בדרך כלל, אין נוגדנים לאדם דם בדם.
בדיקת Direct Coombs - בדיקת אנטיגלובולינים (אגלוטינציה בג'ל, מאפשרת לזהות נוגדנים דו ערכיים מלאים), הקובעת נוגדנים מחלקה IgGומרכיב ה-C3 של המשלים על פני השטח של אריתרוציטים. בדרך כלל, לנוגדנים המתגלים בבדיקת Coombs ישירה יש ספציפיות רחבה שאינה קשורה לאנטיגן מבוסס היטב. בדיקת Coombs ישירה חיובית מצביעה בבירור על נוכחות של אנמיה המוליטית בחולה, אם כי לא כל החולים עם בדיקת אנטיגלובולין ישירה חיובית סובלים ממחלה זו. כ-10% מהחולים עם נוגדנים או רכיבים משלימים על קרום האריתרוציטים אינם ניתנים לזיהוי בבדיקת קומבס ישירה (בדיקה שלילית), אך למרות זאת הם סובלים מאנמיה המוליטית אוטואימונית. כדי להבהיר את הספציפיות של נוגדנים במקרים כאלה, נעשה שימוש בבדיקות עם elution שלהם. בדיקת Coombs הישירה, חיובית רק להשלמה, קשורה בדרך כלל לנוגדני IgM מסוג קר. במקרה זה, נוגדני IgM אינם נמצאים על אריתרוציטים כאשר טמפרטורה בסיסיתגוּף. עם זאת, בשל העובדה שנוגדני IgM מקבעים באופן פעיל משלים, ומשלים נשאר על אריתרוציטים, בצורה זו של אנמיה המוליטית אוטואימונית (מחלת אגלוטינין קרה), בדיקת Coombs תהיה חיובית רק עבור משלים.
בדיקת Coombs הישירה היא חיובית באנמיה המוליטית אוטואימונית הנגרמת על ידי נוגדנים חמים, אנמיה של תרופות אוטואימוניות (בעת נטילת מתילדופה, עד 20% מהחולים מקבלים תגובה חיובית), סוג ספיחה של תרופות של אנמיה המוליטית, סוג אימונו-קומפלקס של אנמיה המוליטית (ה הבדיקה חיובית רק ל-C3), עם אנמיה המוליטית אוטואימונית הנגרמת מנוגדנים קרים - מחלת אגלוטינין קרה (הבדיקה חיובית רק ל-C3). עם המוגלובינוריה קר התקפי, בדיקת Coombs הישירה היא שלילית.
בדיקת קומבס עקיפה - בדיקת אנטיגלובולינים עקיפה (מאתרת נוגדנים לא שלמים) מאפשרת לזהות נוגדנים לא טיפוסיים בדם, לרבות נוגדנים אלו, לאנטיגנים זרים של אריתרוציטים. הוא קיבל את שמו (עקיף) בשל העובדה שהוא מתקדם ב-2 שלבים. בתחילה, סרום הדם של המטופל, המכיל נוגדנים לא שלמים, יוצר אינטראקציה עם ה-corpuscular Ag diagnosticum הנוסף ללא ביטויים גלויים. בשלב השני, סרום האנטיגלובולין המוכנס יוצר אינטראקציה עם נוגדנים לא שלמים הנספחים על אנטיגנים, עם הופעת משקע גלוי. עירוי של תאי דם אדומים הומולוגיים (אלוגניים) או הריון - רובם סיבות שכיחותיצירת נוגדנים אנטי-אריתרוציטים אלה. השילוב של בדיקת Coombs עקיפה חיובית עם בדיקה ישירה שלילית לא עוזר לאבחן אנמיה המוליטית אוטואימונית. בדיקת Coombs עקיפה וחיובית גורמת לקשיים מסוימים בבחירת דם לעירוי והצלבה עם דם בנקאי, אך אין לה ערך אבחוני אחר.
מבחן קומבס הוא ניתוח קליניבדיקת דם, הנעשית כדי לראות אם הדם מכיל נוגדנים מסוימים שעלולים להיות לא בטוחים. נוגדנים אלו נדבקים לתאי דם אדומים ויכולים לפלוש מערכת החיסוןולהזיק בדרכים אחרות. במינוח רפואי, בדיקה זו נקראת גם בדיקת אנטיגלובולין (AGT).
סוגי בדיקות קומבס
ישנם שני סוגים של מבחן Coombs - ישיר ועקיף.
בדיקת קומבס ישירה, הידוע גם בשם ישיר (DAT), מזהה נוגדנים אוטומטיים הנצמדים לפני השטח של תאי דם אדומים. נוגדנים אלו מיוצרים לעיתים בגוף עקב מחלות מסוימות או בעת נטילת תרופות מסוימות, כגון פרוקאינאמיד, מתילדופה או כינידין.
נוגדנים אלו מסוכנים מכיוון שלעתים הם גורמים לאנמיה על ידי הרס תאי דם אדומים.
בדיקה זו ניתנת לעיתים לאבחון הגורם לצהבת או אנמיה.
בדרך כלל, התגובה של קומבס היא שלילית.
חיובי עבור:
- מחלה המוליטיתיילודים;
- המוליזה אוטואימונית;
- תגובות עירוי המוליטיות;
- אנמיה המוליטית חיסונית הנגרמת על ידי תרופות.
מבחן Coombs עקיף, הידוע גם בשם , משמש לאיתור נוגדנים לתאי דם אדומים המצויים בסרום הדם (סרום הוא נוזל הדם הצהוב והצלול שנשאר לאחר הפרשת תאי הדם האדומים וחומר הקרישה).
בדיקת Coombs העקיפה משמשת בעירוי דם כדי לקבוע אם הדם של התורם תואם את הדם של הנמען. זה נקרא בדיקת תאימות ועוזר למנוע כל תגובה שלילית לדם של התורם. ניתוח זה מומלץ גם לנשים בהריון. לחלק מהנשים יש נוגדני IgG שיכולים לחצות את השליה לתוך העובר ולהזיק ליילוד, ולגרום למחלה המוליטית המכונה אנמיה המוליטית.
תהליך
דם נלקח באמצעות מזרק מוריד, בדרך כלל מגב היד או בעיקול המרפק. לפני זה מחטאים היטב את מקום הדקירה ולאחר בדיקת דם מורחים גזה נקייה או צמר גפן.
הדם שנוצר מטוהר במעבדה, ותאי הדם האדומים מופרדים. לאחר מכן, הדגימה נבדקת ברצף באמצעות סרום וריאגנטים שונים של Coombs, אשר נבדקת. אם אין אגלוטינציה (התקבצות של כדוריות דם אדומות), המשמעות היא תוצאה חיובית.
עם זאת, אם הבדיקה שלילית, זה אומר שישנו נוגדנים בדם הפועלים נגד כדוריות הדם האדומות. זה עשוי להעיד מחלות שונותכגון אנמיה (טבעית או הנגרמת על ידי תרופות), עגבת או זיהום במיקופלזמה. לאחר קבלת התוצאות, הרופא המטפל ירשום את הטיפול המתאים.
וִידֵאוֹ
בדיקת Coombs היא בדיקת מעבדה ספציפית המאתרת נוגדנים הנמצאים בתוך או על פני השטח של כדורית דם אדומה. התהליך הזהמאפשר אבחון חיסוני, כולל ביילודים, וכן זיהוי תגובות עירוי המוליטיות. מבחן Coombs נמצא בשימוש נרחב ב רפואה משפטיתוגנטיקה מדעית על מנת לקבוע אנטיגנים אריתרוציטים. ציות לכל הכללים ליישום ניתוח כזה מאפשר לך לקבל את התוצאה האמינה ביותר.
מטרת בדיקת האנטיגלובולין
בדיקת Coombs הישירה מאפשרת לזהות נוגדנים אנטי-אריתרוציטים המקובעים על תאי דם אדומים. תגובה חיובית ב מחקר דומהמצביע על התפתחות של אוטואימוניות. יש לציין כי תוצאה שליליתאינו שולל את הנוכחות, שכן נוגדנים הם לעתים קרובות בצורה חופשית, כלומר, אין להם קשר עם תאי דם אדומים. במקרים כאלה, רצוי לערוך בדיקת Coombs עקיפה, שתאפשר לקבוע חומרים אוטונומיים ב
כיצד מתבצע הניתוח?
דגימת דם ורידי מהמטופל מתבצעת בבוקר על קיבה ריקה, למרות שלא נמצאו גורמים משמעותיים המשפיעים על התוצאה הסופית של בדיקה כזו. מותר לאחסן את החומר שנלקח בטמפרטורה של 2 עד 8 מעלות צלזיוס למשך לא יותר משבעה ימים. על מנת לקבל אינדיקטורים מחקר זההיו מדויקים ככל האפשר, יש להעביר דם מלא למעבדה בתוך השעתיים הראשונות. באופן אידיאלי, בדיקת Coombs צריכה להראות תוצאה שלילית, המעידה על היעדר שינויים המוליטיים בגוף.
פענוח הסכומים
מבחן Coombs היא שיטת מחקר שגוזלת זמן רב הדורשת ביצועים זהירים ומדויקים. בעת שימוש בבדיקה כזו, ייתכנו כמה קשיים הקשורים לפרשנות לא נכונה של התוצאות הסופיות עקב ביטוי חלש תגובות חיוביות. יש לציין כי חוסר האמינות של הניתוח - דהיינו, בדיקה חיובית Coombs - עלול להיות תוצאה של שטיפה לא יעילה של אריתרוציטים, מגע עם שומני
פני השטח, כמו גם נטרול של ריאגנטים אנטיגלובולינים על ידי רכיבים
נַסיוֹב. חסרון נוסף של שיטת מחקר זו הוא חוסר היציבות של החומר שנלקח, שלאחסון שלו יש תכונות מסוימות.
תוצאה שלילית כוזבת עלולה להיגרם על ידי רעד מוגזם של ההשעיה RBC במהלך ההשעיה מחדש. תוצאות שגויות עשויות לנבוע גם מנוכחות של זיהומים נוגדנים משלימים, הנספגים במהלך הדגירה על פני האריתרוציטים שנבדקו, וכתוצאה מכך הופעת תוצאה חיובית. אם דגימות הבדיקה נשטפות היטב ותנאי התגובה נשלטים, ניתן לבטל בקלות חסרונות אלו, מה שיגדיל את הסיכוי לקבל את האינדיקטורים המהימנים ביותר של מבחן Coombs.
- בדיקת אנטיגלובולין שמטרתה לזהות בדם Rh שלילי נוגדנים אנטי אריתרוציטים לא שלמים לגורם Rh - חלבון ספציפי הממוקם על פני האריתרוציטים של דם חיובי ל-Rh. יש שני סוגים המבחן הזה: ישיר - זיהוי של נוגדנים על פני השטח של אריתרוציטים, עקיף - זיהוי של נוגדנים בסרום הדם. בדיקה ישירה מתבצעת באבחון ובניטור הטיפול במחלות דם: אנמיה המוליטית, מחלה המוליטית של היילוד ואחרות. מבוצעת בדיקה עקיפה על מנת להעריך את תאימות הדם של התורם והמקבל במהלך העירוי, וכן לקביעת נוכחות וסיכון של קונפליקט Rh בעת תכנון וניהול ההריון. החומר למבחן Coombs הוא דם נטול חמצן, המחקר מתבצע בשיטות המבוססות על תגובת האגלוטינציה. בדרך כלל, שתי הבדיקות נותנות תוצאה שלילית. הניתוח מתבצע תוך יום אחד. בסך הכל, היו 89 כתובות במוסקבה שבהן ניתן היה לבצע את הניתוח הזה.
- בדיקת אנטיגלובולין שמטרתה לזהות בדם Rh שלילי נוגדנים אנטי אריתרוציטים לא שלמים לגורם Rh - חלבון ספציפי הממוקם על פני האריתרוציטים של דם חיובי ל-Rh. ישנם שני סוגים של בדיקה זו: ישיר - זיהוי נוגדנים על פני כדוריות הדם האדומות, עקיף - זיהוי נוגדנים בסרום הדם. בדיקה ישירה מתבצעת באבחון ובניטור הטיפול במחלות דם: אנמיה המוליטית, מחלה המוליטית של היילוד ואחרות. מבוצעת בדיקה עקיפה על מנת להעריך את תאימות הדם של התורם והמקבל במהלך העירוי, וכן לקביעת נוכחות וסיכון של קונפליקט Rh בעת תכנון וניהול ההריון. החומר לבדיקת Coombs הוא דם ורידי, המחקר מתבצע בשיטות המבוססות על תגובת האגלוטינציה. בדרך כלל, שתי הבדיקות נותנות תוצאה שלילית. הניתוח מתבצע תוך יום אחד.
מבחן קומבס - ניסוי קלינידם Rh שלילי, שמטרתו זיהוי נוגדנים לגורם Rh. הבדיקה משמשת לזיהוי הסיכון לפתח קונפליקט Rhesus ותגובות המוליטיות. בכל אדם, פני השטח של תאי הדם האדומים מכילים קבוצה מסוימת של אנטיגנים או אגלוטינוגנים - תרכובות אופי שונה, לפי נוכחותם או היעדרם שופטים את קבוצת הדם ואת גורם ה-Rh. ישנם סוגים רבים של אנטיגנים פרקטיקה רפואיתהגדול ביותר ערך מעשיבעלי אגלוטינוגן A ו-B, שקובעים את קבוצת הדם, ואגלוטינוגן D שקובע את גורם ה-Rh. עם גורם Rh חיובי, אנטיגנים D מתגלים על הממברנה החיצונית של אריתרוציטים, עם שלילי - לא.
בדיקת Coombs, הנקראת גם בדיקת אנטיגלובולין, מכוונת לאיתור נוגדנים אנטי-אריתרוציטים לא שלמים למערכת פקטור Rh בדם. נוגדנים לגורם Rh הם אימונוגלובולינים ספציפיים המיוצרים בדם שלילי Rh כאשר נכנסים אליו אריתרוציטים עם אגלוטינוגנים מסוג D. זה יכול לקרות כאשר הדם של העובר והאישה ההרה מעורבב, כאשר עירויי דם מתבצעים ללא בדיקת דם מוקדמת. מבחן Coombs קיים בשתי גרסאות - ישירות ועקיפות. בעת ביצוע בדיקת Coombs ישירה, מתגלים נוגדנים המחוברים לפני השטח של תאי דם אדומים. המחקר משמש לקביעת הגורם לתגובה המוליטית. בדיקת Coombs העקיפה מכוונת לאיתור נוגדנים אנטי-אריתרוציטים בפלסמת הדם. יש צורך לקבוע את תאימות הדם של התורם והמקבל או האם והעובר, זה עוזר למנוע התפתחות של קונפליקט Rhesus והמוליזה שלאחר מכן של תאי דם אדומים.
דם עבור שתי הגרסאות של בדיקת Coombs נלקח מוריד. הניתוח מתבצע בשיטת האגלוטינציה באמצעות סרום אנטיגלובולין. תוצאות המחקר משמשות בהמטולוגיה בזיהוי הגורמים לתגובות המוליטיות, בניתוחים והחייאה בזמן עירויי דם, במיילדות ובגינקולוגיה במעקב הריון בנשים עם דם שלילי Rh.
אינדיקציות
בדיקת Coombs הישירה, המזהה נוגדנים המחוברים לפני השטח של תאי דם אדומים, נקבעת לתגובות המוליטיות (הרס של תאי דם אדומים) ממקורות שונים. המחקר מיועד לאנמיה המוליטית אוטואימונית ראשונית, אנמיה המוליטית לאחר עירוי, מחלה המוליטית של היילוד, המוליזה של תאי דם אדומים הנגרמת על ידי אוטואימונית, גידול או מחלות מדבקות, כמו גם קבלה תרופותלמשל, quinidine, methyldopa, procainamide. בדיקת Coombs העקיפה, המאתרת נוגדנים בפלסמת הדם, משמשת למניעת התפתחות קונפליקט Rhesus. התרופה מיועדת לחולים לקראת עירוי דם, וכן לנשים הרות עם גורם Rh שלילי, בתנאי אבא לעתידלילד יש גורם Rh חיובי.
על מנת לקבוע תאימות Rh, בדיקת Coombs אינה ניתנת לחולים עם דם Rh חיובי. במקרים אלו כבר יש אנטיגנים על פני כדוריות הדם האדומות, לא ניתן להפעיל את ייצור הנוגדנים על ידי עירוי דם או חדירת דם עוברי לזרם הדם של האישה ההרה. כמו כן, המחקר אינו מיועד לנשים בהריון אם לשני ההורים יש גורם Rh שלילי- תכונה רצסיבית תורשתית. לילד בזוגות כאלה יש תמיד דם Rh שלילי, קונפליקט אימונולוגי עם האם הוא בלתי אפשרי. בפתולוגיות המוליטיות, בדיקת האנטיגלובולין אינה משמשת לניטור הצלחת הטיפול, שכן התוצאות אינן משקפות את פעילות תהליך ההרס של אריתרוציטים.
מגבלה של מבחן Coombs היא מורכבות הליך המחקר - להשיג תוצאות אמינותיש צורך להקפיד על משטרי הטמפרטורה והזמן, הכללים להכנת ריאגנטים וביוחומר. היתרונות של מבחן Coombs כוללים רגישות גבוהה. באנמיה המוליטית, התוצאות של בדיקה זו נשארות חיוביות, גם אם המוגלובין, בילירובין ורטיקולוציטים חוזרים למצב נורמלי.
הכנה לניתוח ואיסוף חומר
החומר לביצוע בדיקת Coombs הוא דם ורידי. דרישות מיוחדותעד למועד הליך דגימת הדם ולהכנת המטופל לא. כמו בכל מחקר, מומלץ לקחת הפסקה לאחר אכילה של לפחות 4 שעות, וב-30 הדקות האחרונות להפסיק לעשן, פעילות גופנית, להימנע מתח רגשי. כמו כן, כדאי לדון מראש עם הרופא בצורך להפסיק ליטול תרופות - תרופות מסוימות עלולות לעוות את תוצאות בדיקת Coombs. דם נלקח עם מזרק מהווריד הקוביטלי, לעתים רחוקות יותר מוריד הצד האחורימברשות. תוך מספר שעות החומר מועבר למעבדה.
בעת ביצוע בדיקת Coombs ישירה, מוסיפים סרום אנטיגלובולין לסרום הדם של המטופל. לאחר זמן מה, התערובת נבדקת לנוכחות של אגלוטינים - הם נוצרים אם יש נוגדנים על כדוריות הדם האדומות. עם תוצאה חיובית, טיטר אצגיר נקבע. מבחן Coombs העקיף מורכב משלבים נוספים. ראשית, הנוגדנים הקיימים בסרום מקובעים על האריתרוציטים המוזרקים במהלך הדגירה. לאחר מכן מתווסף סרום אנטיגלובולין לדגימה, לאחר זמן מה נקבעים נוכחות וטיטר של agglutinates. תקופת הניתוח היא יום אחד.
תוצאות תקינות
בדרך כלל, התוצאה של בדיקת Coombs הישירה היא שלילית (-). המשמעות היא שאין נוגדנים הקשורים לתאי דם אדומים בדם, והם לא יכולים להיות הגורם להמוליזה. תוצאה נורמלית מבחן עקיף Coombs הוא גם שלילי (-), כלומר, אין נוגדנים לגורם Rh בפלסמת הדם. כאשר מתכוננים לעירוי דם למקבל, המשמעות היא התאמה לדם התורם, תוך ניטור הריון - היעדר רגישות ל-Rh של האם, סיכון נמוך לפתח קונפליקט אימונולוגי. גורמים פיזיולוגייםכגון הרגלי תזונה או פעילות גופנית, לא יכול להשפיע על תוצאת הבדיקה. לכן, אם התוצאה חיובית, יש צורך בהתייעצות עם רופא.
ערך אבחון של הניתוח
תוצאת בדיקת Coombs חיובית מתבטאת באופן איכותי, מ-(+) עד (++++), או כמותית, בטיטרים מ-1:16 עד 1:256. קביעת ריכוז הנוגדנים על אריתרוציטים ובנסיוב הדם מתבצעת בשני סוגי הדגימות. עם תוצאה חיובית של בדיקת Coombs הישירה, מתגלים נוגדנים על הממברנה החיצונית של תאי דם אדומים, מה שמוביל להרס של תאי דם אלה. הסיבה עשויה להיות עירוי דם ללא הקלדה מוקדמת - תגובה המוליטית לאחר עירוי, וכן אריתרובלאסטוזיס של יילודים, תגובה המוליטית הנובעת משימוש בתרופות, אנמיה המוליטית אוטואימונית ראשונית או משנית. הרס משני של אריתרוציטים יכול להיגרם על ידי זאבת אדמנתית מערכתית, תסמונת אוונס, מקרוגלובלינמיה של Waldenström, המוגלובינוריה קרה התקפית, לוקמיה לימפוציטית כרונית, לימפומה, מונונוקלאוזיס זיהומיות, עגבת, דלקת ריאות מיקופלזמלית.
תוצאה חיובית של בדיקת Coombs העקיפה מצביעה על נוכחות של נוגדנים לגורם Rh בפלסמה. בפועל, זה אומר שהתרחשה רגישות ל-Rh, ישנה אפשרות לפתח קונפליקט Rh לאחר עירוי של דם תורם במהלך ההריון. כדי למנוע סיבוכי הריון, נשים עם תוצאת בדיקת Coombs חיובית מוצבות ברשומות מיוחדות.
טיפול בחריגות מהנורמה
מבחן Coombs מתייחס למחקרים איזוזרולוגיים. תוצאותיו מאפשרות לזהות תגובה המוליטית, וכן לקבוע את תאימות הדם של התורם והמקבל, האם והעובר, על מנת למנוע התפתחות קונפליקט רזוס. אם תוצאת הבדיקה חיובית, אז יש צורך לפנות לייעוץ מהרופא המטפל - מיילד-גינקולוג, המטולוג, מנתח.
העיקרון של אנטיגלובולין. נוגדנים אנטי-אריתרוציטים מסוג חלקי ומולקולות משלימות (C) הממוקמות על פני האריתרוציטים ניתנים לזיהוי - בדיקה ישירה - על ידי אגלוטינציה שלהם במגע עם סרום בעלי חיים המכיל נוגדנים לאנטיגלובולין אנושי (סרום אנטיגלובולין). נוגדנים לא שלמים חופשיים בנסיוב מתגלים - בדיקה עקיפה - על ידי קיבועם על תערובת של אריתרוציטים נורמליים מקבוצה 0, שכל האנטיגנים שלהם שייכים למערכת Rh ידועה, ואז נאגרים בהשפעת סרום אנטיגלובולינים.
חומרים, ריאגנטים לבדיקת אנטיגלובולין Coombs: צינורות 10/100 מ"ל; פיפטות מדורגות עבור 1.2 מ"ל; פיפטות פסטר; חצובות; נושא משקפיים לא מלוטשים; תמיסה של 8.5‰ NaCl; אריתרוציטים. אריתרוציטים של החולה, כמו גם אלה השייכים לקבוצה 0, יתקבלו מדם טרי שנלקח על חומר נוגד קרישה (תמיסת EDTA).
בחר אריתרוציטים מקבוצה 0 בצורה כזו שהם מגיעים מאנשים נורמליים ומכילים את כולם אנטיגנים של מערכת Rh. ניתן לאחסן אותם עד 7 ימים בפלזמה עצמית ב-+4°C. בהיעדר אריתרוציטים מקבוצה 0, פסיפס אנטיגני ידוע, ניתן להשתמש בתערובת של אריתרוציטים מקבוצה 0, אריתרוציטים Rh חיוביים ו-Rh שליליים.
נַסיוֹבהמטופל צריך להיבחר טרי.
סרום אנטיגלובוליןמיוצר על ידי המכון. Dr. I. Cantacuzino, זמין בצורה ליאופילית באמפולות המכילות 1 מ"ל. לאחר פירוק, יש לאחסן את הסרום ב-20 מעלות צלזיוס.
טכניקת בדיקת אנטיגלובולין של Coombs:
א) בדיקת קומבס ישירה: שטפו את אריתרוציטים של המטופל 3 פעמים עם תמיסה של 8.5‰ NaCl.
יש למרוח טיפה גדולה של דילול סרום אנטיגלובולין על מספר שקופיות, ולצדה טיפה קטנה של משקעי אריתרוציטים של המטופל; מערבבים טיפות אחר פינת זכוכית. השאר את החומר המוכן על השולחן למשך 5 דקות, ולאחר מכן בדוק את נוכחותם של agglutinates. אם חיובי, קבע את הטיטר המצטבר המרבי.
ב) מבחן Coombs עקיף: אריתרוציטים מקבוצה 0, Rh-חיוביים ו-Rh-שליליים, שטפו 3 פעמים בתמיסת 8.5‰ NaCl וחשפו לסרום המטופל בקצב של 2 טיפות אריתרוציטים לכל 8-10 טיפות סרום, לאחר מכן, למשך 60 דקות, דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות עם. לאחר מכן יש לשטוף שוב את האריתרוציטים שלוש פעמים ולפעול עליהם בסרום אנטיגלובולין, בהתאם להוראות לבדיקת Coombs הישירה.
כשזה מגיע על נוגדנים פעילים קריםרגישות של אריתרוציטים של קבוצה 0 לבלות 60 דקות. בטמפרטורה של +4 מעלות צלזיוס.
הערה: 1) אין לבצע בדיקת Coombs ישירה על אריתרוציטים המאוחסנים במשך יום אחד או יותר ב-+4°C או טמפרטורת חדר, שכן התוצאות עשויות להיות חיוביות שגויות עקב קיבוע של נוגדנים לא שלם ופעילים בקור הקיימים בסרום תקין. 2) במקרים של היפרפרוטינמיה חמורה יש לשטוף את האריתרוציטים 4-5 פעמים ולבדוק את היעדר חלבוני סרום בנוזל הכביסה האחרון באמצעות חומצה סולפוסיצילית.
שארית אפשרית של 2 מיקרוגרם IgG/mL במשקע האריתרוציטים עשויה לנטרל סרום אנטיגלובולין. ניתן לבצע את בדיקת Coombs גם באמצעות סרה מונוספציפית אנטי-IgG, -IgM, -IgA -C3 ו-C4 על מנת להבהיר את סוג הגלובולין על פני אריתרוציטים, למשל, אצל הסובלים מאנמיה המוליטית אוטואימונית.