Kraujo grupių nustatymo metodas. netiesioginė Kumbso reakcija (antiglobulino tyrimas, nepilnų anti-eritrocitų antikūnų nustatymas), kraujas

COOMBS REAKCIJA(R. R. A. Coombs, anglų imunologas, g. 1921 m.; sin.: Kumbso testas, antiglobulino testas ) - imunologinė reakcija, skirta nustatyti nepilnus antikūnus prieš eritrocitų auto- ir izoantigenus.

Reakciją 1908 metais sukūrė Moreshi (S. Moreschi), bet gavo platus pritaikymas tik nuo 1945 m., po to, kai Coombsas parodė savo vaidmenį nustatant suderinamumą atliekant kraujo perpylimą, rezus konfliktą, diagnozuojant autoalergines ir autoimunines sąlygas ir kt.

K. r. yra pagrįstas jame specialiai paruošto preparato – antiglobulino serumo – naudojimu. Esant antiglobulino serumui, eritrocitai, prikrauti nepilnų antikūnų, agliutinuojasi. Eritrocitai, kurių paviršiuje nėra antikūnų, lieka neagliutinuoti.

K. r. plačiai naudojamas: a) izosensibilizacijos būklei nustatyti, t. y. izoantikūnams, atsirandantiems kartotinių kraujo perpylimų metu (žr. Kraujo perpylimas) arba nėštumo metu (žr. Nėštumas), nustatyti; b) atlikti hemotransfuzijų suderinamumo testą; c) įvairių Rh faktoriaus apibrėžimai eritrocituose (žr.); d) autoimuninių antikūnų nustatymas eritrocituose pacientams, sergantiems įgyta hemolizine anemija (žr.) ir kitomis autoalerginėmis ligomis (žr.), taip pat kai kuriomis infekcijomis, atsirandančiomis alerginis komponentas; e) izoimuninių antikūnų, fiksuotų ant naujagimio hemolizine liga sergančių vaikų eritrocitų, nustatymas (žr.). K. r. Jis taip pat naudojamas teismo medicinos ir antropologiniuose tyrimuose.

Pagrindinė medžiaga pastatymui K. r. yra paciento serumas arba citratinė plazma ir eritrocitai. Yra du K. upės variantai: netiesioginis ir tiesioginis. Su netiesioginiu K. p. tiriamas paciento serumas, pjūvyje apibrėžiami laisvai cirkuliuojantys antikūnai. Su tiesia linija K. p. ištirti raudonuosius kraujo kūnelius, ar nėra ant jų fiksuotų antikūnų formos elementai kraujo.

Antiglobulino serumas K. upei. imunizacijos būdu gauti laboratoriją. gyvūnai (triušiai, ožkos, avys ir kt.) su globulinais, išskirtais iš žmogaus serumo frakcionuojant etanoliu, amonio sulfatu arba gelio filtravimu naudojant Sephadex. Gavus antiglobulino serumą, būtina pašalinti heteroagliutinuojančius antikūnus, susidariusius imunizavus gyvūnus žmogaus globulinais. Tai pasiekiama adsorbuojant imuninį serumą su raudonųjų kraujo kūnelių mišiniu iš žmonių, sergančių skirtinga grupė kraujas arba praskiedimas jo izotoniniu natrio chlorido tirpalu. Pastaruoju atveju heteroagliutininų titras turi būti žemas (1:16–1:32), kad po praskiedimo antiglobulino serumas išliktų. gera veikla esančiame K. r.

Netiesioginė Kumbso reakcija

Netiesioginė Kumbso reakcija vykdoma dviem etapais. Pirmas etapas atliekamas specialiai šiam tikslui skirtuose mažuose, 4 x 0,5 cm dydžio mėgintuvėliuose, į kiekvieną mėgintuvėlį į tris serumo lašus (visas, 1:2 ir kt.), kuriame įtariamas antikūnų buvimas, įlašinamas vienas lašas žinomos antigeninės sudėties eritrocitų nuosėdų. Mėgintuvėlio turinys sumaišomas ir dedamas į termostatą t° 37° 1 valandai. Tada eritrocitai tris kartus plaunami izotoniniu natrio chlorido tirpalu. Antrasis etapas susideda iš 5% išplautų eritrocitų suspensijos paruošimo ir ant baltos (porceliano) plokštelės su drėgnu paviršiumi sujungiamas vienas lašas eritrocitų su vienu lašu antiglobulino serumo. Rezultatų apskaita atliekama iki 10 min. Išimtis klaidingai teigiami rezultatai pagamintas darant kontroliniai tyrimai. Naudojimas izotoninis tirpalas natrio chloridas vietoj antiglobulino serumo neturėtų lydėti eritrocitų agliutinacijos. Netiesioginio K. r. Kalbant apie žinomo fenotipo eritrocitus, izoantigenai leidžia nustatyti antikūnų specifiškumą. Pavyzdžiui, paciento serumo tyrimas su eritrocitais 0(I), CDE, Kk, Fya; 0(1), CDe, Kk, Fua; 0 (I), cDe, Kk, Fya; 0 (I), cDE, Kk, Fya; 0 (I), cde, kk, Fya parodė teigiamas rezultatas su kraujo mėginiu 1 ir 4 atvejais; kiti kraujo mėginiai (2, 3, 5 atvejai) parodė neigiamas rezultatas. Serumo sudėtyje yra anti-E antikūnų. Netiesioginės K. r. gali būti aptikti nepilni antikūnai prieš antigenus: C, D, E, c, e; K, k; Fya, Fyb; Lea, Lebas; Jka, Jkb ir kt. (žr. Kraujo grupes).

Tiesioginė Kumbso reakcija

Pagal vykdymo techniką tiesioginė Kumbso reakcija atitinka antrąją netiesioginės K. r. stadiją: paciento eritrocitai (5 % suspensija), tris kartus išplauti izotoniniu natrio chlorido tirpalu, derinami su antiglobulino serumu. Tiesioginis K. r. atlikti, kai yra pagrindo manyti, kad in vivo tiriamo paciento eritrocitai jau yra įjautrinti antikūnais. Teigiama tiesi linija K. r. tarnauja kaip diagnostinis žymeklis hemolizinė liga naujagimiams, dėl moters organizmo įsijautrinimo vaisiaus antigenams ir antikūnų prasiskverbimo per placentą į vaiko organizmą, taip pat su įgytomis hemolizinė anemija.

Už nugaros pastaraisiais metais K. r. žymiai pagerėjo. Su jo pagalba galima ne tik nustatyti antikūnų buvimą ant eritrocitų, bet ir nustatyti imunoglobulinų klasę (žr.). Norėdami tai padaryti, naudokite serumą prieš tam tikras imunoglobulinų klases: IgG, IgM, IgA. Izoimuniniai antikūnai prieš Rh, Kell antigenus, Duffy antigenus ir kitus antigenus, taip pat šilti autoimuniniai antikūnai dažniausiai yra IgG. Šalti autoimuniniai antikūnai, taip pat izoimuniniai antikūnai prieš Le ir kai kuriuos kitus antigenus, kaip taisyklė, priklauso IgM. Tik reti autoimuniniai antikūnai turi IgA pobūdį (žr. Autoantikūnai).

Bibliografija: Dygin V. P. Autoimuninės ligos vidaus ligų klinikoje, L., 1970, bibliogr.; Kasos ir y I. A. ir Aleksejevas G. A. Klinikinė hematologija, M., 1970; Kosyakov P. N. ISO antigenai ir žmogaus antikūnai normaliomis ir patologinėmis sąlygomis, M., 1974, bibliogr.; Apie i v i n P. e. a. Les anemias hemolytiques, p. 93, P., 1971, bibliogr.; Klinikiniai imunologijos aspektai, red. pateikė P. G. H. Geli a. o., Oksfordas, 1975; Coombs R. R. A., M o u g a n t A. E. a. Rasė R. R. Raudonųjų kraujo kūnelių in vivo izosensibilizacija kūdikiams, sergantiems hemolizine liga, Lancet, v. 1, p. 264, 1946 m.

Iš daugelio esamų antigenų Medicininė praktika didžiausia vertė skiriama trijų tipų kraujo agliutinogenams. Vienas iš jų yra tipas, atsakingas už Rh faktoriaus pasireiškimą: jei jis yra ant eritrocitų membranos, diagnozuojama Rh + kraujo grupė, jei jos nėra - Rh-. Jei eritrocitai su Rh + agliutinogenais patenka į Rh neigiamo kraujo sudėtį, organizmas sukelia imuninį atsaką ir pradeda gaminti antikūnus prieš šį antigeną, o tai sukelia patologines sąlygas.

NUORODA! Rh faktorius yra sudėtinga daugiakomponentė kelių dešimčių antigenų sistema. Dažniausi iš jų yra D tipo agliutinogenai (85% atvejų), taip pat E ir C.

Kumbso testas atliekamas tik esant tiesioginėms indikacijoms. Bendras sąrašas Kumbso testo skyrimo priežastys:

nėštumo planavimas ir valdymas (tėvai turi skirtingą Rh);
donorystė ir pasiruošimas kraujo perpylimui (kraujo neatitikimas Rh yra ne mažiau žalingas nei neatitikimas AB0 sistemoje);
planuojama chirurginė intervencija(jeigu kraujo netekimas papildomas perpilant kraują);
hemolizinių ligų diagnostika.

Konkretesnės indikacijos priklauso nuo atliekamo tyrimo tipo.

Tiesioginis Kumbso testas

Tiesioginis tyrimas aptinka antikūnus raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje. Tai būtina diagnozuojant esamą hemolizinės patologijos:

autoimuninė (eritrocitai ir hemoglobinas sunaikinami dėl paties organizmo antikūnų atakos);
medicinos ( patologinis procesas pradeda vartoti šiek tiek vaistai chinidinas arba prokainamidas);
po perpylimo (su kraujo grupės neatitikimu perpylimo metu), taip pat dėl Rh konflikto nėštumo metu (naujagimių eritroblastozė).

NUORODA! Hemolizinė anemija yra liga, susijusi su priešlaikiniu raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimu dėl hemolizės, dėl kurio kraujyje nepakankamas prisotinimas deguonimi ir smegenų ir (arba) vidaus organų hipoksija.

Kraujo elementų hemolizė stebima sergant onkologinėmis, infekcinėmis, reumatinės ligos, todėl tiesioginį Kumbso testą galima naudoti kaip papildoma priemonė diagnostika patologinė būklė. Verta prisiminti: neigiama prasmė analizė neatmeta hemolizės galimybės, tačiau yra papildomo tyrimo priežastis.

Netiesioginis Kumbso testas

Netiesioginis tyrimas dažniau naudojamas patologinių situacijų prevencijai. Jis padeda nustatyti antikūnus kraujo plazmoje, o tai būtina norint įvertinti transfuzijos suderinamumą ir diagnozuoti Rh konflikto riziką nėštumo metu.

Daugiau nei 80% žmonių turi teigiamą Rh faktorių (Rh +), atitinkamai šiek tiek mažiau nei 20% yra Rh neigiami. Jei Rh motinai gimsta Rh+ kūdikis, jos organizmas pradeda gaminti antikūnus, kurie atakuoja vaisiaus raudonuosius kraujo kūnelius ir sukelia hemolizę.

Atsižvelgiant į tai, kad „skirtingų rezus“ santuokų procentas siekia 12–15%, naujagimio hemolizinės ligos rizika turėtų būti didelė, tačiau iš tikrųjų tik 1 iš 25 panašių atvejų moterims stebimas sensibilizacijos reiškinys (200 sėkmingų gimdymų, 1 hemolizinės patologijos pavyzdys). Iš dalies taip yra dėl to, kad pirmasis Rh teigiamas vaikas dažniausiai nesukelia atviros mamos organizmo agresijos; absoliuti dauguma atvejų pasireiškia antrajam ir vėlesniems vaikams. Taikomas tas pats principas kaip ir įprasto jautrinimo konkrečiam alergenui atveju.

Pirmo kontakto metu reakcijos nevyksta. Organizmas tik susipažįsta su nauju jam skirtu antigenu, gaminančiu IgM klasės antikūnus, kurie atsakingi už greitą imuninį atsaką, bet retai prasiskverbia pro placentos barjerą į vaiko kraują. Visos patologinės reakcijos pasireiškia pakartotiniu „susitikimu“, kai organizme pradeda gamintis antikūnai. IgG klasė, lengvai prasiskverbia į vaisiaus kraujotaką, pradeda hemolizės procesą.

Netiesioginis Kumbso testas nėštumo metu leidžia nustatyti antikūnų buvimą motinos organizme ir laiku nustatyti Pradinis etapas jautrinimas. Norint gauti teigiamą atsakymą, reikia užsiregistruoti kas mėnesį tiriant antikūnų titrą ir likus 3-4 savaitėms iki gimdymo privaloma hospitalizuoti.

NUORODA! Rh faktoriaus nesuderinamumas niekaip neįtakoja mamos būklės, hemolizinė liga vystosi tik vaikui. IN sunkūs atvejai o nesant laiku atsako, vaisius gali mirti įsčiose arba iš karto po gimimo.

Pasiruošimas procedūrai ir jos įgyvendinimas

Naudojamas diagnostikai veninio kraujo. Specialaus ilgalaikio pasiruošimo Kumbso testui nereikia. Prieš imdami kraują iš venos analizei, pabandykite laikytis standartinių taisyklių:

atsisakyti alkoholio 3 dienas, vaistai(jei įmanoma);
planuoti paskutinį valgį vėlesniam nei 8 valandoms prieš paimant kraują analizei;
per 1 valandą mesti rūkyti, fizinį, protinį ir emocinį stresą;
Prieš procedūrą išgerkite stiklinę švaraus negazuoto vandens.

Tyrimo metodas pagrįstas hemagliutinacijos reakcija.

Atliekant tiesioginį testą kraujo mėginys veikiamas iš anksto paruoštu antiglobulino serumu su žinomais indikatoriais, mišinys kurį laiką palaikomas ir tikrinama, ar nėra agliutinatų, kurie susidaro esant antikūnams ant eritrocitų. Agliutinatų lygis diagnozuojamas naudojant agliutinacijos titrą.

Netiesioginis testas Coombs turi panašią techniką, bet sudėtingesnę veiksmų seką. Į atskirtą kraujo serumą įvedami antigeniniai eritrocitai (su Rh faktoriumi) ir tik po šių manipuliacijų pridedamas antiglobulino serumas diagnostikai ir agliutinatų titrui.

Tyrimo rezultatai

Paprastai tiek tiesioginiai, tiek netiesioginis Kumbso testas turėtų duoti neigiamą rezultatą:

neigiamas tiesioginis testas rodo, kad specifinių antikūnų prieš Rh faktorių, susijusį su raudonaisiais kraujo kūneliais, kraujyje nėra ir jie negali būti hemolizės priežastis.
neigiamas netiesioginis testas rodo, kad kraujo plazmoje taip pat nėra laisvų antikūnų prieš Rh faktorių; faktas rodo donoro kraujo suderinamumą su recipiento krauju (arba motinos ir vaiko krauju) pagal Rh faktorių.

Teigiamas Kumbso testas rodo organizmo Rh jautrinimo faktą, kuris yra Pagrindinė priežastis Rh konfliktas perpylus kraują arba nešiojant vaiką, kurio Rh būklė kitokia. Tokiu atveju rezultatai išlieka nepakitę 3 mėnesius (eritrocitų gyvenimo trukmė). Jei priežastimi tapo autoimuninė hemolizinė anemija, teigiamas testas gali persekioti pacientą kelerius metus (kai kuriais atvejais ir visą gyvenimą).

NUORODA! Antiglobulino testas skiriasi didelis jautrumas, bet turi mažai informacijos. Jis neregistruoja hemolizinio proceso aktyvumo, nenustato antikūnų tipo ir negali nustatyti patologijos priežasties. Norėdami gauti išsamesnį vaizdą, gydantis gydytojas turi paskirti papildomų tyrimų(kraujo mikroskopija, bendroji ir biocheminė analizė, reumatiniai tyrimai, ESR, geležies ir feritino kiekis).

Jautrinimo laipsnis gali turėti kokybinę išraišką (nuo „+“ iki „++++“) arba kiekybinę – antraštės forma:

1:2 - maža vertė, nekelia pavojaus;
1:4 - 1:8 - imunologinės reakcijos vystymosi pradžia; nekelia pavojaus, tačiau reikalauja nuolatinio stebėjimo;
1:16 -1:1024 – ryški įjautrinimo forma, reikia nedelsiant imtis priemonių.

Teigiamo testo priežastis gali būti:

nenurodyto kraujo perpylimas (arba su spausdinimo klaida), kai donoro ir recipiento Rh faktorius nesutampa;
Rezus konfliktas nėštumo metu (jei tėvo ir motinos kraujo antigenų sudėtis nesutampa);
autoimuninė hemolizinė anemija – tiek įgimta (pirminė), tiek antrinė, kuri yra tam tikrų ligų pasekmė (Evanso sindromas, infekcinė pneumonija, sifilis, šalta hemoglobinurija, limfoma);
vaistų hemolizinė reakcija.

Nė vienos iš aukščiau išvardytų problemų pacientas negali išspręsti be Medicininė priežiūra. Visais atvejais prireiks skubios konsultacijos, registracijos ar skubios hospitalizacijos.

DĖMESIO! Retais atvejais galimas klaidingai teigiamas Kumbso testas. To priežastis gali būti dažni kraujo perpylimai, taip pat daugybė ligų: reumatoidinis artritas, raudonoji vilkligė, sarkoidozė. Taip pat šį reiškinį galima pastebėti pašalinus blužnį, taip pat pažeidžiant reakcijos eigą (dažnas turinio purtymas, teršalų buvimas).

Pastaraisiais metais tarp įvairaus amžiaus pacientų padaugėjo kraujo ligų, o joms diagnozuoti įvairių metodų ir lėšų. Kumbso testas yra klinikinis tyrimas kraujo, o jo elgesio tikslas – nustatyti tam tikrus organizmus, keliančius grėsmę žmonių sveikatai.

Antikūnai gali prilipti ir rezultatas gali būti būklės pažeidimas Imuninė sistema. Tiesioginis Kumbso testas yra antiglobulino testas, kuris atliekamas norint aptikti antikūnus, pritvirtintus prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus.

Paprastai specialistai imasi antikūnų tyrimo šiais atvejais:

Kraujo perpylimo poreikis. Iš mokyklinio anatomijos kurso žinoma, kad žmogus gali turėti vieną iš keturių kraujo grupių. Antiglobulino tyrimo atlikimas leidžia nustatyti kraujo perpylimo į kitą organizmą galimybę. Galima sakyti, kad pacientas gali tapti perpylimo donoru tik tada, kai jo kraujas atitinka paciento tipą, tai yra, jame yra tie patys antigenai. Jei paciento ir donoro antigenai skiriasi, imuninė sistema gali sunaikinti perpiltas ląsteles. Tai gali sukelti vystymąsi sunkios ligos ir komplikacijų, ir net mirtis. Būtent dėl šios priežasties svarbus vaidmuo pridedamas prie kratos norimą tipą kraujo, kai reikia perpylimo.
Rh jautrinimo rizikos nustatymas. šiuolaikinė medicina apibrėžia Rh kaip antigeną, o visas jo apibrėžimas yra „Rh faktoriaus“ sąvoka. Kumbso testo dėka galima diagnozuoti antikūnų prieš Rh faktorių buvimą moterų kraujyje per. Tuo atveju, jei būsima mama turi neigiamą Rh faktorių, o tėvas – teigiamas, tuomet būsimas vaikas gali paveldėti bet kurį iš jų. Jei negimusiam vaikui nustatomas teigiamas Rh faktorius, padidėja Rh jautrinimo rizika – tai kraujo ir motinos maišymosi procesas nėštumo ar gimdymo metu.

Jei yra nesuderinamumas tarp motinos ir vaiko grupės, tada imuninė sistema moteriškas kūnas pradeda suvokti vaisius kaip svetimą objektą ir daro jį visokius išpuolius. Dėl to gali išsivystyti sunki vaiko patologija, vadinama eritroblastoze. Kai kuriais atvejais, nesant efektyvus gydymas vaisiaus mirtis įvyksta gimdoje arba iškart po gimimo.

Kai kuriais atvejais Kumbso testas atliekamas autoimuninei hemolizei nustatyti.

Tokia liga yra gana reta ir pasireiškia savo kūno eritrocitų antigenų susidarymu.

Ekspertai išskiria dviejų tipų Kumbso pavyzdžius, kurių kiekvienas naudojamas konkretiems tikslams.

Tiesioginis testas. Tiesioginis tyrimas medicinos praktikoje dar vadinamas tiesioginiu antiglobulino tyrimu ir jo pagalba galima diagnozuoti ant paviršiaus prisirišusius antikūnus. Kai kuriais atvejais tokių antikūnų gamyba žmogaus organizme atsiranda dėl įvairių ligų progresavimo arba vartojant tokius vaistus kaip:

Chinidinas
metildopas
Prokainamidas

Tokių antikūnų pavojus slypi tame, kad jie gali sukelti vystymąsi ir turėti destruktyvų poveikį. Kartais Kumbso testas naudojamas, kai reikia nustatyti patologijų, tokių kaip anemija ir, vystymosi priežastis.

Kumbso testas- analizė, skirta aptikti prie paviršiaus pritvirtintus arba plazmoje ištirpusius antikūnus. Su jo pagalba nustatoma imunizacija ir antikūnai prieš raudonuosius kraujo kūnelius. Antrasis pavadinimas yra antiglobulino testas. Tai vyksta tiesiogiai ir netiesiogiai.

At tiesioginis antiglobulino tyrimas aptinka eritrocitų paviršiuje fiksuotus antikūnus. Jis atliekamas įtariant, sergant kitomis autoimuninėmis ligomis, pavartojus vaistų (metildopos, penicilino, chinino) ir.

Eritrocitai buvo įjautrinti in vivo – prie jų jau tvirtai prisirišę antikūnai, o įjautrintos ląstelės pridedant antiglobulino serumo (anti-IgG) priverčia sulipti, o tai matoma plika akimi.

Netiesioginis Kumbso testas nustato anti-eritrocitinius antikūnus kraujo plazmoje, jis atliekamas prieš kraujo perpylimą ir jo metu.

Anti-eritrocitų antikūnai – tai autoantikūnų rūšis, t.y. antikūnų prieš savo audinius. Autoantikūnas atsiranda, kai imuninė sistema neįprastai reaguoja į tam tikrus vaistus, pvz didelės dozės penicilinas.

Eritrocituose jų paviršiuje yra įvairių cheminės struktūros(glikolipidai, sacharidai, glikoproteinai ir baltymai), medicinoje vadinami antigenais. Žmogus iš savo tėvų paveldi tam tikrą antigenų žemėlapį ant kiekvieno raudonojo kraujo kūnelio.

Antigenai sujungiami į grupes ir šalia to kraujas skirstomas į kelias grupes – pagal AB0 sistemą, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Žymiausi ir reikšmingiausi gydytojo darbe yra AB0 ir Rh faktorius (Rh).

AB0 sistema

Asmens Rh priklausomybę lemia šių antigenų buvimas. Ypač svarbus eritrocitų antigenas yra antigenas D. Jei jis yra, tada jie kalba apie Rh teigiamas kraujas RhD, o jei ne – apie Rh neigiamas Rhd.

Jei atitinkamas antikūnas prisijungia prie eritrocitų antigenų, tada eritrocitas sunaikinamas – bus hemolizė.

Indikacijos

Pagrindinė indikacija, skirta tiesioginisantiglobulino testas- Įtarimas dėl hemolizinės anemijos. Dažniausiai tai atliekama su pirmine autoimunine hemolizine anemija, hemolize su reumatine, naviku, užkrečiamos ligos vaistų sukelta hemolizė.

Jei anemija atsiranda praėjus kelioms dienoms ar mėnesiams po kraujo perpylimo arba užsitęsus geltai naujagimiui, taip pat atliekamas tiesioginis Kumbso testas.

Netiesioginisatliktas antiglobulino tyrimas prieš kraujo perpylimą ir Rh neigiamos moters nėštumo metu.

Autoimuninė hemolizinė anemija

Autoimuninė hemolizinė anemija (pirminė) yra klasikinė autoimuninė liga nežinomų priežasčių. Sutrinka sąveika imuninėje sistemoje, todėl savo eritrocitai suvokiami kaip svetimi. Limfmazgiuose sintetinami IgG klasės (reaguoja esant t 37 ° C) ir (arba) IgM (esant t 40 ° C) antikūnai, kurie, prisijungę prie eritrocito paviršiaus, paleidžia daugybę fermentų (komplemento sistemą) ir „perforuoja“ eritrocitų sienelę, o tai sukelia hemolizinį jo sunaikinimą.

Pirmieji simptomai atsiranda dėl raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimo ir hemoglobino kiekio sumažėjimo. Tarp jų:

nuovargis, bendras silpnumas, irzlumas
dusulys
pilvo ir krūtinės skausmas, pykinimas
tamsi šlapimo spalva
nugaros skausmas
icterinis odos ir gleivinių dažymas
eritrocitų skaičiaus sumažėjimas ir

teigiamas tiesioginis rezultatas Kumbso testas 100% patvirtina autoimuninės hemolizinės anemijos diagnozę, įrodant jos autoimuninę kilmę. Tuo pačiu metu neigiamas rezultatas neleidžia pašalinti diagnozės.

Antrinė hemolizinė anemija

Antrinė autoimuninė hemolizinė anemija ir teigiamas Kumbso testas gali būti su šiomis ligomis:

Evanso sindromas
pneumonijos infekcija

Teigiamas antiglobulino testas sergant šiomis ligomis yra vienas iš simptomų, o ne diagnostinis kriterijus.

Naujagimio hemolizinė liga

Priežastis naujagimio hemolizinė liga motinos ir vaisiaus kraujo grupės nesuderinamumas, daugeliu atvejų pagal Rh sistemą, pavieniais atvejais - pagal AB0 sistemą, kazuistiškai - pagal kitus antigenus.

Rh-konfliktas išsivysto, jei Rh neigiamos moters vaisius paveldėjo Rh teigiamą kraują iš jos tėvo.

Liga naujagimiui išsivysto tik tuo atveju, jei motina jau sukūrė antikūnus prieš atitinkamus antigenus, o tai atsitinka po ankstesnių nėštumų, abortų, nesuderinamo kraujo perpylimo. Dauguma bendra priežastis sužadinanti antikūnų prieš eritrocitų membranos antigenus sintezę – gimdymas (vaisiaus ir motinos kraujavimas). Pirmieji gimdymai paprastai praeina be komplikacijų, tačiau vėlesni gimdymai yra kupini naujagimio hemolizinės ligos pirmosiomis dienomis po gimimo.

Naujagimio hemolizinės ligos simptomai:

odos pageltimas
, ir gleivinės
kepenų ir blužnies padidėjimas
kvėpavimo sutrikimai
viso kūno patinimas
sužadinimas ir laipsniškas centrinės nervų sistemos slopinimas

Anemija po kraujo perpylimo

Netiesioginis Kumbso testas atliekamas prieš kraujo perpylimą, siekiant įvertinti suderinamumą, o po jo atliekamas tiesioginis Kumbso testas, jei įtariama hemolizė po perpylimo, t.y. jei turite simptomų, tokių kaip karščiavimas, laistymas (skaitykite toliau). Tyrimo tikslas – nustatyti antikūnus prieš perpiltus eritrocitus, kurie prisijungė prie recipiento eritrocitų ir yra hemolizės po perpylimo priežastis, taip pat priešlaikinį donoro eritrocitų pašalinimą iš recipiento (gavėjo) kraujotakos.

Simptomai:

kūno temperatūros padidėjimas
bėrimas ant odos
nugaros skausmas
raudona
pykinimas
galvos svaigimas

Iššifravimas

Verta prisiminti, kad pagrindinės tiesioginių ir netiesioginių antiglobulino tyrimų dekodavimo taisyklės yra vienodos. Skiriasi tik antikūnų vieta – kraujyje ar jau ant eritrocito.

Jeigu tiesioginis Kumbso testas yra neigiamas- tai reiškia, kad antikūnas „nesėdi“ ant eritrocitų, todėl reikia toliau ieškoti simptomų priežasties ir atlikti netiesioginį Kumbso testą.
jei Kumbso testo rezultatas teigiamas po kraujo perpylimo, infekcijų, vaistų – teigiamas išlieka iki 3 mėnesių (eritrocitų gyvenimo trukmė 120 dienų – 3 mėn.)
teigiamas antiglobulino testo rezultatas autoimuninė liga trunka mėnesius ir net metus

Norm

tiesioginis Kumbso testas – neigiamas
netiesioginis Kumbso testas – neigiamas

Kokybiškai teigiamas rezultatas matuojamas pliusų skaičiumi nuo vieno iki keturių (+, ++, +++, ++++), o kiekybiškai skaitmenine forma - 1:16, 1:256 ir kt.

Antiglobulino tyrimo trūkumai

negali nustatyti antigeno surišimo su antikūnu stiprumo
nežinomas surištų antikūnų skaičius
nenustato antikūno tipo
teigiamas Kumbso testas nepadės nustatyti jo priežasties
0,5% sveikų žmonių turėti teigiamas mėginys Coombs be jokių hemolizinės anemijos požymių
netinka gydymo sėkmei stebėti, nes nerodo eritrocitų hemolizės aktyvumo

Papildomi tyrimai

kraujo tyrimas dėl
kraujo tepinėlio mikroskopija
— ( , ), ( , )
— 2. Prieš 5-10-20 metų man perpylė kraują, ar dabar prieš naują kraujo perpylimą apie tai turiu pasakyti gydytojui?
Taip. Tai, kad jums buvo perpiltas kraujas, turi žinoti gydytojas, nes tai turi įtakos teisingam tyrimo rezultatų aiškinimui dabar. Gavus kažkieno kito (nors daug kartų tirtą kraują), visada yra tikimybė, kad jūsų organizme atsiras antikūnų prieš perpiltą kraują. Būtent šie antikūnai tai padarys bloga įtaka apie sveikatos būklę. Vėlesnių kraujo perpylimų metu gydytojas turėtų žinoti, kad jums jau buvo perpylimas, o tai reiškia, kad buvo laiko antikūnų sintezei. Nėščioms moterims Ši informacija dar aktualesnis.

3. Jei motinos ir vaiko Rh faktorius nesutampa, ar visi vaikai sirgs?

Priklauso nuo to, ar vaikas Rh teigiamas, ar neigiamas (RhD). I, II, III ir IV kraujo grupių nešiotojai gali būti ir Rh teigiami, ir neigiami. Esant situacijai, kai motina yra Rh neigiama, o vaikas Rh teigiamas, antikūnai bus gaminami jau su pirmuoju nėštumu, tačiau tik po pirmojo gimdymo (arba nėštumo nutraukimo) bus tiesioginis kontaktas tarp motinos ir vaiko kraujo. Hemolizinio antikūnų poveikio įgyvendinimas bus tik su antruoju ir sekantis gimdymas sukelia hemolizinę ligą naujagimiui.

Kiekviena moteris su neigiamas Rh faktorius reikia atidžiai ištirti nėštumo metu ir po gimdymo profilaktinis gydymas išvengti antikūnų atsiradimo ir tolesnių komplikacijų.

4. Ar nėštumo metu prieš atliekant Kumbso testą būtina žinoti vyro kraujo grupę?

Nėštumo metu būtina ne tik žinoti, bet ir pasitikrinti biologinio vaiko tėvo kraujo grupę.

Duomenys
- pirmą kartą pasiūlytas Kembridže 1945 m
- jautrumo slenkstis – ne mažiau kaip 300 fiksuotų antikūnų molekulių viename eritrocite
- antikūnų, sukeliančių hemolizę, skaičius - kiekvienam asmeniui individualiai (nuo 16-30 iki 300)
- kitų dinamika laboratoriniai rodikliai hemolizinė anemija (hemoglobinas, bilirubinas, retikulocitai) gali normalizuotis, o Kumbso testas išliks tokio paties lygio
Kumbso testas paskutinį kartą buvo pakeistas: 2018 m. kovo 16 d Marija Bodyan

Agliutinacijos reakcija, skirta anti-reuso antikūnams nustatyti (netiesioginė Kumbso reakcija)taikyti pacientams, kuriems yra intravaskulinė hemolizė. Kai kuriems iš šių pacientų randami anti-reuso antikūnai, kurie yra nepilni, monovalentiniai. Jie konkrečiai sąveikauja su Rh teigiamais eritrocitais, bet nesukelia jų agliutinacijos. Tokių nepilnų antikūnų buvimas nustatomas netiesioginėje Kumbso reakcijoje. Tam į sistemą pridedamas antiglobulino serumas (antikūnai prieš žmogaus imunoglobulinus) anti-Rh antikūnai + Rh teigiami eritrocitai, kurie sukelia eritrocitų agliutinaciją. Taikant Kumbso reakciją, diagnozuojamos patologinės būklės, susijusios su imuninės kilmės eritrocitų intravaskuline lize, pavyzdžiui, naujagimio hemolizinė liga: Rh teigiamo vaisiaus eritrocitai susijungia su kraujyje cirkuliuojančiais nepilnais Rh faktoriaus antikūnais, kurie per placentą perėjo iš Rh-negatyvios motinos.

Mechanizmas. Sunku nustatyti nepilnus (monovalentinius) antikūnus, nes šie antikūnai, jungdamiesi prie specifinio antigeno epitopų, nesudaro gardelės struktūros, o reakcija tarp antigenų ir antikūnų neaptinkama agliutinacijos, precipitacijos ar kitais tyrimais. Norint nustatyti susidariusius antigeno-antikūno kompleksus, reikia naudoti papildomas tyrimo sistemas. Norint nustatyti nepilnus antikūnus, pavyzdžiui, prieš eritrocitų Rh antigeną nėščios moters kraujo serume, reakcija vykdoma dviem etapais: 1) eritrocitai, kuriuose yra Rh antigeno, pridedami prie dvigubo tiriamojo serumo skiedimo ir valandą laikomi 37 ° C temperatūroje; 2) į po pirmojo etapo kruopščiai nuplautus eritrocitus įpilkite triušio anti-žmogaus antiglobulino serumo (iš anksto titruotu darbiniu skiedimu). Po 30 minučių inkubacijos 37 °C temperatūroje rezultatai įvertinami pagal hemagliutinacijos buvimą (teigiama reakcija). Būtina kontroliuoti reakcijos sudedamąsias dalis: 1) antiglobulino serumas + eritrocitai, akivaizdžiai įjautrinti specifiniais antikūnais; 2) eritrocitai, gydyti normaliu serumu + antiglobulino serumas; 3) Rh neigiami eritrocitai, apdoroti tiriamuoju serumu + antiglobulino serumu.

50. Pasyvi hemagliutinacijos reakcija. Mechanizmas. Komponentai. Taikymas.

Netiesioginės (pasyviosios) hemagliutinacijos reakcija(RNGA, RPGA) yra pagrįstas eritrocitų (arba latekso) naudojimu su ant jų paviršiuje adsorbuotais antigenais arba antikūnais, kurių sąveika su atitinkamais antikūnais ar pacientų kraujo serumo antigenais sukelia eritrocitų sulipimą ir iškrenta į mėgintuvėlio ar ląstelės dugną šukuotų nuosėdų pavidalu.

Komponentai. RNHA gamybai gali būti naudojami avių, arklių, triušių, vištų, pelių, žmonių ir kitų eritrocitai, kurie surenkami naudoti ateityje, apdorojami formalinu arba glutaraldehidu. Eritrocitų adsorbcijos gebėjimas padidėja, kai jie apdorojami tanino arba chromo chlorido tirpalais.

RNGA antigenais gali būti mikroorganizmų polisacharidiniai antigenai, bakterinių vakcinų ekstraktai, virusų ir riketsijų antigenai, taip pat kitos medžiagos.

AG įjautrinti eritrocitai vadinami eritrocitų diagnostikomis. Eritrocitų diagnostikai ruošti dažniausiai naudojami avininiai eritrocitai, pasižymintys dideliu adsorbciniu aktyvumu.

Taikymas. RNHA naudojama infekcinėms ligoms diagnozuoti, gonadotropiniam hormonui šlapime nustatyti nėštumo metu, padidėjusiam jautrumui vaistams, hormonams nustatyti ir kai kuriais kitais atvejais.

Mechanizmas. Reakcija netiesioginė hemagliutinacija(RNGA) jautrumas ir specifiškumas yra žymiai didesnis nei agliutinacijos reakcija. Jis naudojamas patogenui identifikuoti pagal jo antigeninę struktūrą arba tirtoje patologinėje medžiagoje nurodyti ir identifikuoti bakterinius produktus – toksinus. Atitinkamai, naudojami standartiniai (komerciniai) eritrocitų antikūnų diagnostiniai preparatai, gaunami adsorbuojant specifinius antikūnus ant taninuotų (taninu apdorotų) eritrocitų paviršiaus. Plastikinių plokštelių duobutėse ruošiami nuoseklūs tiriamosios medžiagos skiedimai. Tada į kiekvieną šulinėlį įpilama vienodo tūrio 3 % suspensijos su antikūnais pakrautų eritrocitų. Jei reikia, reakcija įvedama lygiagrečiai keliose šulinėlių eilėse su eritrocitais, prikrautais skirtingos grupės specifiškumo antikūnais.

Po 2 valandų inkubavimo 37 ° C temperatūroje atsižvelgiama į rezultatus, įvertinant išvaizda eritrocitų nuosėdos (be kratymo): esant neigiamai reakcijai, šulinio apačioje atsiranda kompaktinio disko arba žiedo pavidalo nuosėdos, teigiama reakcija- būdingos nėriniuotos eritrocitų nuosėdos, plona plėvelė nelygiais kraštais.