प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष विषाणु विज्ञान अनुसंधान के तरीके। माइक्रोबायोलॉजी में वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड्स

वायरोलॉजिकल रिसर्च के तरीके- वायरस के जीव विज्ञान और उनकी पहचान के अध्ययन के तरीके। वायरोलॉजी में, आणविक जीव विज्ञान के तरीकों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, जिसकी मदद से वायरल कणों की आणविक संरचना को स्थापित करना संभव था, वे कोशिका में कैसे प्रवेश करते हैं और वायरस के प्रजनन की विशेषताएं, वायरल न्यूक्लिक एसिड की प्राथमिक संरचना और प्रोटीन। वायरल न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन अमीनो एसिड के घटक तत्वों के अनुक्रम को निर्धारित करने के तरीके विकसित किए जा रहे हैं। न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन के कार्यों को न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम के साथ जोड़ना और ई-वायरस संक्रमण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाने वाली इंट्रासेल्युलर प्रक्रियाओं के कारणों को स्थापित करना संभव हो जाता है।

वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड भी इम्यूनोलॉजिकल प्रोसेस (एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की इंटरेक्शन), वायरस के बायोलॉजिकल प्रॉपर्टीज (हेमग्लुटिनेट, हेमोलिसिस, एंजाइमेटिक एक्टिविटी) की क्षमता पर आधारित होते हैं, होस्ट सेल के साथ वायरस के इंटरेक्शन की विशेषताएं (साइटोपैथिक की प्रकृति) प्रभाव, इंट्रासेल्युलर समावेशन का गठन, आदि)।

वायरल संक्रमणों के निदान में, खेती, अलगाव और वायरस की पहचान के साथ-साथ टीके की तैयारी में, ऊतक और सेल संस्कृति की विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। प्राथमिक, माध्यमिक, स्थिर निरंतर और द्विगुणित सेल संस्कृतियों का उपयोग किया जाता है। प्राथमिक संस्कृतियों को प्रोटियोलिटिक एंजाइम (ट्रिप्सिन, कोलेजनेज़) के साथ ऊतक को फैलाकर प्राप्त किया जाता है। कोशिकाओं का स्रोत मानव और पशु भ्रूण के ऊतक और अंग (अधिक बार गुर्दे) हो सकते हैं। पोषक माध्यम में कोशिकाओं के निलंबन को तथाकथित गद्दों, बोतलों या पेट्री डिश में रखा जाता है, जहाँ, बर्तन की सतह से जुड़ने के बाद, कोशिकाएँ गुणा करना शुरू कर देती हैं। वायरस के संक्रमण के लिए, आमतौर पर एक सेल मोनोलेयर का उपयोग किया जाता है। पोषक तत्व तरल निकाला जाता है, वायरल निलंबन को कुछ कमजोरियों में पेश किया जाता है, और कोशिकाओं के संपर्क के बाद, ताजा पोषक माध्यम जोड़ा जाता है, आमतौर पर सीरम के बिना।

अधिकांश प्राथमिक संस्कृतियों की कोशिकाओं को उपसंवर्धित किया जा सकता है और उन्हें माध्यमिक संस्कृतियों के रूप में संदर्भित किया जाता है। कोशिकाओं के आगे पारित होने के साथ, फाइब्रोब्लास्ट जैसी कोशिकाओं की आबादी बनती है, जो तेजी से प्रजनन करने में सक्षम होती हैं, जिनमें से अधिकांश गुणसूत्रों के मूल सेट को बनाए रखती हैं। ये तथाकथित द्विगुणित कोशिकाएँ हैं। कोशिकाओं की क्रमिक खेती में, स्थिर निरंतर सेल कल्चर प्राप्त होते हैं। मार्ग के दौरान, गुणसूत्रों के विषम सेट के साथ तेजी से विभाजित होने वाली सजातीय कोशिकाएं दिखाई देती हैं। स्थिर सेल लाइनें मोनोलेयर और सस्पेंशन हो सकती हैं। मोनोलेयर कल्चर कांच की सतह पर एक सतत परत के रूप में विकसित होते हैं, सस्पेंशन कल्चर आंदोलनकारी का उपयोग करके विभिन्न जहाजों में सस्पेंशन के रूप में बढ़ते हैं। 40 विभिन्न जानवरों की प्रजातियों (प्राइमेट्स, पक्षी, सरीसृप, उभयचर, मछली, कीड़े) और मनुष्यों से प्राप्त 400 से अधिक सेल लाइनें हैं।

कृत्रिम पोषक मीडिया में अलग-अलग अंगों और ऊतकों (ऑर्गन कल्चर) के टुकड़ों की खेती की जा सकती है। इस प्रकार की संस्कृतियाँ ऊतक संरचना को संरक्षित करती हैं, जो विशेष रूप से वायरस के अलगाव और पारित होने के लिए महत्वपूर्ण है जो अविभाजित ऊतक संस्कृतियों (उदाहरण के लिए, कोरोनविर्यूज़) में प्रजनन नहीं करते हैं।

संक्रमित सेल कल्चर में, सेल आकारिकी में परिवर्तन, साइटोपैथिक क्रिया, जो विशिष्ट हो सकती है, सेल में वायरल एंटीजन का निर्धारण करके और कल्चर द्रव में विषाणुओं का पता लगाया जा सकता है; संस्कृति तरल पदार्थ में वायरल संतान के जैविक गुणों का निर्धारण और टिशू कल्चर, चिक भ्रूण या संवेदनशील जानवरों में वायरस का अनुमापन; फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके साइटोकेमिकल विधि द्वारा आणविक संकरण या न्यूक्लिक एसिड के समूहों द्वारा कोशिकाओं में व्यक्तिगत वायरल न्यूक्लिक एसिड का पता लगाकर।

वायरस का अलगाव एक श्रमसाध्य और लंबी प्रक्रिया है। यह आबादी के बीच प्रसारित होने वाले वायरस के प्रकार या प्रकार को निर्धारित करने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, वायरस ए, वाइल्ड या वैक्सीन स्ट्रेन ऑफ वायरस ए, आदि के सेरोवेरिएंट की पहचान करने के लिए); ऐसे मामलों में जहां तत्काल महामारी विज्ञान के उपाय करना आवश्यक है; जब वायरस के नए प्रकार या वेरिएंट सामने आते हैं; यदि आवश्यक हो, प्रारंभिक निदान की पुष्टि करें; पर्यावरणीय वस्तुओं में वायरस के संकेत के लिए। विषाणुओं को अलग करते समय, मानव शरीर में उनके बने रहने की संभावना के साथ-साथ दो या दो से अधिक विषाणुओं के कारण होने वाले मिश्रित संक्रमण की घटना को ध्यान में रखा जाता है। एक विषाणु से प्राप्त विषाणु की आनुवंशिक रूप से सजातीय आबादी को एक वायरल क्लोन कहा जाता है, और इसे प्राप्त करने की प्रक्रिया को क्लोनिंग कहा जाता है।

वायरस को अलग करने के लिए अतिसंवेदनशील प्रयोगशाला जानवरों के संक्रमण, चिकन भ्रूण का उपयोग किया जाता है, लेकिन टिशू कल्चर का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है। वायरस की उपस्थिति आमतौर पर विशिष्ट कोशिका अध: पतन (साइटोपैथिक प्रभाव) द्वारा निर्धारित की जाती है,

सिम्प्लास्ट्स और सिंकाइटिया का गठन, इंट्रासेल्युलर समावेशन का पता लगाने के साथ-साथ एक विशिष्ट एंटीजन का पता लगाने के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस, हेमडसॉर्शन, हेमग्लगुटिनेशन (हेमग्लुटिनेटिंग वायरस में), आदि का उपयोग किया जाता है। ये लक्षण वायरस के 2-3 पास होने के बाद ही पता चल सकते हैं।

कई वायरस के अलगाव के लिए, उदाहरण के लिए वायरस ए, चिकन भ्रूण का उपयोग कुछ कॉक्ससेकी वायरस और कई अर्बोवायरस - नवजात चूहों के अलगाव के लिए किया जाता है। सीरोलॉजिकल परीक्षणों और अन्य तरीकों का उपयोग करके पृथक वायरस की पहचान की जाती है।

वायरस के साथ काम करते समय, उनका अनुमापांक निर्धारित किया जाता है। वायरस का अनुमापन आमतौर पर टिशू कल्चर में किया जाता है, जो वायरस युक्त द्रव के उच्चतम कमजोर पड़ने का निर्धारण करता है, जिस पर ऊतक अध: पतन होता है, समावेशन और वायरस-विशिष्ट एंटीजन बनते हैं। प्लेक विधि का उपयोग कई वायरस को अनुमापन करने के लिए किया जा सकता है। सजीले टुकड़े, या वायरस की नकारात्मक कॉलोनियां, अगर कोटिंग के तहत सिंगल-लेयर टिशू कल्चर की वायरस-नष्ट कोशिकाओं के फॉसी हैं। कालोनी की गिनती इस आधार पर वायरस की संक्रामक गतिविधि के मात्रात्मक विश्लेषण की अनुमति देती है कि एक संक्रामक वायरस कण एक पट्टिका बनाता है। सजीले टुकड़े की पहचान संस्कृति को महत्वपूर्ण रंगों से रंगने से होती है, आमतौर पर तटस्थ लाल; सजीले टुकड़े डाई को सोख नहीं पाते हैं और इसलिए सना हुआ जीवित कोशिकाओं की पृष्ठभूमि के खिलाफ हल्के धब्बे के रूप में दिखाई देते हैं। वायरस के अनुमापांक को 1 में पट्टिका बनाने वाली इकाइयों की संख्या के रूप में व्यक्त किया जाता है एमएल.

विषाणुओं का शुद्धिकरण और सांद्रण आमतौर पर डिफरेंशियल अल्ट्रासेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा किया जाता है, जिसके बाद सघनता या घनत्व ग्रेडिएंट्स में सेंट्रीफ्यूगेशन होता है। वायरस को शुद्ध करने के लिए इम्यूनोलॉजिकल तरीके, आयन-एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी, इम्यूनोसॉर्बेंट्स आदि का इस्तेमाल किया जाता है।

वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान में नैदानिक ​​सामग्री में रोगज़नक़ या इसके घटकों का पता लगाना शामिल है; इस सामग्री से वायरस अलगाव; सेरोडायग्नोसिस। प्रत्येक व्यक्तिगत मामले में प्रयोगशाला निदान पद्धति का चुनाव रोग की प्रकृति, रोग की अवधि और प्रयोगशाला की क्षमताओं पर निर्भर करता है। विषाणुजनित संक्रमणों का आधुनिक निदान एक्सप्रेस विधियों पर आधारित है जो आपको रोग के बाद प्रारंभिक अवस्था में नैदानिक ​​सामग्री लेने के कुछ घंटों बाद उत्तर प्राप्त करने की अनुमति देता है। इनमें इलेक्ट्रॉन और प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी शामिल हैं,

साथ ही इम्यूनोफ्लोरेसेंस, आणविक संकरण विधि, एलजीएम वर्ग एंटीबॉडी का पता लगाना आदि।

नकारात्मक रूप से अभिरंजित विषाणुओं की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विषाणुओं के विभेदीकरण और उनकी सांद्रता के निर्धारण की अनुमति देती है। वायरल संक्रमण के निदान में इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग उन मामलों तक सीमित है जहां नैदानिक ​​​​सामग्री में वायरल कणों की एकाग्रता पर्याप्त रूप से उच्च है (10 5 में 1 एमएलऔर उच्चा)। विधि का नुकसान एक ही टैक्सोनोमिक समूह से संबंधित वायरस के बीच अंतर करने में असमर्थता है। प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके इस नुकसान को समाप्त किया जाता है। विधि प्रतिरक्षा परिसरों के गठन पर आधारित होती है जब वायरल कणों में विशिष्ट सीरम जोड़ा जाता है, जबकि वायरल कणों की एक साथ एकाग्रता होती है, जिससे उन्हें पहचानना संभव हो जाता है। विधि का उपयोग एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए भी किया जाता है। एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के उद्देश्य से, ऊतक के अर्क, मल, पुटिकाओं से तरल पदार्थ और नासॉफरीनक्स से रहस्यों की एक इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म परीक्षा की जाती है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का व्यापक रूप से वायरस के आकारजनन का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है; इसकी क्षमताओं को लेबल किए गए एंटीबॉडी के उपयोग के साथ विस्तारित किया जाता है।

आणविक संकरण की विधि, वायरस-विशिष्ट न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के आधार पर, जीन की एकल प्रतियों का पता लगाना संभव बनाती है और संवेदनशीलता के मामले में कोई समान नहीं है। प्रतिक्रिया डीएनए या आरएनए (जांच) के पूरक किस्में के संकरण और डबल-स्ट्रैंडेड संरचनाओं के गठन पर आधारित है। सबसे सस्ता जांच क्लोन पुनः संयोजक डीएनए है। जांच को रेडियोधर्मी अग्रदूतों (आमतौर पर रेडियोधर्मी फास्फोरस) के साथ लेबल किया जाता है। वर्णमिति प्रतिक्रियाओं का उपयोग आशाजनक है। आणविक संकरण के कई रूप हैं: बिंदु संकरण, धब्बा संकरण, सैंडविच संकरण, स्वस्थानी संकरण आदि।

एलजीएम वर्ग के एंटीबॉडी कक्षा जी एंटीबॉडी (बीमारी के 3-5 वें दिन) से पहले दिखाई देते हैं और कुछ हफ्तों के बाद गायब हो जाते हैं, इसलिए उनका पता लगाना हाल ही में संक्रमण का संकेत देता है। आईजीएम वर्ग के एंटीबॉडी का पता इम्यूनोफ्लोरेसेंस या एंजाइम इम्यूनोसेरा द्वारा एंटी-एम एंटीसेरा (एंटी-आईजीएम हैवी चेन सेरा) का उपयोग करके लगाया जाता है।

वायरोलॉजी में सीरोलॉजिकल तरीके शास्त्रीय प्रतिरक्षात्मक प्रतिक्रियाओं पर आधारित हैं (देखें। इम्यूनोलॉजिकल रिसर्च के तरीके ): पूरक निर्धारण प्रतिक्रियाएं

हीमोग्लूटिनेशन का निषेध, जैविक न्यूट्रलाइजेशन, इम्युनोडिफ्यूजन, अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म, रेडियल हेमोलिसिस, इम्यूनोफ्लोरेसेंस, एंजाइम इम्यूनोएसे, रेडियोइम्यूनोसे। कई अभिक्रियाओं के लिए सूक्ष्म विधियाँ विकसित की जा चुकी हैं, और उनकी तकनीकों में लगातार सुधार किया जा रहा है। इन विधियों का उपयोग पहले की तुलना में दूसरे सीरम में एंटीबॉडी में वृद्धि का निर्धारण करने के लिए ज्ञात सीरा के एक सेट और सेरोडायग्नोसिस के लिए वायरस की पहचान करने के लिए किया जाता है (पहला सीरम रोग के बाद पहले दिनों में लिया जाता है, दूसरा - के बाद 2-3 सप्ताह)। नैदानिक ​​मूल्य दूसरे सीरम में एंटीबॉडी में चार गुना वृद्धि से कम नहीं है। यदि lgM वर्ग के एंटीबॉडी का पता लगाना हाल के संक्रमण का संकेत देता है, तो lgC वर्ग के एंटीबॉडी कई वर्षों तक और कभी-कभी जीवन भर बने रहते हैं।

पूर्व प्रोटीन शुद्धि के बिना जटिल मिश्रण में वायरस और एंटीबॉडी के अलग-अलग एंटीजन की पहचान करने के लिए, इम्युनोब्लॉटिंग का उपयोग किया जाता है। यह विधि पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके प्रोटीन के विभाजन को एंजाइम इम्यूनोसे द्वारा प्रोटीन के बाद के इम्यूनोसे के साथ जोड़ती है। प्रोटीन का पृथक्करण प्रतिजन की रासायनिक शुद्धता की आवश्यकताओं को कम करता है और व्यक्तिगत प्रतिजन-एंटीबॉडी जोड़े की पहचान करना संभव बनाता है। यह कार्य प्रासंगिक है, उदाहरण के लिए, एचआईवी संक्रमण के सेरोडायग्नोसिस में, जहां सेल एंटीजन के लिए एंटीबॉडी की उपस्थिति के कारण झूठे-सकारात्मक एंजाइम इम्यूनोएसे प्रतिक्रियाएं होती हैं, जो वायरल प्रोटीन की अपर्याप्त शुद्धि के परिणामस्वरूप मौजूद होती हैं। आंतरिक और बाहरी वायरल प्रतिजनों के रोगियों के सेरा में एंटीबॉडी की पहचान रोग के चरण को निर्धारित करना संभव बनाती है, और आबादी के विश्लेषण में - वायरल प्रोटीन की परिवर्तनशीलता। एचआईवी संक्रमण में इम्युनोब्लोटिंग का उपयोग व्यक्तिगत वायरल एंटीजन और उनके प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में किया जाता है। आबादी का विश्लेषण करते समय, वायरल प्रोटीन की परिवर्तनशीलता को निर्धारित करने के लिए विधि का उपयोग किया जाता है। विधि का बड़ा मूल्य पुनः संयोजक डीएनए प्रौद्योगिकी का उपयोग करके संश्लेषित प्रतिजनों का विश्लेषण करने, उनके आकार की स्थापना और प्रतिजनी निर्धारकों की उपस्थिति की संभावना में निहित है।

ग्रंथ सूची:बुक्रिंस्काया ए.जी. वायरोलॉजी, एम., 1986; विषाणु विज्ञान, तरीके, एड। बी मेखी, ट्रांस। अंग्रेजी से, एम।, 1988; माइक्रोबायोलॉजिकल और वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड्स की हैंडबुक, एड। एम.ओ. बिगर, एम।, 1982।

वायरल प्रकृति वाले रोगों के निदान के लिए अनुसंधान। वायरस की पहचान करने, उसके जीव विज्ञान और जानवरों और मानव कोशिकाओं को प्रभावित करने की क्षमता का अध्ययन करने के लिए यह आवश्यक है। इस प्रकार, वायरल रोगों के रोगजनन को समझना और तदनुसार, सही उपचार पद्धति का चयन करना संभव हो जाता है।

निदान क्या है?

जीवित कोशिकाओं में। इसकी जांच के लिए, एक प्रायोगिक जीव के स्तर पर इसकी खेती करना आवश्यक है या इसके लिए, सामान्य रूप से चिकित्सा पद्धति और सूक्ष्म जीव विज्ञान में वायरोलॉजिकल अनुसंधान विधियों को अंजाम दिया जाता है, जिसमें निम्नलिखित मुख्य दृष्टिकोण हैं:

• सीधा;
• अप्रत्यक्ष;
• सीरोलॉजिकल।

न्यूक्लिक एसिड, वायरल एंटीजन की उपस्थिति के लिए सामग्री की सीधे जांच की जा सकती है, या, उदाहरण के लिए, नैदानिक ​​​​सामग्री से वायरस को अलग करने और पहचानने के लिए।

रोग के एटियलजि को स्थापित करने की क्षमता के अलावा, चिकित्सीय प्रभाव की निगरानी, ​​वायरोलॉजिकल अनुसंधान विधियां महामारी-रोधी उपायों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। अलगाव के लिए और चिकन भ्रूण, प्रयोगशाला जानवरों या सेल संस्कृतियों का उपयोग करें।

उनका शोध कैसे किया जाता है?

सबसे तेज़ प्रत्यक्ष तरीका है। यह आपको नैदानिक ​​सामग्री में ही वायरस, एंटीजन या एनए (न्यूक्लिक एसिड) का पता लगाने की अनुमति देता है। इसमें दो घंटे से लेकर एक दिन तक का समय लगता है।

1. ईएम - इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी। सीधे वायरस का पता लगाता है।
2. आईईएम - प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी। वायरस के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करता है।
3. आरआईएफ - इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया। डाई-बाउंड एंटीबॉडी का उपयोग करता है। इस तरह के वायरोलॉजिकल शोध विधियों का व्यापक रूप से एसएआरएस (तीव्र श्वसन वायरल संक्रमण) के ईटियोलॉजी के त्वरित डिकोडिंग के रूप में उपयोग किया जाता है, जब ऊपरी श्वसन पथ के श्लेष्म झिल्ली से स्वैब लिया जाता है।
4. एलिसा - एंजाइम इम्यूनोएसे - वायरल एंटीजन का निर्धारण, आरआईएफ के समान, लेकिन एंटीबॉडी के एंजाइम लेबलिंग पर आधारित।
5. आरआईए - रेडियोइम्यूनोसे। वायरल एंटीजन डिटेक्शन में उच्च संवेदनशीलता प्रदान करने के लिए एंटीबॉडी के रेडियोआइसोटोप लेबलिंग का उपयोग करता है।
6. आणविक - पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) का उपयोग करके एनके संकरण या वायरस जीनोम का अलगाव।
7. साइटोलॉजी - शायद ही कभी इस्तेमाल किया जाता है, लेकिन कुछ संक्रमणों के लिए, अनुसंधान के ये वायरोलॉजिकल तरीके बहुत प्रभावी होते हैं। माइक्रोस्कोप के तहत धुंधला और विश्लेषण के लिए संसाधित बायोप्सी सामग्री, ऑटोप्सी और स्मीयर की जांच की जाती है।

शोध की बात क्या है?

वायरस के सफल अलगाव के लिए, नैदानिक ​​सामग्री को रोगजनन के अनुसार और जितनी जल्दी हो सके लिया जाता है। कुछ विषाणुजनित परीक्षणों को लागू करने से पहले अक्सर इस प्रक्रिया के लिए कई परिच्छेदों की आवश्यकता होती है।

माइक्रोबायोलॉजी सूक्ष्म प्राणियों का अध्ययन है। और उसका क्षेत्र केवल चिकित्सा नहीं है। यह कृषि, पशु चिकित्सा, अंतरिक्ष और तकनीकी उद्योग और भूविज्ञान के लिए एक मौलिक विज्ञान है।

लेकिन निश्चित रूप से, इस खूबसूरत ग्रह पर मनुष्य और उसके विकास के लिए सब कुछ बनाया गया है। इसलिए, समय रहते खतरे का पता लगाना और उसे बेअसर करना बहुत जरूरी है। वायरस बैक्टीरिया से अलग होते हैं। ये ऐसी संरचनाएं हैं जो शरीर में प्रवेश करती हैं और एक नई पीढ़ी के गठन का कारण बनती हैं। वे क्रिस्टल की तरह दिखते हैं और उनके प्रजनन की प्रक्रिया को नियंत्रित करने के उद्देश्य से होते हैं, हालांकि वे खुद नहीं खाते हैं, बढ़ते नहीं हैं और चयापचय उत्पादों का उत्सर्जन नहीं करते हैं।

वायरस किसी भी जीवित जीव में गंभीर बीमारी पैदा कर सकता है जिसमें यह प्रवेश कर गया है। साथ ही, यह विकसित हो सकता है। इसीलिए माइक्रोबायोलॉजी में वायरोलॉजिकल रिसर्च के तरीकों को विकसित और बेहतर बनाया जाना चाहिए, क्योंकि मानव सभ्यता पूरी तरह से खतरे में पड़ सकती है।

सामग्री

दवा में वायरस का पता लगाने और पहचानने के लिए, एक नियम के रूप में, वे लेते हैं:

• नासॉफिरिन्जियल लैवेज (श्वसन संक्रमण);
• निस्तब्धता और मल (एंटरोवायरस संक्रमण);
• स्क्रैपिंग, पुटिकाओं की सामग्री (त्वचा के घाव, श्लेष्मा झिल्ली, जैसे दाद, चिकन पॉक्स);
• फ्लश (खसरा, रूबेला जैसे एक्ज़ेंथेमिक संक्रमण);
• रक्त, मस्तिष्कमेरु द्रव (अर्बोवायरस संक्रमण)।

के चरण

वायरोलॉजिकल रिसर्च पद्धति के सभी चरणों में शामिल हैं:

• सामग्री का संग्रह;
• चयन, एक परीक्षण प्रणाली प्राप्त करना, इसकी व्यवहार्यता का निर्धारण करना;
• परीक्षण प्रणाली का संक्रमण;
• वायरस संकेत;
• वायरस के प्रकार का निर्धारण।

मूल रूप से, रोगजनक वायरस ऊतक और प्रकार की विशिष्टता की उपस्थिति में भिन्न होते हैं। उदाहरण के लिए, पोलियोवायरस को लें, जो केवल प्राइमेट्स (उनकी कोशिकाओं में) में प्रजनन करता है। तदनुसार, एक विशिष्ट वायरस को अलग करने के लिए एक विशिष्ट ऊतक संस्कृति का उपयोग किया जाता है। यदि हम एक अज्ञात रोगज़नक़ के बारे में बात कर रहे हैं, तो एक साथ तीन और अधिमानतः चार सेल संस्कृतियों को संक्रमित करना उचित होगा।

इस प्रकार, शायद उनमें से एक संवेदनशील होगा। संक्रमित संस्कृतियों में वायरस की उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए, विशिष्ट कोशिका अध: पतन, इंट्रासेल्युलर समावेशन, एक विशिष्ट एंटीजन का पता लगाने, सकारात्मक रक्तगुल्म और रक्तशोधन परीक्षणों के विकास को देखें।

संदिग्ध संक्रमण के किसी विशेष मामले के लिए जांच के सभी वायरोलॉजिकल तरीकों (प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष, सीरोलॉजिकल) को सबसे उपयुक्त के रूप में चुना जाना चाहिए।

अप्रत्यक्ष तरीके वायरस के अलगाव और पहचान पर आधारित हैं। वे श्रमसाध्य, लंबे, लेकिन सटीक हैं।

सेरोडायग्नोस्टिक्स

यह निदान एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया के आधार पर एक विधि को संदर्भित करता है। बहुधा, युग्मित रक्त सीरम का उपयोग किया जाता है, जिसे कई हफ्तों के अंतराल पर लिया जाता है। यदि एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि 4 या अधिक बार होती है, तो प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है। वायरस के प्रकार की विशिष्टता निर्धारित करने के लिए, वायरस न्यूट्रलाइजेशन टेस्ट का उपयोग किया जाता है। समूह विशिष्टता निर्धारित करने के लिए, आपको पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया प्राप्त करने की आवश्यकता है।

एंजाइम इम्यूनोएसे के विभिन्न प्रकार, रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया, निष्क्रिय रक्तगुल्म, रिवर्स निष्क्रिय रक्तगुल्म, आरआईएफ का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। जेनेटिक इंजीनियरिंग में भी मोनोक्लोनल एंटीबॉडी प्राप्त करने की एक विधि विकसित की गई थी। विभिन्न वायरल निर्धारकों के लिए कई मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करके मोनोक्लोन्स की संकीर्ण विशिष्टता को दूर किया जा सकता है। इस प्रकार, प्रतिजनों के निर्धारण के साथ परख की विशिष्टता और संवेदनशीलता में वृद्धि हुई है।

कुछ सुविधाएं

आज, एक जीवित जीव में वायरस के प्रवेश के परिणामस्वरूप होने वाले संक्रमणों के प्रतिरक्षात्मक निदान के लिए कई अलग-अलग परीक्षण प्रणालियां बनाई गई हैं।

इस प्रकार, वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड्स वायरस को अलग करने, उनके गुणों का अध्ययन करने और कुछ बीमारियों के साथ उनके एटिऑलॉजिकल संबंध स्थापित करने की विधियाँ हैं।

वायरोलॉजिकल रिसर्च के तरीके- वायरस के जीव विज्ञान और उनकी पहचान के अध्ययन के तरीके। वायरोलॉजी में, आणविक जीव विज्ञान के तरीकों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, जिसकी मदद से वायरल कणों की आणविक संरचना को स्थापित करना संभव था, वे कोशिका में कैसे प्रवेश करते हैं और वायरस के प्रजनन की विशेषताएं, वायरल न्यूक्लिक एसिड की प्राथमिक संरचना और प्रोटीन। वायरल न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन अमीनो एसिड के घटक तत्वों के अनुक्रम को निर्धारित करने के तरीके विकसित किए जा रहे हैं। न्यूक्लिक एसिड के कार्यों और उनके द्वारा एन्कोड किए गए प्रोटीन को न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम से जोड़ना और इंट्रासेल्युलर प्रक्रियाओं के कारणों को स्थापित करना संभव हो जाता है जो एक वायरल संक्रमण के रोगजनन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।

वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड भी इम्यूनोलॉजिकल प्रोसेस (एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की इंटरेक्शन), वायरस के बायोलॉजिकल प्रॉपर्टीज (हेमग्लुटिनेट, हेमोलिसिस, एंजाइमेटिक एक्टिविटी) की क्षमता पर आधारित होते हैं, होस्ट सेल के साथ वायरस के इंटरेक्शन की विशेषताएं (साइटोपैथिक की प्रकृति) प्रभाव, इंट्रासेल्युलर समावेशन का गठन, आदि)।

वायरल संक्रमणों के निदान में, खेती, अलगाव और वायरस की पहचान के साथ-साथ टीके की तैयारी में, ऊतक और सेल संस्कृति की विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। प्राथमिक, माध्यमिक, स्थिर निरंतर और द्विगुणित सेल संस्कृतियों का उपयोग किया जाता है। प्राथमिक संस्कृतियों को प्रोटियोलिटिक एंजाइम (ट्रिप्सिन, कोलेजनेज़) के साथ ऊतक को फैलाकर प्राप्त किया जाता है। कोशिकाओं का स्रोत मानव और पशु भ्रूण के ऊतक और अंग (अधिक बार गुर्दे) हो सकते हैं। पोषक माध्यम में कोशिकाओं के निलंबन को तथाकथित गद्दों, बोतलों या पेट्री डिश में रखा जाता है, जहाँ, बर्तन की सतह से जुड़ने के बाद, कोशिकाएँ गुणा करना शुरू कर देती हैं। वायरस के संक्रमण के लिए, आमतौर पर एक सेल मोनोलेयर का उपयोग किया जाता है। पोषक तत्व तरल निकाला जाता है, वायरल निलंबन को कुछ कमजोरियों में पेश किया जाता है, और कोशिकाओं के संपर्क के बाद, ताजा पोषक माध्यम जोड़ा जाता है, आमतौर पर सीरम के बिना।

अधिकांश प्राथमिक संस्कृतियों की कोशिकाओं को उपसंवर्धित किया जा सकता है और उन्हें माध्यमिक संस्कृतियों के रूप में संदर्भित किया जाता है। कोशिकाओं के आगे पारित होने के साथ, फाइब्रोब्लास्ट जैसी कोशिकाओं की आबादी बनती है, जो तेजी से प्रजनन करने में सक्षम होती हैं, जिनमें से अधिकांश गुणसूत्रों के मूल सेट को बनाए रखती हैं। ये तथाकथित द्विगुणित कोशिकाएँ हैं। कोशिकाओं की क्रमिक खेती में, स्थिर निरंतर सेल कल्चर प्राप्त होते हैं। मार्ग के दौरान, गुणसूत्रों के विषम सेट के साथ तेजी से विभाजित होने वाली सजातीय कोशिकाएं दिखाई देती हैं। स्थिर सेल लाइनें मोनोलेयर और सस्पेंशन हो सकती हैं। मोनोलेयर कल्चर कांच की सतह पर एक सतत परत के रूप में विकसित होते हैं, सस्पेंशन कल्चर आंदोलनकारी का उपयोग करके विभिन्न जहाजों में सस्पेंशन के रूप में बढ़ते हैं। 40 विभिन्न जानवरों की प्रजातियों (प्राइमेट्स, पक्षी, सरीसृप, उभयचर, मछली, कीड़े) और मनुष्यों से प्राप्त 400 से अधिक सेल लाइनें हैं।

कृत्रिम पोषक मीडिया में अलग-अलग अंगों और ऊतकों (ऑर्गन कल्चर) के टुकड़ों की खेती की जा सकती है। इस प्रकार की संस्कृतियाँ ऊतक संरचना को संरक्षित करती हैं, जो विशेष रूप से वायरस के अलगाव और पारित होने के लिए महत्वपूर्ण है जो अविभाजित ऊतक संस्कृतियों (उदाहरण के लिए, कोरोनविर्यूज़) में प्रजनन नहीं करते हैं।

संक्रमित सेल कल्चर में, सेल आकारिकी में परिवर्तन, साइटोपैथिक क्रिया, जो विशिष्ट हो सकती है, सेल में वायरल एंटीजन का निर्धारण करके और कल्चर द्रव में विषाणुओं का पता लगाया जा सकता है; संस्कृति तरल पदार्थ में वायरल संतान के जैविक गुणों का निर्धारण और टिशू कल्चर, चिक भ्रूण या संवेदनशील जानवरों में वायरस का अनुमापन; फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके साइटोकेमिकल विधि द्वारा आणविक संकरण या न्यूक्लिक एसिड के समूहों द्वारा कोशिकाओं में व्यक्तिगत वायरल न्यूक्लिक एसिड का पता लगाकर।

वायरस का अलगाव एक श्रमसाध्य और लंबी प्रक्रिया है। यह आबादी के बीच प्रसारित होने वाले वायरस के प्रकार या प्रकार को निर्धारित करने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा वायरस के सेरोवेरिएंट की पहचान करने के लिए, पोलियो वायरस के जंगली या वैक्सीन तनाव आदि); ऐसे मामलों में जहां तत्काल महामारी विज्ञान के उपाय करना आवश्यक है; जब वायरस के नए प्रकार या वेरिएंट सामने आते हैं; यदि आवश्यक हो, प्रारंभिक निदान की पुष्टि करें; पर्यावरणीय वस्तुओं में वायरस के संकेत के लिए। विषाणुओं को अलग करते समय, मानव शरीर में उनके बने रहने की संभावना के साथ-साथ दो या दो से अधिक विषाणुओं के कारण होने वाले मिश्रित संक्रमण की घटना को ध्यान में रखा जाता है। एक विषाणु से प्राप्त विषाणु की आनुवंशिक रूप से सजातीय आबादी को एक वायरल क्लोन कहा जाता है, और इसे प्राप्त करने की प्रक्रिया को क्लोनिंग कहा जाता है।

वायरस को अलग करने के लिए अतिसंवेदनशील प्रयोगशाला जानवरों के संक्रमण, चिकन भ्रूण का उपयोग किया जाता है, लेकिन टिशू कल्चर का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है। एक वायरस की उपस्थिति आमतौर पर विशिष्ट कोशिका अध: पतन (साइटोपैथिक प्रभाव), सिम्प्लास्ट्स और सिंकाइटिया के गठन, इंट्रासेल्युलर समावेशन का पता लगाने के साथ-साथ इम्यूनोफ्लोरेसेंस, हेमडसॉर्प्शन, हेमग्लगुटिनेशन (हेमग्लुटिनेटिंग वायरस में), आदि का उपयोग करके निर्धारित की जाती है। . ये लक्षण वायरस के 2-3 पास होने के बाद ही पता चल सकते हैं।

कई विषाणुओं के अलगाव के लिए, जैसे कि इन्फ्लूएंजा वायरस, चिकन भ्रूण का उपयोग किया जाता है, कुछ कॉक्ससेकी वायरस और कई अर्बोविरस के अलगाव के लिए, नवजात चूहों का उपयोग किया जाता है। सीरोलॉजिकल परीक्षणों और अन्य तरीकों का उपयोग करके पृथक वायरस की पहचान की जाती है।

वायरस के साथ काम करते समय, उनका अनुमापांक निर्धारित किया जाता है। वायरस का अनुमापन आमतौर पर टिशू कल्चर में किया जाता है, जो वायरस युक्त द्रव के उच्चतम कमजोर पड़ने का निर्धारण करता है, जिस पर ऊतक अध: पतन होता है, समावेशन और वायरस-विशिष्ट एंटीजन बनते हैं। प्लेक विधि का उपयोग कई वायरस को अनुमापन करने के लिए किया जा सकता है। सजीले टुकड़े, या वायरस की नकारात्मक कॉलोनियां, अगर कोटिंग के तहत सिंगल-लेयर टिशू कल्चर की वायरस-नष्ट कोशिकाओं के फॉसी हैं। कालोनी की गिनती इस आधार पर वायरस की संक्रामक गतिविधि के मात्रात्मक विश्लेषण की अनुमति देती है कि एक संक्रामक वायरस कण एक पट्टिका बनाता है। सजीले टुकड़े की पहचान संस्कृति को महत्वपूर्ण रंगों से रंगने से होती है, आमतौर पर तटस्थ लाल; सजीले टुकड़े डाई को सोख नहीं पाते हैं और इसलिए सना हुआ जीवित कोशिकाओं की पृष्ठभूमि के खिलाफ हल्के धब्बे के रूप में दिखाई देते हैं। वायरस के अनुमापांक को 1 में पट्टिका बनाने वाली इकाइयों की संख्या के रूप में व्यक्त किया जाता है एमएल.

विषाणुओं का शुद्धिकरण और सांद्रण आमतौर पर डिफरेंशियल अल्ट्रासेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा किया जाता है, जिसके बाद सघनता या घनत्व ग्रेडिएंट्स में सेंट्रीफ्यूगेशन होता है। वायरस को शुद्ध करने के लिए इम्यूनोलॉजिकल तरीके, आयन-एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी, इम्यूनोसॉर्बेंट्स आदि का इस्तेमाल किया जाता है।

वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान में नैदानिक ​​सामग्री में रोगज़नक़ या इसके घटकों का पता लगाना शामिल है; इस सामग्री से वायरस अलगाव; सेरोडायग्नोसिस। प्रत्येक व्यक्तिगत मामले में प्रयोगशाला निदान पद्धति का चुनाव रोग की प्रकृति, रोग की अवधि और प्रयोगशाला की क्षमताओं पर निर्भर करता है। वायरल संक्रमणों का आधुनिक निदान एक्सप्रेस विधियों पर आधारित है जो रोग के बाद प्रारंभिक अवस्था में नैदानिक ​​सामग्री लेने के कुछ घंटों बाद प्रतिक्रिया प्राप्त करने की अनुमति देता है। इनमें इलेक्ट्रॉन और प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, साथ ही इम्यूनोफ्लोरेसेंस, आणविक संकरण की विधि, lgM वर्ग, आदि के एंटीबॉडी का पता लगाना।

नकारात्मक रूप से अभिरंजित विषाणुओं की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विषाणुओं के विभेदीकरण और उनकी सांद्रता के निर्धारण की अनुमति देती है। वायरल संक्रमण के निदान में इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग उन मामलों तक सीमित है जहां नैदानिक ​​​​सामग्री में वायरल कणों की एकाग्रता पर्याप्त रूप से उच्च है (10 5 में 1 एमएलऔर उच्चा)। विधि का नुकसान एक ही टैक्सोनोमिक समूह से संबंधित वायरस के बीच अंतर करने में असमर्थता है। प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके इस नुकसान को समाप्त किया जाता है। विधि प्रतिरक्षा परिसरों के गठन पर आधारित होती है जब वायरल कणों में विशिष्ट सीरम जोड़ा जाता है, जबकि वायरल कणों की एक साथ एकाग्रता होती है, जिससे उन्हें पहचानना संभव हो जाता है। विधि का उपयोग एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए भी किया जाता है। एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के उद्देश्य से, ऊतक के अर्क, मल, पुटिकाओं से तरल पदार्थ और नासॉफरीनक्स से रहस्यों की एक इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म परीक्षा की जाती है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का व्यापक रूप से वायरस के आकारजनन का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है; इसकी क्षमताओं को लेबल किए गए एंटीबॉडी के उपयोग के साथ विस्तारित किया जाता है।

आणविक संकरण की विधि, वायरस-विशिष्ट न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के आधार पर, जीन की एकल प्रतियों का पता लगाना संभव बनाती है और संवेदनशीलता के मामले में कोई समान नहीं है। प्रतिक्रिया डीएनए या आरएनए (जांच) के पूरक किस्में के संकरण और डबल-स्ट्रैंडेड संरचनाओं के गठन पर आधारित है। सबसे सस्ता जांच क्लोन पुनः संयोजक डीएनए है। जांच को रेडियोधर्मी अग्रदूतों (आमतौर पर रेडियोधर्मी फास्फोरस) के साथ लेबल किया जाता है। वर्णमिति प्रतिक्रियाओं का उपयोग आशाजनक है। आणविक संकरण के कई रूप हैं: बिंदु संकरण, धब्बा संकरण, सैंडविच संकरण, स्वस्थानी संकरण आदि।

कक्षा IgM के एंटीबॉडी वर्ग G एंटीबॉडी (बीमारी के 3-5 वें दिन) से पहले दिखाई देते हैं और कुछ हफ्तों के बाद गायब हो जाते हैं, इसलिए उनका पता लगाना हाल ही में संक्रमण का संकेत देता है। आईजीएम वर्ग के एंटीबॉडी का पता इम्यूनोफ्लोरेसेंस या एंजाइम इम्यूनोसेरा द्वारा एंटी-एम एंटीसेरा (एंटी-आईजीएम हैवी चेन सेरा) का उपयोग करके लगाया जाता है।

वायरोलॉजी में सीरोलॉजिकल तरीके शास्त्रीय प्रतिरक्षात्मक प्रतिक्रियाओं पर आधारित हैं (देखें। इम्यूनोलॉजिकल रिसर्च के तरीके ): पूरक निर्धारण प्रतिक्रियाएं, रक्तगुल्म अवरोधन, जैविक उदासीनीकरण, प्रतिरक्षी प्रसार, अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म, रेडियल हेमोलाइसिस, इम्यूनोफ्लोरेसेंस, एंजाइम इम्यूनोएसे, रेडियोइम्यूनोएसे। कई अभिक्रियाओं के लिए सूक्ष्म विधियाँ विकसित की जा चुकी हैं, और उनकी तकनीकों में लगातार सुधार किया जा रहा है। इन विधियों का उपयोग पहले की तुलना में दूसरे सीरम में एंटीबॉडी में वृद्धि का निर्धारण करने के लिए ज्ञात सीरा के एक सेट और सेरोडायग्नोसिस के लिए वायरस की पहचान करने के लिए किया जाता है (पहला सीरम रोग के बाद पहले दिनों में लिया जाता है, दूसरा - के बाद 2-3 सप्ताह)। नैदानिक ​​मूल्य दूसरे सीरम में एंटीबॉडी में चार गुना वृद्धि से कम नहीं है। यदि lgM वर्ग के एंटीबॉडी का पता लगाना हाल के संक्रमण का संकेत देता है, तो lgC वर्ग के एंटीबॉडी कई वर्षों तक और कभी-कभी जीवन भर बने रहते हैं।

पूर्व प्रोटीन शुद्धि के बिना जटिल मिश्रण में वायरस और एंटीबॉडी के अलग-अलग एंटीजन की पहचान करने के लिए, इम्युनोब्लॉटिंग का उपयोग किया जाता है। यह विधि पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके प्रोटीन के विभाजन को एंजाइम इम्यूनोसे द्वारा प्रोटीन के बाद के इम्यूनोसे के साथ जोड़ती है। प्रोटीन का पृथक्करण प्रतिजन की रासायनिक शुद्धता की आवश्यकताओं को कम करता है और व्यक्तिगत प्रतिजन-एंटीबॉडी जोड़े की पहचान करना संभव बनाता है। यह कार्य प्रासंगिक है, उदाहरण के लिए, एचआईवी संक्रमण के सेरोडायग्नोसिस में, जहां सेल एंटीजन के लिए एंटीबॉडी की उपस्थिति के कारण झूठे-सकारात्मक एंजाइम इम्यूनोएसे प्रतिक्रियाएं होती हैं, जो वायरल प्रोटीन की अपर्याप्त शुद्धि के परिणामस्वरूप मौजूद होती हैं। आंतरिक और बाह्य वायरल प्रतिजनों के लिए रोगियों के सीरा में एंटीबॉडी की पहचान रोग के चरण को निर्धारित करना और आबादी के विश्लेषण में वायरल प्रोटीन की परिवर्तनशीलता को संभव बनाती है। एचआईवी संक्रमण में इम्युनोब्लोटिंग का उपयोग व्यक्तिगत वायरल एंटीजन और उनके प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में किया जाता है। आबादी का विश्लेषण करते समय, वायरल प्रोटीन की परिवर्तनशीलता को निर्धारित करने के लिए विधि का उपयोग किया जाता है। विधि का बड़ा मूल्य पुनः संयोजक डीएनए प्रौद्योगिकी का उपयोग करके संश्लेषित प्रतिजनों का विश्लेषण करने, उनके आकार की स्थापना और प्रतिजनी निर्धारकों की उपस्थिति की संभावना में निहित है।

वायरस के जीव विज्ञान और उनकी पहचान के अध्ययन के तरीके। वायरोलॉजी में, आणविक जीव विज्ञान के तरीकों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, जिसकी मदद से वायरल कणों की आणविक संरचना को स्थापित करना संभव था, वे कोशिका में कैसे प्रवेश करते हैं और वायरस के प्रजनन की विशेषताएं, वायरल न्यूक्लिक एसिड की प्राथमिक संरचना और प्रोटीन। वायरल न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन अमीनो एसिड के घटक तत्वों के अनुक्रम को निर्धारित करने के तरीके विकसित किए जा रहे हैं। न्यूक्लिक एसिड के कार्यों और उनके द्वारा एन्कोड किए गए प्रोटीन को न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम से जोड़ना और इंट्रासेल्युलर प्रक्रियाओं के कारणों को स्थापित करना संभव हो जाता है जो एक वायरल संक्रमण के रोगजनन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।

वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड भी इम्यूनोलॉजिकल प्रोसेस (एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की इंटरेक्शन), वायरस के बायोलॉजिकल प्रॉपर्टीज (हेमग्लुटिनेट, हेमोलिसिस, एंजाइमेटिक एक्टिविटी) की क्षमता पर आधारित होते हैं, होस्ट सेल के साथ वायरस के इंटरेक्शन की विशेषताएं (साइटोपैथिक की प्रकृति) प्रभाव, इंट्रासेल्युलर समावेशन का गठन, आदि)।

वायरल संक्रमणों के निदान में, खेती, अलगाव और वायरस की पहचान के साथ-साथ टीके की तैयारी में, ऊतक और सेल संस्कृति की विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। प्राथमिक, माध्यमिक, स्थिर निरंतर और द्विगुणित सेल संस्कृतियों का उपयोग किया जाता है। प्राथमिक संस्कृतियों को प्रोटियोलिटिक एंजाइम (ट्रिप्सिन, कोलेजनेज़) के साथ ऊतक को फैलाकर प्राप्त किया जाता है। कोशिकाओं का स्रोत मानव और पशु भ्रूण के ऊतक और अंग (अधिक बार गुर्दे) हो सकते हैं। पोषक माध्यम में कोशिकाओं के निलंबन को तथाकथित गद्दों, बोतलों या पेट्री डिश में रखा जाता है, जहाँ, बर्तन की सतह से जुड़ने के बाद, कोशिकाएँ गुणा करना शुरू कर देती हैं। वायरस के संक्रमण के लिए, आमतौर पर एक सेल मोनोलेयर का उपयोग किया जाता है। पोषक तत्व तरल निकाला जाता है, वायरल निलंबन को कुछ कमजोरियों में पेश किया जाता है, और कोशिकाओं के संपर्क के बाद, ताजा पोषक माध्यम जोड़ा जाता है, आमतौर पर सीरम के बिना।

अधिकांश प्राथमिक संस्कृतियों की कोशिकाओं को उपसंवर्धित किया जा सकता है और उन्हें माध्यमिक संस्कृतियों के रूप में संदर्भित किया जाता है। कोशिकाओं के आगे पारित होने के साथ, फाइब्रोब्लास्ट जैसी कोशिकाओं की आबादी बनती है, जो तेजी से प्रजनन करने में सक्षम होती हैं, जिनमें से अधिकांश गुणसूत्रों के मूल सेट को बनाए रखती हैं। ये तथाकथित द्विगुणित कोशिकाएँ हैं। कोशिकाओं की क्रमिक खेती में, स्थिर निरंतर सेल कल्चर प्राप्त होते हैं। मार्ग के दौरान, गुणसूत्रों के विषम सेट के साथ तेजी से विभाजित होने वाली सजातीय कोशिकाएं दिखाई देती हैं। स्थिर सेल लाइनें मोनोलेयर और सस्पेंशन हो सकती हैं। मोनोलेयर कल्चर कांच की सतह पर एक सतत परत के रूप में विकसित होते हैं, सस्पेंशन कल्चर आंदोलनकारी का उपयोग करके विभिन्न जहाजों में सस्पेंशन के रूप में बढ़ते हैं। 40 विभिन्न जानवरों की प्रजातियों (प्राइमेट्स, पक्षी, सरीसृप, उभयचर, मछली, कीड़े) और मनुष्यों से प्राप्त 400 से अधिक सेल लाइनें हैं।

कृत्रिम पोषक मीडिया में अलग-अलग अंगों और ऊतकों (ऑर्गन कल्चर) के टुकड़ों की खेती की जा सकती है। इस प्रकार की संस्कृतियाँ ऊतक संरचना को संरक्षित करती हैं, जो विशेष रूप से वायरस के अलगाव और पारित होने के लिए महत्वपूर्ण है जो अविभाजित ऊतक संस्कृतियों (उदाहरण के लिए, कोरोनविर्यूज़) में प्रजनन नहीं करते हैं।

संक्रमित सेल कल्चर में, सेल आकारिकी में परिवर्तन, साइटोपैथिक क्रिया, जो विशिष्ट हो सकती है, सेल में वायरल एंटीजन का निर्धारण करके और कल्चर द्रव में विषाणुओं का पता लगाया जा सकता है; संस्कृति तरल पदार्थ में वायरल संतान के जैविक गुणों का निर्धारण और टिशू कल्चर, चिक भ्रूण या संवेदनशील जानवरों में वायरस का अनुमापन; फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके साइटोकेमिकल विधि द्वारा आणविक संकरण या न्यूक्लिक एसिड के समूहों द्वारा कोशिकाओं में व्यक्तिगत वायरल न्यूक्लिक एसिड का पता लगाकर।

वायरस का अलगाव एक श्रमसाध्य और लंबी प्रक्रिया है। यह आबादी के बीच प्रसारित होने वाले वायरस के प्रकार या प्रकार को निर्धारित करने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा वायरस के सेरोवेरिएंट की पहचान करने के लिए, पोलियो वायरस के जंगली या वैक्सीन तनाव आदि); ऐसे मामलों में जहां तत्काल महामारी विज्ञान के उपाय करना आवश्यक है; जब वायरस के नए प्रकार या वेरिएंट सामने आते हैं; यदि आवश्यक हो, प्रारंभिक निदान की पुष्टि करें; पर्यावरणीय वस्तुओं में वायरस के संकेत के लिए। विषाणुओं को अलग करते समय, मानव शरीर में उनके बने रहने की संभावना के साथ-साथ दो या दो से अधिक विषाणुओं के कारण होने वाले मिश्रित संक्रमण की घटना को ध्यान में रखा जाता है। एक विषाणु से प्राप्त विषाणु की आनुवंशिक रूप से सजातीय आबादी को एक वायरल क्लोन कहा जाता है, और इसे प्राप्त करने की प्रक्रिया को क्लोनिंग कहा जाता है।

वायरस को अलग करने के लिए अतिसंवेदनशील प्रयोगशाला जानवरों के संक्रमण, चिकन भ्रूण का उपयोग किया जाता है, लेकिन टिशू कल्चर का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है। एक वायरस की उपस्थिति आमतौर पर विशिष्ट कोशिका अध: पतन (साइटोपैथिक प्रभाव), सिम्प्लास्ट्स और सिंकाइटिया के गठन, इंट्रासेल्युलर समावेशन का पता लगाने के साथ-साथ इम्यूनोफ्लोरेसेंस, हेमडसॉर्प्शन, हेमग्लगुटिनेशन (हेमग्लुटिनेटिंग वायरस में), आदि का उपयोग करके निर्धारित की जाती है। . ये लक्षण वायरस के 2-3 पास होने के बाद ही पता चल सकते हैं।

कई विषाणुओं के अलगाव के लिए, जैसे कि इन्फ्लूएंजा वायरस, चिकन भ्रूण का उपयोग किया जाता है, कुछ कॉक्ससेकी वायरस और कई अर्बोविरस के अलगाव के लिए, नवजात चूहों का उपयोग किया जाता है। सीरोलॉजिकल परीक्षणों और अन्य तरीकों का उपयोग करके पृथक वायरस की पहचान की जाती है।

वायरस के साथ काम करते समय, उनका अनुमापांक निर्धारित किया जाता है। वायरस का अनुमापन आमतौर पर टिशू कल्चर में किया जाता है, जो वायरस युक्त द्रव के उच्चतम कमजोर पड़ने का निर्धारण करता है, जिस पर ऊतक अध: पतन होता है, समावेशन और वायरस-विशिष्ट एंटीजन बनते हैं। प्लेक विधि का उपयोग कई वायरस को अनुमापन करने के लिए किया जा सकता है। सजीले टुकड़े, या वायरस की नकारात्मक कॉलोनियां, अगर कोटिंग के तहत सिंगल-लेयर टिशू कल्चर की वायरस-नष्ट कोशिकाओं के फॉसी हैं। कालोनी की गिनती इस आधार पर वायरस की संक्रामक गतिविधि के मात्रात्मक विश्लेषण की अनुमति देती है कि एक संक्रामक वायरस कण एक पट्टिका बनाता है। सजीले टुकड़े की पहचान संस्कृति को महत्वपूर्ण रंगों से रंगने से होती है, आमतौर पर तटस्थ लाल; सजीले टुकड़े डाई को सोख नहीं पाते हैं और इसलिए सना हुआ जीवित कोशिकाओं की पृष्ठभूमि के खिलाफ हल्के धब्बे के रूप में दिखाई देते हैं। वायरस के अनुमापांक को 1 में पट्टिका बनाने वाली इकाइयों की संख्या के रूप में व्यक्त किया जाता है एमएल.

विषाणुओं का शुद्धिकरण और सांद्रण आमतौर पर डिफरेंशियल अल्ट्रासेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा किया जाता है, जिसके बाद सघनता या घनत्व ग्रेडिएंट्स में सेंट्रीफ्यूगेशन होता है। वायरस को शुद्ध करने के लिए इम्यूनोलॉजिकल तरीके, आयन-एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी, इम्यूनोसॉर्बेंट्स आदि का इस्तेमाल किया जाता है।

वायरल संक्रमण के प्रयोगशाला निदान में नैदानिक ​​सामग्री में रोगज़नक़ या इसके घटकों का पता लगाना शामिल है; इस सामग्री से वायरस अलगाव; सेरोडायग्नोसिस। प्रत्येक व्यक्तिगत मामले में प्रयोगशाला निदान पद्धति का चुनाव रोग की प्रकृति, रोग की अवधि और प्रयोगशाला की क्षमताओं पर निर्भर करता है। वायरल संक्रमणों का आधुनिक निदान एक्सप्रेस विधियों पर आधारित है जो रोग के बाद प्रारंभिक अवस्था में नैदानिक ​​सामग्री लेने के कुछ घंटों बाद प्रतिक्रिया प्राप्त करने की अनुमति देता है। इनमें इलेक्ट्रॉन और प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, साथ ही इम्यूनोफ्लोरेसेंस, आणविक संकरण की विधि, lgM वर्ग, आदि के एंटीबॉडी का पता लगाना।

नकारात्मक रूप से अभिरंजित विषाणुओं की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विषाणुओं के विभेदीकरण और उनकी सांद्रता के निर्धारण की अनुमति देती है। वायरल संक्रमण के निदान में इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग उन मामलों तक सीमित है जहां नैदानिक ​​​​सामग्री में वायरल कणों की एकाग्रता पर्याप्त रूप से उच्च है (10 5 में 1 एमएलऔर उच्चा)। विधि का नुकसान एक ही टैक्सोनोमिक समूह से संबंधित वायरस के बीच अंतर करने में असमर्थता है। प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके इस नुकसान को समाप्त किया जाता है। विधि प्रतिरक्षा परिसरों के गठन पर आधारित होती है जब वायरल कणों में विशिष्ट सीरम जोड़ा जाता है, जबकि वायरल कणों की एक साथ एकाग्रता होती है, जिससे उन्हें पहचानना संभव हो जाता है। विधि का उपयोग एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए भी किया जाता है। एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के उद्देश्य से, ऊतक के अर्क, मल, पुटिकाओं से तरल पदार्थ और नासॉफरीनक्स से रहस्यों की एक इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म परीक्षा की जाती है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का व्यापक रूप से वायरस के आकारजनन का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है; इसकी क्षमताओं को लेबल किए गए एंटीबॉडी के उपयोग के साथ विस्तारित किया जाता है।

आणविक संकरण की विधि, वायरस-विशिष्ट न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के आधार पर, जीन की एकल प्रतियों का पता लगाना संभव बनाती है और संवेदनशीलता के मामले में कोई समान नहीं है। प्रतिक्रिया डीएनए या आरएनए (जांच) के पूरक किस्में के संकरण और डबल-स्ट्रैंडेड संरचनाओं के गठन पर आधारित है। सबसे सस्ता जांच क्लोन पुनः संयोजक डीएनए है। जांच को रेडियोधर्मी अग्रदूतों (आमतौर पर रेडियोधर्मी फास्फोरस) के साथ लेबल किया जाता है। वर्णमिति प्रतिक्रियाओं का उपयोग आशाजनक है। आणविक संकरण के कई रूप हैं: बिंदु संकरण, धब्बा संकरण, सैंडविच संकरण, स्वस्थानी संकरण आदि।

एलजीएम वर्ग के एंटीबॉडी कक्षा जी एंटीबॉडी (बीमारी के 3-5 वें दिन) से पहले दिखाई देते हैं और कुछ हफ्तों के बाद गायब हो जाते हैं, इसलिए उनका पता लगाना हाल ही में संक्रमण का संकेत देता है। आईजीएम वर्ग के एंटीबॉडी का पता इम्यूनोफ्लोरेसेंस या एंजाइम इम्यूनोसेरा द्वारा एंटी-μ एंटीसेरा (एंटी-आईजीएम हैवी चेन सेरा) का उपयोग करके लगाया जाता है।

वायरोलॉजी में सीरोलॉजिकल तरीके क्लासिकल इम्यूनोलॉजिकल रिएक्शन पर आधारित हैं (अनुसंधान के इम्यूनोलॉजिकल तरीके देखें) : पूरक निर्धारण प्रतिक्रियाएं, रक्तगुल्म अवरोधन, जैविक उदासीनीकरण, प्रतिरक्षी प्रसार, अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म, रेडियल हेमोलाइसिस, इम्यूनोफ्लोरेसेंस, एंजाइम इम्यूनोएसे, रेडियोइम्यूनोएसे। कई अभिक्रियाओं के लिए सूक्ष्म विधियाँ विकसित की जा चुकी हैं, और उनकी तकनीकों में लगातार सुधार किया जा रहा है। इन विधियों का उपयोग पहले की तुलना में दूसरे सीरम में एंटीबॉडी में वृद्धि का निर्धारण करने के लिए ज्ञात सीरा के एक सेट और सेरोडायग्नोसिस के लिए वायरस की पहचान करने के लिए किया जाता है (पहला सीरम रोग के बाद पहले दिनों में लिया जाता है, दूसरा - के बाद 2-3 सप्ताह)। नैदानिक ​​मूल्य दूसरे सीरम में एंटीबॉडी में चार गुना वृद्धि से कम नहीं है। यदि lgM वर्ग के एंटीबॉडी का पता लगाना हाल के संक्रमण का संकेत देता है, तो lgC वर्ग के एंटीबॉडी कई वर्षों तक और कभी-कभी जीवन भर बने रहते हैं।

पूर्व प्रोटीन शुद्धि के बिना जटिल मिश्रण में वायरस और एंटीबॉडी के अलग-अलग एंटीजन की पहचान करने के लिए, इम्युनोब्लॉटिंग का उपयोग किया जाता है। यह विधि पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके प्रोटीन के विभाजन को एंजाइम इम्यूनोसे द्वारा प्रोटीन के बाद के इम्यूनोसे के साथ जोड़ती है। प्रोटीन का पृथक्करण प्रतिजन की रासायनिक शुद्धता की आवश्यकताओं को कम करता है और व्यक्तिगत प्रतिजन-एंटीबॉडी जोड़े की पहचान करना संभव बनाता है। यह कार्य प्रासंगिक है, उदाहरण के लिए, एचआईवी संक्रमण के सेरोडायग्नोसिस में, जहां सेल एंटीजन के लिए एंटीबॉडी की उपस्थिति के कारण झूठे-सकारात्मक एंजाइम इम्यूनोएसे प्रतिक्रियाएं होती हैं, जो वायरल प्रोटीन की अपर्याप्त शुद्धि के परिणामस्वरूप मौजूद होती हैं। आंतरिक और बाहरी वायरल प्रतिजनों के रोगियों के सेरा में एंटीबॉडी की पहचान रोग के चरण को निर्धारित करना संभव बनाती है, और आबादी के विश्लेषण में - वायरल प्रोटीन की परिवर्तनशीलता। एचआईवी संक्रमण में इम्युनोब्लोटिंग का उपयोग व्यक्तिगत वायरल एंटीजन और उनके प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में किया जाता है। आबादी का विश्लेषण करते समय, वायरल प्रोटीन की परिवर्तनशीलता को निर्धारित करने के लिए विधि का उपयोग किया जाता है। विधि का बड़ा मूल्य पुनः संयोजक डीएनए प्रौद्योगिकी का उपयोग करके संश्लेषित प्रतिजनों का विश्लेषण करने, उनके आकार की स्थापना और प्रतिजनी निर्धारकों की उपस्थिति की संभावना में निहित है।

ग्रंथ सूची:बुक्रिंस्काया ए.जी. वायरोलॉजी, एम., 1986; विषाणु विज्ञान, तरीके, एड। बी मेखी, ट्रांस। अंग्रेजी से, एम।, 1988; माइक्रोबायोलॉजिकल और वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड्स की हैंडबुक, एड। एम.ओ. बिगर, एम।, 1982।

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किताबों में "वायरोलॉजिकल रिसर्च मेथड्स"

रेज अगेंस्ट द मशीन किलिंग इन द नेम (1992)

लेखक त्सालेर इगोर

रेज़ अगेंस्ट द मशीन किलिंग इन द नेम (1992) लॉस एंजिल्स स्थित रेज अगेंस्ट द मशीन का पहला एल्बम हिप-हॉप और हार्ड रॉक को मिला कर, उन्हें सामयिक राजनीतिक घोषणापत्र के साथ छिड़का और, सुखद रूप से, सघन फंक रिदम की काफी खुराक। "किलिंग इन द नेम" गीत में, पहले एकल में शामिल,

जेम्स ब्राउन गेट अप (आई फील लाइक बीइंग ए) सेक्स मशीन (1970)

20वीं शताब्दी का लोकप्रिय संगीत पुस्तक से: जैज़, ब्लूज़, रॉक, पॉप, कंट्री, फोक, इलेक्ट्रॉनिक, सोल लेखक त्सालेर इगोर

जेम्स ब्राउन गेट अप (आई फील लाइक बीइंग ए) सेक्स मशीन (1970) 1960 के दशक के अंत में, जेम्स ब्राउन ने प्रयोग करना शुरू किया। द फेमस फ्लेम्स की दिल दहला देने वाली आत्मा ने जेबी के सिजलिंग फंक को रास्ता दिया। आसन्न दुर्गंध युग के सबसे महत्वपूर्ण मील के पत्थर में से एक "सेक्स मशीन" था, जो दस मिनट के संस्करण में था

मशीन के खिलाफ रोष

किताब अगेंस्ट द इम्पॉसिबल से (संस्कृति के बारे में लेखों का संग्रह) लेखक कोल्टाशोव वसीली जॉर्जिएविच

मशीन के खिलाफ रोष टॉम मोरेलो: "हमारा लक्ष्य लोगों को खुद को झूठ और हिंसा की जंजीरों से मुक्त करने में मदद करना है, जिसने उन्हें सरकारों, अंतर्राष्ट्रीय निगमों, मीडिया और राजनीतिक दलों के साथ उलझा दिया है, दुनिया भर के लोगों को विश्वास की भावना देने के लिए कल और

मशीन में आपका स्वागत है

बेल टाइम किताब से लेखक स्मिरनोव इल्या

मशीन में आपका स्वागत है हम अपने इतिहास में पेरेस्त्रोइका की शुरुआत जनवरी 1987 से कर सकते हैं। तब केंद्रीय समिति की उदारवादी बैठक हुई, और हमें यूनोस्ट में सोवियत रॉक के आधुनिक "सितारों" की एक असंपादित सूची प्रकाशित करने का अवसर मिला, जिसमें डीडीटी, क्लाउड एज और

टोयोडा मशीन काम करती है

गेम्बा काइज़न पुस्तक से। लागत में कमी और गुणवत्ता में सुधार का मार्ग इमाई मसाकी द्वारा

टोयोडा मशीन वर्क्स टोयोडा मशीन वर्क्स के निदेशक योशियो शिमा के अनुसार, गुणवत्ता आश्वासन के लिए एक गुणवत्ता प्रणाली और मानक स्थापित करने के लाभ 1980 के दशक में स्पष्ट हो गए, जब कंपनी ने "गुणवत्ता पर आधारित कुल प्रबंधन" की अवधारणा पेश की।

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मशीन (मशीन) अरस्तू ने एक बार टिप्पणी की थी, "यदि शटल स्वयं बुने जाते हैं," कारीगरों को श्रमिकों की आवश्यकता नहीं होगी, और स्वामी को दासों की आवश्यकता नहीं होगी ("राजनीति", I, 4)। यह लगभग वही है जिसे हम एक मशीन कहते हैं - एक ऐसी वस्तु जो हिलने-डुलने में सक्षम है, आत्मा से रहित (ऑटोमेटन) और

इंटरनेट इंटेलिजेंस [एक्शन गाइड] पुस्तक से लेखक युशुक एवगेनी लियोनिदोविच

साइटों का संग्रह इंटरनेट आर्काइव वेबैक मशीन ई-मेल पता - http://web.archive.org कोई भी व्यक्ति जिसने पर्याप्त लंबी अवधि के लिए अपनी रुचि की समस्या के बारे में जानकारी एकत्र की है, वह जानता है कि कभी-कभी प्रकाशित जानकारी को खोजना कितना महत्वपूर्ण होता है साइट कई साल पहले। कभी कभी यह बस है

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साइट्स का संग्रह इंटरनेट आर्काइव वेबैक मशीन बहुत बार काले पीआर लोगों का हमला आपके लिए अप्रत्याशित रूप से आता है। इस मामले में, आपको पहली बार दुश्मन का बारीकी से अध्ययन करने की आवश्यकता का सामना करना पड़ता है। यदि आपने भी घटनाओं के ऐसे विकास की कल्पना की है (उदाहरण के लिए, in

4.9। टाइम मशीन के साथ बैकअप

लेखक स्क्रीलिना सोफिया

4.9। टाइम मशीन मैक ओएस एक्स लेपर्ड के साथ बैकअप लेने से आप टाइम मशीन एप्लिकेशन का उपयोग करके नियमित रूप से अपने कंप्यूटर का बैकअप ले सकते हैं। उपयुक्त सेटिंग्स के बाद, एप्लिकेशन अपने आप हो जाएगा

4.9.2। टाइम मशीन के साथ अपना पहला बैकअप बनाएं

Macintosh Tutorial पुस्तक से लेखक स्क्रीलिना सोफिया

4.9.2। टाइम मशीन का उपयोग करके अपना पहला बैकअप बनाना इससे पहले कि आप अपना पहला बैकअप बनाना शुरू करें, आपको या तो एक बाहरी ड्राइव डालना होगा या केवल बैकअप के लिए एक मुफ्त हार्ड ड्राइव विभाजन अलग रखना होगा।

4.9.4। टाइम मशीन का उपयोग करना

Macintosh Tutorial पुस्तक से लेखक स्क्रीलिना सोफिया

4.9.4। टाइम मशीन का उपयोग करना आवश्यक टाइम मशीन सेटिंग्स करने और कई बैकअप बनाने के बाद, आप अपनी फ़ाइलों के पुराने संस्करणों को खोजना और पुनर्स्थापित करना शुरू कर सकते हैं। इसके लिए : 1. एक खोजक विंडो खोलें और उस फ़ाइल का चयन करें जिसे आपको पुनर्स्थापित करने की आवश्यकता है।2। अगर

वायरस, बैक्टीरिया के विपरीत, केवल जीवित कोशिकाओं में प्रजनन करते हैं। इस संबंध में, वायरस की खेती एक प्रायोगिक जानवर के शरीर के स्तर पर की जा सकती है (मुर्गी के भ्रूण को एक विकासशील जीव के रूप में प्रायोगिक जानवरों के रूप में संदर्भित किया जाता है) या शरीर के बाहर विकसित एक जीवित कोशिका, अर्थात। सेल संस्कृति स्तर पर।

प्रयोगशाला जानवरों का उपयोग। वायरस को अलग करने और खेती करने के तरीकों में से एक प्रयोगशाला जानवरों को संक्रमित करना है। उनका उपयोग वायरस को अलग करने के लिए किया जाता है जो सेल संस्कृतियों में साइटोपैथिक परिवर्तनों के विकास का कारण नहीं बनते हैं और चिकन भ्रूण में गुणा नहीं करते हैं। प्रयोगशाला पशुओं का उपयोग नैदानिक ​​लक्षण परिसर द्वारा वायरल संक्रमण की प्रकृति की पहचान करना भी संभव बनाता है। काम के उद्देश्य और अध्ययन किए जा रहे वायरस के प्रकार के आधार पर, सफेद चूहों, हैम्स्टर, गिनी सूअरों और खरगोशों को अक्सर प्रयोगशाला जानवरों के रूप में उपयोग किया जाता है। बड़े जानवरों में से विभिन्न प्रजातियों के बंदर और कुछ अन्य जानवरों का उपयोग किया जाता है। पक्षियों से मुर्गियां, गीज़, बत्तख का उपयोग करें। हाल के वर्षों में, नवजात जानवर (वायरस के प्रति अधिक संवेदनशील), "बाँझ जानवर" (गर्भाशय से निकाले गए और बाँझ हवा और बाँझ भोजन का उपयोग करके बाँझ परिस्थितियों में रखे गए) और ज्ञात आनुवंशिकता वाले शुद्ध वंश के जानवर (इनब्रेड या रैखिक जानवर) अधिक बार उपयोग किया जाता है।

केवल स्वस्थ जानवरों को ही प्रयोग में लिया जाता है, अधिमानतः एक नर्सरी और एक बैच से। शरीर के तापमान को उसी समय मापा जाता है, क्योंकि इसमें दैनिक उतार-चढ़ाव होते हैं। परीक्षण सामग्री को कुछ ऊतकों में वायरस के ट्रॉपिज़्म को ध्यान में रखते हुए प्रशासित किया जाता है। तो, न्यूट्रोट्रोपिक वायरस के अलगाव के लिए, न्यूमोट्रोपिक वायरस के अलगाव के लिए - नाक के माध्यम से (प्रकाश ईथर संज्ञाहरण के तहत) सामग्री को मस्तिष्क में इंजेक्ट किया जाता है।

प्रयोगशाला पशुओं में, वायरस युक्त सामग्री से संक्रमण के बाद, आगे के शोध के लिए सामग्री को समय पर और सही तरीके से और असंतुलित रूप से लेना महत्वपूर्ण है। यदि जानवर उचित ऊष्मायन अवधि के बाद संक्रमण के लक्षण विकसित करता है तो वायरस अलगाव के परिणाम सकारात्मक माने जाते हैं।

चिक भ्रूण का उपयोग। भ्रूण के ऊतकों में, इसकी झिल्लियों में, जर्दी थैली, कई रोगजनक मानव और पशु वायरस गुणा करने में सक्षम होते हैं। इस मामले में, एक विशेष ऊतक के लिए वायरस की चयनात्मकता महत्वपूर्ण है: चेचक के वायरस अच्छी तरह से प्रजनन करते हैं और कोरियोन-एलैंटोइक झिल्ली की कोशिकाओं में जमा होते हैं, एमनियन में कण्ठमाला वायरस, एमनियन और एलांटोइस में इन्फ्लूएंजा वायरस और रेबीज वायरस जर्दी थैली में।

विकासशील भ्रूणों में वायरस की खेती के अन्य तरीकों की तुलना में कई फायदे हैं: एक घना खोल काफी मज़बूती से आंतरिक सामग्री को रोगाणुओं से बचाता है; चिकन भ्रूण को संक्रमित करते समय, खेती के अन्य तरीकों की तुलना में वायरस युक्त सामग्री की अधिक उपज प्राप्त होती है; चिकन भ्रूण के संक्रमण की विधि किसी भी वायरोलॉजिकल प्रयोगशालाओं के लिए सरल और सुलभ है; भ्रूण में बाहरी कारकों के रोगजनकों के लिए पर्याप्त व्यवहार्यता और प्रतिरोध होता है। हालांकि, चिकन भ्रूण हमेशा अव्यक्त वायरल और जीवाणु संक्रमण से मुक्त नहीं होते हैं। वायरस से संक्रमण के बाद भ्रूण में होने वाले पैथोलॉजिकल परिवर्तनों की गतिशीलता का निरीक्षण करना मुश्किल है। संक्रमित भ्रूणों की ऑटोप्सी में अक्सर कोई स्पष्ट परिवर्तन नहीं दिखता है और रक्तगुल्म परीक्षण और अन्य तरीकों का उपयोग करके वायरस का पता लगाया जाता है। संक्रमित भ्रूण में एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि का पालन करना असंभव है। विधि सभी वायरस के लिए उपयुक्त नहीं है।

वायरोलॉजिकल स्टडीज के लिए 7-12 दिन की उम्र के भ्रूण का इस्तेमाल किया जाता है, जो पोल्ट्री फार्म से प्राप्त किए जाते हैं। आप एक पारंपरिक थर्मोस्टेट में भ्रूण विकसित कर सकते हैं, जिसके तल पर हवा को नम करने के लिए पानी की ट्रे रखी जाती है। थर्मोस्टेट में तापमान 37 डिग्री सेल्सियस होना चाहिए, और आर्द्रता 60-65% होनी चाहिए। सफेद मुर्गियों के बड़े, साफ (लेकिन बिना धुले), निषेचित अंडे चुनें, जिन्हें 5-10 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 10 दिनों से अधिक के लिए संग्रहित नहीं किया जाना चाहिए। निषेचित अंडे एक जर्मिनल डिस्क की उपस्थिति से पहचाने जाते हैं, जो एक ओवोस्कोप के साथ पारभासी होने पर एक डार्क स्पॉट की तरह दिखता है।

वायरस के साथ काम करते समय, भ्रूण को संक्रमित करने के विभिन्न तरीकों का उपयोग किया जा सकता है, लेकिन सबसे व्यावहारिक अनुप्रयोग कोरियोन-एलैंटोइक झिल्ली पर वायरस का अनुप्रयोग है, अल्लांटोइक, एमनियोटिक गुहा और जर्दी थैली में परिचय

(चित्र 10.5)। विधि का चुनाव अध्ययन के तहत वायरस के जैविक गुणों पर निर्भर करता है।

चावल। 10.5।

संक्रमण से पहले, भ्रूण की व्यवहार्यता एक ओवोस्कोप पर निर्धारित की जाती है। जीवित भ्रूण मोबाइल हैं, झिल्ली के जहाजों का स्पंदन स्पष्ट रूप से दिखाई देता है। मोमबत्ती जलाते समय, खोल पर एक साधारण पेंसिल से वायु थैली की सीमाओं या भ्रूण के स्थान को चिह्नित करें, जो खोल पर इसकी छाया से निर्धारित होता है।

मुर्गे के भ्रूणों को उबाल-निष्फल उपकरणों का उपयोग करते हुए सख्ती से सड़न रोकने वाली स्थितियों में एक बॉक्स में संक्रमित किया जाता है।

कोरियोन-एलैंटोइक झिल्ली पर संक्रमित होने पर, 12-दिवसीय भ्रूण सबसे उपयुक्त होते हैं। एलेंटिक गुहा में संक्रमण के लिए, 10-11 दिनों के भ्रूण का उपयोग किया जाता है, एमनियोटिक गुहा में - 7-11 दिनों के भ्रूण, जर्दी थैली में - 7 दिनों के भ्रूण।

संक्रमित भ्रूण वाले अंडे कुंद अंत के साथ स्टैंड पर रखे जाते हैं। तापमान शासन और ऊष्मायन अवधि टीका वायरस के जैविक गुणों पर निर्भर करती है। ओवोस्कोप के तहत प्रतिदिन भ्रूण की व्यवहार्यता की निगरानी की जाती है। चोट के कारण संक्रमण के बाद पहले दिन मरने वाले भ्रूणों की जांच नहीं की जाती है।

सामग्री एकत्र करने से पहले, जहाजों को कसने और शव परीक्षा में रक्तस्राव को रोकने के लिए भ्रूण को 18-20 घंटे के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर ठंडा किया जाता है। सड़न के नियमों के अनुपालन में भ्रूण को बॉक्स में खोला जाता है।

अल्लांटोइक तरल पदार्थ को एक पिपेट के साथ चूसा जाता है, बाँझपन को चीनी या मांस-पेप्टोन शोरबा में इनोक्यूलेशन द्वारा नियंत्रित किया जाता है, रक्तगुल्म प्रतिक्रिया में वायरस की उपस्थिति के लिए जाँच की जाती है और एक जमे हुए राज्य में 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाता है।

एमनियोटिक द्रव प्राप्त करने के लिए, सर्वप्रथम एलांटोइक द्रव की आकांक्षा की जाती है, फिर एमनियोटिक झिल्ली को चिमटी से पकड़ लिया जाता है, थोड़ा ऊपर उठाया जाता है, और एमनियोटिक द्रव को पाश्चर पिपेट के साथ चूसा जाता है।

कोरियोन-एलैंटोइक झिल्ली में परिवर्तन का अध्ययन करते समय, इसे कैंची से काटा जाता है और सभी सामग्री छेद के माध्यम से पेट्री डिश में डाल दी जाती है। कोरियोन-एलैंटोइक झिल्ली खोल के अंदर रहता है और चिमटी के साथ खारा के साथ पेट्री डिश में निकाल दिया जाता है। यहाँ इसे धोया जाता है, सीधा किया जाता है और गहरे रंग की पृष्ठभूमि के विरुद्ध फोकल घावों की प्रकृति का अध्ययन किया जाता है।

एमनियोटिक झिल्ली प्राप्त करने के लिए, एमनियोटिक थैली जिसमें भ्रूण संलग्न होता है, को काट दिया जाता है और भ्रूण से मुक्त कर दिया जाता है, घावों के लिए देखा जाता है।

जर्दी झिल्ली प्राप्त करने के लिए, कोरियोन-एलैंटोइस को काट दिया जाता है, एलेंटोइक और एमनियोटिक द्रव को चूसा जाता है, भ्रूण को चिमटी से हटा दिया जाता है, गर्भनाल द्वारा अलग किया जाता है, जर्दी थैली को पकड़कर पेट्री डिश में रखा जाता है। बाँझपन के लिए नियंत्रण, घावों की उपस्थिति के लिए देखें। जर्दी, यदि आवश्यक हो, जर्दी थैली को हटाए बिना एक सिरिंज के साथ हटाया जा सकता है।

संक्रमित भ्रूण के एलेंटोइक और एमनियोटिक द्रव में वायरस की उपस्थिति रक्तगुल्म परीक्षण में निर्धारित की जाती है। बाँझपन के लिए परीक्षण के बाद रक्तगुल्म-सकारात्मक भ्रूण से तरल पदार्थ जमा किए जाते हैं और एक विस्तारित रक्तगुल्म परीक्षण में इसका शीर्षक दिया जाता है।

वायरस की थोड़ी मात्रा या परीक्षण सामग्री में इसका पता लगाने की असंभवता की उपस्थिति में, चिकन भ्रूण पर क्रमिक मार्ग किए जाते हैं। यदि, भ्रूण पर बाद के तीन मार्ग के बाद, परीक्षण सामग्री में वायरस का पता नहीं चलता है, तो परिणाम नकारात्मक माना जाता है।

सेल संस्कृतियों का उपयोग। शरीर के बाहर कोशिकाओं की खेती के लिए कई शर्तों की पूर्ति की आवश्यकता होती है। उनमें से एक काम के दौरान बाँझपन का सख्त पालन है, क्योंकि उपयोग किए जाने वाले पोषक तत्व बैक्टीरिया और कवक के लिए भी एक उत्कृष्ट पोषक तत्व हैं। ऊतक कोशिकाएं भारी धातुओं के लवणों के प्रति अत्यधिक संवेदनशील होती हैं। इसलिए, विभिन्न सामग्रियों की गुणवत्ता जो खारा समाधान और पोषक मीडिया बनाती हैं, साथ ही सेल संस्कृति में उपयोग किए जाने वाले बर्तनों और रबर स्टॉपर्स के प्रसंस्करण के तरीकों को असाधारण महत्व दिया जाना चाहिए।

कोशिकाओं के साथ सफल काम के लिए आवश्यक शर्तों में से एक आसुत जल की उच्च गुणवत्ता है (सप्ताह में दो बार जाँच की जाती है)। कोशिकाओं के साथ काम करने के लिए, बिडिस्टिल्ड या विआयनीकृत पानी का उपयोग किया जाता है। सबसे अच्छे डिस्टिलर कांच या मिश्र धातु इस्पात से बने उपकरण हैं: भारी धातु आयन, जो कोशिकाओं के लिए विषैले होते हैं, ऐसे उपकरणों से बाहर नहीं निकलते हैं। विआयनीकृत पानी विशेष प्रतिष्ठानों पर प्राप्त किया जाता है, जहां आयनों एक्सचेंजर और कटियन एक्सचेंजर के साथ स्तंभों के माध्यम से इसके क्रमिक मार्ग के दौरान लवण से पानी को शुद्ध किया जाता है।

कोशिकाओं की खेती करते समय, व्यंजन और स्टॉपर्स की तैयारी और नसबंदी पर विशेष रूप से उच्च आवश्यकताएं रखी जाती हैं। कई मामलों में, यह उनकी अनुचित धुलाई और नसबंदी है जो कोशिकाओं को कांच या सेल मोनोलेयर के तेजी से अध: पतन से जुड़ी नहीं होने का कारण बनती है।

शरीर के बाहर कोशिकाओं के विकास और प्रजनन के लिए, भौतिक-रासायनिक कारकों के एक जटिल सेट की आवश्यकता होती है: एक निश्चित तापमान, हाइड्रोजन आयनों की एकाग्रता, अकार्बनिक यौगिक, कार्बोहाइड्रेट, अमीनो एसिड, प्रोटीन, विटामिन, ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड, इसलिए, के लिए सेल संस्कृतियों में वायरस की खेती, जटिल संरचना के पोषक मीडिया का उपयोग किया जाता है। उनकी संरचना बनाने वाले घटकों की प्रकृति के अनुसार, इन मीडिया को दो समूहों में बांटा गया है।

• 1. मीडिया, जो नमकीन घोल (हैंक्स, अर्ल, आदि) और प्राकृतिक घटकों (पशु और मानव रक्त सीरम, एल्ब्यूमिन हाइड्रोलाइज़ेट) के मिश्रण हैं। मीडिया के विभिन्न योगों में इनमें से प्रत्येक घटक की मात्रा अलग-अलग होती है।
• 2. अमीनो एसिड, विटामिन, कोएंजाइम और न्यूक्लियोटाइड्स (ईगल मीडिया, 199 आदि) के अतिरिक्त खारा समाधान (अर्ल, हैंक्स, आदि) से युक्त सिंथेटिक और अर्ध-सिंथेटिक मीडिया। सिंथेटिक मीडिया में, कोशिकाएं थोड़े समय (7 दिनों तक) के लिए व्यवहार्य अवस्था में मौजूद रह सकती हैं। उन्हें लंबे समय तक व्यवहार्य स्थिति में बनाए रखने के लिए, साथ ही कोशिकाओं के विकास और प्रजनन के लिए बेहतर स्थिति बनाने के लिए, जानवरों के रक्त सीरम (गायों, बछड़ों, आदि) को सिंथेटिक मीडिया में जोड़ा जाता है।

वायरस को अलग करने के लिए शरीर के बाहर कोशिकाओं के संवर्धन के विभिन्न तरीकों का इस्तेमाल किया जा सकता है। हालांकि, वर्तमान में, प्राथमिक ट्रिप्सिनाइज्ड और ट्रांसप्लांटेड सेल लाइनों की सिंगल-लेयर संस्कृतियों को सबसे बड़ा व्यावहारिक अनुप्रयोग प्राप्त हुआ है। सिंगल-लेयर सेल कल्चर ग्लास फ्लैट-दीवार वाले जहाजों-गद्दों में 1 एल, 250 और 100 मिलीलीटर की क्षमता या पारंपरिक बैक्टीरियोलॉजिकल टेस्ट ट्यूब में उचित तरीके से इलाज के साथ उगाए जाते हैं।

प्राथमिक ट्रिप्सिनाइज्ड सेल कल्चर का उपयोग करते समय, विधि का सार प्रोटियोलिटिक एंजाइमों द्वारा ऊतकों में अंतरकोशिकीय बंधनों के विनाश और कांच की सतह पर एक मोनोलेयर विकसित करने के लिए कोशिकाओं को अलग करने में निहित है। मानव और पशु भ्रूण के ऊतक और अंग, वध किए गए पशु और पक्षी, साथ ही सर्जरी के दौरान मनुष्यों से निकाले गए अंग कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए एक स्रोत के रूप में काम कर सकते हैं। सामान्य और घातक पतित ऊतकों, उपकला, फाइब्रोब्लास्टिक प्रकार और मिश्रित का प्रयोग करें। शरीर से निकाले गए कोशिकाओं को पुन: उत्पन्न करने की क्षमता ऊतक भेदभाव की डिग्री से निकटता से संबंधित है। ऊतक जितना कम विभेदित होता है, उसकी कोशिकाओं की इन विट्रो में प्रसार की क्षमता उतनी ही तीव्र होती है। इसलिए, वयस्क जानवरों की सामान्य कोशिकाओं की तुलना में भ्रूण और ट्यूमर के ऊतकों की कोशिकाएं शरीर के बाहर संस्कृति के लिए बहुत आसान होती हैं।

उनके विकास की प्रकृति को निर्धारित करने के लिए दैनिक संस्कृतियों को कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के तहत देखा जाता है। यदि कोशिकाएँ फैलती नहीं हैं, गोल, दानेदार, काली दिखती हैं, और कांच से छूटती हैं, तो कांच के बर्तन खराब तरीके से संसाधित होते हैं या कल्चर माध्यम में सामग्री विषाक्त होती है।

प्राथमिक ट्रिप्सिनीकृत ऊतकों के साथ, प्रतिरोपित सेल संस्कृतियों का व्यापक रूप से वायरस की खेती के लिए उपयोग किया जाता है; सेल कल्चर शरीर के बाहर अनिश्चित काल तक प्रजनन करने में सक्षम हैं। सामान्य और कैंसरग्रस्त मानव ऊतकों से प्राप्त सेल कल्चर का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है। सर्वाइकल ट्यूमर से प्राप्त हेला सेल लाइन, स्वरयंत्र कार्सिनोमा से हेप-2, ओरल कैविटी कैंसर ऊतक से केवी व्यापक रूप से ज्ञात हो गया है। इस तरह के सेल कल्चर सामान्य जानवरों के ऊतकों - एक बंदर, एक खरगोश और एक सुअर के भ्रूण (तालिका 10.1) से भी तैयार किए जाते हैं।

प्रत्यारोपित कोशिकाओं के पुनर्बीज के लिए, पोषक माध्यम को पिपेट के साथ चूसा जाता है और डाला जाता है। कोशिकाओं की बनी पतली परत को ट्रिप्सिन घोल से नष्ट कर दिया जाता है, और इस तरह से छोड़ी गई कोशिकाओं को ताजा पोषक समाधान के साथ एक नए बर्तन में स्थानांतरित कर दिया जाता है, जहां कोशिकाओं की एक मोनोलेयर फिर से बन जाती है।

संक्रमित सेल संस्कृतियों में वायरस की उपस्थिति का एक संकेतक हो सकता है:

• ए) विशिष्ट सेल अपघटन का विकास;
• बी) इंट्रासेल्युलर समावेशन का पता लगाना;
• सी) इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा एक विशिष्ट एंटीजन का पता लगाना;
• डी) सकारात्मक hemadsorption प्रतिक्रिया;
• ई) सकारात्मक hemagglutination प्रतिक्रिया;
• ई) सजीले टुकड़े का गठन।

तालिका 10.1

सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली सेल संस्कृतियों की सूची

संक्रमित संस्कृतियों में विशिष्ट अध: पतन का पता लगाने के लिए, कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के तहत प्रतिदिन कोशिकाओं की जांच की जाती है। कई वायरस, जब कोशिकाओं में गुणा करते हैं, तो उनके अध: पतन का कारण बनते हैं, अर्थात। एक साइटोपैथोजेनिक प्रभाव (सीपीए) (चित्र। 10.6) है।

चावल। 10.6।

विकास का समय और संक्रमित सेल संस्कृतियों में साइटोपैथिक परिवर्तनों की प्रकृति, इनोक्युलेटेड वायरस के गुणों और खुराक के साथ-साथ सेल की खेती के गुणों और स्थितियों से निर्धारित होती है। कुछ वायरस संक्रमण के पहले सप्ताह के भीतर सीपीपी का कारण बनते हैं (चेचक, पोलियो, कॉक्ससेकी बी, आदि), अन्य - 1-2 सप्ताह के बाद। संक्रमण के बाद (एडेनोवायरस, पैराइन्फ्लुएंजा वायरस, ईसीएचओ, आदि)।

वायरस तीन मुख्य प्रकार के साइटोपैथिक परिवर्तन का कारण बनते हैं: बहुसंस्कृति विशाल कोशिकाओं और सिम्प्लास्ट का निर्माण, जो कई कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म के संलयन का परिणाम है; इंटरसेलुलर कनेक्शन और कोशिकाओं के गोलाई के नुकसान के परिणामस्वरूप गोल कोशिका अध: पतन; सेल प्रसार के foci का विकास, जिसमें कोशिकाओं की कई परतें होती हैं।

सेल संस्कृतियों में कुछ वायरस के प्रजनन के दौरान, प्रभावित कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म या न्यूक्लियस में इंट्रासेल्युलर समावेशन बनते हैं। समावेशन का पता लगाने के लिए सेल संस्कृतियों को वायरस से संक्रमित टेस्ट ट्यूबों में ग्लास प्लेटों पर उगाया जाता है, और निश्चित ऊष्मायन अवधि के बाद, पारंपरिक रंगों के साथ धुंधला करके तैयारियां तैयार की जाती हैं।

संक्रमित सेल संस्कृतियों में एक विशिष्ट प्रतिजन का पता लगाने के लिए, एमएफए का उपयोग करके समावेशन का पता लगाने के लिए तैयारी उसी तरह तैयार की जाती है।

प्लाक विधि पतित (मृत) कोशिकाओं से युक्त फीके पड़े क्षेत्रों की अगर कोटिंग के तहत वायरस-संक्रमित कोशिकाओं के एक मोनोलेयर में गठन पर आधारित है। ये क्षेत्र, जिन्हें सजीले टुकड़े कहा जाता है, वायरस उपनिवेश हैं, जो आमतौर पर एक वायरल कण से बनते हैं।

साइटोपैथिक परिवर्तनों की अनुपस्थिति में, परीक्षण सामग्री से संक्रमित सेल संस्कृतियों में इंट्रासेल्युलर समावेशन, पट्टिका गठन, हेमडसॉर्प्शन की नकारात्मक प्रतिक्रियाएं और हेमग्लगुटिनेशन, दो बाद के मार्ग किए जाते हैं। अंतिम परिच्छेद में इन परिवर्तनों की अनुपस्थिति में, वायरस अलगाव का परिणाम नकारात्मक माना जाता है।

संक्रामक सामग्री में वायरस का पता लगाने के लिए निम्नलिखित विधियों का उपयोग किया जा सकता है।

सूक्ष्मदर्शी:

• ए) वायरोस्कोपी;
• बी) इंट्रासेल्युलर समावेशन का पता लगाना।

इम्यूनोलॉजिकल:

• ए) प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी;
• बी) इम्यूनोफ्लोरेसेंस;
• ग) रक्तगुल्म;
• घ) रक्तशोषण।

निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं सहित प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकों का उपयोग करके वायरस की पहचान की जाती है:

• ए) रक्तगुल्म का निषेध;
• बी) hemadsorption देरी;
• ग) बाध्यकारी पूरक;
• घ) निष्प्रभावीकरण;
• ई) अगर जेल में वर्षा।

सूक्ष्म तरीके। एक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी से, केवल 150 एनएम से बड़े बड़े वायरस का पता लगाया जा सकता है। छोटे वायरस की पहचान केवल इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप से ही संभव है। बड़े वायरस का पता लगाने के लिए लाइट, फेज कंट्रास्ट और फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का इस्तेमाल किया जा सकता है।

वायरल संक्रमण के दौरान, संक्रमित कोशिकाओं में अजीबोगरीब समावेश विकसित होते हैं। कुछ संक्रमण प्रभावित कोशिकाओं (रेबीज, चेचक के टीके) के साइटोप्लाज्म में समावेशन के साथ होते हैं, अन्य - साइटोप्लाज्म और न्यूक्लियस (खसरा, प्राकृतिक और चिकन पॉक्स, एडेनोवायरस रोग) में। समावेशन की प्रकृति, संरचना, आकार और आकार 0.25 से 25 माइक्रोन तक भिन्न होते हैं। आधुनिक आंकड़ों के अनुसार, कुछ संक्रमणों में, समावेशन वायरस प्रजनन की साइट है और सेल पदार्थों से घिरे इसके संचय का प्रतिनिधित्व करते हैं, जबकि अन्य में, वे सेल अपघटन का एक उत्पाद हैं।

समावेशन को अंगों और ऊतकों के दागदार प्रिंट, सेल स्क्रैपिंग, प्रभावित ऊतक से हिस्टोलॉजिकल सेक्शन और वायरस से संक्रमित सेल कल्चर तैयारियों में पाया जा सकता है। रंग अक्सर रोमानोव्स्की-गिमेसा पद्धति के अनुसार किया जाता है। इस विधि द्वारा अभिरंजित करने के लिए, पिक्रिक एसिड, फॉर्मेलिन, अल्कोहल, एसिटिक एसिड से युक्त डबोस्क - ब्राजील - बूइन के मिश्रण में तैयारी तय की जाती है। रोमानोव्स्की-गिमेसा विधि के अनुसार अधिकांश वायरल संक्रमणों में इंट्रासेल्युलर समावेशन ऑक्सीफिलिक और दाग गुलाबी या बकाइन होते हैं।

वायरल संक्रमण के निदान के लिए इम्यूनोलॉजिकल तरीके। हाल के वर्षों में, ये विधियां वायरल संक्रमणों के प्रयोगशाला निदान में अग्रणी बन गई हैं। यह काफी हद तक आर्थिक कारणों से है, क्योंकि वायरोलॉजिकल विश्लेषण के शास्त्रीय तरीके काफी महंगे हैं। इसके अलावा, वायरोलॉजिकल विधियों (सप्ताह) का उपयोग करते हुए अध्ययन की अवधि, भले ही वे काफी प्रभावी हों, उन्हें पूर्वव्यापी बनाते हैं।

इम्यूनोलॉजिकल विधियों का उपयोग विभिन्न बायोसब्रेट्स और पर्यावरणीय वस्तुओं में वायरल एंटीजन का पता लगाने और सेरोडायग्नोसिस के लिए किया जाता है - बीमार लोगों और प्रयोगशाला जानवरों के रक्त सीरा में वायरल एंटीजन के एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए। इसके अलावा, विषाणुओं की पहचान के लिए प्रतिरक्षाविज्ञानी अनुसंधान विधियां अपरिहार्य हैं।

शरीर के साथ बातचीत करते हुए, वायरस एंटीबॉडी के गठन का कारण बनते हैं, जो विषाणुओं पर सोखते हैं, कोशिकाओं में विषाणुओं के प्रवेश को रोकते हैं और साइटोपैथिक क्रिया (सीपीई) के विकास को रोकते हैं; चिकन भ्रूण और जानवरों में उनके प्रजनन के दौरान वायरस के घातक प्रभाव को बेअसर करना; वायरल हेमाग्लगुटिनिन और न्यूरोमिनिडेस को निष्क्रिय करें, वायरस से प्रभावित कोशिकाओं पर हीमोग्लूटिनेशन रिएक्शन (आरजीए) और हेमडसॉर्शन रिएक्शन (आरजीएडीएस) को रोकें। ये वायरस-बेअसर करने वाले एंटीबॉडी भी वायरल कणों की समूहन और वर्षा का कारण बनते हैं, और परिणामी प्रतिरक्षा परिसरों पूरक बांधते हैं। इसलिए, विषाणुओं की पहचान के लिए, सेल संस्कृतियों, चिकन भ्रूण और जानवरों और इसके संशोधनों पर क्लासिकल न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन (PH) का उपयोग किया जाता है: हेमग्लगुटिनेशन इनहिबिटेशन रिएक्शन (HITA); रक्तशोषण निषेध प्रतिक्रिया (RTGads)। एक ज्ञात वायरल एंटीजन (डायग्नोस्टिकम) के अनुसार रोगियों के सीरम में वायरस-बेअसर करने वाले एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए वायरल संक्रमण के सेरोडायग्नोसिस में समान प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाता है।

इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (आईईएम) की विधि। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी वर्तमान में वायरस के अध्ययन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। यह इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का डेटा है जो वायरस के आधुनिक वर्गीकरण के आधार के रूप में कार्य करता है।

वायरस के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपिक अध्ययन के विकास में एक नया चरण इम्यूनोइलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी तकनीकों का उपयोग है। इस पद्धति का उपयोग करके, न केवल वायरस का प्रत्यक्ष पता लगाना संभव हो गया, बल्कि उनकी पहचान के साथ-साथ वायरल स्ट्रेन का तेजी से सीरोटाइपिंग और उनके प्रति एंटीबॉडी का अनुमापन भी संभव हो गया। मैक्रोऑर्गेनिज्म की कोशिकाओं के अंदर वायरल एंटीजन के स्थानीयकरण को निर्धारित करने के लिए IEM को बहुत महत्व मिला।

पारंपरिक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विधियों की तुलना में IEM का निस्संदेह लाभ इसकी उच्च संवेदनशीलता है।

जब एक वायरस एंटीजन या वायरल घटक एक समरूप एंटीसेरम के संपर्क में आता है, तो एक एंटीबॉडी-एंटीजन कॉम्प्लेक्स बनता है। यह घटना वायरल एंटीजन या एंटीबॉडी का पता लगाने और पहचानने के लिए इस्तेमाल की जाने वाली तकनीक का आधार है। यह नकारात्मक धुंधला होने के बाद एंटीबॉडी वाले एंटीजन के ये परिसर हैं जिन्हें इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में देखा जा सकता है। क्लिनिकल डायग्नोस्टिक्स में, एंटीजेनिक सामग्री को पूरी तरह से शुद्धिकरण की आवश्यकता नहीं होती है। इसलिए, यदि एक इन्फ्लूएंजा वायरस का पता चला है, तो अशुद्ध एलेंटिक द्रव की जांच की जा सकती है। वर्तमान में, यह माना जाता है कि लगभग किसी भी प्रकार की नैदानिक ​​सामग्री IEM के लिए उपयुक्त है। नैदानिक ​​उद्देश्यों के लिए, सामान्य असंक्रमित सीरा, साथ ही आरोग्य सेरा का उपयोग किया जा सकता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एंटीजन और एंटीबॉडी की मात्रा के अनुपात का अंतिम परिणामों पर बहुत प्रभाव पड़ता है। प्रतिजन की अधिकता के साथ, कणों की बहुतायत देखी जाती है; इस मामले में ढेर कम होंगे। एंटीबॉडी की अधिकता के साथ, वायरल कण उनकी मोटी परत से घिरे होते हैं, विषाणु के छोटे संरचनात्मक विवरणों को प्रकट करना लगभग असंभव है; समुच्चय भी कुछ हैं। प्रतिजन और एंटीबॉडी के इष्टतम अनुपात के साथ, समुच्चय को विषाणुओं के विवरण की एक अच्छी छवि के साथ बड़ा किया जाता है। उपरोक्त विचारों से, कई dilutions में प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग करना वांछनीय है।

पैलेडियम से बनी एक सपोर्ट फिल्म को सपोर्ट ग्रिड पर लगाया जाता है। पैलेडियम की कम सांद्रता का उपयोग करते समय और सब्सट्रेट के सोखने के गुणों में सुधार करने के लिए, इसे कार्बन के साथ प्रबलित किया जाता है। ऐसा करने के लिए, एक निर्वात में एक इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म ग्रिड पर तैयार सूखी फिल्म-सब्सट्रेट पर कोयले का छिड़काव किया जाता है। फिल्म-सब्सट्रेट की मोटाई और मजबूत कार्बन परत का वस्तु के ठीक विवरण के विपरीत और छवि पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है। प्रत्येक शोधकर्ता इस तथ्य के आधार पर व्यक्तिगत रूप से सब्सट्रेट फिल्मों और कार्बन परत की विशिष्ट मोटाई निर्धारित करता है कि कार्बन पैलेडियम की तुलना में अधिक इलेक्ट्रॉनिक रूप से पारदर्शी है।

उनके लिए वायरस और एंटीबॉडी में कम इलेक्ट्रॉन घनत्व होता है। इसलिए, पूर्व-उपचार के बिना एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का उपयोग करके जैविक वस्तुओं का पता नहीं लगाया जा सकता है। नकारात्मक विपरीत (या नकारात्मक दाग) तकनीक का उपयोग करके वायरस की कल्पना की जाती है। वायरस और वायरस-एंटीबॉडी परिसरों के नकारात्मक धुंधला होने के लिए भारी धातुओं के विभिन्न लवणों का उपयोग किया जाता है। कंट्रास्टिंग एजेंट (भारी धातु परमाणु) वस्तुओं के हाइड्रोफिलिक क्षेत्रों में प्रवेश करते हैं और उनमें पानी की जगह लेते हैं। नतीजतन, वस्तु का इलेक्ट्रॉन घनत्व बढ़ जाता है, और इसे इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में देखना संभव हो जाता है।

प्रत्यक्ष आईईएम पद्धति को व्यवहार में सबसे बड़ा अनुप्रयोग मिला है। वायरस के निलंबन को undiluted antiserum के साथ मिलाया जाता है। जोरदार सरगर्मी के बाद, मिश्रण को 1 घंटे के लिए ऊष्मायन किया जाता है

37 डिग्री सेल्सियस, फिर रात भर 4 डिग्री सेल्सियस पर। अगले दिन, प्रतिरक्षा परिसरों को अवक्षेपित करने के लिए मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। आसुत जल की एक बूंद में अवक्षेप को फिर से निलंबित कर दिया जाता है और नकारात्मक विपरीतता के अधीन किया जाता है।

आईईएम के परिणामों का मूल्यांकन करते समय, एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में एक एंटीजन और एक एंटीबॉडी के बीच बातचीत के उत्पादों का एक अलग रूप हो सकता है (पूरे या आंशिक रूप से एंटीबॉडी के साथ कवर किया गया एक वायरल कण; वायरल कणों का समूह)। एग्लोमेरेट्स एक अलग क्षेत्र पर कब्जा कर सकते हैं, एक अलग उपस्थिति हो सकती है, और कणों की एक अलग संख्या हो सकती है। इसलिए, प्रायोगिक लोगों के साथ-साथ नियंत्रण की तैयारी (एक बफर समाधान या हेट्रोलॉगस एंटीसेरम के साथ) का अध्ययन करना आवश्यक है।

IEM का उपयोग करके प्राप्त परिणामों के मूल्यांकन के लिए मानदंड तैयारियों में प्रतिरक्षा सीरम द्वारा एकत्रित वायरल कणों के समूहों की उपस्थिति या अनुपस्थिति है। एंटीजन एग्लोमेरेट्स और विशिष्ट एंटीसेरम एंटीबॉडी की उपस्थिति एक सकारात्मक प्रतिक्रिया का संकेत है। फिर भी, उच्च गति के सेंट्रीफ्यूगेशन के प्रभाव में प्रतिजन कणों के गैर-विशिष्ट एकत्रीकरण की संभावना को ध्यान में रखा जाना चाहिए। इस कारण से, कई लेखक सशर्त पैमाने पर 0 से 4+ के परिणामों पर विचार करने की सलाह देते हैं। यह सीरम एंटीबॉडी के साथ एकत्रित कणों के कवरेज की डिग्री के आकलन पर आधारित है।

hemagglutination और hemadsorption के तरीके। कई विषाणुओं में स्तनधारियों और पक्षियों की कड़ाई से परिभाषित प्रजातियों के एरिथ्रोसाइट्स को समूहीकृत करने की क्षमता होती है। इस प्रकार, इन्फ्लूएंजा और कण्ठमाला के वायरस मुर्गियों, गिनी सूअरों और मनुष्यों के एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ते हैं; टिक-जनित एन्सेफलाइटिस वायरस - भेड़ एरिथ्रोसाइट्स; जापानी एन्सेफलाइटिस वायरस - एक दिवसीय मुर्गियों और गीज़ के एरिथ्रोसाइट्स; एडेनोवायरस - चूहों, चूहों, बंदरों के एरिथ्रोसाइट्स। रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (एचए) में परीक्षण सामग्री के रूप में अल्लांटोइक, एमनियोटिक तरल पदार्थ, चिकन भ्रूण के कोरियोन-एलैंटोइक झिल्ली का निलंबन, कोशिकाओं या वायरस से संक्रमित जानवरों के अंगों की संस्कृतियों से निलंबन और अर्क का उपयोग किया जाता है। रक्तगुल्म प्रतिक्रिया कांच पर ड्रिप विधि द्वारा और परीक्षण ट्यूबों या पॉलीस्टायरीन प्लेटों के कुओं में एक विस्तारित पंक्ति में निर्धारित की जा सकती है। पहली विधि सांकेतिक है।

समूह-विशिष्ट होने के कारण, आरजीए वायरस की प्रजातियों को निर्धारित करना संभव नहीं बनाता है। रक्तगुल्म अवरोधक परीक्षण (HITA) का उपयोग करके उनकी पहचान की जाती है। इसके निर्माण के लिए ज्ञात प्रतिरक्षा एंटीवायरल सेरा का उपयोग किया जाता है। प्रत्येक कमजोर पड़ने पर वायरस युक्त तरल की समान मात्रा डाली जाती है। नियंत्रण वायरस का निलंबन है।

मिश्रण को थर्मोस्टेट में रखा जाता है, फिर एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन जोड़ा जाता है। कुछ मिनट बाद, न्यूट्रलाइज़िंग सीरम का टिटर निर्धारित किया जाता है, अर्थात। इसका अधिकतम कमजोर पड़ना, जिससे एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन में देरी हुई।

वायरल रोगों के सीरोलॉजिकल निदान में, आरटीएचए को युग्मित सेरा के साथ उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, जिनमें से एक रोग की शुरुआत में प्राप्त होता है, और दूसरा 1-2 सप्ताह या उससे अधिक के बाद। दूसरे सीरम में एंटीबॉडी टिटर में चार गुना वृद्धि प्रस्तावित निदान की पुष्टि करती है।

हेमाडसॉर्प्शन रिएक्शन (RGads) का उपयोग संक्रमित सेल संस्कृतियों में हेमग्लगुटिनेटिंग गतिविधि वाले वायरस को इंगित करने के लिए किया जाता है। प्रतिक्रिया का सार इस तथ्य में निहित है कि वायरस के रक्तगुल्म क्रिया के प्रति संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स वायरस से संक्रमित कोशिकाओं की सतह पर सोख लिए जाते हैं। उदाहरण के लिए, चिकन एरिथ्रोसाइट्स वेरियोला वायरस से संक्रमित कोशिकाओं पर सोख लिए जाते हैं; खसरा वायरस - बंदरों के एरिथ्रोसाइट्स; एडेनोवायरस - बंदर और चूहे आदि।

तटस्थता प्रतिक्रिया (पीएच)। सेल संस्कृतियों में पुनरुत्पादन, वायरस विभिन्न प्रकार के सीपीडी का कारण बनता है, गोलाई, झुर्री, कमी या इसके विपरीत, सेल आकार में वृद्धि, उनके संलयन और सिम्प्लास्ट के गठन, साइटोप्लाज्म और नाभिक के विनाश में व्यक्त किया जाता है। अंत में, वायरस से संक्रमित कोशिकाओं के एक मोनोलेयर में, कोशिका परत के कुछ हिस्सों के उनके विनाश के परिणामस्वरूप, "बाँझ धब्बे" या सजीले टुकड़े दिखाई दे सकते हैं, जो एक वायरल कण का एक क्लोन है, जो न केवल संभव बनाता है वायरस को अलग करने के लिए, लेकिन इसके अनुमापांक का निर्धारण करने के लिए भी।

सजीले टुकड़े की प्रकृति से वायरस की पहचान करना बहुत मुश्किल है, और इसलिए वे पृथक वायरस के पीएच को ज्ञात वायरस-बेअसर करने वाले सेरा के साथ सेट करने का सहारा लेते हैं। इस प्रयोजन के लिए, रोगी से प्राप्त वायरस सेल कल्चर में जमा हो जाता है और इसके विभिन्न तनुकरणों को बिना मिलाए एंटीवायरल सीरम के साथ मिलाया जाता है।

वायरस और सेरा का मिश्रण चिक भ्रूण या संवेदनशील जानवरों को संक्रमित कर सकता है। ऐसे मामलों में, एंटीबॉडी की न्यूट्रलाइजिंग गतिविधि अक्सर भ्रूण के तरल पदार्थ में वायरल हेमाग्लगुटिनिन के न्यूट्रलाइजेशन और भ्रूण और जानवरों पर वायरस के घातक प्रभाव को खत्म करने से निर्धारित होती है। उसी समय, न्यूट्रलाइजेशन इंडेक्स की गणना की जाती है, जो इस सीरम द्वारा बेअसर किए गए वायरस की घातक खुराक की अधिकतम संख्या को व्यक्त करता है, एक के रूप में लिए गए नियंत्रण प्रयोग के परिणामों की तुलना में।

इसी तरह, PH का उपयोग करते हुए, रोगियों की सामग्री से अलग किए गए वायरस की पहचान तब की जाती है जब वे चिकन भ्रूण और जानवरों को संक्रमित करते हैं। ऐसा करने के लिए, भ्रूण के वायरस युक्त तरल पदार्थ और जानवरों के प्रभावित अंगों के निलंबन को वायरस-बेअसर करने वाले सेरा में जोड़ा जाता है। एक निश्चित ऊष्मायन समय के बाद, सेल कल्चर, चिक भ्रूण और जानवर मिश्रण से संक्रमित होते हैं।

वायरल संक्रमणों के सेरोडायग्नोसिस में, ज्ञात वायरस के लिए वायरस-बेअसर करने वाले एंटीबॉडी के टिटर में वृद्धि की गतिशीलता निर्धारित की जाती है। इसी समय, PH को शुरुआत में और रोग के अंत में रोगियों से लिए गए युग्मित सीरा के साथ सेट किया जाता है। उनमें से दूसरे में इम्युनोग्लोबुलिन के टिटर में डायग्नोस्टिक 4 गुना वृद्धि होगी।

PH एक विषाणु कण के लिए पर्याप्त रूप से पर्याप्त रूप से बाँधने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की क्षमता पर आधारित है। वायरस और एंटीबॉडी के बीच बातचीत के परिणामस्वरूप, संवेदनशील कोशिकाओं के साथ वायरल कण के कनेक्शन के लिए जिम्मेदार एंटीजेनिक निर्धारकों की नाकाबंदी के कारण वायरस की संक्रामक गतिविधि बेअसर हो जाती है। नतीजतन, वायरस इन विट्रो या विवो में एक संवेदनशील जैविक प्रणाली में गुणा करने की क्षमता खो देता है।

PH के परिणाम वायरस और उसके समरूप एंटीबॉडी के मिश्रण के बाद स्पष्ट हो जाते हैं, एक समय के संपर्क के बाद, एक संवेदनशील जैविक प्रणाली (टिशू सेल कल्चर, चिक भ्रूण, अतिसंवेदनशील पशु शरीर) में पेश किया जाता है, जहां वायरस गुणा कर सकता है और औसत दर्जे का कारण बन सकता है। ऐसे परिवर्तन जो प्रतिपिंडों की उपस्थिति में आंशिक या पूर्ण रूप से दब जाएंगे।

PH में तीन घटक शामिल होते हैं:

• 1) वायरस;
• 2) एंटीबॉडी युक्त सीरम;
• 3) एक जैविक वस्तु (प्रयोगशाला के जानवर, विकासशील चिकन भ्रूण, ऊतक संस्कृति), जिसका चुनाव वायरस के प्रकार पर निर्भर करता है जिसके साथ अनुसंधान किया जाना चाहिए।

PH का उपयोग या तो एक पृथक रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए किया जाता है या सेरा में एंटीबॉडी का पता लगाने और अनुमापन करने के लिए किया जाता है। पहले मामले में, विशेष रूप से प्रतिरक्षित प्रयोगशाला जानवरों या बरामद लोगों के सेरा का उपयोग किया जाता है। दूसरे मामले में, रोग के प्रारंभिक चरण में और आरोग्यलाभ अवधि के दौरान लिए गए सेरा का उपयोग किया जाता है।

ठीक हुए लोगों के सीरा में वायरस-बेअसर करने वाले एंटीबॉडी, एंटीहेमग्लगुटिनिन या पूरक-फिक्सिंग एंटीबॉडी के विपरीत, कई वर्षों तक बने रहते हैं, और कुछ वायरल संक्रमणों (उदाहरण के लिए, खसरा) में भी जीवन के लिए बने रहते हैं। यह कुछ मामलों में एक संदर्भ दवा के रूप में कई दीक्षांत समारोह के सीरा के पूल का उपयोग करना संभव बनाता है, जो ampoules और lyophilization में भरने के बाद, लंबे समय तक नैदानिक ​​​​कार्य के लिए उपयुक्त है।

पृथक रोगजनकों की पहचान करते समय, विभिन्न जानवरों के पूर्व-तैयार हाइपरिम्यून सीरा का उपयोग किया जाता है: खरगोश, सफेद चूहे और चूहे, गिनी सूअर, बंदर, भेड़, घोड़े, आदि। PH के लिए हाइपरइम्यून सीरा की गतिविधि पशुओं के प्रतिरक्षण की विधि पर निर्भर करती है।

प्रत्येक न्यूट्रलाइजेशन प्रयोग को स्थापित करने से पहले, वायरस को प्री-टाइट्रेट किया जाता है, अंतिम कमजोर पड़ने का निर्धारण करता है जो ऊतक संस्कृति क्षति या प्रयोगशाला जानवरों (या चिकन भ्रूण) के संक्रमण का कारण बनता है। वायरस टिटर को 50% खुराक (TCID50 - टिशू कल्चर के लिए 50% संक्रामक खुराक) के रूप में व्यक्त किया जाता है।

वायरोलॉजिकल प्रैक्टिस में आणविक आनुवंशिक निदान के तरीके। 50 के दशक में आणविक जीव विज्ञान के तरीके विकसित किए गए थे। XX सदी। वे इस तथ्य के कारण संभव हो गए कि प्रत्येक वायरस के जीनोम में अद्वितीय प्रजाति-विशिष्ट न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम होते हैं, जिनका पता लगाकर किसी भी संक्रामक एजेंट की पहचान की जा सकती है। ये विधियां सूक्ष्मजीवों की पहचान करने में सबसे महत्वपूर्ण हैं जो पारंपरिक तरीकों से खेती करने के लिए दीर्घकालिक या कठिन हैं। 1970 के दशक में, एक पृथक डीएनए नमूने के साथ रेडियोधर्मी आइसोटोप (या फ्लोरोक्रोम) के साथ लेबल किए गए विशिष्ट ओलिगोन्यूक्लियोटाइड जांच के संकरण के आधार पर, एक संक्रामक एजेंट या उत्परिवर्तन का पता लगाने के लिए डीएनए जांच का पता लगाने का उपयोग किया गया था। संकरण विश्लेषण कुछ शर्तों के तहत न्यूक्लिक एसिड की क्षमता का उपयोग न्यूक्लिक एसिड के साथ विशिष्ट परिसरों को बनाने के लिए करता है जिनके अनुक्रम उनके पूरक हैं। डीएनए संकरण द्वारा संक्रामक रोगजनकों का पता लगाने की विधि अत्यंत श्रमसाध्य, समय लेने वाली और महंगी निकली। इसके अलावा, नैदानिक ​​सामग्री जैसे मल और मूत्र में सूक्ष्मजीवों की पहचान के लिए इसकी संवेदनशीलता अपर्याप्त है।

डीएनए संकरण को एक ऐसी विधि से बदल दिया गया है जो डीएनए की प्राकृतिक प्रतिकृति की नकल करता है और आपको थर्मोफिलिक डीएनए पोलीमरेज़ का उपयोग करके एक निश्चित डीएनए टुकड़े का पता लगाने और बार-बार कॉपी करने की अनुमति देता है। पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) एक सुंदर तरीका है जो प्राकृतिक डीएनए प्रतिकृति की नकल करता है और डीएनए के एक विशिष्ट टुकड़े को थर्मोफिलिक डीएनए पोलीमरेज़ का उपयोग करके बार-बार पता लगाने और कॉपी करने की अनुमति देता है।

अपने उच्च नैदानिक ​​गुणों के कारण, पीसीआर वायरोलॉजी में उपयोग किए जाने वाले पारंपरिक तरीकों में आम तौर पर मान्यता प्राप्त है: सेल कल्चर में वायरस का प्रसार, वायरल एंटीजन की इम्यूनोलॉजिकल पहचान और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी। इस पद्धति का एक महत्वपूर्ण लाभ अव्यक्त संक्रमण (साइटोमेगालोवायरस, हर्पीज वायरस) और ऐसे वायरस का पता लगाने की क्षमता है जो मुश्किल हैं या अभी तक खेती करना संभव नहीं है (मानव इम्यूनोडिफीसिअन्सी वायरस, एपस्टीन-बार वायरस, मानव पेपिलोमावायरस, विदर हेपेटाइटिस वायरस)। Creutzfeldt-Jakob रोग, अल्जाइमर रोग और मल्टीपल स्केलेरोसिस जैसी बीमारियों के अध्ययन की संभावनाएं पीसीआर पद्धति से जुड़ी हैं।