Metoda oznaczania grup krwi. Reakcja Coombsa pośrednia (test antyglobulinowy, wykrywanie niekompletnych przeciwciał przeciw erytrocytom), krew

REAKCJA COOMBSA(R.R.A. Coombs, angielski immunolog, ur. 1921; syn.: test Coombsa, test antyglobulinowy ) - reakcja immunologiczna w celu wykrycia niekompletnych przeciwciał przeciwko auto- i izoantygenom erytrocytów.

Reakcja została opracowana w 1908 roku przez Moreshiego (S. Moreschi), ale została przyjęta szerokie zastosowanie dopiero od 1945 roku, po tym, jak Coombs wykazał swoją rolę w określaniu zgodności w transfuzjach krwi, konflikcie Rhesus, diagnozowaniu stanów autoalergicznych i autoimmunologicznych itp.

Kr. r. opiera się na zastosowaniu w nim specjalnie przygotowanego preparatu - serum antyglobulinowego. W obecności surowicy antyglobulinowej erytrocyty obciążone niekompletnymi przeciwciałami ulegają aglutynacji. Erytrocyty, które nie zawierają przeciwciał na swojej powierzchni, pozostają nieaglutynowane.

Kr. r. szeroko stosowany do: a) ustalenia stanu izosensybilizacji, czyli wykrycia izoprzeciwciał pojawiających się podczas wielokrotnych transfuzji krwi (patrz Transfuzja krwi) lub ciąż (patrz Ciąża); b) wykonanie testu zgodności dla hemotransfuzji; c) definicje w erytrocytach różnych czynników Rh (patrz); d) wykrywanie przeciwciał autoimmunologicznych na erytrocytach pacjentów z nabytą niedokrwistością hemolityczną (patrz) i innymi chorobami autoalergicznymi (patrz), a także w niektórych infekcjach występujących z składnik alergiczny; e) wykrywanie przeciwciał izoimmunologicznych utrwalonych na erytrocytach dzieci cierpiących na chorobę hemolityczną noworodków (patrz). Kr. r. Znajduje również zastosowanie w badaniach kryminalistycznych i antropologicznych.

Główny materiał do inscenizacji K. r. są surowica lub osocze z cytrynianem i erytrocyty pacjenta. Istnieją dwa warianty rzeki K.: pośrednia i bezpośrednia. Z pośrednim K. p. zbadać surowicę pacjenta, w nacięciu określić swobodnie krążące przeciwciała. Z linią prostą K. str. zbadać czerwone krwinki pod kątem obecności utrwalonych na nich przeciwciał kształtowane elementy krew.

Surowica antyglobulinowa do K. river. otrzymać przez immunizację laboratorium. zwierzęta (króliki, kozy, owce itp.) z globulinami wyizolowanymi z surowicy ludzkiej przez frakcjonowanie etanolem, siarczanem amonu lub filtrację żelową na Sephadexie. Po otrzymaniu surowicy antyglobulinowej konieczne jest usunięcie przeciwciał heteroaglutynujących powstałych w wyniku immunizacji zwierząt globulinami ludzkimi. Osiąga się to poprzez adsorpcję surowicy odpornościowej z mieszaniną czerwonych krwinek osób z inna grupa krew lub rozcieńczenie izotonicznym roztworem chlorku sodu. W tym drugim przypadku miano heteroaglutynin powinno być niskie (1:16 - 1:32), aby po rozcieńczeniu surowica antyglobulinowa zachowała dobra aktywność w Kr.

Pośrednia reakcja Coombsa

Pośrednia reakcja Coombsa przebiega w dwóch etapach. Pierwszy etap przeprowadza się w specjalnie zaprojektowanych do tego celu małych probówkach o wymiarach 4 x 0,5 cm.W każdej probówce po trzy krople surowicy (całe, 1:2 itd.), w których obecność przeciwciał podejrzewa się, dodaje się jedną kroplę osadu erytrocytów o znanym składzie antygenowym. Zawartość probówki miesza się i umieszcza w termostacie w temperaturze 37°C na 1 godzinę. Następnie erytrocyty przemywa się trzykrotnie izotonicznym roztworem chlorku sodu. Drugi etap polega na przygotowaniu 5% zawiesiny przemytych erytrocytów i połączeniu na białej (porcelanowej) płytce o zwilżonej powierzchni jednej kropli erytrocytów z jedną kroplą surowicy antyglobulinowej. Rozliczanie wyników odbywa się do 10 minut. Wyjątek wyniki fałszywie dodatnie produkowane przez robienie badania kontrolne. Stosowanie roztwór izotoniczny chlorku sodu zamiast surowicy antyglobulinowej nie powinna towarzyszyć aglutynacja erytrocytów. Wykonanie pośredniego K. r. w stosunku do erytrocytów o znanym fenotypie, izoantygeny pozwalają na ustalenie swoistości przeciwciał. Na przykład badanie surowicy pacjenta z erytrocytami 0(I), CDE, Kk, Fya; 0(1), CDe, Kk, Fua; 0(I), cDe, Kk, Fya; 0(I), cDE, Kk, Fya; 0(I), cde, kk, Fya pokazał wynik pozytywny z próbką krwi w 1. i 4. przypadku; inne próbki krwi (2, 3, 5 przypadki) wykazały wynik negatywny. Surowica zawiera przeciwciała anty-E. Z pomocą pośredniego K. r. można wykryć niekompletne przeciwciała przeciwko antygenom: C, D, E, c, e; k, k; Fya, Fyb; Lea, Leb; Jka, Jkb itp. (patrz Grupy krwi).

Bezpośrednia reakcja Coombsa

Zgodnie z techniką wykonania bezpośrednia reakcja Coombsa odpowiada drugiemu etapowi pośredniego K. r.: erytrocyty pacjenta (5% zawiesina) przemyte trzykrotnie izotonicznym roztworem chlorku sodu łączy się z surowicą antyglobulinową. Bezpośredni K. r. wykonać, gdy istnieje powód, aby sądzić, że erytrocyty pacjenta badanego in vivo są już uczulone przez przeciwciała. Prosta dodatnia K. r. służy jako marker diagnostyczny choroba hemolityczna noworodków, ze względu na uczulenie organizmu kobiety na antygeny płodowe i przenikanie przeciwciał przez łożysko do organizmu dziecka, a także z nabytymi niedokrwistość hemolityczna.

Za ostatnie lata Kr. r. znacznie ulepszone. Za jego pomocą można nie tylko stwierdzić obecność przeciwciał na erytrocytach, ale także ustalić klasę immunoglobulin (patrz). Aby to zrobić, użyj surowicy przeciwko niektórym klasom immunoglobulin: IgG, IgM, IgA. Przeciwciała izoimmunologiczne przeciwko Rh, antygenom Kell, antygenom Duffy'ego i innym antygenom, a także ciepłym przeciwciałom autoimmunologicznym, to zazwyczaj IgG. Zimne przeciwciała autoimmunologiczne, a także przeciwciała izoimmunologiczne przeciwko Le i niektórym innym antygenom z reguły należą do IgM. Tylko rzadkie przeciwciała autoimmunologiczne mają charakter IgA (patrz Autoprzeciwciała).

Bibliografia: Dygin V. P. Choroby autoimmunologiczne w klinice chorób wewnętrznych, L., 1970, bibliogr.; Kasjer-s do i y I. A. i Alekseev G. A. Hematologia kliniczna, M., 1970; Kosyakov P. N. ISO antygeny i ludzkie przeciwciała w warunkach normalnych i patologicznych, M., 1974, bibliogr.; W około i v i n P. e. A. Les anemias hemolytiques, str. 93, P., 1971, bibliogr.; Kliniczne aspekty immunologii, wyd. przez PGH Geli a. o., Oxford, 1975; Coombs R.R.A., M ou g a n t A.E.a. Rasa R. R. Izosensybilizacja in vivo krwinek czerwonych u dzieci z chorobą hemolityczną, Lancet, v. 1, str. 264, 1946.

Spośród wielu istniejących antygenów w praktyka lekarska najwyższa wartość podawany trzem rodzajom aglutynogenów krwi. Jednym z nich jest typ odpowiedzialny za manifestację czynnika Rh: jeśli jest obecny na błonie erytrocytów, diagnozuje się grupę krwi Rh +, jeśli jej nie ma - Rh-. Jeśli erytrocyty z aglutynogenami Rh+ wejdą w skład krwi Rh-ujemnej, organizm wyzwala odpowiedź immunologiczną i zaczyna wytwarzać przeciwciała przeciwko temu antygenowi, co powoduje stany patologiczne.

ODNIESIENIE! Czynnik Rh to złożony, wieloskładnikowy układ kilkudziesięciu antygenów. Najczęstsze z nich to aglutynogeny typu D (85% przypadków) oraz E i C.

Test Coombsa przeprowadza się tylko w obecności bezpośrednich wskazań. Wspólna lista powody przepisywania testu Coombsa:

  • planowanie i prowadzenie ciąży (rodzice mają różne Rh);
  • dawstwo i przygotowanie do transfuzji krwi (niedopasowanie krwi w Rh jest nie mniej szkodliwe niż niedopasowanie w układzie AB0);
  • zaplanowany interwencja chirurgiczna(w przypadku uzupełnienia utraty krwi za pomocą transfuzji krwi);
  • diagnostyka chorób hemolitycznych.

Bardziej szczegółowe wskazania zależą od rodzaju prowadzonego badania.

Bezpośredni test Coombsa

Bezpośredni test wykrywa przeciwciała na powierzchni czerwonych krwinek. Jest to konieczne do diagnozy istniejących patologie hemolityczne:

  • autoimmunologiczny (erytrocyty i hemoglobina są niszczone w wyniku ataku własnych przeciwciał organizmu);
  • medyczny ( proces patologiczny zaczyna brać leki typu chinidyny lub prokainamidu);
  • po transfuzji (z niedopasowaniem grupy krwi podczas transfuzji), a także w postaci konfliktu Rh podczas ciąży (erytroblastoza noworodków).

ODNIESIENIE! Anemia hemolityczna jest chorobą związaną z przedwczesnym niszczeniem krwinek czerwonych w wyniku hemolizy, co prowadzi do niedostatecznego nasycenia krwi tlenem i niedotlenienia mózgu i/lub narządów wewnętrznych.

Hemolizę elementów krwi obserwuje się w chorobach onkologicznych, zakaźnych, choroby reumatyczne, więc bezpośredni test Coombsa może być użyty jako dodatkowy środek diagnostyka stan patologiczny. Warto pamiętać: negatywne znaczenie analiza nie wyklucza możliwości hemolizy, ale jest powodem do dodatkowego badania.

Pośredni test Coombsa

Test pośredni jest częściej stosowany w celu zapobiegania sytuacjom patologicznym. Pomaga wykryć przeciwciała w osoczu krwi, co jest niezbędne do oceny zgodności transfuzji i diagnozy ryzyka konfliktu Rh podczas ciąży.

Ponad 80% ludzi ma odpowiednio dodatni czynnik Rh (Rh +), nieco poniżej 20% ma czynnik Rh ujemny. Jeśli matka Rh- rozwija dziecko Rh+, jej organizm zaczyna wytwarzać przeciwciała, które atakują czerwone krwinki płodu, powodując hemolizę.

Biorąc pod uwagę, że odsetek małżeństw „innych rezusów” sięga 12-15%, ryzyko choroby hemolitycznej noworodka powinno być wysokie, ale w rzeczywistości tylko u 1 na 25 podobne przypadki u kobiet obserwuje się zjawisko sensytyzacji (na 200 udanych porodów 1 przykład patologii hemolitycznej). Wynika to po części z faktu, że pierwsze dziecko Rh-dodatnie zwykle nie powoduje otwartej agresji organizmu matki; zdecydowana większość przypadków występuje u drugiego i kolejnych dzieci. Obowiązuje ta sama zasada, co w przypadku konwencjonalnego uczulenia na określony alergen.

Brak reakcji przy pierwszym kontakcie. Organizm dopiero zapoznaje się z nowym dla niej antygenem, wytwarzając przeciwciała klasy IgM, które odpowiadają za szybką odpowiedź immunologiczną, ale rzadko przenikają przez barierę łożyskową do krwi dziecka. Wszystkie reakcje patologiczne przejawiają się w powtarzającym się „spotkaniu”, kiedy w organizmie zaczynają wytwarzać się przeciwciała. klasa IgG, łatwo przenikając do krwioobiegu płodu, rozpoczynając proces hemolizy.

Pośredni test Coombsa podczas ciąży pozwala na wykrycie obecności przeciwciał w organizmie matki i identyfikację na czas etap początkowy uczulenie. Pozytywna odpowiedź wymaga rejestracji z comiesięcznym badaniem miana przeciwciał i obowiązkową hospitalizacją 3-4 tygodnie przed porodem.

ODNIESIENIE! Niekompatybilność czynnika Rh nie wpływa w żaden sposób na stan matki, choroba hemolityczna rozwija się tylko u dziecka. W ciężkie przypadki aw przypadku braku szybkiej reakcji płód może umrzeć w łonie matki lub bezpośrednio po urodzeniu.

Przygotowanie do zabiegu i jego realizacja

Służy do diagnozy krew żylna. Specjalne długoterminowe przygotowanie do testu Coombsa nie jest wymagane. Staraj się przestrzegać standardowego zestawu zasad przed pobraniem krwi z żyły do ​​analizy:

  • odstawić alkohol na 3 dni, leki(Jeśli to możliwe);
  • zaplanuj ostatni posiłek na później niż 8 godzin przed pobraniem krwi do analizy;
  • rzucić palenie, stres fizyczny, psychiczny i emocjonalny w ciągu 1 godziny;
  • Przed zabiegiem należy wypić szklankę czystej niegazowanej wody.

Metoda badawcza opiera się na reakcji hemaglutynacji.

Podczas przeprowadzania testu bezpośredniego próbkę krwi poddaje się działaniu wcześniej przygotowanej surowicy antyglobulinowej o znanych wskaźnikach, mieszaninę przechowuje się przez pewien czas i sprawdza pod kątem aglutynatów, które powstają, gdy na erytrocytach obecne są przeciwciała. Poziom aglutynatów diagnozuje się za pomocą miana aglutynacji.

Test pośredni Coombs ma podobną technikę, ale bardziej złożoną sekwencję działań. Erytrocyty antygenowe (z czynnikiem Rh) wprowadza się do oddzielonej surowicy krwi i dopiero po tych manipulacjach dodaje się surowicę antyglobulinową w celu diagnozy i oznaczenia miana aglutynatów.

Winiki wyszukiwania

Zwykle zarówno bezpośrednie, jak i pośredni test Coombsa powinien dać wynik negatywny:

  • ujemny wynik testu bezpośredniego wskazuje, że we krwi nie występują swoiste przeciwciała przeciwko czynnikowi Rh związanemu z krwinkami czerwonymi i nie mogą one być przyczyną hemolizy
  • negatywny test pośredni pokazuje, że w osoczu krwi nie ma również wolnych przeciwciał przeciwko czynnikowi Rh; fakt ten wskazuje na zgodność krwi dawcy z krwią biorcy (lub krwią matki i dziecka) według czynnika Rh.

Pozytywny odczyn Coombsa wskazuje na fakt uwrażliwienia organizmu na czynnik Rh, czyli tzw główny powód Konflikt Rh w przypadku transfuzji krwi lub podczas noszenia dziecka z innym statusem Rh. W takim przypadku wyniki pozostają niezmienione przez 3 miesiące (czas życia erytrocytów). Jeśli przyczyną stała się autoimmunologiczna niedokrwistość hemolityczna, pozytywny wynik testu może prześladować pacjenta przez kilka lat (w niektórych przypadkach do końca życia).

ODNIESIENIE! Test antyglobulinowy jest inny wysoka czułość, ale zawiera niewiele informacji. Nie rejestruje aktywności procesu hemolitycznego, nie określa rodzaju przeciwciał i nie jest w stanie zidentyfikować przyczyny patologii. Aby uzyskać pełniejszy obraz, lekarz prowadzący musi przepisać dodatkowe badania(mikroskopia krwi, ogólna i analiza biochemiczna, testy reumatyczne, OB, poziom żelaza i ferrytyny).

Stopień uczulenia może mieć wyraz jakościowy (od „+” do „++++”) lub ilościowy – w postaci napisu:

  • 1:2 - niska wartość, nie stwarza zagrożenia;
  • 1:4 - 1:8 - początek rozwoju reakcji immunologicznej; nie stwarza zagrożenia, ale wymaga stałego monitorowania;
  • 1:16 -1:1024 - jasna forma uczulenia, środki należy podjąć natychmiast.

Przyczyną pozytywnego testu może być:

  • transfuzja krwi nieopisanej (lub z błędem w typowaniu), gdy czynnik Rh dawcy i biorcy nie są zgodne;
  • Konflikt Rhesus podczas ciąży (jeśli skład antygenów krwi u ojca i matki nie pasuje);
  • niedokrwistość hemolityczna autoimmunologiczna - zarówno wrodzona (pierwotna), jak i wtórna, będąca konsekwencją niektórych chorób (zespół Evansa, zakaźne zapalenie płuc, kiła, zimna hemoglobinuria, chłoniak);
  • lekowa reakcja hemolityczna.

Żaden z powyższych problemów nie może zostać rozwiązany przez pacjenta bez opieka medyczna. We wszystkich przypadkach konieczna będzie pilna konsultacja, rejestracja lub pilna hospitalizacja.

UWAGA! W rzadkich przypadkach możliwy jest fałszywie dodatni wynik testu Coombsa. Powodem tego mogą być częste transfuzje krwi, a także szereg chorób: reumatoidalne zapalenie stawów, toczeń rumieniowaty, sarkoidoza. Zjawisko to można również zaobserwować po usunięciu śledziony, a także z naruszeniem przebiegu reakcji (częste wstrząsanie zawartością, obecność zanieczyszczeń).

W ostatnich latach wśród pacjentów w różnym wieku wzrosła liczba chorób krwi, a do ich diagnostyki różne metody i fundusze. Test Coombsa jest badanie kliniczne krwi, a celem jego postępowania jest identyfikacja określonych organizmów stanowiących zagrożenie dla zdrowia człowieka.

Przeciwciała mogą przylegać, a wynikiem może być naruszenie warunku układ odpornościowy. Bezpośredni test Coombsa jest testem antyglobulinowym wykonywanym w celu wykrycia przeciwciał przyczepionych do powierzchni czerwonych krwinek.

Zazwyczaj specjaliści uciekają się do testu na przeciwciała w następujących sytuacjach:

  • Konieczność transfuzji krwi. Ze szkolnego kursu anatomii wiadomo, że człowiek może mieć jedną z czterech grup krwi. Przeprowadzenie testu antyglobulinowego pozwala określić możliwość transfuzji krwi do innego organizmu. Można powiedzieć, że pacjent może zostać dawcą do transfuzji tylko wtedy, gdy jego krew odpowiada typowi pacjenta, czyli zawiera te same antygeny. W przypadku, gdy pacjent i dawca mają różne antygeny, może to prowadzić do zniszczenia przetoczonych komórek przez układ odpornościowy. Może to spowodować rozwój poważna choroba i komplikacje, a nawet śmierć. Właśnie z tego powodu ważna rola dołączone do wyszukiwania żądany typ krwi, gdy konieczna jest transfuzja.
  • Określenie ryzyka uczulenia Rh. nowoczesna medycyna definiuje Rh jako antygen, a jego pełną definicją jest pojęcie „czynnika Rh”. Dzięki testowi Coombsa możliwe jest zdiagnozowanie obecności przeciwciał przeciwko czynnikowi Rh we krwi kobiet w trakcie. W przypadku, jeśli przyszła mamusia ma ujemny czynnik Rh, a ojciec jest dodatni, to nienarodzone dziecko może odziedziczyć którykolwiek z nich. W przypadku wykrycia dodatniego czynnika Rh u nienarodzonego dziecka wzrasta ryzyko rozwoju uczulenia na Rh - jest to proces mieszania krwi i krwi matki podczas ciąży lub porodu.

W przypadku niezgodności między grupą matki i dziecka, układ odpornościowy kobiece ciało zaczyna postrzegać płód jako obcy przedmiot i wywiera na niego wszelkiego rodzaju ataki. Rezultatem tego może być rozwój ciężkiej patologii u dziecka, zwanej erytroblastozą. W niektórych przypadkach pod nieobecność skuteczne leczenieśmierć płodu następuje w łonie matki lub bezpośrednio po urodzeniu.

W niektórych przypadkach test Coombsa jest wykonywany w celu wykrycia hemolizy autoimmunologicznej.

Taka choroba jest dość rzadka i objawia się tworzeniem antygenów erytrocytów własnego organizmu.


Eksperci wyróżniają dwa rodzaje próbek Coombsa, z których każdy jest używany do określonych celów.

Test bezpośredni. Bezpośredni test w praktyce medycznej jest również nazywany bezpośrednim testem antyglobulinowym i za jego pomocą można zdiagnozować przeciwciała przyczepione do powierzchni. W niektórych przypadkach produkcja takich przeciwciał w organizmie człowieka następuje w wyniku progresji różnych lub stosowania leków takich jak:

  • chinidyna
  • metylodop
  • Prokainamid

Niebezpieczeństwo takich przeciwciał polega na tym, że mogą one powodować rozwój i mieć destrukcyjny wpływ na organizm. Czasami stosuje się test Coombsa, gdy konieczne jest zidentyfikowanie przyczyn rozwoju patologii, takich jak niedokrwistość i.

Test Coombsa- analiza w celu wykrycia przeciwciał przyczepionych do powierzchni lub rozpuszczonych w osoczu. Za jego pomocą wykrywa się immunizację i przeciwciała przeciwko krwinkom czerwonym. Druga nazwa to test antyglobulinowy. Dzieje się to bezpośrednio i pośrednio.

Na bezpośredni test antyglobulinowy wykrywa przeciwciała utrwalone na powierzchni erytrocytów. Przeprowadza się go z podejrzeniem, przy innych chorobach autoimmunologicznych, po zażyciu leków (metyldopa, penicylina, chinina) i.

Erytrocyty zostały uwrażliwione in vivo - przeciwciała są już mocno do nich przyczepione, a dodatek surowicy antyglobulinowej (anty-IgG) powoduje sklejanie uczulonych komórek, co jest widoczne gołym okiem.

Pośredni test Coombsa wykrywa przeciwciała przeciwko erytrocytom w osoczu krwi, wykonuje się przed transfuzją krwi iw trakcie.

Przeciwciała przeciw erytrocytom to rodzaj autoprzeciwciał, tj. przeciwciał przeciwko własnym tkankom. Autoprzeciwciała pojawiają się, gdy układ odpornościowy reaguje nienormalnie na niektóre leki, takie jak wysokie dawki penicylina.

Erytrocyty na swojej powierzchni zawierają różne struktury chemiczne(glikolipidy, sacharydy, glikoproteiny i białka), w medycynie określane jako antygeny. Osoba dziedziczy po rodzicach pewną mapę antygenów na każdej czerwonej krwince.

Antygeny są łączone w grupy, a następnie krew jest dzielona na kilka grup - według układu AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Najbardziej znane i znaczące w pracy lekarza są czynnik AB0 i Rh (Rh).

systemu AB0

Przynależność Rh osoby jest określona przez obecność tych antygenów. Szczególnie ważnym antygenem erytrocytów jest antygen D. Jeśli jest obecny, to o tym mówią Krew Rh dodatnia RhD, a jeśli nie - o Rh ujemny Rhd.

Jeżeli odpowiednie przeciwciało przyłączy się do antygenów erytrocytów, wówczas erytrocyt ulega zniszczeniu – nastąpi hemoliza.

Wskazania

Główne wskazanie do bezpośrednitest antyglobulinowy- Podejrzenie niedokrwistości hemolitycznej. Najczęściej przeprowadza się go przy pierwotnej niedokrwistości hemolitycznej autoimmunologicznej, hemolizie z reumatyką, nowotworem, choroba zakaźna hemoliza polekowa.

Jeśli niedokrwistość pojawi się kilka dni lub miesięcy po transfuzji krwi lub przy przedłużającej się żółtaczce u noworodka, wykonuje się również bezpośredni test Coombsa.

Pośredniwykonano test antyglobulinowy przed transfuzją krwi iw czasie ciąży kobiety Rh-ujemnej.

Niedokrwistość autoimmunohemolityczna

Niedokrwistość autoimmunohemolityczna (pierwotna) jest klasyczną chorobą autoimmunologiczną nieznane przyczyny. Zakłócona zostaje interakcja w obrębie układu odpornościowego, co prowadzi do postrzegania własnych erytrocytów jako obcych. W węzłach chłonnych syntetyzowane są przeciwciała klasy IgG (reagujące w t 37°C) i/lub IgM (w t 40°C), które po przyczepieniu do powierzchni erytrocytów inicjują szereg enzymów (tzw. dopełniacza) i „przedziurawić” ścianę erytrocytów, co prowadzi do jej zniszczenia – hemolizy.


Pierwsze objawy są spowodowane zarówno zniszczeniem czerwonych krwinek, jak i spadkiem poziomu hemoglobiny. Pomiędzy nimi:

  • zmęczenie, ogólna słabość, drażliwość
  • duszność
  • ból brzucha i klatki piersiowej, nudności
  • ciemny kolor moczu
  • ból pleców
  • żółtawe zabarwienie skóry i błon śluzowych
  • spadek liczby erytrocytów i

pozytywny wynik bezpośredni Test Coombsa 100% potwierdza rozpoznanie autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej, dowodząc jej pochodzenia autoimmunologicznego. Jednocześnie wynik negatywny nie daje możliwości usunięcia diagnozy.

Wtórna niedokrwistość hemolityczna

Wtórna niedokrwistość autoimmunohemolityczna i dodatni wynik testu Coombsa mogą występować w następujących chorobach:

  • Zespół Evansa
  • zapalenie płuc

Dodatni wynik testu antyglobulinowego w tych chorobach jest jednym z objawów, a nie kryterium diagnostycznym.

Choroba hemolityczna noworodka

Przyczyna choroba hemolityczna noworodków niezgodność grupy krwi matki i płodu, w większości przypadków według układu Rh, w pojedynczych przypadkach – według układu AB0, kazuistycznie – według innych antygenów.

Konflikt Rh rozwija się, jeśli u kobiety Rh-ujemnej płód odziedziczył krew Rh-dodatnią od jej ojca.

Choroba u noworodka rozwija się tylko wtedy, gdy matka wytworzyła już przeciwciała przeciwko odpowiednim antygenom, co ma miejsce po poprzednich ciążach, poronieniach, transfuzjach niezgodnej krwi. Bardzo popularny przypadek wyzwalanie syntezy przeciwciał przeciwko antygenom błony erytrocytów - poród (krwawienie płodowo-matczyne). Pierwsze porody na ogół przebiegają bez powikłań, ale kolejne porody obarczone są chorobą hemolityczną noworodka w pierwszych dniach po urodzeniu.

Objawy choroby hemolitycznej noworodka:

  • zażółcenie skóry
  • i śluzowe
  • powiększenie wątroby i śledziony
  • zaburzenia oddychania
  • obrzęk całego ciała
  • pobudzenie i stopniowa depresja ośrodkowego układu nerwowego

Anemia po transfuzji krwi

Pośredni test Coombsa wykonuje się przed transfuzją krwi w celu oceny zgodności, a po niej bezpośredni test Coombsa w przypadku podejrzenia hemolizy potransfuzyjnej, tj. jeśli u pacjenta występują objawy, takie jak gorączka, wodnienie (przeczytaj poniżej). Celem testu jest wykrycie przeciwciał przeciwko przetoczonym krwinkom, które związały się z krwinkami biorcy i są przyczyną hemolizy potransfuzyjnej, a także przedwczesnego usunięcia krwinek czerwonych dawcy z krążenia biorcy (biorcy).

Objawy:

  • wzrost temperatury ciała
  • wysypka na skórze
  • ból pleców
  • czerwony
  • mdłości
  • zawroty głowy


Deszyfrowanie

Warto przypomnieć, że podstawowe zasady dekodowania bezpośrednich i pośrednich testów antyglobulinowych są takie same. Jedyną różnicą jest lokalizacja przeciwciał - we krwi lub już na erytrocytach.

  • Jeśli bezpośredni test Coombsa jest ujemny- oznacza to, że przeciwciało nie „siedzi” na erytrocytach i należy dalej szukać przyczyny objawów oraz wykonać pośredni odczyn Coombsa
  • w przypadku dodatniego wyniku odczynu Coombsa po transfuzji krwi, infekcji, lekach - dodatni wynik utrzymuje się do 3 miesięcy (czas życia erytrocytów 120 dni - 3 miesiące)
  • dodatni wynik testu antyglobulinowego choroby autoimmunologiczne trwa miesiącami, a nawet latami

Norma

  • bezpośredni test Coombsa - negatywny
  • pośredni test Coombsa - negatywny

Jakościowo wynik pozytywny mierzony jest liczbą plusów od jednego do czterech (+, ++, +++, ++++), a ilościowo w formie cyfrowej - 1:16, 1:256 itd.


Wady testu antyglobulinowego

  • nie może określić siły wiązania antygenu z przeciwciałem
  • nieznana liczba związanych przeciwciał
  • nie określa rodzaju przeciwciała
  • pozytywny test Coombsa nie pomoże ustalić przyczyny
  • 0,5% zdrowi ludzie Posiadać próbka pozytywna Coombsa bez żadnych dowodów na anemię hemolityczną
  • nie nadaje się do monitorowania skuteczności leczenia, ponieważ nie wskazuje aktywności hemolizy erytrocytów

Dodatkowe badania

  • badanie krwi dla
  • mikroskopia rozmazu krwi
  • — ( , ), ( , )
  • — 2. 5-10-20 lat temu miałem transfuzję krwi, czy powinienem powiedzieć o tym lekarzowi teraz przed kolejną transfuzją krwi?

    Tak. Fakt, że otrzymałeś transfuzję krwi, musi być znany Twojemu lekarzowi, ponieważ wpływa to teraz na prawidłową interpretację wyników badania. Otrzymując cudzą (choć wielokrotnie badaną) krew, zawsze istnieje możliwość, że Twój organizm wytworzy przeciwciała przeciwko przetoczonej krwi. To właśnie te przeciwciała będą zły wpływ o stanie zdrowia. Przy kolejnych transfuzjach krwi lekarz powinien wiedzieć, że otrzymałeś już transfuzje, co oznacza, że ​​był czas na syntezę przeciwciał. Dla kobiet w ciąży ta informacja jeszcze bardziej aktualne.

    3. Jeśli istnieje niedopasowanie czynnika Rh między matką a dzieckiem, czy wszystkie dzieci będą chore?

    Zależy od tego, czy dziecko jest Rh-dodatnie czy ujemne (RhD). Nosiciele grup krwi I, II, III i IV mogą być zarówno Rh-dodatnie, jak i ujemne. W sytuacji, gdy matka jest Rh-ujemna, a dziecko Rh-dodatnie, przeciwciała będą produkowane już przy pierwszej ciąży, ale dopiero po pierwszym porodzie (lub przerwaniu ciąży) dojdzie do bezpośredniego kontaktu krwi matki matka i dziecko. Wdrożenie efektu hemolitycznego przeciwciał nastąpi dopiero przy drugim i następne narodziny prowadzące do choroby hemolitycznej u noworodków.

    Każda kobieta z ujemny czynnik Rh należy dokładnie zbadać w czasie ciąży i po porodzie leczenie zapobiegawcze aby zapobiec pojawieniu się przeciwciał i dalszym powikłaniom.

    4. Czy w czasie ciąży konieczna jest znajomość grupy krwi męża przed wykonaniem testu Coombsa?

    Konieczne jest nie tylko poznanie, ale także sprawdzenie grupy krwi biologicznego ojca dziecka w czasie ciąży.

    Dane

    • zaproponowany po raz pierwszy w Cambridge w 1945 r
    • próg czułości - co najmniej 300 utrwalonych cząsteczek przeciwciał na jednym erytrocytach
    • ilość przeciwciał wywołujących hemolizę - indywidualnie dla każdej osoby (od 16-30 do 300)
    • dynamika innych wskaźniki laboratoryjne niedokrwistość hemolityczna (hemoglobina, bilirubina, retikulocyty) może wrócić do normy, a odczyn Coombsa pozostanie na tym samym poziomie

    Test Coombsa był ostatnio modyfikowany: 16 marca 2018 r. przez Marii Bodyan

Reakcja aglutynacji do oznaczania przeciwciał anty-Rhesus (pośrednia reakcja Coombsa)stosować u pacjentów z hemolizą wewnątrznaczyniową. U niektórych z tych pacjentów stwierdza się przeciwciała anty-Rhesus, które są niekompletne, monowalentne. Oddziałują specyficznie z erytrocytami Rh-dodatnimi, ale nie powodują ich aglutynacji. Obecność takich niekompletnych przeciwciał określa się w pośredniej reakcji Coombsa. W tym celu do układu przeciwciała anty-Rh + erytrocyty Rh-dodatnie dodaje się surowicę antyglobulinową (przeciwciała przeciwko ludzkim immunoglobulinom), co powoduje aglutynację erytrocytów. Wykorzystując reakcję Coombsa diagnozuje się stany patologiczne związane z wewnątrznaczyniową lizą erytrocytów pochodzenia immunologicznego, na przykład chorobę hemolityczną noworodka: erytrocyty Rh-dodatniego płodu łączą się z niekompletnymi przeciwciałami przeciwko krążącemu we krwi czynnikowi Rh, który przekroczył łożysko od matki Rh-ujemnej.

Mechanizm. Trudność w wykryciu przeciwciał niekompletnych (jednowartościowych) wynika z faktu, że przeciwciała te, wiążąc się z epitopami określonego antygenu, nie tworzą struktury sieciowej, a reakcja między antygenami a przeciwciałami nie jest wykrywana przez aglutynację, precypitację lub inne testy. Aby zidentyfikować utworzone kompleksy antygen-przeciwciało, należy zastosować dodatkowe systemy testowe. W celu wykrycia niekompletnych przeciwciał, np. antygenu Rh erytrocytów w surowicy krwi kobiety ciężarnej, reakcję przeprowadza się dwuetapowo: 1) erytrocyty zawierające antygen Rh dodaje się do dwukrotnego rozcieńczenia badanej surowicy i utrzymywano w temperaturze 37°C przez godzinę; 2) do erytrocytów dokładnie wypłukanych po pierwszym etapie dodać króliczą antyludzką surowicę antyglobulinową (we wstępnie miareczkowanym rozcieńczeniu roboczym). Po inkubacji przez 30 minut w temperaturze 37°C wyniki ocenia się na podstawie obecności hemaglutynacji (reakcja pozytywna). Konieczna jest kontrola składników odczynu: 1) surowica antyglobulinowa + erytrocyty ewidentnie uczulone swoistymi przeciwciałami; 2) erytrocyty traktowane surowicą normalną + surowicą antyglobulinową; 3) Erytrocyty Rh-ujemne traktowane surowicą testową + surowicą antyglobulinową.

50. Bierna reakcja hemaglutynacji. Mechanizm. Składniki. Aplikacja.

Reakcja pośredniej (biernej) hemaglutynacji(RNGA, RPGA) polega na wykorzystaniu erytrocytów (lub lateksu) z zaadsorbowanymi na ich powierzchni antygenami lub przeciwciałami, których interakcja z odpowiednimi przeciwciałami lub antygenami surowicy krwi pacjentów powoduje sklejanie się erytrocytów i wypadanie na dno rurka lub komórka w postaci zapiekanego osadu.

Składniki. Do produkcji RNHA można wykorzystać erytrocyty owiec, koni, królików, kurczaków, myszy, ludzi i innych, które są zbierane do przyszłego użytku, traktowane formaliną lub aldehydem glutarowym. Zdolność adsorpcyjna erytrocytów wzrasta, gdy traktuje się je roztworami garbników lub chlorku chromu.

Antygeny polisacharydowe mikroorganizmów, ekstrakty szczepionek bakteryjnych, antygeny wirusów i riketsji oraz inne substancje mogą służyć jako antygeny w RNGA.

Erytrocyty uczulone przez AG nazywane są erytrocytami diagnostycznymi. Do przygotowania erytrocytów diagnostycznych najczęściej stosuje się erytrocyty barankowe, które mają wysoką aktywność adsorpcyjną.

Aplikacja. RNHA służy do diagnozowania chorób zakaźnych, oznaczania hormonu gonadotropowego w moczu po ustaleniu ciąży, wykrywania nadwrażliwości na leki, hormony iw niektórych innych przypadkach.

Mechanizm. Reakcja pośrednia hemaglutynacja(RNGA) ma znacznie wyższą czułość i swoistość niż reakcja aglutynacji. Służy do identyfikacji patogenu po jego budowie antygenowej lub do wskazania i identyfikacji produktów bakteryjnych - toksyn w badanym materiale patologicznym. W związku z tym stosuje się standardowe (handlowe) przeciwciała diagnostyczne dla erytrocytów, otrzymane przez adsorpcję swoistych przeciwciał na powierzchni garbowanych (traktowanych garbnikami) erytrocytów. W studzienkach plastikowych płytek przygotowuje się kolejne rozcieńczenia badanego materiału. Następnie do każdej studzienki dodaje się równą objętość 3% zawiesiny erytrocytów obciążonych przeciwciałami. Jeśli to konieczne, reakcję umieszcza się równolegle w kilku rzędach studzienek z erytrocytami obciążonymi przeciwciałami o różnej specyficzności grupowej.

Po 2 godzinach inkubacji w temperaturze 37°C wyniki uwzględnia się oceniając wygląd osad erytrocytów (bez wstrząsania): przy reakcji ujemnej na dnie studzienki pojawia się osad w postaci zwartego krążka lub pierścienia, z pozytywna reakcja- charakterystyczny koronkowaty osad erytrocytów, cienki film o nierównych krawędziach.