Serologinių reakcijų kompleksui reikalingas aukštos kvalifikacijos laboratorijos personalas, atitinkama laboratorinė įranga ir reikšminga suma ingridientai. Serologinių reakcijų gausa paaiškinama tuo, kad įrodytas blyškių treponemų antigeninis mozaikiškumas, o dėl to sifiliu sergančio paciento kraujo serume yra atitinkamų antikūnų (reaginų, komplementą fiksuojančių) buvimas. ir polisacharidiniai antikūnai, agliutininai, imobilizinai, antikūnai, sukeliantys imuninę fluorescenciją ir kt.). Kiekvienoje sifilio stadijoje vyrauja tam tikri antikūnai, todėl reakcijos su vienus antikūnus jau gali būti teigiamos, o su kitais – dar neigiamos. Be to, standartinių seroreakcijų santykinis specifiškumas skatina, siekiant išvengti diagnostinių klaidų, naudoti ne vieną iš šių reakcijų, o jų kompleksą. Nepaisant tokių Kompleksinis požiūris atliekant serologinį paciento tyrimą, reikia atsiminti, kad kai kuriais atvejais net visas kompleksas gali duoti klaidingai teigiamą, nespecifinį rezultatą. Klaidingai teigiamos serologinės reakcijos kraujyje stebimos sergant maliarija, šiltine ir pasikartojančia karštine, raupsais, brucelioze, pneumonija, skarlatina, piktybiniai navikai, menstruacijų metu, 2 savaites iki gimdymo ir per 3 savaites po gimdymo, išgėrus alkoholio, riebus maistas, kai kurie vaistai, sergant lėtinėmis pūlingi procesai, kepenų ligos ir kt. Nustatyta, kad didėjant pacientų amžiui, daugėja nespecifinių klaidingai teigiamų standartinių seroreakcijų rezultatų. Visa tai verčia labai atsargiai vertinti pacientų serologinio tyrimo rodiklius ir vertinti seroreakciją kaip vertingą, bet pagalbinę metodiką, patvirtinančią klinikinio vaizdo duomenis, kitų tyrimų rezultatus. laboratoriniai tyrimai(dėl blyškios treponemos, cerebrospinalinis skystis), akistatos rezultatai.
Wassermano reakciją (RV) nustatyti sunku. Jį specialiose serologinėse laboratorijose gamina specialistai serologai. Jis pagrįstas komplemento fiksavimo reiškiniu. Nustatant reakciją, naudojami tiek specifiniai blyškios treponemos antigenai, tiek nespecifiniai antigenai (sveikų gyvūnų organų ekstraktai, pavyzdžiui, galvijų širdies raumenys). Komplemento surišimą gamina kompleksas (lipoidinis antigenas ir tiriamojo serumo reaginas). Norint nurodyti susidariusį kompleksą, naudojama hemolizinė sistema (avies eritrocitai ir hemolizinis serumas). Nustatant RV su kardiolipino antigenu, padidėja jo jautrumas. Be to, RS modifikacija šaltyje (Colmer reakcija) pasirodė jautresnė. Colmerio reakcijos bruožas yra dviejų fazių temperatūros sąlygos(pirmoji fazė - 18,20 ° C temperatūroje 30 minučių, antroji - šaldytuve +4. + 6 ° C temperatūroje 16-20 valandų), kurioje vyksta komplemento fiksacija. Kolmerio reakcija užfiksuoja reaginus tuose serumuose, kur dėl mažos jų koncentracijos įprastu metodu tiekiamas RV duoda neigiamą rezultatą. Tačiau, pasak daugumos sifilidologų, Colmerio ir RV reakcija su kardiolipino antigenu, su jo didelis jautrumas savo specifiškumu prastesnis už kitas RV modifikacijas.
Gavus ryškiai teigiamus Wassermano ir Kolmerio reakcijų rezultatus, jie dedami su mažėjančiomis tiriamojo serumo dozėmis, kad būtų nustatytas reaginų titras (Boas kiekybinis metodas). Kiekybinis reaginų nustatymas padeda atskirti ankstyvą ir vėlyvą latentinį sifilį, taip pat lengviau įvertinti antisifilinio gydymo veiksmingumą: sumažėjęs reaginų titras rodo gydymo efektyvumą.
Nuosėdinės reakcijos (Kana ir citocholinis Zaks-Vitebsky) yra daug paprastesnės, palyginti su RV. Jų gamybai naudojami labiau koncentruoti antigenai, kuriuose yra didelis skaičius cholesterolio. Jas sustingus, susidaro plika akimi aiškiai matomos nuosėdos (kartais rezultatams įvertinti naudojamas padidinamasis stiklas arba agliutininoskopas).
RV, Colmerio reakcijos ir nuosėdų reakcijų pozityvumo laipsnis rodomas pliusų arba kryželių skaičiumi: 4+ (labai teigiamas), 3+ (teigiamas), 2+ arba 1+ (silpnai teigiamas), ± (abejotinas), - (neigiamas). Nustatant kiekybinę Wasserman arba Colmer reakciją, nurodomas serumo praskiedimas, kuriam esant vis tiek gaunamas ryškiai teigiamas rezultatas (pavyzdžiui, 1:5, 1:10, 1:20 ir kt.). Remiantis daugybe duomenų, Kahno reakcija duoda tuos pačius rezultatus su Wassermano reakcija 93–96% stebėjimų (jos nespecifiniai rezultatai registruojami 1,6%), o Sachs-Vitebsky reakcija - 95–99% ( jos nespecifiniai rezultatai fiksuojami 1.6 proc.. 3 proc. stebėjimų).
Dėl didelio tūrio profilaktiniai tyrimai ir CSR atlikimo sudėtingumas, šiuo metu plačiai naudojamas greitas sifilio serodiagnostikos metodas, kai nereikia imti kraujo iš venos. Bet kuris laboratorijos technikas, paimantis kraują klinikinei analizei, taip pat paims kraują pagreitintam sifilio tyrimui. Be to, jam tereikia atskiru kapiliaru nustatyti ESR ir registruoti šios mikroreakcijos rezultatus.
Pagreitintas sifilio serodiagnostikos metodas. (Pateikta remiantis metodiniu raštu, sudarytu TsNIKVI mikrobiologijos skyriaus. Autoriai N.M. Ovčinikovas ir T.I. Milonova.)
Mikroreakcijos nustatymo technika. Kraujas imamas iš piršto galiuko, kaip ir tiriant ESR; tik reikia, kad sifilio tyrimo laborantas paimtų dar vieną kapiliarą, atitinkamai padidindamas natrio citrato kiekį. Norėdami tai padaryti, sudrėkindami Panchenkovo kapiliarines pipetes, iki 75 žymės įpilkite 5% natrio citrato tirpalo ir supilkite jį į mėgintuvėlį. Tada surenkami trys kraujo kapiliarai ir supilami į tą patį mėgintuvėlį, sumaišomi. Kraujas paimamas į vieną kapiliarą ESR, o kraujas, likęs mėgintuvėlyje, pasibaigus paėmimui, paliekamas 1 val. kambario temperatūra po to seka tyrimas.
Įranga: Panchenkov kapiliarinės pipetės (jų skaičius priklauso nuo darbo kiekio), organinio stiklo lėkštelės su duobutėmis ir plokščiu dugnu 1 cm skersmens, Pasteur pipetės, mėgintuvėliai 8-10 cm ilgio ir 1-1,2 cm skersmens, Jenner rašikliai .
Ingridientai: kardiolipino antigenas mikroreakcijai, natrio chloridas (chemiškai grynas), cholino chloridas, natrio citratas, mertiolatas (nebūtina; reikia tik jei antigenas laikomas ilgiau nei 5 dienas).
Tirpalai: 0,85% izotoninis natrio chlorido tirpalas; 10% cholino chlorido tirpalas, praskiestas izotoninis druskos tirpalas natrio chloridas (ruošiant tirpalą reikia atsiminti, kad cholinas yra higroskopinis, todėl atidarius buteliuką su vaistu, būtina tuoj pat ištirpinti visus miltelius). Jei tirpalas ruošiamas pridedant 0,01% mertiolato tirpalo, jį galima laikyti metus; 5% natrio citrato tirpalas.
Kardiolipino antigeno emulsijos paruošimas.
Serologinė sifilio diagnozė
Sifilio diagnozė pagrįsta klinikiniais ir laboratoriniais duomenimis. Sifilio diagnozė nustatoma tik laboratoriškai patvirtinus, t. y. nustačius blyškią treponemą kietojo šanko išskyros metu, erozines papules pirminėje ir. antrinis sifilis, ir serologinių tyrimų duomenis. Serologinės reakcijos – itin vertingas metodas ne tik sifilio diagnozei patvirtinti, bet ir jo eigos dinamikai gydymo įtakoje stebėti bei ligos išgydymui nustatyti.
Standartiniai serologinių reakcijų komplekso (CSR) komponentai, skirti nustatyti sifilinė infekcijašiuo metu papildyta treponeminėmis reakcijomis: RIBT (blyškios treponemos imobilizacijos reakcija), RIF (imunofluorescencinė reakcija). Wassermano reakcija (RW, PB) pagrįsta komplemento fiksacijos reiškiniu. Jo formulavimui naudojamas kardiolipino antigenas, kuris yra cholesterolio alkoholio ekstraktas iš galvijų širdies raumenų ir turi panašių antigeninių savybių su blyškia treponema.
Wassermano reakcija. Komplementą suriša kompleksas (lipoidinis antigenas ir tiriamojo serumo reaginas). Norint nurodyti susidariusį kompleksą, naudojama hemolizinė sistema (avies eritrocitai ir hemolizinis serumas).
Be komplemento fiksavimo reakcijos su kardiolipinu ir treponeminiais antigenais, CSR grupė apėmė reakciją ant stiklo (ekspresinis metodas). RV hemolizės sunkumą rodo pliusai:
smarkiai teigiamas - 4 +; teigiamas - 3 +; silpnai teigiamas - 2 + arba 1 +; neigiamas - -.
Svarbus ir reakcijos formulavimas kiekybiniu metodu, t.y. su įvairiais serumo praskiedimais (1:10; 1:20 ir kt. iki 1:320). Standartinių serologinių reakcijų gausa paaiškinama blyškių treponemų antigeniniu mozaikiškumu, todėl pacientų kraujo serume atsiranda atitinkamas antikūnų (komplementų surišimo, agliutininų, precipitinų, imobilizinų, imuninę fluorescenciją sukeliančių antikūnų ir kt.) gausa. . Kiekvienoje sifilio stadijoje gali vyrauti tam tikri antikūnai, todėl reakcijos su kai kuriais antigenais jau gali būti teigiamos, o su kitais – vis dar neigiamos. Be to, dėl standartinių serologinių reakcijų santykinio specifiškumo būtina naudoti ne vieną iš jų, o reakcijų kompleksą, kad būtų išvengta diagnostinių klaidų. ĮSA tampa teigiamas 3-osios savaitės pabaigoje arba 4-ą savaitę po to, kai atsiranda kietas šansas. Šios reakcijos yra labai teigiamos ir reikšmingai praskiesta serume beveik visiems pacientams, kuriems yra antrinis šviežias (98–99 %), antrinis pasikartojantis (100 %), tretinis aktyvumas (70–80 %) ir tretinis latentinis (50–60 %). sifilis. Tačiau CSR nėra griežtai specifinis sifilio reakcijos kompleksas. Jie gali būti teigiami pacientams, sergantiems raupsais, tuberkulioze, brucelioze, maliarija, raudonąja vilklige, taip pat plaučių uždegimu, kepenų ligomis, onkologinės ligos, pavartojus alkoholio, riebaus maisto, nėštumo metu, ypač antroje pusėje, taip pat pirmąsias 2 savaites. po gimdymo. Su amžiumi nespecifinių klaidingai teigiamų CSR rezultatų daugėja.
Norint pagrįstai diagnozuoti sifilį, atsižvelgiama į CSR duomenis, klinikinius duomenis, blyškios treponemos tyrimo rezultatus pirminio ir antrinio sifilio apraiškose, kitų serologinių reakcijų duomenis - RIBT ir RIF.
RIBT yra pagrįstas blyškios treponemos imobilizacijos reiškiniu antikūnais, tokiais kaip imobilizinai, esantys pacientų, sergančių sifiliu, kraujo serume. Kaip RIBT antigenas, naudojama blyškios treponemos suspensija, gauta iš triušio sifilinio orchito audinių. Blyškios treponemos, į jas įpylus paciento kraujo serumo, nustoja judėti, t.y., imobilizuojamos. Reakcijos rezultatai vertinami procentais: teigiamas RIBT imobilizacijos metu nustatomas nuo 51 iki 100% blyškios treponemos, silpnai teigiamas - nuo 31 iki 50%, abejotinas - nuo 21 iki 30% ir neigiamas - nuo 0 iki 20%. . Reakcija vyksta anaerobiozės sąlygomis. Imobilizinai pacientų kraujo serume atsiranda vėliau nei kiti antikūnai, todėl RIBT tampa teigiamas vėliau nei CSR ir RIF. RIBT yra specifiškiausia iš esamų reakcijų į sifilį. Pagrindinis jos tikslas yra atpažinti klaidingai teigiamus rezultatus nustatant CSR. Tai ypač svarbu pacientams, kuriems sifilis pasireiškia latentiškai be išorinių apraiškų, bet su pažeidimu. Vidaus organai arba nervų sistema. RIBT yra ypač svarbus atpažįstant klaidingai teigiamus nėščių moterų CSR rezultatus. Reikėtų prisiminti, kad nespecifinis teigiamas RIBT rezultatai galimas pacientams, sergantiems sarkoidoze, raudonąja vilklige, tuberkulioze, kepenų ciroze ir kt. Tačiau sergant šiomis ligomis RIBT yra silpnai teigiamas (nuo 30 iki 50%) ir niekada nepasiekia 100%). Gydant antibiotikais, RIBT rezultatai tampa neigiami. Todėl tyrimai naudojant RIBT atliekami tik po 7 dienų, jei buvo skirti vandenyje tirpūs antibiotikai, ir 25 dienas po gydymo durantiniais antibiotikais pabaigos.
RIFAS- jautresnė reakcija, todėl ji teigiama jau pirminiu seronegatyviu sifilio periodu 80 proc. Pagal specifiškumą RIF nusileidžia RIBT, kuris neleidžia juo pakeisti RIBT, nors jo technika daug paprastesnė. Reakcija yra kelių modifikacijų: RIF-10, RIF-200 ir RIF-abs. (absorbuotas). RIF-10 yra jautresnis, o RIF-200 ir RIF-abs. konkretesnis. Reakcijos principas yra tas, kad specifinis antigenas (treponema pallidum) yra derinamas su paciento kraujo serumu (antikūnais) ir anti-rūšiniu fluorescenciniu serumu (triušio anti-žmogaus globulino serumas, derinamas su fluoresceinu, medžiaga, kuri švyti ultravioletinėje šviesoje). . Esant teigiamai reakcijai, fluorescenciniame mikroskopu galima pamatyti gelsvai žalią blyškių treponemų švytėjimą, nes jas supa prie jų prilipę fluorescenciniai antikūnai. Liuminescencijos laipsnis įvertinamas pliusais, kaip ir CSR. teigiama reakcija Nurodomi 4+, 3+ ir 2.+. Kai liuminescencijos laipsnis yra 1 + ir liuminescencijos nėra, reakcija laikoma neigiama. Sergant antriniu sifiliu, RIF teigiamas beveik 100 % atvejų. Tai visada teigiama latentinis sifilis(99-100 proc.), o sergant tretinėmis formomis ir įgimtu sifiliu jis teigiamas 95-100 proc.
Express metodas (mikroreakcija ant stiklo).Šioje reakcijoje, kaip ir CSR, naudojamas kardiolipino antigenas, kurio vienas lašas specialios stiklinės plokštelės šulinėliuose sumaišomas su 2-3 lašais tiriamojo kraujo serumo. Reakcija vyksta nusodinimo mechanizmu. Bendra reakcijos trukmė yra 10-40 minučių. Rezultatas vertinamas pagal kritulių kiekį ir dribsnių dydį; reakcijos sunkumas nurodomas pliusais: 4 +, 3 + ir kt., taip pat CSR. Mikroreakcija ant stiklo yra mažiau specifinė pacientams, sergantiems sifiliu, nei RV, tačiau jautrumas yra šiek tiek didesnis. Netiesa teigiamų rezultatų naudojant greitąjį metodą, jie gaunami dažniau nei naudojant RV. Todėl šį metodą leidžiama naudoti tik kaip atrankos reakciją atliekant masinius gyventojų tyrimus, klinikinį tyrimą ir pacientų tyrimą somatinių ligoninių klinikinės diagnostikos laboratorijose. Galutinė sifilio diagnozė remiantis šiuo metodu yra draudžiama. Tik greitasis metodas negali būti naudojamas apžiūrint donorus, nėščias moteris, taip pat stebint po gydymo sifiliu sergančius pacientus.
Sifiliui diagnozuoti gali būti naudojami ir kiti metodai: susietas imunosorbentų tyrimas(ELISA) su mikroprecipitacijos reakcija (RPM) arba pasyviąja hemagliutinacijos reakcija (RPHA) su RMP (įskaitant užsienio analogai RMP – RPR arba VDRL).
Atliekant klinikinę ir serologinę kontrolę po specifinis gydymas(terapijos efektyvumui nustatyti) leidžiamas kiekybinis RMP tyrimas (reakcijos titro dinamikoje tyrimas).
fermentinis imunologinis tyrimas (ELISA,Eliza). Reakcijos principas – kietosios fazės nešiklio paviršiuje adsorbuotą sifilinį antigeną sujungti su tiriamojo kraujo serumo antigenu ir naudojant fermentu pažymėtą antirūšinį imuninį serumą aptikti specifinį antigeno-antikūno kompleksą. ELISA jautrumas ir specifiškumas yra panašūs į RIF.
Pasyviosios hemagliutinacijos (RPHA) reakcija.Šios reakcijos makromodifikacija vadinama TRHA, mikromodifikacija – MHA-TR, automatizuota versija – AMHA-TR.
IgM serologija. IN pastaraisiais dešimtmečiais Antikūnų susidarymo dinamika sergančiųjų sifiliu organizme yra plačiai tiriama prieš gydymą, jo metu ir po jo. Taip yra dėl to, kad pacientams, kurie visiškai gydomi nuo sifilio, teigiami specifinių serologinių reakcijų dėl sifilio rezultatai išlieka ilgą laiką, o tai apsunkina pacientų išgydymo klausimo sprendimą, taip pat ankstyvą diagnozę. įgimtas sifilis. Taip pat sunku diferencinė diagnostika ligos pasikartojimas ir pakartotinė infekcija. Tiriant antikūnus sifiliu sergančių pacientų organizme, nustatyta, kad po užsikrėtimo pirmieji gaminasi specifiniai IgM, kurie nustatomi jau antrą savaitę po užsikrėtimo ir maksimalią koncentraciją kraujyje pasiekia 6-9 savaitę. . Po 6 mėn po gydymo pabaigos daugumos pacientų kraujyje jie nenustatomi. Ketvirtą savaitę po užsikrėtimo organizmas pradeda gaminti specifinį IgG. Šio tipo imunoglobulinas dauguma nustatoma praėjus 1-2 metams po užsikrėtimo. Reikia pažymėti, kad specifinis IgM nustoja gamintis, kai antigenas išnyksta iš organizmo, o IgG sekreciją tęsia atminties ląstelių klonai. Be to, didelės IgM molekulės nepraeina per placentą iš motinos į vaisius, todėl pagal jų buvimą vaiką sprendžia, kad jis užsikrėtęs blyškia treponema. Atsižvelgiant į tai, kad specifinio IgM koncentracija kraujyje laikui bėgant natūraliai mažėja, šių antikūnų titro padidėjimas gali būti pagalbinis ligos atkryčio ar pakartotinės infekcijos požymis.
Sifilis yra pavojingas venerinė liga, kurią sukelia blyški treponema, perduodama lytiniu keliu ir gali paveikti visus kūno organus ir sistemas. Šiuo metu val savalaikė diagnostika ir atlikus terapiją, tapo įmanoma visiškai išgydyti sifilį.
Šios ligos diagnozė pagrįsta laboratoriniais ir klinikiniais duomenimis.
Serologinių reakcijų į sifilį tipai
Tarp laboratorinių tyrimų ypač vertinama serologinė analizė, kuri reikalinga ne tik ligai diagnozuoti, bet ir ištirti. bendras vaizdasįtakos gydomosios priemonės apie ligą, tiriant gydymo veiksmingumą.
Serologiniai tyrimai dėl sifilio tapo atskira medicinos šaka. Reikia pažymėti, kad sukurta Įvairių tipų tokios diagnostikos, kurios oficialiai pripažįstamos daugelyje šalių. Tačiau labai svarbu, kad gydytojas turėtų pakankamai patirties serologijos srityje, kurios reikia norint teisingai interpretuoti rezultatus.
Mūsų šalies erdvėje serologiniam sifilio tyrimui jie naudojami vadovaudamiesi instrukcija(patvirtinta 1995 m.):
1. CSR (serologinių reakcijų kompleksas). Į šį sąrašą įtraukta treponemalinių, kardiolipino antigenų jungimosi reakcija su komplementais. Taip pat nuosėdų mikroreakcija su kardiolipino antigenu;
2. Treponeminės reakcijos. Jų sudėtyje naudojama blyškios treponemos reakcija ir imunofluorescencijos reakcija.
Šis nedidelis privalomų priemonių sąrašas serologinė analizė sifilis turi skirtingą „jautrumą“, specifiškumą ir yra rekomenduojamas griežtai atsižvelgiant į kiekvieną atskirą atvejį ir užduotį. Dabar pažiūrėkime atidžiau.
Kritulių mikroreakcija. Savybės ir rezultatai
Jis naudojamas masiniam gyventojų patikrinimui dėl sifilio. Yra atmainų – mikroreakcija ant stelos, greitasis sifilio diagnostikos metodas, kuriam naudojamas ir tiriamųjų kraujo serumas, ir plazma. Ši reakcija atsiranda kontaktuojant su specifiniu kardiolipino antigenu.
Paprastai analizės rezultatas vertinamas kokybiškai – 4+, 3+, 2+, neigiamai. Savo ruožtu greitasis metodas leidžia gauti rezultatą per pusvalandį, o tyrimui reikės tik kelių lašų kraujo plazmos, kuri paimama iš paciento piršto.
Lygiai taip pat tiriami tie asmenys, kurie yra užsiregistravę venerologijos skyriuje. Jei šis analizės metodas taikomas lokaliai, atskirai, tai yra tik atrankinis testas.
Pagal greitąjį testą tiksliai pasakyti, kad pacientas serga sifiliu, neįmanoma, tačiau gavęs teigiamą rezultatą, gydytojas gali parašyti siuntimą pas dermatovenerologą. Šis specialistas atliks tolesnį tyrimą, naudodamas kitus metodus - RIF, USR, RIBT. Taip pat verta paminėti, kad skubi analizė nėra tikrinama nėščioms moterims, donorams, nes daugeliu atvejų gaunamas klaidingas teigiamas rezultatas. Dažnai greitąjį testą gali atlikti medicinos darbuotojai, išklausę specialų mokymą, tačiau laborantai privalo ištirti analizę ir nustatyti rezultatus.
Komplimento privalomas atsakymas arba RSK
Norint patvirtinti pirminę diagnozę (jei greitasis testas ir MP yra teigiami), reikalinga reakcija su kardiolipinu ir treponeminiais antigenais. Tiesa, tokią procedūrą rekomenduojama taikyti, jei yra aktyvių apraiškų, arba tiriamieji turėjo lytinių santykių su užsikrėtusiu sifiliu. Be to, RSK diagnozuojami žmonės, kuriems įtariamas latentinis (latentinis) sifilis. Natūralu, kad atsakas į komplimento surišimą taip pat skiriamas siekiant nustatyti terapijos efektyvumą.
Ištyrimui reikia 5-7 mililitrų kraujo iš kubitalinės venos. Kūdikiams kraujas analizei imamas iš laikinosios venos arba iš pjūvio ant kulno.
Kraujo mėginiai iš paciento turi būti imami „tuščiu skrandžiu“. Tada gydytojas palieka mėginį sausame, švariame mėgintuvėlyje 2-3 valandas kambario temperatūroje (tai būtina krešėjimui). Serologinių reakcijų komplekso nustatymas atliekamas specialiai tam paruoštose laboratorijose.
Aprašytos reakcijos veikimo principas paaiškinamas tuo, kad spėjamų sifiliu sergančių pacientų kraujo serume randami reaganai gali reaguoti su įvairiais antigenais. Susidarę kompleksai klasifikuoja medžiagą, įtrauktą į reakciją. CSR indeksuoti naudojama hemolizinė sistema (t.y. naudojamas avino eritrocitų mišinys su hemoliziniu serumu).
Jei atsiranda CSR, raudonieji kraujo kūneliai nusėda ir toks procesas pastebimas plika akimi. Reakcijos sunkumą nustato gydytojas pagal šią klasifikaciją:
- 4+ Labai teigiamas.
- 3+ Teigiamas.
- 2+, 1+. Silpnai teigiamas.
- Neigiamas.
Pažymėtina, kad be kokybinio vertinimo, naudojamas ir kiekybinis. Tokia vertinimo sistema reikalinga norint nustatyti sifilio išsivystymo stadiją ir gydymo veiksmingumą.
Pirmą kartą tokį tyrimo principą 1906 metais panaudojo Neisseris, Brookas ir Wassermanas. Atlikdami antigeno „vaidmenį“, jie naudojo vandeninis ekstraktas kepenys. Vėliau tokia reakcija buvo pradėta keisti kitais antigenais, todėl ji tapo dar jautresnė. Šiuo metu reakcijai nustatyti rekomenduojami šie antigenai:
- Cordylipil antigenas (galvijų širdies ekstraktas su lecitino ir cholesterolio pertekliumi).
- Treponeminis antigenas (suspensija iš apatogeninių kultivuotų treponemų, apdorotų ultragarsu).
Šių antigenų surišimo reakcija pasiekia teigiamą rezultatą per dvi ar keturias savaites nuo panaudojimo momento ir palaipsniui didėja, pasiekdama maksimalų titrą, kuris stebimas, kai atsiranda antrinis šviežias sifilis. Tada konkrečių medžiagų titras palaipsniui mažėja, o su pasikartojanti forma sifilis, kaip taisyklė, neviršija 1:180 - 1:120. Tarp sergančiųjų tretiniu sifilio pasireiškimu aprašyta reakcija teigiama 70 proc.
Svarbu pažymėti, kad serologinių reakcijų kompleksas nėra išskirtinis sifilio žmogaus organizme rodiklis ir gali duoti nespecifinius (klaidingai teigiamus) rezultatus. Tiesa, taip nutinka, jei specialistas apžiūroje padarė klaidą – nekokybiška kraujo paėmimo procedūra, nešvarūs mėgintuvėliai, žema kvalifikacija ir pan.
Be to, klaidingai teigiamą rezultatą dažniausiai gauna pacientai, kenčiantys nuo raupsų, maliarija ir situacinių negalavimų. Taip pat gauti klaidinga diagnozė gali būti žmonės, sergantys tuberkulioze, kepenų ligomis ir vartojantys vaistus. Moterims klaidingai teigiama diagnozė gali būti nustatyta, jei pacientė yra nėščia arba turi kritinių dienų.
- Kūdikiams dešimtą gyvenimo dieną;
- Su karščiavimo reiškiniais per dvi savaites po gimdymo;
- Jei pacientas neseniai patyrė traumų, chirurginė intervencija, vakcinacija.
Ir viskas dėl to, kad tokių reiškinių metu vykstančios fizikinės ir cheminės reakcijos kraujo serume taip pat gali parodyti klaidingai teigiamą sifilio rezultatą.
RIF reakcija
Siekiant atskirti klaidingus teigiamus rezultatus nuo tikrųjų ĮSA tyrimo rezultatų, mūsų šalyje naudojami specifiniai serologiniai tyrimai, tokie kaip RIF ir RIBT. Taip pat šis tyrimo metodas rekomenduojamas diagnozuojant ligos formą bei įtarus sifilinę infekciją.
Norėdami atlikti šią procedūrą, jums reikės 5-10 ml kraujo, kurį taip pat galima paimti iš kubitalinės venos „tuščiu skrandžiu“. Gautas kraujas supilamas į sausą mėgintuvėlį, kurį laiką paliekamas krešėjimo kambaryje, o vėliau siunčiamas tirti į specialią laboratoriją, kuri yra dermatovenerologijos skyriuose.
RIF reakcijos pagrindas yra netiesioginis fluorescencinių antikūnų nustatymo metodas. Antigenas, prie kurio reikia prisijungti Ši byla tarnauja kaip ultragarsu gydomos blyškios treponemos suspensija. Taigi medžiaga fiksuojama ant stiklinių stiklelių, kur kartu su antirūšiniu fluorescenciniu serumu taip pat eksponuojama paciento kraujo medžiaga. Norint nustatyti rezultatą, jums reikės fluorescencinio mikroskopo, kuriuo specialistas įvertins treponemos liuminescencijos laipsnį. Manoma, kad esant teigiamam rezultatui, treponemos turi geltonai žalią liuminescencijos atspalvį, o šio proceso „galia“ įvertinama pliusais (nuo vieno iki keturių). Neigiamas rezultatas – treponemos nešviečia.
RIBT reakcija
Kita reakcija, padedanti diagnozuoti sifilį, yra RIBT, kurią 1949 m. pirmą kartą panaudojo Nelsonas ir Meyeris. Jo pagrindas yra imobilizuotų, blyškių treponemų reiškinys su antigenu iš paciento kraujo serumo, kuriame yra komplemento.
Kaip reakcijos antigenas naudojamos gyvos blyškios treponemos, gaunamos iš sifiliu užsikrėtusių triušių kraujo. Po mikroskopu skaičiuojamos mobilumo praradusios treponemos. Reakcijos rezultatas vertinamas procentais, kur:
- Neigiamas – 0–20 %
- Abejotina – 21-31 proc.
- Silpnai teigiamas – 31-50 proc.
- Teigiama - 51-100%.
Reakcija gali rodyti teigiamą rezultatą pirminės sifilio stadijos pabaigoje ir daugeliu atvejų rezultatas nekinta visuose ligos etapuose. Kartais RIBT yra teigiamas net visiškai pasveikus. Sergant tretiniu sifiliu, vidaus organų pažeidimais, įgimtu sifiliu, kai CSR tiksliai neparodo rezultatų, ši reakcija duoda tikrus rezultatus 98-100% atvejų. Beje, norint diagnozuoti latentinę, latentinę sifilio formą, reikalinga RIBT diagnostika.
RIBT gali parodyti klaidingai teigiamą rezultatą, jei ištirtame kraujyje yra treponeminių medžiagų elementų – antibiotikų, dėl kurių nespecifinis gyvų blyškių treponemų imobilizavimas. Todėl paimti kraują iš paciento, kuriam buvo paskirti antibiotikai, patariama ne anksčiau kaip po dviejų savaičių po gydymo antibiotikais pabaigos.
Cerebrospinalinio skysčio analizė
Dažnai serologinis tyrimas naudojamas ir norint tiksliai nustatyti nervų sistemos pažeidimo sifilio laipsnį. Tam naudojama paciento smegenų skysčio analizė. Taip pat šis tyrimas padės nustatyti baltymus, fermentinius elementus, rodančius patologijos vystymąsi, ir „palengvins“ gydytojui patikslinti diagnozę. Kaip jau spėjote, smegenų skystis imamas ne iš piršto, o juosmeninės punkcijos pagalba. Ši procedūra reikalauja, kad gydytojas būtų atsargus, laikytųsi visų taisyklių ir saugos priemonių, kad nepablogintų paciento padėties. Paprastai toks tyrimas skiriamas įtarus bet kokią centrinės nervų sistemos sifilio formą.
Sifilio analizė yra viena iš labiausiai paplitusių laboratorinių tyrimų. Sifilio tyrimai plačiai naudojami profilaktinių apžiūrų metu. Mikroskopijos pagalba nustatomas sifilio sukėlėjas -. Serologinių reakcijų pagalba patvirtinama sifilio diagnozė, nustatoma diagnozė latentinis sifilis, stebimas gydymo efektyvumas, nustatomas pacientų išgijimo rodiklis.
Sifilio diagnozė nustatoma remiantis klinikiniais duomenimis, sifilio sukėlėjų nustatymu medžiaginiuose mėginiuose ir diagnozės patvirtinimu serologiniais tyrimo metodais. Sifilio apraiškų yra daug ir įvairių, todėl ligą nustato įvairių specialybių gydytojai. Diferencinė diagnozė pirminis sifilis atliekama sergant įvairiomis ligomis.
Ryžiai. 1. Nuotraukoje pirminis pasireiškimas sifilis – kietasis šankras.
Antikūnai prieš blyškią treponemą ir serologinė diagnostika
Užsikrėtus sifiliu, paciento organizme susidaro antikūnai. Serologinė diagnostika padeda gydytojui ištirti antikūnų susidarymo dinamiką paciento, sergančio sifiliu, organizme. pradiniai etapai liga, gydymo laikotarpiu ir jį baigus, išspręsti paciento ligos pasikartojimo ar pakartotinio užsikrėtimo (reinfekavimo) klausimą, masinėmis medicininėmis sąlygomis diagnozuoti sifilį.
Antikūnai prieš blyškią treponemą IgM
IgM antikūnai yra pirmieji, kurie gaminami po infekcijos. Jie pradedami nustatyti serologinėmis reakcijomis nuo antros savaitės po užsikrėtimo. 6-9 ligos savaitę jų skaičius tampa didžiausias. Jei pacientas nebuvo gydomas, antikūnai išnyksta po šešių mėnesių. IgM antikūnai išnyksta po 1-2 mėnesių. po, po 3 - 6 mėn. - po vėlyvojo sifilio gydymo. Jei užregistruotas jų augimas, tai tarnauja arba rodo pakartotinį užsikrėtimą. IgM molekulės yra didelės ir pro placentą nepraeina vaisiui.
Antikūnai prieš blyškią treponemą IgG
Antikūnai IgG imunoglobulinai atsiranda pirmojo mėnesio pabaigoje (4 savaitę) nuo užsikrėtimo momento. Jų titras yra didesnis nei IgM titras. Po gydymo IgG išlieka gana ilgą laiką.
Nespecifiniai antikūnai
Yra daug serologinių reakcijų. Taip yra dėl antigeninio blyškios treponemos įvairovės. Sergančio žmogaus kraujo serume skirtingi etapai sifilio, be specifinių, susidaro ir tam tikri nespecifiniai antikūnai - agliutininai, komplementą fiksuojantys, imobilizinai, imuninę fluorescenciją sukeliantys antikūnai, precipitinai ir kt.. Serologinės reakcijos nespecifiniams antikūnams aptikti turi santykinį specifiškumą;reakcijos (CSR).
Klaidingai teigiami sifilio testai
Išskirtinis bruožas ne treponeminiai tyrimai sulaukia klaidingai teigiamų reakcijų. Reagin antikūnai, kurie žmogaus kraujyje gaminasi prieš kardiolipino antigeną, registruojami ne tik sergant sifiliu, bet ir sergant kitomis ligomis: kolagenoze, hepatitu, inkstų ligomis, tirotoksikoze, onkologinėmis ligomis, užkrečiamos ligos(raupsai, tuberkuliozė, bruceliozė, maliarija, šiltinės, skarlatina), nėštumo ir menstruacijų metu, vartojant riebų maistą ir alkoholį. Pastebima, kad su amžiumi klaidingai teigiamų reakcijų skaičius didėja.
Ryžiai. 2. Nuotraukoje matomas pirminis moterų sifilis.
Sifilio laboratorinė diagnostika naudojant serologinius tyrimus
Serologiniai sifilio tyrimai skirstomi į treponeminius ir netreponeminius.
1. Ne treponeminiai testai
Šioje tyrimų grupėje kaip antigenas naudojamas kardiolipino antigenas. Sifilio sukėlėjų lipidinių antigenų yra daugiausia. Jie sudaro 1/3 sausos ląstelės masės. Netreponeminių testų pagalba nustatomi reagino antikūnai, kurie gaminami prieš kardiolipino antigeną. Šiai grupei priklauso komplemento fiksavimo reakcija (RSKcard), mikroprecipitacijos reakcija (RMP), greitas plazmos reaginų nustatymas (RPR) ir kt. Naudojant ne treponeminius tyrimus, atliekama pirminė sifilio patikra (populiacijų grupių ištyrimas). o galimybė gauti rezultatus kiekybiniu variantu leidžia naudoti šiuos tyrimus gydymo efektyvumui stebėti. Teigiami ne treponeminių tyrimų rezultatai turėtų būti patvirtinti treponeminiais tyrimais. Išskirtinis ne treponeminių testų bruožas yra klaidingai teigiamų reakcijų atsiradimas.
2. Treponeminiai tyrimai
Atliekant treponeminius tyrimus naudojami treponeminės kilmės antigenai, išskirti iš treponema pallidum kultūros. Jų pagalba patvirtinami teigiami ne treponeminių tyrimų rezultatai. Į grupę įeina: RSKtrep – komplemento fiksavimo reakcija, RIF – imunofluorescencinė reakcija ir jos modifikacijos, RIT, RIBT – blyškios treponemos imobilizacijos reakcija, RPHA – pasyvioji hemagliutinacijos reakcija, ELISA – fermentinis imunologinis tyrimas.
3. Sifilio tyrimai naudojant rekombinantinius antigenus
Šios grupės testų antigenai gaunami genų inžinerijos būdu ir naudojami reakcijose – TPHA ir ELISA, imunoblotavimo (IB) analizėse ir imunochromatografinėje analizėje.
Ryžiai. 3. Sifiliui diagnozuoti naudojamas serologinių tyrimų rinkinys.
Sifilio diagnozė naudojant ne treponeminius tyrimus
Sifiliui nustatyti naudojami netreponeminiai tyrimai arba serologinių reakcijų kompleksas (CSR). Serologinė diagnostika bus taikoma nuo 5 savaitės nuo užsikrėtimo momento arba 2-3 savaites nuo užsikrėtimo. Antikūnai aptinkami beveik visiems pacientams, kuriems yra šviežių pirminių,. Serologinės reakcijos yra teigiamos 70-80% pacientų, sergančių tretiniu latentiniu sifiliu, 50-60% atvejų.
Serologinės reakcijos, naudojant ne treponeminius tyrimus, gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus.
Ryžiai. 4. Kraujo mėginių ėmimas sifilio tyrimui.
Komplemento fiksavimo reakcija (RSK kortelė, KSK su KA, Wasserman reakcija)
Prieš daugiau nei 100 metų A. Wassermano sugalvota Wassermano reakcija (RW, РВ) šiandien patyrė daugybę pokyčių, tačiau kaip duoklė tradicijai savo pavadinimą išlaikė iki šiol. Komplemento fiksacijos testas naudojant kardiolipino antigeną skirtas ne tik antikūnams aptikti, bet ir kiekybiškai atliekamas su skirtingais serumo praskiedimais, todėl juo galima stebėti gydymo efektyvumą. Mažas jautrumas ir specifiškumas, gaunami klaidingai teigiami rezultatai - neigiamos pusės tokio tipo tyrimai.
Wassermano reakcijos esmė yra tokia: antigenai, kurie naudojami formuojant Wassermano reakciją, jei žmogaus kraujyje yra antikūnų prieš sifilio sukėlėjus, komplimentu, su jais jungiasi. ir nusodinti. Reakcijos intensyvumas rodomas ženklu (+). Reakcija gali būti neigiama (-) – nėra nuosėdų, abejotina (mažos nuosėdos arba +), silpnai teigiama (++), teigiama (+++) ir ryškiai teigiama (++++).
Jautresnė yra modifikuota Wassermann reakcija – Kolmerio reakcija. Su jo pagalba antikūnai aptinkami serume, kur Wasserman reakcija davė neigiamą rezultatą.
Su aštriai teigiamomis reakcijomis, kiekybinis įvertinimas reagins, kuriam serumas naudojamas praskiedus nuo 1:10 iki 1:320, todėl galima naudoti ši rūšis tyrimai, skirti stebėti gydymo veiksmingumą. Pavyzdžiui, sumažėjęs antikūnų titras ir vėlesnis jų seronegatyvumas (gavimas neigiamų rezultatų), kalbama apie sėkmingas gydymas ligų.
Ryžiai. 5. Kraujo tyrimas dėl sifilio – Wasserman reakcija.
Kritulių mikroreakcija (MPR)
Masiniams tyrimams naudojama kritulių mikroreakcija atskiros grupės gyventojų, diagnozuojant sifilį ir stebint gydymo efektyvumą. Norint atlikti tokio tipo tyrimus, reikalingas nedidelis tiriamos medžiagos kiekis. Kritulių mikroreakcija pagrįsta imunologine antigeno-antikūno reakcija. Jei tiriamojo kraujo serume yra antikūnų, antigeno-antikūno kompleksas nusėda ir susidaro dribsniai. Reakcija atliekama specialios stiklo plokštės šuliniuose. Jis apskaičiuojamas pagal nusodintų nuosėdų intensyvumą ir dribsnių dydį (+), kaip Wassermano reakciją. Tiriant nėščias moteris, donorus ir stebėti gydymo veiksmingumą nenaudojama. VDRL ir RPR yra mikroreakcijų tipai.
Ryžiai. 6. Nusodinimo reakcijos vaizdas laše ant stiklo.
Ryžiai. 7. Kraujo tyrimas dėl sifilio – mikroprecipitacijos reakcija.
Ryžiai. 8. Rinkinys greitam plazmos reaginų nustatymui (Sifilio RPR tyrimas).
Visi teigiami testai gauti nespecifinių serologinių reakcijų metu reikalauja patvirtinimo specifinėmis reakcijomis – treponeminiais tyrimais.
Sifilio diagnozė naudojant treponeminius tyrimus
Atliekant treponeminius tyrimus, naudojami treponeminės kilmės antigenai. Jų neigiama pusė yra nesugebėjimas naudoti norint kontroliuoti gydymo veiksmingumą, gauti teigiamų rezultatų sergant spirochetoze ir nevenerinėmis treponematozėmis ir gauti klaidingai teigiamus rezultatus onkologinės ligos, raupsai, kai kurie endokrininė patologija. Tokie tyrimai kaip RPHA, ELISA ir RIF išlieka teigiami daugelį metų po išgydymo nuo sifilio, o kai kuriais atvejais ir visą gyvenimą.
RIBT ir RIF yra specifiškiausi iš visų serologinių tyrimų, naudojamų sifiliui diagnozuoti. Jie leidžia atskirti klaidingas teigiamas reakcijas, nustatyti vėlyvąsias sifilio formas neigiamos reakcijos. RIBT pagalba atpažįstamos klaidingos teigiamos nėščių moterų reakcijos, kai reikia išspręsti vaiko užsikrėtimo problemą.
Treponema pallidum imobilizacijos reakcija (RIBT, RIT)
Reakcijos esmė ta, kad paciento kraujo serume esantys antikūnai imobilizuoja blyškią treponemą. Reakcija, kai imobilizuojama iki 20% patogenų, laikoma neigiama, silpnai teigiama - 21 - 50%, teigiama - 50 - 100%. RIBT kartais duoda klaidingai teigiamų rezultatų. Tyrimas yra sudėtingas ir daug laiko reikalaujantis, tačiau jis yra būtinas diferencinei diagnozei. paslėptos formos ligos ir klaidingai teigiami serologinių reakcijų rezultatai, įskaitant nėščias moteris. RIBT duoda 100% teigiamą rezultatą sergant antriniu, ankstyvuoju ir vėlyvuoju sifiliu, 94 – 100% atvejų – sergant kitomis sifilio formomis.
Imunofluorescencinė reakcija (RIF)
Reakcijos esmė ta, kad blyškios treponemos (antigenai), kartu su fluorochromais paženklintais antikūnais, fluorescenciniame mikroskope skleidžia geltonai žalią švytėjimą. Rezultatas įvertinamas (+) ženklu. RIF pagalba nustatomi A klasės imunoglobulinai.Imunofluorescencinė reakcija tampa teigiama anksčiau nei Wasserman reakcija. Jis visada teigiamas sergant antriniu ir latentiniu sifiliu, 95-100% atvejų teigiamas sergant tretiniu ir įgimtu sifiliu. Šio tipo tyrimų atlikimo metodika yra paprastesnė nei RIBT, tačiau RIF pakeisti RIBT neįmanoma, nes ši reakcija specifiškumu yra prastesnė nei RIBT. RIF-10 (RIF modifikacija) yra jautresnis, RIF-200 ir RIF-abs yra specifiškesni.
Ryžiai. 9. Kraujo tyrimas dėl sifilio – imunofluorescencinė reakcija (RIF).
Treponema pallidum imuninės adhezijos testas (TRIPBT)
Reakcijos esmė ta, kad blyškios treponemos, įjautrintos paciento serumo, esant komplementui, prilimpa prie eritrocitų paviršiaus. Centrifuguojant gauti kompleksai nusėda. Jautrumas šis testas ir specifiškumas yra artimi RIF ir RIBT.
Su fermentais susijęs imunosorbentinis sifilio tyrimas (ELISA)
ELISA pagalba nustatomi M ir G klasės imunoglobulinai.IgM - ELISA metodas gali būti naudojamas kaip atrankinis ir patvirtinantis tyrimas. ELISA jautrumas ir specifiškumas yra panašūs į RIF. Sergant sifiliu, ELISA duoda teigiamų rezultatų nuo trečio užsikrėtimo mėnesio ir išlieka teigiamas gana ilgai (kartais visą gyvenimą).
Ryžiai. 10. ELISA analizatorius.
Pasyvios (netiesioginės) hemagliutinacijos (RPHA) reakcija
TPHA pagrįsta eritrocitų, ant kurių adsorbuojami treponema pallidum antigenai, gebėjimu sulipti (hemagliutinacija) esant paciento serumui. RPHA naudojamas diagnozuoti visų formų sifilį, įskaitant latentinį. Kai taikoma Aukštos kokybės antigeno, šio tipo serologinė reakcija specifiškumu ir jautrumu lenkia visus kitus testus.
Ryžiai. 11. RPHA naudojama visų formų sifiliui diagnozuoti.
Ryžiai. 12. Sifilio analizė – pasyvios (netiesioginės) hemagliutinacijos reakcija (schema).
Ryžiai. 13. Apversto skėčio, užimančio visą mėgintuvėlio dugną, atsiradimas rodo teigiamą reakciją. Tuo atveju, kai eritrocitai nusėda stulpelyje („mygtukas“) mėgintuvėlio dugno centre, jie kalba apie neigiamą reakciją.
Ryžiai. 14. RPGA tyrimas laboratorinėmis sąlygomis.
Mikrobiologinė diagnostika
Kartu su serologinė diagnozė blyškių treponemų nustatymo metodas (mikrobiologinė diagnostika) vaidina svarbus vaidmuo, ypač seronegatyvaus sifilio laikotarpiu, kai kraujyje vis dar nėra antikūnų, tačiau jau yra pirmieji šviežio pirminio sifilio (kietojo šankro) apraiškos.
Biologinė tyrimo medžiaga yra išskyros iš kietų opų (šankrų) paviršiaus, pustulinių sifilidų turinys, verkiančios ir erozinės papulės, užkrėstų taškai. limfmazgiai, smegenų skystis ir vaisiaus vandenys, PGR - kraujas.
Geriausias būdas aptikti sifilio sukėlėjus yra biologinės medžiagos tyrimas tamsiame mikroskopo lauke. Ši technika leidžia pamatyti blyškią treponemą gyvoje būsenoje, ištirti jos struktūros ir judėjimo ypatybes, atskirti patogeninius patogenus nuo saprofitų.
Ryžiai. 15. Sifilio analizė – tamsaus lauko mikroskopija.
Ryžiai. 16. Tiriant sausus tepinėlius, naudojamas Romanovskio-Giemsa dažymas. Blyškios treponemos dėmės tuo pačiu metu rausva spalva, visos kitos spirochetų rūšys – violetinės spalvos.
Blyškių treponemų nustatymas tamsaus lauko mikroskopu yra absoliutus galutinis sifilio diagnozės kriterijus.
Ryžiai. 17. Bakterijoms aptikti naudojama imunofluorescencinė reakcija (RIF) – treponeminis tyrimas. Specifinis kompleksas antigenas – antikūnas derinamas su specifiniu serumu, paženklintu fluorochromu, fluorescencinio mikroskopo šviesoje suteikia bakterijoms žalsvo švytėjimo.
Ryžiai. 18. Sifilio sukėlėjai aiškiai matomi tepinėliuose, paruoštuose Levaditi metodu (impregnavimas sidabru). Blyškiai tamsios treponemos užkrėstų audinių ląstelių geltonos spalvos fone.
Ryžiai. 19. Sifilio sukėlėjas su daugybiniu padidėjimu.
Ryžiai. 20. Nuotraukoje pavaizduota blyškios treponemos kolonija. Sunku gauti bakterijų kultūrą. Dirbtinėse maistinėse terpėse jie praktiškai neauga. Ant terpės, kurioje yra arklio ir triušio serumo, kolonijos atsiranda 3–9 dieną.
PGR dėl sifilio
Šiandien efektyvi ir perspektyvi polimerazės grandininės reakcijos technika. Sifilio PGR leidžia gauti rezultatą per kelias valandas, o diagnozei surinktoje medžiagoje gali būti bent keli patogenai.
Ryžiai. 21. Sifilio PGR leidžia aptikti blyškios treponemos DNR arba jos fragmentus.
Šio tyrimo metodo jautrumas priklauso nuo to, ar yra biologinė medžiaga blyški treponema ir pasiekia 98,6%. Šio testo specifiškumas labai priklauso nuo teisingas pasirinkimas diagnostikos metu siekia sustiprinti ir pasiekia 100%.
Tačiau dėl nepakankamai ištirtų lyginamąsias charakteristikas tiesioginių sifilio ir PGR diagnozavimo metodų jautrumas ir specifiškumas, šis metodas Rusijos Federacijoje tyrimai ligai diagnozuoti kol kas neleidžiami.
PGR dėl sifilio leidžiamas tik kai kuriais atvejais, pvz papildomas metodasįgimto sifilio, neurosifilio diagnozė, su sunkumais diagnozuojant sifilį taikant serologinius ŽIV pacientų tyrimo metodus.
Serologinė sifilio diagnozė
Sifilio diagnozė pagrįsta klinikiniais ir laboratoriniais duomenimis. Sifilio diagnozė nustatoma tik laboratoriškai patvirtinus, t.y. nustačius blyškią treponemą kietojo šanko išskyros metu, erozines papules sergant pirminiu ir antriniu sifiliu bei serologinio tyrimo duomenis. Serologinės reakcijos – itin vertingas metodas ne tik sifilio diagnozei patvirtinti, bet ir jo eigos dinamikai gydymo įtakoje stebėti bei ligos išgydymui nustatyti.
Standartinius serologinių reakcijų komplekso (CSR) komponentus, skirtus sifilinei infekcijai nustatyti, šiuo metu papildo treponeminės reakcijos: RIBT (blyškios treponemos imobilizacijos reakcija), RIF (imunofluorescencinė reakcija). Wassermano reakcija (RW, PB) pagrįsta komplemento fiksacijos reiškiniu. Jo formulavimui naudojamas kardiolipino antigenas, kuris yra cholesterolio alkoholio ekstraktas iš galvijų širdies raumenų ir turi panašių antigeninių savybių su blyškia treponema.
Wassermano reakcija. Komplementą suriša kompleksas (lipoidinis antigenas ir tiriamojo serumo reaginas). Norint nurodyti susidariusį kompleksą, naudojama hemolizinė sistema (avies eritrocitai ir hemolizinis serumas).
Be komplemento fiksavimo reakcijos su kardiolipinu ir treponeminiais antigenais, CSR grupė apėmė reakciją ant stiklo (ekspresinis metodas). RV hemolizės sunkumą rodo pliusai:
smarkiai teigiamas - 4 +; teigiamas - 3 +; silpnai teigiamas - 2 + arba 1 +; neigiamas - -.
Svarbus ir reakcijos formulavimas kiekybiniu metodu, t.y. su įvairiais serumo praskiedimais (1:10; 1:20 ir kt. iki 1:320). Standartinių serologinių reakcijų gausa paaiškinama blyškių treponemų antigeniniu mozaikiškumu, todėl pacientų kraujo serume atsiranda atitinkamas antikūnų (komplementų surišimo, agliutininų, precipitinų, imobilizinų, imuninę fluorescenciją sukeliančių antikūnų ir kt.) gausa. . Kiekvienoje sifilio stadijoje gali vyrauti tam tikri antikūnai, todėl reakcijos su kai kuriais antigenais jau gali būti teigiamos, o su kitais – vis dar neigiamos. Be to, dėl standartinių serologinių reakcijų santykinio specifiškumo būtina naudoti ne vieną iš jų, o reakcijų kompleksą, kad būtų išvengta diagnostinių klaidų. ĮSA tampa teigiamas 3-osios savaitės pabaigoje arba 4-ą savaitę po to, kai atsiranda kietas šansas. Šios reakcijos yra labai teigiamos ir reikšmingai praskiesta serume beveik visiems pacientams, kuriems yra antrinis šviežias (98–99 %), antrinis pasikartojantis (100 %), tretinis aktyvumas (70–80 %) ir tretinis latentinis (50–60 %). sifilis. Tačiau CSR nėra griežtai specifinis sifilio reakcijos kompleksas. Jie gali būti teigiami sergant raupsais, tuberkulioze, brucelioze, maliarija, raudonąja vilklige, taip pat plaučių uždegimu, kepenų ligomis, vėžiu, pavartojus alkoholio, riebaus maisto, nėštumo metu, ypač antroje jo pusėje, taip pat pirmąsias 2 savaites po gimdymo. Su amžiumi nespecifinių klaidingai teigiamų CSR rezultatų daugėja.
Norint pagrįstai diagnozuoti sifilį, atsižvelgiama į CSR duomenis, klinikinius duomenis, blyškios treponemos tyrimo rezultatus pirminio ir antrinio sifilio apraiškose, kitų serologinių reakcijų duomenis - RIBT ir RIF.
RIBT yra pagrįstas blyškios treponemos imobilizacijos reiškiniu antikūnais, tokiais kaip imobilizinai, esantys pacientų, sergančių sifiliu, kraujo serume. Kaip RIBT antigenas, naudojama blyškios treponemos suspensija, gauta iš triušio sifilinio orchito audinių. Blyškios treponemos, į jas įpylus paciento kraujo serumo, nustoja judėti, t.y., imobilizuojamos. Reakcijos rezultatai vertinami procentais: teigiamas RIBT imobilizacijos metu nustatomas nuo 51 iki 100% blyškios treponemos, silpnai teigiamas - nuo 31 iki 50%, abejotinas - nuo 21 iki 30% ir neigiamas - nuo 0 iki 20%. . Reakcija vyksta anaerobiozės sąlygomis. Imobilizinai pacientų kraujo serume atsiranda vėliau nei kiti antikūnai, todėl RIBT tampa teigiamas vėliau nei CSR ir RIF. RIBT yra specifiškiausia iš esamų reakcijų į sifilį. Pagrindinis jos tikslas yra atpažinti klaidingai teigiamus rezultatus nustatant CSR. Tai ypač svarbu pacientams, kuriems sifilis yra latentinis be išorinių apraiškų, bet su vidaus organų ar nervų sistemos pažeidimais. RIBT yra ypač svarbus atpažįstant klaidingai teigiamus nėščių moterų CSR rezultatus. Reikia atsiminti, kad nespecifiniai teigiami RIBT rezultatai galimi ir pacientams, sergantiems sarkoidoze, raudonąja vilklige, tuberkulioze, kepenų ciroze ir kt. Tačiau sergant šiomis ligomis RIBT yra silpnai teigiamas (nuo 30 iki 50%) ir niekada nepasiekia 100%. ). Gydant antibiotikais, RIBT rezultatai tampa neigiami. Todėl tyrimai naudojant RIBT atliekami tik po 7 dienų, jei buvo skirti vandenyje tirpūs antibiotikai, ir 25 dienas po gydymo durantiniais antibiotikais pabaigos.
RIFAS- jautresnė reakcija, todėl ji teigiama jau pirminiu seronegatyviu sifilio periodu 80 proc. Pagal specifiškumą RIF nusileidžia RIBT, kuris neleidžia juo pakeisti RIBT, nors jo technika daug paprastesnė. Reakcija yra kelių modifikacijų: RIF-10, RIF-200 ir RIF-abs. (absorbuotas). RIF-10 yra jautresnis, o RIF-200 ir RIF-abs. konkretesnis. Reakcijos principas yra tas, kad specifinis antigenas (treponema pallidum) yra derinamas su paciento kraujo serumu (antikūnais) ir anti-rūšiniu fluorescenciniu serumu (triušio anti-žmogaus globulino serumas, derinamas su fluoresceinu, medžiaga, kuri švyti ultravioletinėje šviesoje). . Esant teigiamai reakcijai, fluorescenciniame mikroskopu galima pamatyti gelsvai žalią blyškių treponemų švytėjimą, nes jas supa prie jų prilipę fluorescenciniai antikūnai. Liuminescencijos laipsnis įvertinamas pliusais, kaip ir CSR. Teigiama reakcija nurodoma 4 +, 3 + ir 2. +. Kai liuminescencijos laipsnis yra 1 + ir liuminescencijos nėra, reakcija laikoma neigiama. Sergant antriniu sifiliu, RIF teigiamas beveik 100 % atvejų. Sergant latentiniu sifiliu jis visada teigiamas (99-100 proc.), o sergant tretinėmis formomis ir įgimtu sifiliu – 95-100 proc.
Express metodas (mikroreakcija ant stiklo).Šioje reakcijoje, kaip ir CSR, naudojamas kardiolipino antigenas, kurio vienas lašas specialios stiklinės plokštelės šulinėliuose sumaišomas su 2-3 lašais tiriamojo kraujo serumo. Reakcija vyksta nusodinimo mechanizmu. Bendra reakcijos trukmė yra 10-40 minučių. Rezultatas vertinamas pagal kritulių kiekį ir dribsnių dydį; reakcijos sunkumas nurodomas pliusais: 4 +, 3 + ir kt., taip pat CSR. Mikroreakcija ant stiklo yra mažiau specifinė pacientams, sergantiems sifiliu, nei RV, tačiau jautrumas yra šiek tiek didesnis. Klaidingai teigiami rezultatai naudojant greitąjį metodą yra dažnesni nei naudojant RV. Todėl šį metodą leidžiama naudoti tik kaip atrankos reakciją atliekant masinius gyventojų tyrimus, klinikinį tyrimą ir pacientų tyrimą somatinių ligoninių klinikinės diagnostikos laboratorijose. Galutinė sifilio diagnozė remiantis šiuo metodu yra draudžiama. Tik greitasis metodas negali būti naudojamas apžiūrint donorus, nėščias moteris, taip pat stebint po gydymo sifiliu sergančius pacientus.
Sifiliui diagnozuoti gali būti taikomi ir kiti metodai: su fermentu susietas imunosorbentinis tyrimas (ELISA) su mikroprecipitacijos reakcija (RPM) arba pasyvioji hemagliutinacijos reakcija (RPHA) su RMP (įskaitant svetimus RMP analogus – RPR arba VDRL).
Atliekant klinikinę ir serologinę kontrolę po specifinio gydymo (siekiant nustatyti terapijos efektyvumą), leidžiamas kiekybinis RMP tyrimas (reakcijos titro dinamikoje tyrimas).
fermentinis imunologinis tyrimas (ELISA,Eliza). Reakcijos principas – kietosios fazės nešiklio paviršiuje adsorbuotą sifilinį antigeną sujungti su tiriamojo kraujo serumo antigenu ir naudojant fermentu pažymėtą antirūšinį imuninį serumą aptikti specifinį antigeno-antikūno kompleksą. ELISA jautrumas ir specifiškumas yra panašūs į RIF.
Pasyviosios hemagliutinacijos (RPHA) reakcija.Šios reakcijos makromodifikacija vadinama TRHA, mikromodifikacija – MHA-TR, automatizuota versija – AMHA-TR.
IgM serologija. Pastaraisiais dešimtmečiais sifiliu sergančių pacientų organizme antikūnų susidarymo dinamika buvo plačiai tyrinėjama prieš gydymą, jo metu ir po jo. Taip yra dėl to, kad pacientams, kurie visiškai gydomi nuo sifilio, teigiami specifinių serologinių reakcijų į sifilį rezultatai išlieka ilgą laiką, o tai apsunkina pacientų išgydymo klausimo sprendimą, taip pat ankstyvos įgimtos ligos diagnozę. sifilis. Taip pat sunku atskirti atkrytį nuo pakartotinio užsikrėtimo. Tiriant antikūnus sifiliu sergančių pacientų organizme, nustatyta, kad po užsikrėtimo pirmieji gaminasi specifiniai IgM, kurie nustatomi jau antrą savaitę po užsikrėtimo ir maksimalią koncentraciją kraujyje pasiekia 6-9 savaitę. . Po 6 mėn po gydymo pabaigos daugumos pacientų kraujyje jie nenustatomi. Ketvirtą savaitę po užsikrėtimo organizmas pradeda gaminti specifinį IgG. Didžiausias šio tipo imunoglobulino kiekis nustatomas praėjus 1–2 metams po užsikrėtimo. Reikia pažymėti, kad specifinis IgM nustoja gamintis, kai antigenas išnyksta iš organizmo, o IgG sekreciją tęsia atminties ląstelių klonai. Be to, didelės IgM molekulės nepraeina per placentą iš motinos į vaisius, todėl pagal jų buvimą vaiką sprendžia, kad jis užsikrėtęs blyškia treponema. Atsižvelgiant į tai, kad specifinio IgM koncentracija kraujyje laikui bėgant natūraliai mažėja, šių antikūnų titro padidėjimas gali būti pagalbinis ligos atkryčio ar pakartotinės infekcijos požymis.