המעשית של המרכז שיטות של בדיקה המונית של נשים הרות ויילודים למחלות תורשתיות, ביצע אלפי הליכים פולשניים לחשודים במחלות תורשתיות של העובר בשלבים שונים של ההריון.
משנת 2012 היא עובדת במחלקה לגנטיקה רפואית עם קורס לאבחון טרום לידתי באקדמיה הרוסית לחינוך לתארים מתקדמים.
תחומי מחקר - מחלות מטבוליות בילדים, אבחון טרום לידתי.
שעות קבלת קהל: ד' 12-15, שבת 10-14רופאים מתקבלים בתיאום מראש.
גנטיקאי
גאבלקו
דניס איגורביץ'
בשנת 2009 סיים את לימודיו בפקולטה לרפואה של KSMU על שם. S. V. Kurashova (התמחות "רפואה").
התמחות באקדמיה הרפואית של סנט פטרסבורג ללימודים מתקדמים של הסוכנות הפדרלית לבריאות ופיתוח חברתי (התמחות "גנטיקה").
התמחות בטיפול. הסבה ראשונית בהתמחות "אבחון אולטרסאונד". משנת 2016 הוא עובד במחלקה ליסודות היסוד של רפואה קלינית של המכון לרפואה וביולוגיה בסיסית.
תחומי עניין מקצועיים: אבחון טרום לידתי, שימוש בשיטות סקר ואבחון מודרניות לזיהוי הפתולוגיה הגנטית של העובר. קביעת הסיכון להישנות מחלות תורשתיות במשפחה.
משתתפת בכנסים מדעיים ומעשיים בנושאי גנטיקה ומיילדות וגינקולוגיה.
ניסיון בעבודה 5 שנים.
ייעוץ בתיאום מראשרופאים מתקבלים בתיאום מראש.
גנטיקאי
גרישינה
כריסטינה אלכסנדרובנה
בשנת 2015 סיימה את לימודיה באוניברסיטה הממלכתית לרפואה ושיניים במוסקבה עם תואר ברפואה כללית. באותה שנה, היא נכנסה להתמחות בהתמחות 30.08.30 "גנטיקה" במוסד הפדרלי התקציבי התקציבי "מרכז מחקר גנטי רפואי".
היא התקבלה לעבודה במעבדה לגנטיקה מולקולרית של מחלות תורשתיות מורכבות (ראש - דוקטור למדעי הביולוגיה Karpukhin A.V.) במרץ 2015 כעוזרת במעבדת מחקר. מספטמבר 2015 היא הועברה לתפקיד חוקרת. הוא מחבר ומחבר שותף של יותר מ-10 מאמרים ותקצירים על גנטיקה קלינית, אונקוגנטיקה ואונקולוגיה מולקולרית בכתבי עת רוסיים וזרים. משתתף קבוע בכנסים בנושא גנטיקה רפואית.
תחום תחומי עניין מדעי ומעשי: ייעוץ גנטי רפואי למטופלים עם פתולוגיה תסמונתית תורשתית ורב-פקטוריאלית.
התייעצות עם גנטיקאי מאפשרת לך לענות על השאלות הבאות:
האם התסמינים של הילד הם סימנים למחלה תורשתית?
איזה מחקר נדרש כדי לזהות את הסיבה
קביעת תחזית מדויקת
המלצות לביצוע והערכת התוצאות של אבחון טרום לידתי
כל מה שאתה צריך לדעת על תכנון משפחה
ייעוץ לתכנון הפריה חוץ גופית
יעוץ שטח ומקוון
לקח חלק בבית הספר המדעי-מעשי "טכנולוגיות גנטיות חדשניות לרופאים: יישום בפרקטיקה קלינית", כנס האגודה האירופית לגנטיקה אנושית (ESHG) ובכנסים נוספים המוקדשים לגנטיקה של האדם.
עורך ייעוץ גנטי רפואי למשפחות עם פתולוגיות תורשתיות או מולדות ככל הנראה, כולל מחלות מונוגניות והפרעות כרומוזומליות, קובע את האינדיקציות למחקרים גנטיים במעבדה, מפרש את תוצאות אבחון ה-DNA. מייעצת לנשים בהריון באבחון טרום לידתי על מנת למנוע לידת ילדים עם מומים מולדים.
גנטיקאי, מיילד-גינקולוג, מועמד למדעי הרפואה
קודריאבצבה
אלנה ולדימירובנה
גנטיקאי, מיילד-גינקולוג, מועמד למדעי הרפואה.
מומחית בתחום ייעוץ רבייה ופתולוגיה תורשתית.
בוגר האקדמיה הרפואית של מדינת אורל בשנת 2005.
התמחות במיילדות וגינקולוגיה
התמחות בהתמחות "גנטיקה"
הסבה מקצועית בהתמחות "אבחון אולטרסאונד"
פעילויות:
- אי פוריות והפלה ואסיליסה יורייבנה
היא בוגרת האקדמיה הרפואית הממלכתית של ניז'ני נובגורוד, הפקולטה לרפואה (התמחות "רפואה"). היא סיימה את ההתמחות הקלינית של FBGNU "MGNTS" עם תואר ב"גנטיקה". בשנת 2014 סיימה התמחות בקליניקה לאמהות וילדות (IRCCS materno infantile Burlo Garofolo, טריאסטה, איטליה).
מאז 2016, היא עובדת כרופאה יועצת בחברת Genomed LLC.
משתתף באופן קבוע בכנסים מדעיים ומעשיים בנושאי גנטיקה.
פעילויות עיקריות: ייעוץ באבחון קליני ומעבדתי של מחלות גנטיות ופרשנות תוצאות. טיפול בחולים ובני משפחותיהם עם חשד לפתולוגיה תורשתית. ייעוץ בעת תכנון הריון, וכן במהלך ההריון באבחון טרום לידתי על מנת למנוע לידת ילדים עם פתולוגיה מולדת.
שיטה מודרנית של אנליזה ציטוגנטית המאפשרת לקבוע את השינויים האיכותיים והכמותיים בכרומוזומים (כולל טרנסלוקציות ומיקרו-מחקות) ומשמשת לאבחון מבדל של מחלות דם ממאירות וגידולים מוצקים.
מילים נרדפות ברוסית
הכלאה פלואורסצנטי באתרו
ניתוח דגים
מילים נרדפות באנגלית
פלוּאוֹרסצֵנצִיָה במקוםהַכלָאָה
שיטת מחקר
הכלאה פלואורסצנטי באתרו.
באיזה חומר ביולוגי ניתן להשתמש למחקר?
דגימת רקמה, דגימת רקמה בבלוק פרפין.
איך להתכונן נכון למחקר?
אין צורך בהכנה.
מידע כללי על המחקר
פלואורסצנטי הכלאה באתרו (FISH) ב- situהכלאה) היא אחת השיטות המודרניות ביותר לאבחון הפרעות כרומוזומליות. הוא מבוסס על שימוש בבדיקות DNA המסומנות בתווית ניאון. בדיקות DNA הן שברי DNA מסונתזים במיוחד, שרצף שלהם משלים לרצף ה-DNA של הכרומוזומים החריגים שנחקרו. לפיכך, דגימות DNA שונות בהרכבן: דגימות DNA שונות וספציפיות משמשות לקביעת הפרעות כרומוזומליות שונות. בדיקות DNA משתנות גם הן בגודלן: חלקן עשויות להיות מכוונות לכרומוזום שלם, אחרות למיקום מסוים.
במהלך תהליך ההכלאה, אם יש כרומוזומים חריגים בדגימת הבדיקה, הם נקשרים לבדיקת ה-DNA, אשר בבדיקה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, נקבעת כאות פלואורסצנטי (תוצאה חיובית של בדיקת FISH). בהיעדר כרומוזומים חריגים, דגימות DNA לא קשורות "נשטפות" במהלך התגובה, אשר, כאשר נבדקת באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, מוגדרת כהיעדר אות ניאון (תוצאת בדיקת FISH שלילית). השיטה מאפשרת להעריך לא רק את נוכחותו של אות ניאון, אלא גם את עוצמתו ולוקליזציה שלו. לפיכך, מבחן FISH אינו רק שיטה איכותית, אלא גם שיטה כמותית.
לבדיקת FISH יש מספר יתרונות על פני שיטות ציטוגנטיות אחרות. ראשית, ניתן ליישם את מחקר ה-FISH הן על גרעיני מטאפזה והן על גרעינים בין-פאזיים, כלומר על תאים שאינם מתחלקים. זהו היתרון העיקרי של FISH על פני שיטות קריוטיפינג קלאסיות (למשל, צביעת כרומוזומים רומנובסקי-גימסה), אשר מיושמות רק על גרעיני מטאפאזה. זה הופך את מחקר ה-FISH לשיטה מדויקת יותר לאיתור מומים כרומוזומליים ברקמות בעלות פעילות שגשוגית נמוכה, כולל גידולים מוצקים.
מכיוון שבדיקת ה-FISH משתמשת ב-DNA יציב של גרעיני אינטרפאזיות, ניתן להשתמש במגוון של חומרים ביולוגיים למחקר - אספירציות של ביופסיה עדינות זווית, מריחות, אספירציות של מח עצם, דגימות ביופסיה, וחשוב מכך, שברי רקמה משומרים, כגון בלוקים היסטולוגיים. כך, למשל, ניתן לבצע בהצלחה בדיקת FISH בהכנות חוזרות ונשנות המתקבלות מבסימה היסטולוגית של דגימת ביופסיית שד כאשר מאששים את האבחנה של "אדנוקרצינומה בשד" והצורך בקביעת מצב HER2/neu של הגידול. יש להדגיש שכרגע מחקר FISH מומלץ כבדיקת אישור כאשר מקבלים תוצאה בלתי מוגדרת של המחקר האימונוהיסטוכימי של הגידול עבור סמן הגידול HER2/neu (IHC 2+).
יתרון נוסף של FISH הוא יכולתו לזהות מיקרו-מחיקות שאינן מזוהות על ידי קריוטיפינג קלאסי או PCR. יש לכך חשיבות מיוחדת במקרים של חשד לתסמונת DiGeorge ותסמונת Velocardiofacial.
בדיקת FISH נמצאת בשימוש נרחב באבחון מבדל של מחלות ממאירות, בעיקר באונקוהמטולוגיה. הפרעות כרומוזומליות בשילוב עם התמונה הקלינית ונתונים אימונוהיסטוכימיים הם הבסיס לסיווג, קביעת טקטיקות טיפול ופרוגנוזה של מחלות לימפו-ומיאלופרוליפרטיביות. דוגמאות קלאסיות הן לוקמיה מיאלואידית כרונית - t (9; 22), לוקמיה פרומיאלוציטית חריפה - t (15; 17), לוקמיה לימפוציטית כרונית - טריזומיה 12 ואחרות. באשר לגידולים מוצקים, מחקר FISH משמש לרוב באבחון סרטן השד, שלפוחית השתן, המעי הגס, נוירובלסטומה, רטינובלסטומה ואחרים.
מחקר FISH יכול לשמש גם באבחון טרום לידתי וקדם השרשה.
בדיקת FISH מבוצעת לרוב בשילוב עם שיטות אחרות של אבחון מולקולרי וציטוגנטי. התוצאה של מחקר זה מוערכת בשילוב עם תוצאות של נתונים מעבדתיים ואינסטרומנטליים נוספים.
למה משמש המחקר?
- לאבחנה מבדלת של מחלות ממאירות (דם ואיברים מוצקים).
מתי מתוכנן הלימודים?
- אם אתה חושד בנוכחות של מחלת דם ממאירה או גידולים מוצקים, טקטיקת הטיפול והפרוגנוזה תלויה בהרכב הכרומוזומלי של שיבוט הגידול.
מה משמעות התוצאות?
תוצאה חיובית:
- נוכחות של כרומוזומים חריגים בדגימת הבדיקה.
תוצאה שלילית:
- היעדר כרומוזומים חריגים בדגימת הבדיקה.
מה יכול להשפיע על התוצאה?
- מספר כרומוזומים חריגים.
- מחקר אימונוהיסטוכימי של חומר קליני (באמצעות נוגדן אחד)
- מחקר אימונוהיסטוכימי של חומר קליני (באמצעות 4 נוגדנים או יותר)
- קביעת מצב גידול HER2 על ידי FISH
- קביעת מצב גידול HER2 בשיטת CISH
מי מזמין את המחקר?
אונקולוג, רופא ילדים, מיילד-גינקולוג, גנטיקאי.
סִפְרוּת
- וואן TS, מא ES. ציטוגנטיקה מולקולרית: כלי הכרחי לאבחון סרטן. Anticancer Res. 2005 יולי-אוגוסט;25(4):2979-83.
- Kolialexi A, Tsangaris GT, Kitsiou S, Kanavakis E, Mavrou A. השפעת מחקרים ציטוגנטיים ומולקולריים ציטוגנטיים על ממאירות המטולוגית. Chang Gung Med J. 2012 Mar-Apr;35(2):96-110.
- Mühlmann M. ציטוגנטיקה מולקולרית בתאי מטאפאזה ואינטרפאזה לסרטן ולמחקר גנטי, אבחון ופרוגנוזה. יישום בחתכי רקמה ותרחפי תאים. Genet Mol Res. 2002 יוני 30;1(2):117-27.