एग्लूटीनेशन की परिभाषा. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया

एग्लूटिनेशन एक खारे घोल में निलंबित रोगाणुओं या माइक्रोबियल कोशिकाओं के हिस्सों के चिपकने की घटना है, जिसमें गुच्छे या छोटे दाने बनते हैं जो अवक्षेपित होते हैं। विशिष्ट और गैर-विशिष्ट एग्लूटिनेशन हैं। विशिष्ट एग्लूटिनेशन तीन घटकों की भागीदारी के साथ होता है: एग्लूटीनोजेन (सेल निलंबन), एग्लूटीनिन (जानवर या मानव शरीर में इस प्रजाति के रोगाणुओं की शुरूआत के बाद प्राप्त प्रतिरक्षा सीरम में निहित) और लवण (), जिसके एक आइसोटोनिक समाधान में प्रतिक्रिया सामान्यतः की जाती है।

प्रतिक्रिया की स्थापना: 1:50 का सीरम तनुकरण परीक्षण ट्यूबों में तैयार किया जाता है; 1:100; 1:200; 1:400; 1:800; 1: 1000 और उससे अधिक. प्रत्येक टेस्ट ट्यूब में समान मात्रा में माइक्रोबियल सस्पेंशन मिलाया जाता है। प्रतिक्रिया की प्रारंभिक रिकॉर्डिंग टेस्ट ट्यूब को t° 37° पर रखने के 2 घंटे बाद की जाती है; अंतिम - ट्यूबों को कमरे के तापमान पर रखने के अगले दिन। प्रतिक्रिया के परिणामों का मूल्यांकन एक आवर्धक कांच या एग्लूटीनोस्कोप का उपयोग करके निहत्थे किया जाता है - एक उपकरण जिसमें रोगाणुओं के निलंबन और परिणामी गांठ या गुच्छे की जांच संचारित प्रकाश में एक चलती ऐपिस के माध्यम से की जाती है। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया परिणाम आमतौर पर सीरा के उच्चतम कमजोर पड़ने से देखा जाता है जिसमें स्पष्ट एग्लूटिनेशन होता है। 1:200 और उससे अधिक (अनुमापांक में बाद की वृद्धि के साथ) के तनुकरण पर रोगी के सीरम के साथ एक सकारात्मक प्रतिक्रिया का नैदानिक ​​महत्व होता है।

त्वरित एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (नोबल के अनुसार) के साथ, पांच अरबवें माइक्रोबियल सस्पेंशन के 0.1 मिलीलीटर को 1:10 के तनुकरण में परीक्षण सीरम की समान मात्रा के साथ मिलाया जाता है; 1:20; 1:40 और 1:80 और 3-5 मिनट में 0.85% घोल का 0.8 मिली डालने के बाद प्रतिक्रिया को ध्यान में रखा जाता है। सूक्ष्म जीव के प्रकार को निर्धारित करने के लिए, एग्लूटिनेटिंग सीरा के एक सेट के साथ एक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की जाती है, जिनमें से प्रत्येक को एक निश्चित प्रकार के सूक्ष्म जीव के साथ एक जानवर को प्रतिरक्षित करके प्राप्त किया गया था।

अनुमानित एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के लिए, अध्ययन के तहत सूक्ष्म जीव के निलंबन की एक बूंद और विशिष्ट एग्लूटिनेटिंग सीरम (1:10) की एक बूंद को एक ग्लास स्लाइड पर लगाया जाता है; 1:20. दोनों बूंदों को मिलाया जाता है और कुछ मिनटों के बाद परिणाम देखा जाता है।

रक्त समूहन लाल रक्त कोशिकाओं, बैक्टीरिया और एंटीजन ले जाने वाली अन्य कोशिकाओं का चिपकना और अवसादन है।

यह प्रक्रिया एग्लूटीनिन के प्रभाव में होती है, जो विशिष्ट पदार्थ हैं। ये पदार्थ लेक्टिन या एंटीबॉडी हैं।

रक्त समूह का निर्धारण करते समय एग्लूटीनेशन के संभावित प्रकार

एग्लूटीनेशन विशिष्ट या गैर विशिष्ट हो सकता है। पहले मामले में, प्रतिक्रिया तीन घटकों की भागीदारी से होती है:

• प्रतिजन;
• एंटीबॉडीज;
• इलेक्ट्रोलाइट्स (आइसोटोनिक समाधान का उपयोग करें)।

रक्त समूह निर्धारित करने के लिए सभी संभावित प्रकार के एग्लूटिनेशन का उपयोग किया जाता है, लेकिन यह एकमात्र मामला नहीं है।

इसका उपयोग किस प्रयोजन के लिए किया जाता है?

रक्त समूहन प्रतिक्रिया का उपयोग किसी संक्रामक रोग के प्रेरक एजेंट की पहचान करने के लिए किया जाता है। साथ ही, यह जम जाता है और तलछट में आसानी से पता चल जाता है। इस प्रक्रिया का उपयोग किया जाता है, जैसा कि ऊपर बताया गया है, और इस पर आगे चर्चा की जाएगी।

विशेषताएं क्या हैं?

लाल रक्त कोशिकाओं में ए और बी प्रकार के एंटीजन होते हैं। वे क्रमशः एंटीबॉडी ά और β से बंधते हैं। रक्त समूह और एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाएं:

• 1, 0 (ά, β) - लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर कोई एंटीजन नहीं हैं;
• 2, ए (β) - एंटीजन ए और एंटीबॉडी β मौजूद हैं;
• 3, बी (ά) - इसमें एंटीजन बी और एंटीबॉडी ά शामिल हैं;
• 4, एबी (00) - दो एंटीजन मौजूद हैं, एंटीबॉडी अनुपस्थित हैं।

यह ध्यान देने योग्य है कि भ्रूण में एंटीजन पहले से ही देखे जाते हैं। जहां तक ​​एंटीबॉडी का सवाल है, वे जन्म के बाद, जीवन के पहले महीने में दिखाई देते हैं।

लोगों की अनुकूलता उनके रक्त प्रकार पर निर्भर करती है। यह माँ के शरीर द्वारा भ्रूण को अस्वीकार करने का कारण है। दूसरे शब्दों में, उसके पास अजन्मे बच्चे के रक्त प्रतिजनों के प्रति एंटीबॉडी हैं। इस स्थिति में, असंगति उत्पन्न होती है. इसके अलावा, रक्त चढ़ाने के दौरान रक्त के प्रकार को भी ध्यान में रखा जाना चाहिए।

तैयारी

रक्त समूह और एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाएं संगत अवधारणाएं हैं जिनका उपयोग अक्सर चिकित्सा में किया जाता है।

परीक्षण से पहले कुछ निर्देशों का पालन करना महत्वपूर्ण है। आपको अस्थायी रूप से कुछ खाद्य पदार्थों और दवाओं के उपयोग से बचना चाहिए। इससे नतीजों को अधिक सटीक बनाने में मदद मिलेगी. पालन ​​की जाने वाली सिफारिशें डॉक्टर द्वारा निर्धारित की जाती हैं। तथ्य यह है कि विभिन्न प्रयोगशालाओं में प्राप्त मूल्यों की श्रृंखला समान नहीं हो सकती है, अर्थात वे थोड़े भिन्न होते हैं।

परीक्षण के लिए शर्तें

रक्त प्रकार को सटीक रूप से निर्धारित करने के लिए, सही उपकरण चुनना महत्वपूर्ण है। इसमे शामिल है:

• और एक पिपेट;
• कांच की छड़ें;
• मानक आइसोहेमाग्लगुटिनेटिंग सीरम;
• सूखी मिट्टी की प्लेटें, जिन्हें 4 क्षेत्रों में विभाजित किया गया है।

परीक्षण शर्तों के लिए भी आवश्यकताएँ हैं:

• दिन का उजाला;
• कमरे का तापमान +16 डिग्री सेल्सियस से ऊपर;
• 1:10 के अनुपात में रक्त और सीरम की मात्रा का उपयोग करना;
• विश्वसनीय परिणाम 5 मिनट के भीतर प्राप्त हो जाते हैं।

ऊपर बुनियादी शर्तें और उपकरण हैं। रक्त समूहन कई तरीकों से किया जा सकता है, और उनमें से प्रत्येक की अलग-अलग आवश्यकताएं होती हैं।

तरीकों

एग्लूटीनेशन का उपयोग करके रक्त समूह निर्धारित करने की संभावित विधियाँ:

• मानक विधि;
• परस्पर प्रतिक्रिया;
• ज़ोलिकलोन का उपयोग;
• "एरिथ्रोटेस्ट-ग्रुप कार्ड" किट का उपयोग करके एक्सप्रेस विधि।

मानक विधि

रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग करके रक्त समूहन का प्रदर्शन किया जाता है। ज्ञात एंटीजन युक्त मानक सीरा का भी उपयोग किया जाता है।

एक सपाट प्लेट पर चार सीरम की 1 बूंद रखें। फिर इसमें कांच की छड़ों की मदद से मरीज का खून डालकर जांच की जाती है। ऐसे में आई ड्रॉपर का उपयोग करना सुविधाजनक होता है। अनुपात 1:10 होना चाहिए. सीरम और रक्त को सावधानीपूर्वक मिलाया जाता है। एक मूल्यांकन पांच मिनट के भीतर पूरा किया जा सकता है।

एक सरल विधि का उपयोग करके परीक्षण परिणामों को डिकोड करना

निर्दिष्ट समय के बाद, सीरम बूंदों में समाशोधन देखा जाता है। कुछ में आप देख सकते हैं कि लाल रक्त कोशिकाओं का समूहन (छोटे टुकड़े) हो गया है, अन्य में यह अनुपस्थित है।

निम्नलिखित विकल्प मौजूद हैं:

• सभी सीरम नमूनों में कोई प्रतिक्रिया नहीं - समूह 1;
• नमूना 2 - समूह 2 को छोड़कर हर जगह जमावट हुई;
• केवल तीसरे नमूने में कोई प्रतिक्रिया नहीं - समूह 3;
• एग्लूटिनेशन हर जगह हुआ - समूह 4।

इस प्रकार, मुख्य बात सीरम को सही ढंग से वितरित करना है। फिर परिणाम को समझना मुश्किल नहीं होगा। यदि रक्त समूहन कमजोर है, तो परीक्षण दोहराने की सिफारिश की जाती है। छोटे गुच्छों के मामले में, उनकी जांच माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है।

क्रॉस प्रतिक्रिया

कभी-कभी सरल तरीके से रक्त प्रकार का सटीक निर्धारण करना असंभव होता है। इस मामले में एग्लूटिनेशन क्रॉस-रिएक्शन विधि का उपयोग करके किया जाता है। परीक्षण के पहले संस्करण के विपरीत, मानक लाल रक्त कोशिकाएं यहां महत्वपूर्ण हैं। रोगी के रक्त को एक टेस्ट ट्यूब में खींचा जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, और फिर सीरम को आगे के शोध के लिए पिपेट के साथ पंप किया जाता है।

इसे एक प्लेट में 2 बूंदों की मात्रा में रखा जाता है, फिर इसमें समूह ए और बी की मानक लाल रक्त कोशिकाएं मिलाई जाती हैं। कंटेनर को हिलाकर सामग्री को हिलाया जाता है।

क्रॉस प्रतिक्रिया विधि के परिणाम

पांच मिनट के बाद नमूने जांच के लिए तैयार हो जाते हैं। विकल्प हैं:

• दोनों बूंदों में ग्लूइंग हुई - समूह 1;
• किसी भी नमूने में गुच्छे नहीं देखे गए - समूह 4;
• प्रक्रिया एक नमूने में दिखाई देती है - समूह 2 या 3 (यह इस बात पर निर्भर करता है कि वास्तव में रक्त का थक्का कहाँ जम गया है)।

ज़ोलिकलोन्स का उपयोग करने की विधि

रक्त समूह निर्धारित करने के लिए, सिंथेटिक सीरम विकल्प का उपयोग करके इस तरह से एग्लूटिनेशन किया जाता है। इन्हें ज़ोलिकलोन्स कहा जाता है। इनमें ά और β-एग्लूटिन के लिए कृत्रिम विकल्प होते हैं, जिन्हें एरिथ्रोटेस्ट (क्रमशः गुलाबी और नीला) कहा जाता है। प्रतिक्रिया उनके और रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं के बीच होती है।

यह विधि सबसे सटीक और विश्वसनीय है. मूलतः, इसके लिए अध्ययन को दोहराने की आवश्यकता नहीं है। परिणामों का मूल्यांकन उसी तरह किया जाता है जैसे मानक पद्धति के मामले में किया जाता है। ख़ासियत यह है कि इसकी पुष्टि एक विशिष्ट सिंथेटिक विकल्प (एंटी-एवी) के साथ प्रतिक्रिया द्वारा की जानी चाहिए। इसके अलावा, सोडियम क्लोराइड घोल डालने पर कोई आसंजन नहीं होता है।

"एरीथ्रोटेस्ट-ग्रुप कार्ड" किट के साथ एक्सप्रेस विधि

रक्त समूह के निर्धारण के लिए संभावित विश्लेषण विधियों पर विचार करते समय, यह ध्यान देने योग्य है कि इस पद्धति की अपनी विशेषताएं हैं। वे इस तथ्य में निहित हैं कि परिणाम का मूल्यांकन न केवल प्रयोगशाला में, बल्कि क्षेत्र में भी किया जा सकता है। अध्ययन करने के लिए एक विशेष किट का उपयोग किया जाता है। इसमें कुओं वाला एक कार्ड शामिल है, जिसके नीचे पहले से ही सूखे अभिकर्मक हैं। एंटी-एबी, एंटी-ए और एंटी-बी के अलावा, एंटी-डी का उपयोग आरएच कारक निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

इस विधि के लिए विशेष तैयारी की आवश्यकता नहीं होती है; इसमें उंगली से लिए गए रक्त का उपयोग करने की अनुमति होती है, और इसमें संरक्षक हो सकते हैं। सबसे पहले आपको सामग्री को घोलने के लिए प्रत्येक कुएं में पानी की एक बूंद डालनी होगी। इसके बाद इसमें खून डालकर हल्के से हिलाया जाता है। तीन मिनट में रिजल्ट मिल जाएगा.

मिथ्या समूहन

कभी-कभी परीक्षण के बाद प्राप्त डेटा सत्य नहीं होता है। यह घटना कुछ कारकों पर निर्भर करती है।

झूठी प्रतिक्रियाएँ तीन प्रकार की होती हैं:

स्यूडोएग्लूटीनेशन. वास्तविक जुड़ाव नहीं होता है; लाल रक्त कोशिकाएं बस सिक्के के स्तंभों में बदल जाती हैं। यदि आप सलाइन की कुछ बूँदें मिलाते हैं, तो वे विघटित हो जाते हैं। इसी तरह की घटना को माइक्रोस्कोप के तहत पहचाना जा सकता है।

ठंडा रक्त एकत्रीकरण. यदि अध्ययन आयोजित करने की स्थितियाँ प्रतिकूल थीं तो यह प्रतिक्रिया देखी जाती है। जब तापमान +16˚C से नीचे होता है, तो जुड़ाव हो सकता है।

पैनाग्लूटीनेशन. यदि रक्त में संक्रमण है, तो परीक्षण के परिणाम गलत हो सकते हैं। यह घटना कैंसर और सेप्सिस के मामले में भी संभव है।

चिकित्सा में एग्लूटीनेशन का बहुत महत्व है। यह न केवल रक्त प्रकार निर्धारित करने की अनुमति देता है, बल्कि रोगों के प्रेरक एजेंट, साथ ही संक्रमण की उपस्थिति की पहचान करने की भी अनुमति देता है। इस प्रक्रिया की तैयारी करते समय मुख्य बात डॉक्टर की सिफारिशों का पालन करना है। जहाँ तक चिकित्सा कर्मियों का सवाल है, उनका कार्य अनुकूल परिस्थितियाँ बनाना और सभी नियमों का पालन करना है। रक्त समूहन करते समय सटीक परिणाम प्राप्त करने का यही एकमात्र तरीका है।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियासंपूर्ण माइक्रोबियल या अन्य कोशिकाओं के साथ एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन) की विशिष्ट बातचीत पर आधारित है। इस अंतःक्रिया के परिणामस्वरूप, समूहित कण बनते हैं जो अवक्षेपित (एग्लूटिनेट) होते हैं। बैक्टीरिया, प्रोटोजोआ, कवक, यीस्ट, रिकेट्सिया, एरिथ्रोसाइट्स और अन्य कोशिकाएं, जीवित और मृत दोनों, एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में भाग ले सकती हैं। प्रतिक्रिया दो चरणों में होती है:

• पहला एंटीजन और एंटीबॉडी का एक विशिष्ट संयोजन है,
• दूसरा निरर्थक है, अर्थात दृश्यमान एग्लूटिनेट का निर्माण।

एग्लूटीनेट का अवक्षेपण सोडियम क्लोराइड जैसे इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में होता है। एग्लूटिनेट में सूक्ष्मजीव जीवित रहते हैं, लेकिन अपनी गतिशीलता खो देते हैं।

संक्रामक रोगों के सीरोलॉजिकल निदान और पृथक रोगाणुओं की एंटीजेनिक संरचना के निर्धारण के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। किसी रोगी या वाहक के शरीर से पृथक रोगज़नक़ की एंटीजेनिक संरचना स्थापित करने के लिए, उपयोग करें विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम, कुछ सूक्ष्मजीवों के साथ जानवरों (खरगोश, गधा, भेड़) का टीकाकरण करके प्राप्त किया जाता है। सूक्ष्म जीव की पहचान कांच पर अधिशोषित या मोनोरिसेप्टर सीरा के साथ या विशिष्ट एग्लूटिनेटिंग सीरा के साथ टेस्ट ट्यूब में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में की जाती है। अधिशोषित सीरा में केवल किसी दिए गए सूक्ष्म जीव के लिए विशिष्ट एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, और मोनोरिसेप्टर सीरा में रोगज़नक़ के केवल एक विशिष्ट एंटीजन के लिए एंटीबॉडी होते हैं। प्रजाति सीरा में एक विशेष सूक्ष्म जीव के सभी एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं।

किसी पृथक सूक्ष्मजीव संस्कृति का किसी दी गई प्रजाति से संबंध सीरम एम्पुल के लेबल पर इंगित एंटीबॉडी टिटर के लिए एक ज्ञात सीरम के साथ एग्लूटिनेशन द्वारा निर्धारित किया जाता है। सीरम के एंटीबॉडी टिटर को इसका अंतिम तनुकरण माना जाता है, जिसमें जानवरों को प्रतिरक्षित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले रोगाणुओं की संस्कृति का एकत्रीकरण अभी भी देखा जाता है। ग्लास एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में आमतौर पर अधिशोषित और मोनोरिसेप्टर सीरा का उपयोग बिना पतला किए किया जाता है।

रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी की उपस्थिति का निर्धारण करते समय, इसे 1:50 से 1:800 या अधिक के तनुकरण से शुरू करके आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल से पतला किया जाता है। प्रत्येक तनुकरण में जीवित या मारे गए रोगाणुओं का एक निलंबन जोड़ा जाता है। गर्मी या फॉर्मेल्डिहाइड द्वारा मारे गए रोगाणुओं से युक्त तैयारी कहलाती है डायग्नोस्टिकम. सूक्ष्मजीव संस्कृतियों को गर्म करके प्राप्त डायग्नोस्टिकम में केवल दैहिक एंटीजन होते हैं। केवल फॉर्मेल्डिहाइड का उपयोग करते समय, रोगाणु अपने फ्लैगेलर एंटीजन को बरकरार रखते हैं।

रोगी के रक्त में एंटीबॉडी की उपस्थिति में, प्रतिक्रिया में लिया गया नैदानिक ​​परीक्षण एक साथ चिपक जाता है और दो परीक्षण ट्यूबों पर एक अवक्षेप (एग्लूटीनेट) बन जाता है। इस मामले में, एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के परिणाम सकारात्मक माने जाते हैं। नियंत्रण ट्यूब में, जिसमें आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान और डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, रोगाणुओं का निलंबन सजातीय (नकारात्मक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया) होना चाहिए।

कुछ बीमारियों में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के परिणाम, उदाहरण के लिए, लेप्टोस्पायरोसिस, को माइक्रोस्कोप (माइक्रोएग्लूटीनेशन) के अंधेरे क्षेत्र में केवल सूक्ष्मदर्शी रूप से ध्यान में रखा जाता है। किसी रोग का सीरोलॉजिकल निदान करने के लिए, निदान रोग को ध्यान में रखा जाता है। यह आमतौर पर 1:100 या 1:200 के सीरम तनुकरण से मेल खाता है।

टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया), ब्रुसेलोसिस (राइट प्रतिक्रिया), टुलारेमिया, आदि के मामलों में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग करके रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाया जा सकता है।

कैस्टेलानी प्रतिक्रिया. कुछ संक्रामक रोगों या समूह एंटीजन वाले सूक्ष्मजीवों के टीकाकरण के साथ, रक्त सीरम में, किसी दिए गए प्रकार के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के अलावा, समूह एंटीबॉडी भी दिखाई देते हैं। इस मामले में, परिणामी सीरा द्वारा संबंधित जीवाणु प्रजातियों को एकत्रित किया जाएगा।

कैस्टेलानी ने प्रतिरक्षा सीरा से समूह एंटीबॉडी के सोखने के लिए एक विधि प्रस्तावित की, जो संबंधित प्रजातियों के सूक्ष्मजीवों की मदद से उनके निष्कासन पर आधारित है, जिनमें समूह एंटीजन होते हैं लेकिन विशिष्ट एंटीबॉडी की कमी होती है। सीरम में जोड़े गए ऐसे सूक्ष्मजीवों की एक संस्कृति गैर-विशिष्ट समूह एंटीबॉडी को सोख लेती है, और सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स को हटाने के बाद, सीरम में केवल विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन ही रह जाते हैं। कैस्टेलानी विधि के अनुसार संसाधित सेरा का उपयोग एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया में अत्यधिक विशिष्ट के रूप में किया जा सकता है।

में हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के आधार परलाल रक्त कोशिका आसंजन की घटना निहित है, जो विभिन्न कारकों के प्रभाव में होती है। प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म होते हैं।

पर प्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रियाएंलाल रक्त कोशिकाएं तब आपस में चिपक जाती हैं जब कुछ एंटीजन, जैसे कि वायरस, उन पर अवशोषित हो जाते हैं।

सीरोलॉजिकल अध्ययनों में, एक प्रत्यक्ष हेमग्लूटीनेशन निषेध प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है, जब एक रोगी से पृथक वायरस को विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम के साथ बेअसर किया जाता है और फिर लाल रक्त कोशिकाओं के साथ जोड़ा जाता है। हेमग्लूटीनेशन की अनुपस्थिति वायरस और प्रयुक्त प्रतिरक्षा सीरम की स्थिरता को इंगित करती है।

अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया(निष्क्रिय हेमग्लूटीनेशन) उन मामलों में देखा जाता है जहां उपयुक्त एंटीबॉडी युक्त प्रतिरक्षा सीरम या रोगी सीरम को लाल रक्त कोशिकाओं में जोड़ा जाता है जिन्हें पहले विभिन्न एंटीजन के साथ इलाज (संवेदीकरण) किया गया है। लाल रक्त कोशिकाओं का विशिष्ट आसंजन होता है, उनका निष्क्रिय रक्तगुल्म होता है।

अप्रत्यक्ष या निष्क्रिय हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया संवेदनशीलता और विशिष्टता में अन्य सीरोलॉजिकल तरीकों से बेहतर है, और इसका उपयोग बैक्टीरिया, रिकेट्सिया और प्रोटोजोआ के कारण होने वाले संक्रमण के निदान में किया जाता है।

अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया करने की विधि में कई चरण होते हैं। सबसे पहले, लाल रक्त कोशिकाओं को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से धोया जाता है, फिर, यदि आवश्यक हो (प्रोटीन एंटीजन का उपयोग करते समय), उन्हें 1: 20,000 के टैनिन समाधान के साथ इलाज किया जाता है और घुलनशील एंटीजन के साथ संवेदनशील बनाया जाता है। बफर्ड आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से धोने के बाद, एरिथ्रोसाइट एंटीजन उपयोग के लिए तैयार है। परीक्षण सीरा को टेस्ट ट्यूब या कुओं के साथ विशेष प्लास्टिक प्लेटों में सोडियम क्लोराइड के एक आइसोटोनिक समाधान के साथ पतला किया जाता है, फिर सीरम के प्रत्येक कमजोर पड़ने पर एक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है। अप्रत्यक्ष हेमग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के परिणामों को ट्यूब के नीचे गठित लाल रक्त कोशिका तलछट की प्रकृति द्वारा ध्यान में रखा जाता है। एक प्रतिक्रिया परिणाम जिसमें लाल रक्त कोशिकाएं ट्यूब के पूरे तल को समान रूप से कवर करती हैं उसे सकारात्मक माना जाता है। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया में, एक छोटी डिस्क या "बटन" के रूप में लाल रक्त कोशिकाएं टेस्ट ट्यूब के निचले भाग के केंद्र में स्थित होती हैं।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए) एक इलेक्ट्रोलाइट (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान) की उपस्थिति में एंटीबॉडी के प्रभाव में रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं का चिपकना और अवक्षेपण है। परिणामी अवक्षेप को एग्लूटिनेट कहा जाता है। प्रतिक्रिया के लिए आपको चाहिए:

1. एंटीबॉडीज (एग्लूटीनिन) - रोगी के सीरम या प्रतिरक्षा सीरम में पाए जाते हैं।

2. एंटीजन - जीवित या मारे गए सूक्ष्मजीवों, लाल रक्त कोशिकाओं या अन्य कोशिकाओं का निलंबन।

3. आइसोटोनिक समाधान।

सेरोडायग्नोसिस के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से टाइफाइड बुखार, पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया), ब्रुसेलोसिस (राइट प्रतिक्रिया) आदि के लिए उपयोग किया जाता है। इस मामले में एंटीबॉडी रोगी का सीरम है, और एंटीजन एक ज्ञात सूक्ष्म जीव है।

रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं की पहचान करते समय, उनके निलंबन का उपयोग एंटीजन के रूप में किया जाता है, और एक ज्ञात प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग एंटीबॉडी के रूप में किया जाता है। इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से आंतों के संक्रमण, काली खांसी आदि के निदान में उपयोग किया जाता है।

सामग्री की तैयारी: 1) मट्ठा प्राप्त करना, पी देखें। 200; 2) एंटीजन की तैयारी. जीवित रोगाणुओं का निलंबन सजातीय होना चाहिए और लगभग 30 इकाइयों के अनुरूप (1 मिलीलीटर में) होना चाहिए। जीआईएससी ऑप्टिकल मानक के अनुसार मैलापन। इसकी तैयारी के लिए आमतौर पर आगर तिरछी जगह पर उगाए गए 24 घंटे के कल्चर का उपयोग किया जाता है। संस्कृति को 3-4 मिलीलीटर आइसोटोनिक समाधान से धोया जाता है, एक बाँझ ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है, इसका घनत्व निर्धारित किया जाता है और यदि आवश्यक हो, तो पतला किया जाता है।

मारे गए रोगाणुओं के निलंबन - डायग्नोस्टिकम - का उपयोग काम को सुविधाजनक बनाता है और इसे सुरक्षित बनाता है। आमतौर पर वे उत्पादन में तैयार किए गए निदान का उपयोग करते हैं।

एक प्रतिक्रिया स्थापित करना. इस प्रतिक्रिया को करने की दो विधियाँ हैं: ग्लास एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (कभी-कभी सांकेतिक प्रतिक्रिया भी कहा जाता है) और विस्तारित एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (टेस्ट ट्यूब में)।

कांच पर एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया. वसा रहित ग्लास स्लाइड पर विशिष्ट (अवशोषित) सीरम की 2 बूंदें और आइसोटोनिक घोल की एक बूंद लगाएं। गैर-अवशोषित सीरम को 1:5 - 1:25 के अनुपात में पहले से पतला किया जाता है। बूंदों को कांच पर लगाया जाता है ताकि उनके बीच दूरी बनी रहे। कांच पर निशान लगाने के लिए एक मोम पेंसिल का उपयोग करें जहां प्रत्येक बूंद है। कल्चर को एक लूप या पिपेट का उपयोग करके कांच पर अच्छी तरह से पीस लिया जाता है, और फिर इसमें आइसोटोनिक घोल की एक बूंद और सीरम की एक बूंद मिलाई जाती है, प्रत्येक में तब तक हिलाया जाता है जब तक कि एक सजातीय निलंबन नहीं बन जाता। बिना कल्चर के सीरम की एक बूंद सीरम नियंत्रण है।

ध्यान! आप कल्चर को सीरम से आइसोटोनिक घोल की एक बूंद में स्थानांतरित नहीं कर सकते, जो एक एंटीजन नियंत्रण है।

प्रतिक्रिया कमरे के तापमान पर 1-3 मिनट तक होती है। सीरम नियंत्रण स्पष्ट रहना चाहिए और एंटीजन नियंत्रण में एक समान मैलापन दिखना चाहिए। यदि एक बूंद में जहां कल्चर को सीरम के साथ मिलाया जाता है, एग्लूटीनेट फ्लेक्स एक स्पष्ट तरल की पृष्ठभूमि के खिलाफ दिखाई देते हैं, तो प्रतिक्रिया परिणाम सकारात्मक माना जाता है। यदि प्रतिक्रिया नकारात्मक है, तो बूंद में एक समान मैलापन होगा, जैसा कि एंटीजन नियंत्रण में होता है।

संचरित प्रकाश में अंधेरे पृष्ठभूमि के विरुद्ध देखने पर प्रतिक्रिया अधिक स्पष्ट रूप से दिखाई देती है। इसका अध्ययन करते समय आप आवर्धक लेंस का उपयोग कर सकते हैं।

विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया. सीरियल, अक्सर सीरम का दो गुना पतलाकरण तैयार किया जाता है। रोगी के सीरम को आमतौर पर 1:50 से 1:1600 तक पतला किया जाता है, प्रतिरक्षा सीरम - टिटर तक या आधे टिटर तक। एग्लूटीनेटिंग सीरम का अनुमापांक इसका अधिकतम तनुकरण है जिस पर यह समजात कोशिकाओं को एग्लूटीनेट करता है।

सीरम तनुकरण: 1) एक रैक में समान व्यास, ऊंचाई और निचले विन्यास की आवश्यक संख्या में टेस्ट ट्यूब रखें;

2) प्रत्येक टेस्ट ट्यूब पर सीरम के कमजोर पड़ने की डिग्री का संकेत दिया जाता है, इसके अलावा, पहली टेस्ट ट्यूब पर प्रयोग संख्या या एंटीजन का नाम लिखा होता है। नियंत्रण ट्यूबों पर वे "केएस" - सीरम नियंत्रण और "केए" - एंटीजन नियंत्रण लिखते हैं;

3) सभी परखनलियों में 1 मिली आइसोटोनिक घोल डाला जाता है;

4) सीरम का प्रारंभिक (कार्यशील) तनुकरण एक अलग परखनली में तैयार किया जाता है। उदाहरण के लिए, 1:50 का कार्यशील तनुकरण तैयार करने के लिए, 4.9 मिली आइसोटोनिक घोल और 0.1 मिली सीरम एक परखनली में डाला जाता है। तनुकरण की डिग्री परखनली पर अंकित होनी चाहिए। प्रारंभिक सीरम तनुकरण को पहले दो परीक्षण ट्यूबों और सीरम नियंत्रण ट्यूब में जोड़ा जाता है;

5) सीरम का क्रमिक दो गुना तनुकरण तैयार करें।

इसके तनुकरण की अनुमानित योजना तालिका में दी गई है। 16.

तालिका 16. पूर्ण विकसित आरए के लिए सीरम कमजोर पड़ने की योजना

टिप्पणी। तीर परखनली से परखनली में तरल के स्थानांतरण का संकेत देते हैं; 5वीं टेस्ट ट्यूब और सीरम कंट्रोल ट्यूब से 1.0 मिलीलीटर कीटाणुनाशक घोल में डाला जाता है।

ध्यान! सभी परीक्षण ट्यूबों में तरल की समान मात्रा होनी चाहिए।

सीरम को पतला करने के बाद, नियंत्रण सीरम को छोड़कर, सभी टेस्ट ट्यूबों में एंटीजन (डायग्नोस्टिकम या बैक्टीरिया का ताजा तैयार निलंबन) की 1-2 बूंदें डाली जाती हैं। परखनलियों में हल्का सा एक समान बादल दिखाई देना चाहिए। सीरम नियंत्रण स्पष्ट रहता है.

टेस्ट ट्यूबों को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और थर्मोस्टेट (37°C) में रखा जाता है। प्रतिक्रिया परिणामों का प्रारंभिक लेखांकन 2 घंटे के बाद किया जाता है, और अंतिम लेखांकन 18-20 घंटों के बाद (कमरे के तापमान पर रखते हुए) किया जाता है।

परिणामों का लेखांकन, हमेशा की तरह, नियंत्रण से शुरू होता है। सीरम नियंत्रण स्पष्ट रहना चाहिए, एंटीजन नियंत्रण समान रूप से अशांत होना चाहिए। एक आवर्धक कांच या एग्लूटीनोस्कोप का उपयोग करके, नग्न आंखों से प्रसारित प्रकाश (अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ बहुत सुविधाजनक) में ट्यूबों की जांच करें।

एग्लूटीनोस्कोप- एक उपकरण जिसमें एक खोखली धातु ट्यूब होती है जो एक स्टैंड पर लगी होती है। इसके शीर्ष पर एक समायोजन पेंच के साथ एक ऐपिस है। ट्यूब के नीचे एक घूमने वाला दर्पण लगा होता है। अध्ययन किए जा रहे तरल पदार्थ के साथ टेस्ट ट्यूब को ट्यूब के छेद में साइड से इतनी दूरी पर डाला जाता है कि उसमें मौजूद तरल ऐपिस के नीचे हो। दर्पण का उपयोग करके प्रकाश व्यवस्था सेट करके और ऐपिस पर ध्यान केंद्रित करके, एग्लूटीनेट की उपस्थिति और प्रकृति निर्धारित की जाती है।

यदि प्रतिक्रिया का परिणाम सकारात्मक है, तो टेस्ट ट्यूब में एग्लूटीनेट के दाने या गुच्छे दिखाई देते हैं। एग्लूटीनेट धीरे-धीरे "छाता" के रूप में नीचे बैठ जाता है, और तलछट के ऊपर का तरल साफ हो जाता है (समान रूप से टर्बिड एंटीजन नियंत्रण के साथ तुलना करें)।

अवक्षेप के आकार और प्रकृति का अध्ययन करने के लिए, परीक्षण ट्यूबों की सामग्री को थोड़ा हिलाया जाता है। इसमें बारीक दानेदार और फ्लोकुलेंट एग्लूटिनेशन होते हैं। ओ-सेरा * के साथ काम करने पर बारीक दाने वाला (ओ-एग्लूटीनेशन) प्राप्त होता है। फ्लेक-लाइक (एच) - फ्लैगेलर एच-सेरा के साथ गतिशील सूक्ष्मजीवों की बातचीत के दौरान।

* (ओ-सेरा में ओ (दैहिक) एंटीजन, एच-सेरा - फ्लैगेलर एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं।)

फ्लोकुलेंट एग्लूटिनेशन तेजी से होता है; परिणामी अवक्षेप बहुत ढीला होता है और आसानी से टूट जाता है।

प्रतिक्रिया की तीव्रता इस प्रकार व्यक्त की गई है:

सभी कोशिकाएँ व्यवस्थित हो गई हैं, परखनली में तरल पूरी तरह से पारदर्शी है। प्रतिक्रिया का परिणाम अत्यंत सकारात्मक है।

तलछट कम होती है, तरल पूरी तरह साफ़ नहीं होता है। प्रतिक्रिया का परिणाम सकारात्मक है.

तलछट और भी कम है, तरल बादलयुक्त है। प्रतिक्रिया परिणाम थोड़ा सकारात्मक है.

हल्का सा तलछट, बादलयुक्त तरल पदार्थ। संदिग्ध प्रतिक्रिया परिणाम.

कोई तलछट नहीं है, तरल समान रूप से धुंधला है, जैसा कि एंटीजन नियंत्रण में होता है। प्रतिक्रिया का नकारात्मक परिणाम.

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया करते समय संभावित त्रुटियाँ. 1. सहज (सहज) समूहन। कुछ कोशिकाएं, विशेष रूप से आर-रूप में रोगाणु, एक समान (सजातीय) निलंबन उत्पन्न नहीं करते हैं और जल्दी से अवक्षेपित हो जाते हैं। इससे बचने के लिए आपको एस-फॉर्म में एक कल्चर का उपयोग करना चाहिए, जो सहज एग्लूटिनेशन नहीं देता है।

2. स्वस्थ लोगों के सीरम में कुछ सूक्ष्मजीवों (तथाकथित "सामान्य एंटीबॉडी") के प्रति एंटीबॉडी होते हैं। उनका टिटर कम है. इसलिए, 1:100 या अधिक के तनुकरण पर प्रतिक्रिया का सकारात्मक परिणाम इसकी विशिष्टता को इंगित करता है।

3. एंटीजेनिक संरचना में समान रोगाणुओं के साथ समूह प्रतिक्रिया। उदाहरण के लिए, टाइफाइड बुखार से पीड़ित रोगी का सीरम पैराटाइफाइड बैक्टीरिया ए और बी को भी एकत्रित कर सकता है। विशिष्ट समूह प्रतिक्रिया के विपरीत, यह निचले अनुमापांक में होता है। अधिशोषित सीरम समूह प्रतिक्रिया नहीं देते हैं।

4. यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि किसी बीमारी के बाद और टीकाकरण के बाद भी विशिष्ट एंटीबॉडी लंबे समय तक बनी रह सकती हैं। उन्हें "अनामनेस्टिक" कहा जाता है। वर्तमान बीमारी के दौरान बने "संक्रामक" एंटीबॉडी से उन्हें अलग करने के लिए, प्रतिक्रिया गतिशील रूप से की जाती है, अर्थात, रोगी के सीरम की जांच की जाती है, 5-7 दिनों के बाद फिर से लिया जाता है। एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि एक बीमारी की उपस्थिति को इंगित करती है; "एनामेनेस्टिक" एंटीबॉडी का टिटर बढ़ता नहीं है, और घट भी सकता है।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएँ क्या हैं, उनके मुख्य गुण क्या हैं?

2. सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं में कौन से घटक शामिल होते हैं? प्रतिक्रियाओं को सीरोलॉजिकल क्यों कहा जाता है? उनमें कितने चरण होते हैं?

3. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया क्या है? इसका उपयोग एवं कार्यान्वयन के तरीके. डायग्नोस्टिकम क्या है?

4. किसी मरीज के सीरम की जांच करते समय किस एंटीजन का उपयोग किया जाता है? अज्ञात सूक्ष्म जीव के प्रकार को निर्धारित करने के लिए किस सीरम का उपयोग किया जाता है?

5. O- और H-एग्लूटीनेशन क्या है? फ़्लोकुलेंट तलछट किस मामले में बनती है और यह कब बारीक कण वाली होती है?

व्यायाम

1. रोगी के सीरम में एंटीबॉडी टिटर निर्धारित करने और उसके परिणाम को ध्यान में रखने के लिए एक विस्तृत एग्लूटिनेशन परीक्षण करें।

2. पृथक सूक्ष्मजीवों के प्रकार को निर्धारित करने के लिए कांच पर एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया करें।

यदि एक निश्चित एग्लूटीनिन युक्त सीरम की एक बूंद को गीली सतह वाली चीनी मिट्टी की प्लेट पर रखा जाता है और रक्त की एक बूंद (10:1 के अनुपात में) डाली जाती है, जिसके एरिथ्रोसाइट्स में एक ही नाम का एग्लूटीनोजेन होता है, तो एक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया घटित होगी - एरिथ्रोसाइट्स का चिपकना। एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया विशिष्ट (सच्ची) और गैर-विशिष्ट हो सकती है।

विशिष्ट एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाओं में शामिल हैं:

1. आइसोहेमाग्लगुटिनेशन, जिसमें समान एग्लूटीनिन और एग्लूटीनोजेन की परस्पर क्रिया के कारण लाल रक्त कोशिकाओं का जुड़ाव होता है। यह स्थिर है और रक्त समूह के निर्धारण में निर्णायक है;

2. कोल्ड एग्लूटिनेशन एरिथ्रोसाइट्स का एक सच्चा एग्लूटिनेशन है, जो सीरम में कोल्ड एग्लूटीनिन की उपस्थिति के कारण +15°C से नीचे के तापमान पर प्रकट होता है।

गैर विशिष्ट एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाओं में शामिल हैं:

1. गलत एग्लूटिनेशन (स्यूडोएग्लूटिनेशन), जिसमें लाल रक्त कोशिकाएं "सिक्का स्तंभों" में एक साथ चिपक जाती हैं। यह प्रतिक्रिया शारीरिक है और लाल रक्त कोशिकाओं के समूहन गुणों पर निर्भर नहीं करती है। इसके अलावा, लंबे समय तक अवलोकन के साथ, बूंद की परिधि से सूखना शुरू हो जाता है और सीमांत छद्म समूहन प्रकट होता है। आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल की एक बूंद डालकर झूठे एग्लूटिनेशन को वास्तविक एग्लूटिनेशन से आसानी से अलग किया जा सकता है, और हिलाने के बाद एग्लूटिनेशन गायब हो जाता है।

2. पैनाग्लूटिनेशन एक ऐसी घटना है जिसमें रक्त सीरम कमरे के तापमान पर सभी एरिथ्रोसाइट्स के साथ चिपक जाता है, और एरिथ्रोसाइट्स सभी सीरा के साथ, यहां तक ​​कि चौथे समूह के सीरम के साथ भी जुड़ जाता है। यह घटना कई रोगियों में होती है जब रक्त सीरम की प्रोटीन संरचना बदलती है, अर्थात् ग्लोब्युलिन की प्रबलता या मैक्रोग्लोबुलिन की उपस्थिति के साथ, जो पुरानी सूजन प्रक्रियाओं (यकृत, गुर्दे की बीमारियों), डिस्प्रोटीनीमिया, घातक ट्यूमर में देखी जाती है। रुधिर संबंधी रोग. अधिकतर, इस प्रतिक्रिया की ऊपरी सीमा +30°C का तापमान होती है (यह तापमान जीवित जीव में मौजूद नहीं होता है)। जब प्लेट को थर्मोस्टेट में +37°C के तापमान पर 5-6 मिनट के लिए गर्म किया जाता है, तो पैनाग्लूटीनेशन कमजोर हो जाता है और +45°C पर पैनाग्लूटीनेशन की क्षमता गायब हो जाती है।

3. थॉमसन घटना. यह तब होता है जब रक्त संक्रमित होता है, ऐसी स्थिति में लाल रक्त कोशिकाएं सभी मानक सीरा द्वारा एकत्रित हो जाती हैं। यह बैक्टीरिया के प्रोटियोलिटिक एंजाइमों के कारण होता है, जिनमें एरिथ्रोसाइट्स के टी-एंटीजन को सक्रिय करने की क्षमता होती है और एंटी-टी-एग्लूटीनिन के साथ एग्लूटिनेशन होता है, और वे सभी लोगों के सीरम में पाए जाते हैं। इस मामले में, प्लेट को थर्मोस्टेट में +37°C के तापमान पर 5-6 मिनट तक गर्म करके एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया समाप्त हो जाती है।