Terminowa diagnoza zakażenia wirusem HIV staje się niezwykle ważnym środkiem, ponieważ wcześniejsze leczenie może w dużej mierze zdeterminować dalszy rozwój choroby i przedłużyć życie pacjenta. W ostatnich latach nastąpił znaczny postęp w wykrywaniu tej strasznej choroby: stare systemy testowe są zastępowane bardziej zaawansowanymi, metody badawcze stają się bardziej dostępne, a ich dokładność znacznie wzrasta.
W tym artykule omówimy nowoczesne metody diagnozowania zakażenia wirusem HIV, które są przydatne do szybkiego leczenia tego problemu i utrzymania normalnej jakości życia pacjenta.
Metody diagnozowania HIV
W Rosji w celu rozpoznania zakażenia wirusem HIV przeprowadzana jest standardowa procedura, która obejmuje dwa poziomy:
- system testowy ELISA (analiza przesiewowa);
- immunoblotting (IB).
Można również zastosować inne metody diagnostyczne:
- ekspresowe testy.
Systemy testów ELISA
W pierwszym etapie diagnozy do wykrycia zakażenia HIV wykorzystuje się test przesiewowy (ELISA), który opiera się na stworzonych w laboratoriach białkach HIV, które wychwytują specyficzne przeciwciała wytwarzane w organizmie w odpowiedzi na infekcję. Po ich interakcji z odczynnikami (enzymami) układu testowego zmienia się kolor wskaźnika. Ponadto te zmiany koloru są przetwarzane na specjalnym sprzęcie, który określa wynik przeprowadzonej analizy.
Takie testy ELISA są w stanie pokazać wyniki w ciągu kilku tygodni od wprowadzenia zakażenia wirusem HIV. Ta analiza nie określa obecności wirusa, ale wykrywa produkcję przeciwciał przeciwko niemu. Czasami w organizmie człowieka produkcja przeciwciał przeciwko HIV rozpoczyna się po 2 tygodniach od zakażenia, ale u większości osób są one wytwarzane w późniejszym terminie, po 3-6 tygodniach.
Istnieją cztery generacje testów ELISA o różnych czułościach. W ostatnich latach coraz częściej stosowane są systemy testowe III i IV generacji, które bazują na syntetycznych peptydach lub rekombinowanych białkach i charakteryzują się większą specyficznością i dokładnością. Można ich używać do diagnozowania zakażenia wirusem HIV, monitorowania rozpowszechnienia wirusa HIV i zapewnienia bezpieczeństwa podczas badania krwi dawców. Dokładność systemów testowych ELISA III i IV generacji wynosi 93-99% (bardziej czułe są testy produkowane w Europie Zachodniej - 99%).
Aby wykonać test ELISA, z żyły pacjenta pobiera się 5 ml krwi. Pomiędzy ostatnim posiłkiem a analizą powinno być co najmniej 8 godzin (z reguły wykonuje się ją rano na czczo). Zaleca się wykonanie takiego testu nie wcześniej niż 3 tygodnie po rzekomym zakażeniu (np. po stosunku bez zabezpieczenia z nowym partnerem seksualnym).
Wyniki testu ELISA uzyskuje się po 2-10 dniach:
- wynik negatywny: wskazuje na brak zakażenia wirusem HIV i nie wymaga skierowania do specjalisty;
- wynik fałszywie ujemny: można zaobserwować we wczesnych stadiach zakażenia (do 3 tyg.), w późniejszych stadiach AIDS z silną immunosupresją i niewłaściwym przygotowaniem krwi;
- wynik fałszywie dodatni: można go zaobserwować w niektórych chorobach oraz w przypadku niewłaściwego przygotowania krwi;
- wynik pozytywny: wskazuje na zakażenie wirusem HIV, wymaga IB i skierowania chorego do specjalisty w ośrodku ds. AIDS.
Dlaczego test ELISA może dawać wyniki fałszywie dodatnie?
Fałszywie dodatnie wyniki testu ELISA na obecność wirusa HIV można zaobserwować przy niewłaściwym przetwarzaniu krwi lub u pacjentów z takimi stanami i chorobami:
- szpiczak mnogi;
- choroby zakaźne wywołane wirusem Epsteina-Barra;
- stan po ;
- choroby autoimmunologiczne;
- na tle ciąży;
- stan po szczepieniu.
Z powodów opisanych powyżej we krwi mogą znajdować się niespecyficzne przeciwciała reagujące krzyżowo, których produkcja nie została wywołana przez zakażenie wirusem HIV.
W ostatnich latach znacznie zmniejszyła się częstość wyników fałszywie dodatnich ze względu na stosowanie systemów testowych III i IV generacji, które zawierają bardziej czułe peptydy i rekombinowane białka (są one syntetyzowane z wykorzystaniem inżynierii genetycznej in vitro). Po zastosowaniu takich testów ELISA częstość wyników fałszywie dodatnich znacznie się zmniejszyła i wynosi około 0,02-0,5%.
Wynik fałszywie dodatni nie oznacza, że dana osoba jest zarażona wirusem HIV. W takich przypadkach WHO rekomenduje kolejny test ELISA (obowiązkowy IV generacji).
Krew pacjenta jest wysyłana do laboratorium referencyjnego lub arbitrażowego z oznaczeniem „powtórz” i badana systemem testowym ELISA IV generacji. Jeżeli wynik nowej analizy jest negatywny, to pierwszy wynik jest uznawany za błędny (fałszywie pozytywny) i IB nie jest przeprowadzany. W przypadku pozytywnego lub wątpliwego wyniku drugiego testu pacjent jest zobowiązany do wykonania IB za 4-6 tygodni w celu potwierdzenia lub wykluczenia zakażenia wirusem HIV.
blotting immunologiczny
Ostateczne rozpoznanie zakażenia wirusem HIV można postawić dopiero po uzyskaniu pozytywnego wyniku testu immunologicznego (IB). Do jego wykonania stosuje się pasek nitrocelulozowy, na który nakłada się białka wirusowe.
Pobieranie krwi na IB odbywa się z żyły. Następnie poddaje się go specjalnej obróbce, a białka zawarte w jego surowicy rozdziela się w specjalnym żelu według ich ładunku i masy cząsteczkowej (manipulacja odbywa się na specjalnym sprzęcie pod wpływem pola elektrycznego). Na żelową surowicę krwi nakłada się pasek nitrocelulozowy i przeprowadza się blotting („blotting”) w specjalnej komorze. Pasek jest przetwarzany i jeśli użyte materiały zawierają przeciwciała przeciwko HIV, wiążą się one z prążkami antygenowymi na IB i pojawiają się jako linie.
IB uważa się za pozytywny, jeśli:
- według amerykańskich kryteriów CDC - na pasku są dwie lub trzy linie gp41, p24, gp120 / gp160;
- według amerykańskich kryteriów FDA - na pasku znajdują się dwie linie p24, p31 oraz linia gp41 lub gp120/gp160.
W 99,9% przypadków dodatni wynik IB wskazuje na zakażenie wirusem HIV.
W przypadku braku linii - IB jest ujemny.
Identyfikując linie z gp160, gp120 i gp41, IB jest wątpliwa. Taki wynik można wykryć, gdy:
- choroby onkologiczne;
- ciąża;
- częste transfuzje krwi.
W takich przypadkach zaleca się wykonanie drugiego badania przy użyciu zestawu innej firmy. Jeśli po dodatkowym IB wynik pozostaje wątpliwy, konieczna jest kontrola przez 6 miesięcy (IB wykonuje się co 3 miesiące).
reakcja łańcuchowa polimerazy
Test PCR może wykryć RNA wirusa. Jego czułość jest dość wysoka i pozwala na wykrycie zakażenia wirusem HIV już po 10 dniach od zakażenia. W niektórych przypadkach PCR może dawać wyniki fałszywie dodatnie, ponieważ jego wysoka czułość może również reagować na przeciwciała przeciwko innym infekcjom.
Ta technika diagnostyczna jest kosztowna, wymaga specjalistycznego sprzętu i wysoko wykwalifikowanych specjalistów. Te powody nie pozwalają na przeprowadzanie go podczas masowych badań populacji.
PCR stosuje się w takich przypadkach:
- wykrywanie wirusa HIV u noworodków urodzonych przez matki zakażone wirusem HIV;
- do wykrywania HIV w „oknie okiennym” lub w przypadku wątpliwej IB;
- kontrolować stężenie wirusa HIV we krwi;
- do badania krwi dawcy.
Tylko za pomocą testu PCR diagnoza HIV nie jest wykonywana, ale jest przeprowadzana jako dodatkowa metoda diagnostyczna w celu rozwiązania sporów.
Metody ekspresowe
Jedną z innowacji w diagnostyce HIV stały się szybkie testy, których wyniki można ocenić w 10-15 minut. Najbardziej wydajne i dokładne wyniki uzyskuje się za pomocą testów immunochromatograficznych opartych na zasadzie przepływu kapilarnego. Są to specjalne paski, na które nanoszona jest krew lub inne płyny testowe (ślina, mocz). W obecności przeciwciał przeciwko HIV po 10-15 minutach na teście pojawia się kolorowy i kontrolny pasek - wynik pozytywny. Jeśli wynik jest ujemny, pojawia się tylko linia kontrolna.
Podobnie jak w przypadku testów ELISA, wyniki szybkich testów należy potwierdzić analizą IB. Dopiero wtedy można postawić diagnozę zakażenia wirusem HIV.
Istnieją zestawy ekspresowe do testów domowych. Test OraSure Technologies1 (USA) jest zatwierdzony przez FDA, dostępny bez recepty i może być używany do wykrywania wirusa HIV. Po badaniu, w przypadku pozytywnego wyniku, pacjentowi zaleca się wykonanie badania w specjalistycznym ośrodku w celu potwierdzenia rozpoznania.
Pozostałe testy do użytku domowego nie zostały jeszcze zatwierdzone przez FDA, a ich wyniki mogą być bardzo wątpliwe.
Pomimo faktu, że szybkie testy są gorsze pod względem dokładności od testów ELISA IV generacji, są one szeroko stosowane do dodatkowych badań populacji.
Test na obecność wirusa HIV można wykonać w dowolnej przychodni, Centralnym Szpitalu Wojewódzkim lub w specjalistycznych ośrodkach chorych na AIDS. Na terytorium Rosji są one przetrzymywane w całkowitej poufności lub anonimowo. Każdy pacjent może liczyć na poradę lekarską lub psychologiczną przed lub po analizie. Za testy w kierunku HIV trzeba będzie zapłacić tylko w komercyjnych placówkach medycznych, aw publicznych przychodniach i szpitalach są one wykonywane bezpłatnie.
Aby uzyskać informacje o tym, jak można zarazić się wirusem HIV i jakie mity istnieją na temat możliwości zarażenia się, przeczytaj
…diagnoza jakiejkolwiek choroby zakaźnej opiera się na porównaniu danych epidemiologicznych, klinicznych i laboratoryjnych, a wyolbrzymianie wartości jednej z grup tych danych może prowadzić do błędów diagnostycznych.
Rozpoznanie zakażenia wirusem HIV obejmuje dwa etapy:
I scena - ustalenia faktycznego faktu zakażenia wirusem HIV
;
II scena - określenie stadium choroby
.
USTALENIE FAKTU ZAKAŻENIA HIV
Ustalenie samego faktu zakażenia wirusem HIV (czyli identyfikacja osób zakażonych wirusem HIV) z kolei obejmuje również dwa etapy:
ja inscenizuję- połączony test immunosorpcyjny(JEŚLI): metoda ELISA to skrining (selektywny) - selekcja osób przypuszczalnie zakażonych, to znaczy jej celem jest identyfikacja osobników podejrzanych i wykluczenie osobników zdrowych; przeciwciała przeciwko HIV są wykrywane przy użyciu innych przeciwciał przeciwko pożądanym przeciwciałom (przeciwciała przeciwko innym przeciwciałom). Te „pomocnicze” przeciwciała są znakowane enzymem. Wszystkie badania przesiewowe muszą być bardzo czułe, aby nie pominąć pacjenta. Z tego powodu ich specyficzność nie jest bardzo wysoka, to znaczy ELISA może dać pozytywną odpowiedź („prawdopodobnie chory”) u osób niezakażonych (np. u pacjentów z chorobami autoimmunologicznymi: reumatyzmem, toczniem rumieniowatym układowym itp.). Częstotliwość wyników fałszywie dodatnich przy stosowaniu różnych systemów testowych waha się od 0,02 do 0,5%. Jeśli test ELISA danej osoby dał wynik pozytywny, to aby potwierdzić fakt zakażenia wirusem HIV, konieczne jest dalsze badanie. Przy przeprowadzaniu testu ELISA w 3-5% przypadków możliwe są wyniki fałszywie ujemne - jeśli infekcja wystąpiła stosunkowo niedawno i poziom przeciwciał jest nadal bardzo niski lub w terminalnym stadium choroby, charakteryzującym się poważnym uszkodzeniem układ odpornościowy z głębokim upośledzeniem procesu tworzenia przeciwciał. Dlatego w przypadku obecności danych wskazujących na kontakt z osobami zakażonymi wirusem HIV powtórne badania przeprowadza się zazwyczaj po 2-3 miesiącach.
II etap - immunoblotting(w modyfikacji Western Blot, Western blot): jest metodą bardziej złożoną i służy do potwierdzenia faktu infekcji. Ta metoda nie wykrywa złożonych przeciwciał przeciwko HIV, ale przeciwciała przeciwko jego poszczególnym białkom strukturalnym (p24, gp120, gp41 itp.). Wynik immunoblottingu uważa się za pozytywny, jeśli wykryto przeciwciała przeciwko co najmniej trzem białkom, z których jedno jest kodowane przez geny env, drugie przez geny gag, a trzecie przez geny pol. W przypadku wykrycia przeciwciał przeciwko jednemu lub dwóm białkom wynik uważa się za wątpliwy i wymaga potwierdzenia. W większości laboratoriów rozpoznanie zakażenia wirusem HIV stawia się na podstawie jednoczesnego wykrycia przeciwciał przeciwko białkom p24, p31, gp4l i gpl20/gp160. Istota metody: wirus jest niszczony na składniki (antygeny), które składają się ze zjonizowanych reszt aminokwasowych, a zatem wszystkie składniki mają świt, który różni się od siebie; następnie za pomocą elektroforezy (prądu elektrycznego) antygeny są rozprowadzane na powierzchni paska - jeśli w surowicy testowej znajdują się przeciwciała przeciwko HIV, będą one oddziaływać ze wszystkimi grupami antygenów, co można wykryć.
Należy pamiętaćże przeciwciała przeciwko HIV pojawiają się u 90-95% zakażonych osób w ciągu 3 miesięcy po zakażeniu, u 5-9% zakażonych osób przeciwciała przeciwko HIV pojawiają się po 6 miesiącach, au 0,5-1% zakażonych osób przeciwciała przeciwko HIV pojawiają się później. W fazie AIDS liczba przeciwciał może się zmniejszać, aż do całkowitego zaniku.
W immunologii istnieje coś takiego jak „okno serologiczne” - okres od zakażenia do pojawienia się takiej liczby przeciwciał, jaką można wykryć. W przypadku HIV okres ten trwa zwykle od 2 do 12 tygodni, w rzadkich przypadkach dłużej. Podczas „okna serologicznego” osoba jest zdrowa według testów, ale w rzeczywistości jest zarażona wirusem HIV. Ustalono, że DNA HIV może znajdować się w ludzkim genomie przez co najmniej trzy lata bez oznak aktywności, a przeciwciała przeciwko HIV (markery zakażenia wirusem HIV) nie pojawiają się.
W tym okresie („okno serologiczne”) możliwa jest identyfikacja osoby zakażonej wirusem HIV, a nawet 1-2 tygodnie po zakażeniu przy użyciu reakcja łańcuchowa polimerazy(PCR). Jest to niezwykle czuła metoda - teoretycznie można wykryć 1 DNA na 10 ml podłoża. Istota metody polega na tym, że za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy uzyskuje się wiele kopii kwasu nukleinowego (wirus to kwas nukleinowy - DNA lub RNA - w otoczce białkowej), które są następnie wykrywane za pomocą znakowanych enzymów lub izotopów , a także charakterystyczną budową. PCR jest kosztowną metodą diagnostyczną, dlatego nie jest stosowana w badaniach przesiewowych i rutynowo.
OKREŚLENIE ETAPU CHOROBY
W sercu AIDS jest, przede wszystkim zniszczenie pomocniczych limfocytów T, naznaczonych przeciwciałami monoklonalnymi - klastrami różnicowania - jako CD4. Pod tym względem diagnostyka i monitorowanie progresji choroby jest niemożliwe bez kontroli subpopulacji T-pomocników, co najwygodniej przeprowadza się za pomocą laserowego sortera komórek.
W przypadku łagodnego zakażenia wirusem HIV liczba limfocytów T jest niezwykle zmiennym wskaźnikiem. Ogólnie rzecz biorąc, spadek liczby komórek CD4 (bezwzględny i względny) stwierdza się u osób, u których zakażenie wirusem HIV wystąpiło co najmniej rok temu. Z drugiej strony, we wczesnych stadiach infekcji, liczba T-supresorów (CD8) często gwałtownie wzrasta zarówno we krwi obwodowej, jak iw powiększonych węzłach chłonnych.
Z ciężkim AIDS zdecydowana większość pacjentów ma obniżoną całkowitą liczbę limfocytów T (poniżej 1000 na 1 μl krwi, w tym limfocyty CD4 - poniżej 22 na 1 μl, przy czym bezwzględna zawartość CD8 mieści się w granicach normy). Odpowiednio, stosunek CD4/CD8 jest znacznie zmniejszony. Odpowiedź limfocytów T in vitro na standardowe antygeny i mitogeny jest zmniejszona ściśle zgodnie ze stosunkowo zmniejszoną liczbą CD4.
Dla zaawansowanego AIDS charakteryzuje się ogólną limfopenią, neutropenią, trombocytopenią (odpowiednio zmniejszeniem liczby limfocytów, neutrofili i płytek krwi), niedokrwistością. Zmiany te mogą być wynikiem ośrodkowego zahamowania hematopoezy w wyniku zniszczenia narządów krwiotwórczych przez wirusa, jak również autoimmunologicznego zniszczenia subpopulacji komórek na obrzeżach. Ponadto AIDS charakteryzuje się umiarkowanym wzrostem ilości gamma globulin z dominującym wzrostem zawartości IgG. Pacjenci z ciężkimi objawami AIDS często mają podwyższone poziomy IgA. W niektórych stadiach choroby znacznie wzrasta poziom takich markerów AIDS, jak 1-mikroglobulina, interferon stabilny w kwasie, 1-tymozyna. To samo dzieje się z wydzielaniem wolnej neopteryny, metabolitu makrofagów. Nie jest jeszcze możliwe oszacowanie względnego znaczenia każdego z wymienionych testów, których liczba stale rośnie. Dlatego należy je rozpatrywać w interakcji z markerami zakażenia wirusem HIV, zarówno immunowirusowymi, jak i cytologicznymi. Kliniczne badanie krwi charakteryzuje się leukopenią, limfopenią (odpowiednio zmniejszeniem liczby leukocytów i limfocytów).
Scena 1 - " etap inkubacji»
- przeciwciała przeciwko HIV nie zostały jeszcze wykryte; rozpoznanie zakażenia wirusem HIV na tym etapie odbywa się na podstawie danych epidemiologicznych i musi być potwierdzone laboratoryjnie przez wykrycie ludzkiego wirusa niedoboru odporności, jego antygenów, kwasów nukleinowych HIV w surowicy krwi pacjenta;
Etap 2 - " etap początkowych manifestacji»
- w tym okresie następuje już produkcja przeciwciał:;
Etap 2A - „ bezobjawowy»
- Zakażenie wirusem HIV objawia się jedynie produkcją przeciwciał;
etap 2B - " ostre zakażenie wirusem HIV bez choroby wtórnej»
- we krwi pacjentów można wykryć limfocyty o szerokim osoczu - „komórki jednojądrzaste” i często obserwuje się przejściowy spadek poziomu limfocytów CD4 (ostra infekcja kliniczna występuje u 50-90% zakażonych osób w pierwszych 3 miesiące po zakażeniu; początek okresu ostrej infekcji z reguły wyprzedza serokonwersję, czyli pojawienie się przeciwciał przeciwko HIV);
etap 2B - " ostra infekcja wirusem HIV z chorobami wtórnymi»
- na tle obniżenia poziomu limfocytów CD4 i wynikającego z tego niedoboru odporności pojawiają się choroby wtórne o różnej etiologii (zapalenie migdałków, bakteryjne i pneumocystozowe zapalenie płuc, kandydoza, zakażenie opryszczką itp.);
Etap 3 - „ utajony»
- w odpowiedzi na postępujący niedobór odporności następuje modyfikacja odpowiedzi immunologicznej w postaci nadmiernej reprodukcji komórek CD4, po której następuje stopniowy spadek poziomu limfocytów CD4, średnio w tempie 0,05-0,07x109/l na rok ; we krwi znajdują się przeciwciała przeciwko HIV;
Etap 4 - „ stadium chorób wtórnych»
- wyczerpanie limfocytów CD4, stężenie przeciwciał przeciwko wirusowi jest znacznie zmniejszone (w zależności od ciężkości chorób wtórnych wyróżnia się stadia 4A, 4B, 4C);
Etap 5 - „ etap końcowy»
- typowy spadek liczby komórek CD4 poniżej 0,05x109/l; stężenie przeciwciał przeciwko wirusowi jest znacznie zmniejszone lub przeciwciała mogą nie zostać wykryte.
Diagnozę zakażenia wirusem HIV przeprowadza się w celu postawienia ostatecznej diagnozy. Jeśli pacjent jest pewien infekcji, nie należy samoleczenia: należy skonsultować się ze specjalistą.
Pod pozorem AIDS można ukryć wiele chorób, które można wyleczyć, udając się do lekarza. Testy na infekcje są najczęstszą i wczesną metodą diagnostyczną.
Określenie stopnia zakażenia jest kontynuowane w laboratorium za pomocą badania krwi metodą ELISA lub PCR.
W związku z pogarszaniem się wskaźników epidemiologicznych zakażenia wirusem HIV, ogromnego znaczenia nabrało wczesne rozpoznanie choroby. Lekarz przeprowadza diagnostykę różnicową zakażenia wirusem HIV, zbiera informacje epidemiologiczne o chorobie.
W trakcie badania metod infekcji specjalista przeprowadza takie badania, jak:
- badanie mechanizmu rozwoju zakażenia wirusem HIV;
- diagnostyka chorób współistniejących.
Metody diagnozowania zakażenia wirusem HIV mają na celu wykrycie przeciwciał w teście ELISA, a po potwierdzeniu diagnozy specjalista prowadzi z pacjentem pracę wyjaśniającą na temat jego przestrzegania zasad w celu uniknięcia rozprzestrzeniania się choroby.
Testy na obecność AIDS są przeprowadzane u dzieci urodzonych przez zakażone matki po otrzymaniu przez nie leczenia antyretrowirusowego. Testy przesiewowe wykrywają przeciwciała przeciwko HIV 1 i 2.
Immunoblot jest potwierdzeniem i wykrywa przeciwciała przeciwko białkom HIV.
Wczesne rozpoznanie niedoboru odporności pozwala pacjentowi w krótkim czasie zmienić styl życia, rozpocząć leczenie i uzyskać pomoc psychologa. Charakterystyczne skargi pacjenta zawsze pomagają lekarzowi podejrzewać AIDS i wysłać krew pacjenta do laboratorium w celu analizy.
Szybkie testy czwartej generacji na AIDS
Diagnostyka laboratoryjna zakażenia wirusem HIV, przeprowadzona za pomocą testów czwartej generacji, pozwala określić chorobę w ostrej fazie choroby. Test Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo jest bardzo czuły na antygeny i przeciwciała w surowicy pacjenta. Swoistość badania wynosi 99,19% dla linii Ab i 99,64% dla linii Ag, a dodatnia wartość predykcyjna mieści się w granicach 55%.
Czułość testu określa się, określając wcześniej znane wyniki. Po otrzymaniu pozytywnych danych prawdopodobieństwo błędnych liczb sięga 45%.
W domu wykonuje się badanie wymazu z jamy ustnej. Badanie jest komfortowe, proste i bezbolesne dla pacjenta. Pasek testowy ImmunoChrom-½-Express służy do analizy i zapewnia stabilny wynik, jeśli pacjent postępuje zgodnie z instrukcjami dołączonymi do leku. Jeśli w obszarze testowym i kontrolnym zostaną znalezione dwa identyczne fioletowe paski, wynik testu uważa się za pozytywny. Obecność jednego paska jest odczytywana jako negatywny wynik analizy.
Czas poświęcony na badanie wynosi od 15 do 30 minut.
Rozpoznanie choroby w okresie inkubacji
Klęska układu odpornościowego następuje, gdy wirus dostanie się do organizmu pacjenta. Okres inkubacji zmienia się w ciągu 3 miesięcy.
Po niechcianym i niebezpiecznym kontakcie z partnerem konieczne jest wykonanie testu PCR i na podstawie wyników wyciągnięcie wniosku o obecności zakażenia wirusem HIV w organizmie. Maksymalny okres rozpoczęcia diagnostyki niedoboru odporności wynosi 8-9 miesięcy, aw wyjątkowych przypadkach wydłuża się do 2 lat.
W celu ostatecznego rozpoznania choroby badanie przeprowadza się w ciągu roku; co 3 miesiące pacjent oddaje krew na HIV. Natychmiastowy kontakt ze specjalistą po niebezpiecznym kontakcie zmniejsza prawdopodobieństwo zakażenia o 90%.
Do diagnostyki laboratoryjnej wczesnego okresu choroby stosuje się metodę reakcji polimerazy, która oznacza kwasy nukleinowe. Wyniki analizy są rozszyfrowywane w ciągu kilku godzin, przy zachowaniu pełnej anonimowości.
Twórczy test HIV/AIDS MP-HIV ½ wykonuje się w domu, 4 tygodnie po niebezpiecznej ekspozycji. Kasety testowe wykrywają przeciwciała wirusa HIV nr 1 i 2.
Ekspresowe metody diagnostyczne AIDS u dzieci
Dzieci urodzone przez zakażone matki są badane na obecność wirusa AIDS. Serologiczne metody ustalania choroby nie zawsze znajdują potwierdzenie u niemowląt w wieku 5-18 miesięcy, ale wynik ma późniejszą wartość dodatnią w immunoblocie.
Wysoce czuła metoda PCR pozwala na stwierdzenie obecności wirusa AIDS w organizmie dziecka.
DNA patogenu znajduje się u dziecka w pierwszym miesiącu życia. System wykrywania prowirusów niedoboru odporności przeznaczony jest do oznaczania stężenia RNA patogenu.
Do analizy nadaje się krew pełna lub jej wysuszone plamy. Próbkę umieszcza się w probówce z konserwantem EDTA w stosunku 1:20. Przechowywać materiał w temperaturze 2-8°C przez 2 dni, eliminując zamarzanie krwi.
Suszone próbki krwi uzyskuje się przez nałożenie całej cieczy na specjalny papier. Materiał do diagnostyki przechowuje się w temperaturze nieprzekraczającej 8°C. Okres użytkowania kart nie przekracza 8 miesięcy.
Badanie noworodka i wykonanie analizy przeprowadza się w następujących terminach: 2 dni po urodzeniu, w wieku dwóch miesięcy, po 3-6 miesiącach. Wykrycie genu prowirusa HIV kilka godzin po urodzeniu wskazuje na zakażenie płodu w okresie prenatalnym. Do zakażenia może dojść podczas porodu lub karmienia piersią dziecka.
Dane potwierdzające obecność DNA wirusa w dwóch próbkach kontrolnych wskazują na rozwój zakażenia wirusem HIV u dziecka.
Obserwacja ambulatoryjna zostaje odwołana po otrzymaniu negatywnych testów metodą PCR 4 miesiące po urodzeniu dziecka.
Błędy badawcze
Fałszywie dodatnia analiza obecności wirusa niedoboru odporności we krwi pacjenta z wielu powodów zaburza dokładność określenia choroby. Błędy czyhają na pacjenta podczas badania w domu.
Fałszywy wynik pojawia się, gdy pacjent ma schorzenia takie jak: reaktywność krzyżowa, ciąża, dawcy krwi, zakażenie wirusem grypy, choroba układu oddechowego, choroby autoimmunologiczne, rak, stwardnienie rozsiane.
Alergia przyczynia się do produkcji antygenów, które są obce organizmowi pacjenta. Są one rozpoznawane przez system testowy z fałszywym wynikiem. Infekcje grzybicze, wirusowe przyczyniają się do nieprawidłowego określenia obecności wirusa AIDS.
Zakażenie powinno być leczone, a następnie badane pod kątem AIDS. W celu uzyskania jakościowego wyniku badania pacjent zobowiązany jest do poinformowania lekarza o współistniejących dolegliwościach i przeprowadzanym leczeniu.
Diagnoza metodą ELISA
Całkowite spektrum przeciwciał wykrytych testem immunoenzymatycznym pojawia się u 95% osób zakażonych wirusem AIDS. Pozytywny podwójny wynik w teście ELISA przewiduje obecność drugiego etapu potwierdzającego - testu immunoblot. Polega na badaniu przeciwciał i ich związku z poszczególnymi strukturami białkowymi patogenu. Badanie ELISA ma dwie reakcje: enzymatyczną i immunologiczną. Analiza opiera się na interakcji przeciwciał i antygenów.
Konsekwentnie określaj przeciwciała, kompleks immunologiczny, aktywność enzymatyczną. Specjalista rozszyfrowuje dane analizy. Wartości ujemne wskazują na brak zakażenia wirusem HIV u pacjenta.
W przypadku braku przeciwciał i niedawnej infekcji lekarz ustala wynik fałszywie ujemny.
Jeśli próbki materiału do badania wirusa nie są przechowywane niedbale, uzyskane wskaźniki mogą być fałszywe.
Test wykonany po zaszczepieniu pacjenta jest pozytywny i może nie być wiarygodny.
Należy odpowiednio przygotować rozcieńczenie surowicy, wyczyścić zużyte płytki i zakupić wysokiej jakości barwnik.
Dodatni wynik immunoboltingu objawia się kombinacją prążków GP 41 i GP 120 oraz antygenu. Wynik negatywny wskazuje na brak prążków.
Przy formułowaniu wniosku diagnostycznego brane są pod uwagę wyniki badań, wskaźniki badania pacjenta w szpitalu oraz badanie epidemiologiczne pacjenta.
Te pierwsze służą do identyfikacji wszystkich osób zakażonych wirusem HIV, drugie do identyfikacji osób, które nie są zakażone wirusem HIV, ale które dały pozytywny wynik testu przesiewowego. Dlatego testy przesiewowe są bardzo czułe, tj. prawie nie dają wyników fałszywie ujemnych, a testy potwierdzające są wysoce swoiste, tj. prawie nie dają wyników fałszywie dodatnich. Razem testy te zapewniają dokładne i wiarygodne wyniki, które mogą wykryć skażone produkty krwiopochodne i zdiagnozować zakażenie wirusem HIV. Istnieją jednak czynniki biologiczne, które zmniejszają dokładność tych testów; możliwe są również błędy laboratoryjne. Dlatego każde laboratorium, które wykonuje testy na przeciwciała HIV, musi mieć nienaganny program kontroli jakości tych testów. Nie wolno nam zapominać, że rzetelność badań laboratoryjnych nigdy nie jest stuprocentowa, a ich wyniki zawsze należy traktować jako uzupełnienie diagnozy klinicznej.
Okres okna i wczesne wykrywanie zakażenia wirusem HIV:
Przeciwciała przeciwko HIV zaczynają być wytwarzane wkrótce po zakażeniu, ale czas ich pojawienia się zależy od wielu czynników, w szczególności od stanu układu odpornościowego pacjenta i właściwości wirusa. Należy zauważyć, że przeciwciała mogą być obecne we krwi już wcześnie po zakażeniu, ale ich stężenie jest poniżej granicy wykrywalności niektórych metod (okres okienkowy). Pierwsze systemy testowe wykryły przeciwciała u prawie wszystkich osób zakażonych wirusem HIV 6–12 tygodni po zakażeniu. Najnowsze systemy testowe, w tym pułapka ELISA trzeciej generacji, wykrywają przeciwciała 3-4 tygodnie po zakażeniu. Czas między zakażeniem a rozpoznaniem zakażenia wirusem HIV można skrócić o kilka dni stosując metody wykrywania antygenu HIV i kilka kolejnych dni stosując metody wykrywania HIV RNA. Przy zastosowaniu wszystkich opisanych metod rozpoznanie zakażenia wirusem HIV u większości pacjentów można ustalić już po 2-3 tygodniach od zakażenia. Dostępne na rynku systemy testowe do skriningu w kierunku przeciwciał przeciwko HIV mają bardzo wysoką i w przybliżeniu taką samą czułość, wystarczającą do wykrycia większości osób zakażonych wirusem HIV (tzw. czułość epidemiologiczna). Jednak różne systemy testowe różnią się czułością analityczną, tj. zdolnością do wykrywania niskich poziomów przeciwciał, które występują przed zakończeniem serokonwersji.
Istnieją systemy testowe przeznaczone do wykrywania przeciwciał IgM przeciwko HIV, ale nie są one powszechnie stosowane we wczesnej diagnostyce zakażenia wirusem HIV, ponieważ przeciwciała IgM nie zawsze są wytwarzane wcześnie po zakażeniu. Niektóre systemy testowe trzeciej generacji jednocześnie wykrywają przeciwciała IgM i IgG przeciwko HIV i mają wyższą czułość analityczną.
Zobacz też: Ujawnienie statusu HIV bez żalu, Krzywa przegroda, Tętniak naczyniowy: ukryte zagrożenie dla zdrowia, Badania prenatalne; aberracje chromosomalne, utajony zez (Strabismus latenta, Heterophoria), ukryte ryzyko: kobiety i choroby serca, utajona kiła (Syphilis latens), protokół Realtime RT-PCR CDC do wykrywania i testowania grypy A(H1N1), zgrzytanie zębami (bruksizm), ostrożność : ukryte alergeny
|
Diagnostyka laboratoryjna zakażenia wirusem HIV
Podczas diagnozowania zakażenia wirusem HIV stosuje się 4 grupy metod:
1. Oznaczanie obecności wirusa, jego antygenów lub kopii RNA w materiałach pochodzących od pacjenta lub osoby zakażonej wirusem HIV
Diagnostyka serologiczna oparta na wykrywaniu swoistych przeciwciał przeciwko powierzchniowym (gp 120 i gp 41) i wewnętrznym (p 18 i p 24) białkom HIV.
3. Identyfikacja zmian patognomonicznych (swoistych) dla zakażenia wirusem HIV w układzie odpornościowym.
Diagnostyka laboratoryjna zakażeń oportunistycznych (choroby związane z AIDS).
1. Diagnostyka wirusologiczna. Materiałem do izolacji wirusa HIV są limfocyty T krwi, leukocyty szpiku kostnego, węzły chłonne, tkanki mózgowe, ślina, nasienie, płyn mózgowo-rdzeniowy i osocze krwi.
Uzyskany materiał służy do infekowania ciągłej hodowli limfocytów T (H9). Wskazanie HIV w hodowli komórkowej przeprowadza się za pomocą CPP (tworzenie simplastów), a także za pomocą immunofluorescencji, mikroskopii elektronowej, na podstawie wyraźnej aktywności odwrotnej transkryptazy.
Nowoczesne metody badawcze umożliwiają wykrycie jednego zainfekowanego limfocytu na 1000 komórek.
Wykrywanie antygenów wirusowych w zakażonych limfocytach T przeprowadza się za pomocą przeciwciał monoklonalnych
W ostatnich latach określenie liczby kopii RNA wirusa HIV w osoczu krwi metodą reakcji łańcuchowej polimerazy (PTCR), tzw. wiremii, stało się kluczowe dla określenia rokowania i ciężkości zakażenia wirusem HIV.
Jeśli u pacjentów nieotrzymujących terapii miano wirusa jest poniżej granicy wykrywalności (jest to mniej niż 5000 kopii RNA HIV w 1 ml osocza), oznacza to brak progresji lub powolną progresję. Stopień zakażenia jest minimalny. Wysokie miano wirusa (ponad 10 000 kopii RNA w 1 ml osocza) u pacjentów z mniej niż 300 limfocytami CO4 w 1 µl zawsze wskazuje na postęp choroby.
Diagnostyka serologiczna. Obecnie otrzymał największą dystrybucję.
Materiał do zbadania: 5 ml. krew heparynizowana, którą można przechowywać w lodówce przez 6-8 godzin przed dostarczeniem do laboratorium, ale nie można jej zamrozić.
W diagnostyce serologicznej AIDS stosuje się przede wszystkim testy immunoenzymatyczne ze standardowymi testami immunoenzymatycznymi (ELISA).
Jest to metoda przesiewowa. Zasada działania opiera się na klasycznej zasadzie bezpośredniego testu ELISA. Immunosorbent to polistyrenowe tabletki z unieruchomionym inaktywowanym antygenem specyficznym dla wirusa, otrzymanym z HIV lub syntetycznie.
Następnie dodaje się badaną surowicę w rozcieńczeniu. Inkubację przeprowadza się w studzienkach z antygenem. Po związaniu AG z AT niezwiązane białka przemywa się trzykrotnie, a następnie do studzienek dodaje się koniugat przeciwciał przeciwko immunoglobulinom ludzkim ze znacznikiem enzymatycznym.
Powstanie specyficznego kompleksu AG+AT wykrywa się wprowadzając substrat dla enzymu (roztwór ortofenylenodiaminy i nadtlenku wodoru).
W rezultacie kolor podłoża zmienia się proporcjonalnie do ilości przeciwciał. Wyniki badania są brane pod uwagę na spektrofotometrze.
Surowice krwi, które mają przeciwciała specyficzne dla wirusa zgodnie z testem ELISA, powinny być dalej badane przez immunoblotting.
Immune blotting jest testem potwierdzającym, ponieważ wykrywa przeciwciała przeciwko różnym białkom HIV.
Polega na wstępnym frakcjonowaniu według masy cząsteczkowej (separacji) białek HIV za pomocą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym, a następnie przeniesieniu antygenów na membranę nitrocelulozową. Następnie na membranę nakładana jest surowica testowa. W tym przypadku specyficzne przeciwciała tworzą kompleks ze specyficznym antygenem (gp.120, gp.41, p.24, p.18). Ostatnim etapem badania jest wykrycie przeciwciał przeciwko różnym białkom wirusa HIV.
W tym celu do systemu dodaje się przeciwciała przeciwko ludzkim białkom znakowanym enzymem lub znacznikiem radioizotopowym.
Tak więc w surowicy pacjenta wykrywa się (lub nie wykrywa) przeciwciała specyficzne dla wirusa przeciwko wszystkim lub większości antygenów HIV.
3. Badania stanu immunologicznego. Ma na celu identyfikację:
1) spadek stosunku komórek CD4 / CD8 (w N 2 i >, z AIDS - 0,5 i<);
2) spadek zawartości komórek CD4 (<200 клеток/мл.);
3) obecność jednego z objawów laboratoryjnych, w tym niedokrwistości, leukopenii, małopłytkowości, limfopenii;
4) wzrost stężenia Ig A i Ig G w surowicy krwi;
5) zmniejszenie odpowiedzi granulacji blastycznej limfocytów na mitogeny;
6) brak reakcji skórnej GTZ na kilka antygenów;
7) wzrost poziomu krążących kompleksów immunologicznych.
Poprzedni1234567891011Następny
ZOBACZ WIĘCEJ:
Przeciwciała przeciwko HIV 1/2- składniki osocza krwi, o charakterze białkowym, które zapobiegają namnażaniu się zakażenia wirusem HIV i całkowicie neutralizują ich negatywny wpływ.
Co to jest test na przeciwciała HIV 1/2 (badanie przesiewowe)
Analiza przesiewowa w kierunku przeciwciał na HIV 1,2 - system testów pozwalających na identyfikację osób zakażonych wirusem niedoboru odporności. Oprócz nich istnieją tzw. testy potwierdzające (pomocnicze), których zadaniem jest identyfikacja osób niezakażonych wirusem, ale z pozytywną reakcją na wirusa podczas skriningu.
Istotą badania przesiewowego zakażenia wirusem HIV jest oznaczenie przeciwciał przeciwko wirusowi niedoboru odporności.
Jego cechą wyróżniającą jest podwyższona czułość - ponad 99,5%. Specyfika testów polega na tym, że badanie przesiewowe może dać wynik fałszywie dodatni, jeśli organizm pacjenta zawiera autoprzeciwciała.
Identyczny wynik można wykryć w przypadku pacjenta z chorobą wątroby, szczepionką przeciw grypie lub obecnością jakiejkolwiek ostrej choroby wirusowej. Na tej podstawie, w celu uzyskania dokładnych wyników, wraz z badaniem przesiewowym, zwyczajowo wykonuje się wyżej wymienione badanie potwierdzające.
Wskazania do analizy
W praktyce medycznej istnieje dość szeroki zakres wskazań do badań przesiewowych.
Pacjent może zgłosić się do laboratorium, jeśli:
- podejrzenie zakażenia (w przypadku bliskiego kontaktu z nosicielem zakażenia wirusem HIV);
- z utratą masy ciała, gorączką;
- zapalenie płuc, które nie podlega konwencjonalnej terapii;
- choroby o charakterze przewlekłym, które powstały z nieznanych przyczyn;
- w przygotowaniu do operacji;
- transfuzje krwi;
- ciąża i planowanie rodziny;
- Z zapaleniem węzłów chłonnych;
- Przypadkowy seks.
Osoby należące do szczególnej grupy ryzyka: narkomani i osoby prowadzące rozwiązłe życie seksualne.
Jak przeprowadza się badanie przesiewowe na obecność przeciwciał HIV 1/2
Procedura obejmuje przestrzeganie szeregu niezbędnych zasad:
- pacjent musi oddać krew wyłącznie na czczo (dozwolone jest picie wody);
- od ostatniego posiłku musi upłynąć co najmniej osiem godzin;
- lekarz powinien być poinformowany o tym, jakie leki przyjmuje pacjent i znać ich dawkowanie (jeśli nie ma możliwości nawet krótkotrwałego anulowania);
- jeśli pacjent jest w stanie opóźnić stosowanie leków, zaleca się, aby zrobił to 10-15 dni przed dniem manipulacji;
- na dzień przed rozpoczęciem badania wskazane jest, aby pacjent odmówił spożywania smażonych lub tłustych potraw, zabrania się również picia napojów alkoholowych, palenia tytoniu oraz ograniczenia dużego wysiłku fizycznego.
Należy zauważyć, że testy laboratoryjne na obecność infekcji u dzieci urodzonych przez matki będące nosicielkami wirusa niedoboru odporności mają swoją specyfikę.
Ponieważ w pierwszych miesiącach życia dziecka w jego krwi mogą być obecne matczyne przeciwciała przeciwko HIV, nie jest możliwe uzyskanie obiektywnego obrazu stanu zdrowia noworodka na podstawie wyników analizy, a nawet wyniku ujemnego wcale nie oznacza, że wirus nie mógł przeniknąć przez barierę łożyskową.
Aby uzyskać dokładne dane, badania należy przeprowadzić w ciągu 36 miesięcy po urodzeniu dziecka.
Usługi w kierunku "Nowoczesna diagnostyka"
Kliniki na kierunku „Nowoczesna diagnostyka”
Istnieją dwa szerokie, ale bardzo dobrze zdefiniowane cele testowania lub badań przesiewowych na obecność przeciwciał HIV - wykrywanie przypadków i nadzór. Podczas identyfikacji przypadków pierwszym krokiem jest wyjaśnienie statusu HIV każdej osoby w celu rozpoczęcia odpowiedniego leczenia lub obserwacji za pomocą odpowiednich środków.
Celem nadzoru epidemiologicznego jest ocena rozpowszechnienia zakażenia wirusem HIV, rozmieszczenia przypadków zakażenia oraz jego trendów w grupie lub całej populacji.
Czułość testu na przeciwciała przeciwko HIV jest miarą jego zdolności do dokładnego wykrywania tych przeciwciał w próbce, podczas gdy specyficzność testu jest miarą jego zdolności do dokładnego potwierdzenia braku przeciwciał, gdy nie są one obecne w próbce.
Idealnie czułość i swoistość testu powinna sięgać 100%. W praktyce żaden test biologiczny nie spełnia tego wymogu, a jednak stosowane testy na obecność przeciwciał przeciwko HIV należą do najbardziej czułych i swoistych obecnie dostępnych testów.
Diagnostyka laboratoryjna AIDS polega na prowadzeniu badań wirusologicznych, serologicznych, immunologicznych materiału pochodzącego od pacjentów z podejrzeniem AIDS.
W badaniach wirusologicznych do wyizolowania wirusa można zastosować pierwotne hodowle jednojądrzastych komórek krwi.
Izolacja i identyfikacja wirusa jest metodycznie trudna i może być przeprowadzona w wyspecjalizowanych laboratoriach. Najskuteczniejszą metodą diagnostyczną stosowaną obecnie w rutynowych badaniach masowych jest wykrywanie przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi niedoboru odporności. Przeciwciała przeciwko HIV mogą pojawić się pod koniec pierwszego miesiąca zakażenia. Złożone przez wielu autorów, rozwój serokonwersji wymaga od 4-7 tygodni do 6 miesięcy lub więcej. Obecność przeciwciał świadczy o AIDS lub wskazuje na ryzyko jej rozwoju.
Przeciwciała są nie tylko serologicznym markerem AIDS. Ujawnione w przedklinicznej fazie choroby pozwalają na jej wczesne rozpoznanie. Ich obecność nabiera szczególnego znaczenia w wykrywaniu nosicieli.
Przeciwciała są wykrywane przez wiele lat, prawie przez całe życie. Naukowcy ustalili paralelizm w wykrywaniu wirusa i przeciwciał przeciwko niemu, czyli obecność przeciwciał przeciwko wirusowi niedoboru odporności wskazuje na duże prawdopodobieństwo, że dana osoba jest nosicielem wirusa.
Przeciwciała przeciwko antygenowi HIV, które pojawiły się w okresie inkubacji, są nadal intensywnie wytwarzane wraz z rozwojem choroby, ponieważ podrażnienie antygenowe jest stymulowane zarówno przez wiriony uwalniane z zakażonych limfocytów, jak i składniki subwirionu, które dostają się do krwioobiegu podczas rozpadu zakażonych komórek i zakażonych limfocytów.
Jednocześnie prowirus wbudowany w genom zainfekowanych komórek pozostaje niedostępny dla swoistych przeciwciał. Wyjaśnia to pozornie paradoksalny fakt: im więcej przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi niedoboru odporności w surowicy krwi, tym łatwiej jest wyizolować samego wirusa od pacjenta.
Dzieje się tak, ponieważ przeciwciała wytwarzane w odpowiedzi na infekcję wirusową nie są neutralizujące i dlatego nie mają zauważalnego wpływu na wirusa, ale są po prostu obecne w organizmie wraz z nim. Aby wykryć przeciwciała (AT) wirusa AIDS, opracowano szereg testów, które umożliwiają prowadzenie badań na wystarczająco wysokim poziomie swoistości i czułości. Są to metody testu radioimmunologicznego w fazie stałej, radioimmunoprecypitacji, immunofluorescencji, testu immunoenzymatycznego i blottingu immunologicznego.
Najszersze zastosowanie w praktyce znalazły metody testu immunoenzymatycznego (ELISA), które charakteryzują się wysoką czułością, możliwością ilościowej i wizualnej rejestracji wyników reakcji, co czyni metodę dostępną dla laboratoriów każdego szczebla.
Test ELISA wykorzystuje zagraniczne i krajowe systemy testowe.
Przebieg kliniczny zakażenia wirusem HIV i AIDS
Należy zachować ostrożność w przypadku dzieci urodzonych przez zakażone matki. W przypadku braku kliniki dziecko uważa się za zakażone, jeśli AT na HIV utrzymuje się po roku. Po otrzymaniu pozytywnego wyniku w teście ELISA należy trzykrotnie przebadać surowice, które dały pojedynczy wynik dodatni, i potwierdzić wynik pozytywny w niezależnym systemie - immunoblottingu
Wykrycie AT w reakcji ELISA nie dostarcza wystarczających informacji, ponieważ nie wskazuje stanu osobnika, a jedynie wskazuje na inkubację, chorobę lub obecność bezobjawowej infekcji.
Immune blotting dostarcza więcej informacji, ponieważ obecność AT na wielu antygenach HIV jest charakterystyczna dla ciężkiej choroby, podczas gdy reakcja z 1-2 antygenami jest bardziej charakterystyczna dla łagodnego procesu zakaźnego
Pouczające jest obliczenie liczby T (pomocników) i stosunku T4 do Te (supresorów) limfocytów, określone przy użyciu przeciwciał mono-kponalnych.
Ważnym kryterium choroby może być gwałtowny wzrost liczby immunoglobulin, zwłaszcza A i V. W ogólnej analizie klinicznej krwi na chorobę mogą wskazywać limfopenia, leukopenia, erytropenia, małopłytkowość, eozynofilia.
Testy na obecność wirusa HIV stosowane w nadzorze epidemiologicznym nie muszą być tak dokładne, jak wymagane do celów klinicznych.
Jednak przy bardzo niskim rozpowszechnieniu HIV w populacji wszystkie dodatnie próbki powinny zostać ponownie przebadane w dodatkowych testach.
Pobieraniu krwi do badania na obecność wirusa HIV lub badania przesiewowego może towarzyszyć rejestracja nazwisk osób (zbieranie nazwisk) lub odbywać się bez rejestracji nazwisk lub indywidualnych danych identyfikacyjnych (zbieranie danych anonimowych) (Tabela 1).
Anonimowe badanie przesiewowe bez informacji identyfikacyjnych charakteryzuje się następującymi cechami: wykorzystuje się próbki krwi pobrane do innych celów; gwarantowana jest anonimowość dzięki temu, że nie są zbierane ani brane pod uwagę żadne dane identyfikacyjne; nie jest wymagane uzyskanie zgody osób; kontakt z poradnią i opieką społeczną nie jest wymagany; wreszcie, co najważniejsze, minimalizowane są błędy szacunków statystycznych, w zależności od poziomu uczestnictwa populacji.
Chociaż dokładniejsze dane można uzyskać z anonimowego testu na obecność wirusa HIV, metoda ta ma następujące wady: nie może wyeliminować potencjalnego błędu selekcji; dane dotyczące zachowań ryzykownych i innych ważnych zmiennych nie są dostępne i nie można ich gromadzić retrospektywnie; nie ma możliwości nawiązania kontaktu z osobami zakażonymi wirusem HIV w celu poinformowania ich o swoim stanie zdrowia; badanie może być przeprowadzone tylko w grupach osób, których krew jest pobierana do innych celów.
Na obszarach, gdzie częstość występowania HIV jest uważana za bardzo niską, nadzór zdrowia publicznego powinien koncentrować się przede wszystkim na osobach lub populacjach o zachowaniach najbardziej ryzykownych.
Krew do badania w kierunku HIV w tej grupie ryzyka najłatwiej uzyskać w ośrodkach specjalizujących się w leczeniu chorób przenoszonych drogą płciową lub podobnych placówkach.
Jeśli powszechne jest również dożylne zażywanie narkotyków, od osób zażywających narkotyki należy pobrać próbki krwi w wyspecjalizowanych placówkach.
Pobieranie krwi raz na 3 lub 6 miesięcy w grupach największego ryzyka z obszarów geograficznych, w których takie grupy są najliczniejsze, zwykle będzie wystarczające. Wyjątkiem mogą być grupy ryzyka, takie jak osoby zażywające narkotyki dożylnie, które mogą wymagać częstszych badań.
WHO opracowuje obecnie system klasyfikacji (stagingu) choroby na potrzeby badań klinicznych, który może być również wykorzystany w badaniach klinicznych, co może mieć również wartość predykcyjną.
Jednak taki system nie ma na celu zastąpienia istniejących definicji AIDS stosowanych w nadzorze opieki zdrowotnej.
Obecnie wszędzie powstają systemy planowego (rutynowego) nadzoru nad HIV.
Systemy te należy dostosować do aktualnej sytuacji epidemiologicznej; w związku z tym metody pobierania próbek w populacjach o bardzo niskiej częstości występowania wirusa muszą koniecznie różnić się od metod stosowanych w przypadku umiarkowanej lub wysokiej częstości występowania.
Taki nadzór obejmuje rutynowe badania dobrze zdefiniowanych i dostępnych populacji.
Powinno ono obejmować przede wszystkim te grupy, które są najbardziej narażone na zakażenie, aw każdej z tych grup należy wyselekcjonować do badania stałą, z góry określoną liczbę osobników.
W ostatnich latach anonimowe badania przesiewowe w obserwowalnych grupach bez względu na dane identyfikacyjne stają się coraz bardziej powszechne jako dokładny i opłacalny sposób nadzoru epidemiologicznego nad zakażeniem wirusem HIV w systemie ochrony zdrowia.
Metody laboratoryjnej diagnostyki HIV
W wysokospecjalistycznym laboratorium przeprowadzane są:
a) oznaczenie przeciwciał, antygenów i kompleksów immunologicznych krążących we krwi; hodowla wirusa, wykrywanie jego materiału genomowego i enzymów;
b) ocena funkcji ogniwa komórkowego układu odpornościowego.
Główną rolę odgrywają metody diagnostyki serologicznej, których celem jest oznaczanie przeciwciał, a także antygenów patogenów we krwi i innych płynach ustrojowych.
Badanie na obecność przeciwciał przeciwko HIV przeprowadza się w celu:
a) bezpieczeństwo transfuzji krwi i przeszczepów;
b) obserwacja, testowanie w celu monitorowania rozpowszechnienia zakażenia wirusem HIV i badanie dynamiki jego rozpowszechnienia w określonej populacji;
c) rozpoznanie zakażenia wirusem HIV, tj.
e. Dobrowolne badanie surowicy krwi pozornie zdrowych osób lub pacjentów z różnymi objawami klinicznymi podobnymi do zakażenia wirusem HIV lub AIDS.
System diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV opiera się na zasadzie trójstopniowej.
Pierwszym etapem jest badanie przesiewowe, mające na celu wykonanie podstawowych badań krwi na obecność przeciwciał przeciwko białkom wirusa HIV. Drugi etap ma charakter referencyjny – pozwala przy pomocy specjalnych technik metodycznych wyjaśnić (potwierdzić) pierwotny pozytywny wynik uzyskany na etapie screeningu. Etap trzeci – ekspercki, przeznaczony jest do ostatecznej weryfikacji obecności i swoistości markerów zakażenia wirusem HIV zidentyfikowanych na poprzednich etapach diagnostyki laboratoryjnej.
Konieczność przeprowadzenia kilkuetapowej diagnostyki laboratoryjnej wynika przede wszystkim ze względów ekonomicznych.
W praktyce do identyfikacji osób zakażonych wirusem HIV z wystarczającą pewnością stosuje się kilka testów:
Test ELISA (ELISA) (test immunoenzymatyczny) do wykrywania pierwszego poziomu charakteryzuje się dużą czułością, choć mniejszą specyficznością niż poniższe;
Immune blot (Western-blot), bardzo specyficzny i najczęściej używany test do różnicowania HIV-1 i HIV-2;
Test antygenemiczny p25, skuteczny w początkowej fazie infekcji;
Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR).
W przypadku masowych badań przesiewowych próbek krwi zaleca się badanie mieszanin surowic z grupy osób, zestawionych w taki sposób, aby końcowe rozcieńczenie każdej próbki nie przekraczało 1:100.
Jeżeli mieszanina surowic jest dodatnia, testowana jest każda surowica z mieszaniny dodatniej. Metoda ta nie prowadzi do utraty czułości zarówno w teście ELISA, jak i immunoblot, ale zmniejsza koszty pracy i koszt badania wstępnego o 60-80%.
Metody immunologiczne
liczba pomocników T,
2. stosunek T4 i T8,
3. stan nadwrażliwości,
4. funkcja kompensacyjna układu limfocytów T.
Objawia się to nadprodukcją immunoglobulin, mają one niskie powinowactwo i jeszcze bardziej zużywają materiał organizmu.
Wady: pojawiają się późno, niektóre wskaźniki immunologiczne mogą występować przy innych infekcjach.
Metody kliniczne - być może. podobnie jak w innych chorobach, najbardziej typowe objawy odnotowuje się w późniejszych stadiach, stąd diagnostyka kliniczna jest mało skuteczna
Główna metoda - serologiczna - jest wdrażana w 2 etapach:
1 - badanie przesiewowe - pobieranie próbek na przeciwciała całkowite przeciwko wszystkim białkom analizy immunologicznej.
Ten etap daje 95% wyników prawdziwych i 5% wyników fałszywie dodatnich.
2 - metoda potwierdzająca - wszystkie próbki są badane metodą potwierdzającą. Technika ta pozwala na wykrycie przeciwciał przeciwko białku wirusowemu.
Wynik pozytywny, gdy zostaną wykryte przeciwciała przeciwko co najmniej 3 białkom wirusa, jeśli do 1 lub 2 wynik jest wątpliwy i wymaga dodatkowych badań.
W pierwotnej serodiagnostyce zakażenia wirusem HIV przeciwciała całkowite oznacza się za pomocą przesiewowych testów przesiewowych - ELISA oraz reakcji aglutynacji.
Na drugim (arbitrażowym) etapie stosuje się bardziej złożony test - immunoblot, który pozwala nie tylko potwierdzić lub odrzucić wstępny wniosek, ale także zrobić to na poziomie oznaczania przeciwciał przeciwko poszczególnym białkom wirusa.
Interpretacja wyników testu na przeciwciała HIV
Na wynik analizy na obecność przeciwciał przeciwko HIV wpływa dość duża liczba różnych czynników, a wśród nich ważny jest czas analizy po ewentualnym zakażeniu.
W większości przypadków przeciwciała HIV można wykryć od 6 do 12 tygodni po zakażeniu.
Ten okres od wniknięcia wirusa do organizmu do pojawienia się wykrywalnej ilości przeciwciał nazywany jest okresem pozytywnej serokonwersji lub okresem „okna”. Rzadko zdarzają się przypadki pojawienia się przeciwciał po 6 miesiącach od zakażenia, a doniesienia o wykryciu przeciwciał dopiero po 1 roku nie mają żadnych dowodów. Obecnie w serwisie diagnostycznym stosowane są nowe generacje metod ELISA, które pozwalają wykryć przeciwciała przeciwko HIV 3–4 tygodnie po zakażeniu, a pewne kombinacje tych metod, tzw. strategie testowania, skracają okres „okna” do 2–3 tygodni, tj. .
umożliwiają wykrycie przeciwciał przeciwko HIV, gdy tylko zaczną być produkowane w organizmie.
Wynik ujemny oznacza, że we krwi badanego nie wykryto przeciwciał przeciwko HIV.
Ten stan nazywa się seronegatywnością i zwykle oznacza, że dana osoba nie jest zarażona.
Negatywny wynik nie daje gwarancji na przyszłość. Podaje tylko stan w chwili badania. Istnieje niewielkie prawdopodobieństwo, że ankieta została przeprowadzona w okresie okna. Dlatego, jeśli dana osoba była wcześniej narażona na ryzyko zarażenia się wirusem HIV i uzyskała negatywny wynik testu, powinna zostać ponownie przebadana co najmniej 6 miesięcy po zdarzeniu ryzyka.
Wynik pozytywny oznacza, że we krwi pacjenta wykryto przeciwciała przeciwko wirusowi HIV.
Ten stan nazywa się seropozytywnością - osoba jest zarażona wirusem HIV. Ważne jest, aby zrozumieć, że pozytywny wynik wskazuje jedynie na zakażenie wirusem HIV, a nie na AIDS.
Niezwykle ważna jest jednak konsultacja lekarska i w razie potrzeby pomoc medyczna w celu zachowania dobrej jakości życia przez długi czas po uzyskaniu pozytywnego wyniku.
Wynik nieokreślony. Rzadko wynik testu na przeciwciała HIV jest niejasny.
Laboratorium nie może stwierdzić, czy dana osoba jest seropozytywna czy seronegatywna. W takiej sytuacji konieczna jest konsultacja lekarska i ponowne wykonanie badań.