התייעצויות: מחלות מין. תגובות סרולוגיות בעגבת

קומפלקס של תגובות סרולוגיות דורש צוות מעבדה מיומן ביותר, ציוד מעבדה מתאים ו כמות משמעותיתרכיבים. ריבוי התגובות הסרולוגיות מוסבר על ידי העובדה שהפסיפס האנטיגני של טרפונמות חיוורות הוכח, ובקשר לכך, נוכחות בסרום הדם של חולה עם עגבת של ריבוי נוגדנים מקביל (מחדש, קיבוע משלים ונוגדנים פוליסכרידים, אגלוטינינים, אימוביליזינים, נוגדנים הגורמים לקרינה חיסונית וכו'). בכל שלב של עגבת, נוגדנים מסוימים שולטים, ולכן, תגובות עם נוגדנים מסוימים עשויות להיות כבר חיוביות, ועם אחרים - עדיין שליליות. בנוסף, הספציפיות היחסית של תגובות סרוריאקציות סטנדרטיות מנחה, על מנת למנוע טעויות אבחון, להשתמש לא באחת מהתגובות הללו, אלא במורכבות שלהן. למרות כאלה גישה מורכבתבמהלך בדיקה סרולוגית של מטופל, יש לזכור שבמקרים מסוימים אפילו המתחם כולו יכול לתת תוצאה חיובית שגויה, לא ספציפית. תגובות סרולוגיות חיוביות כוזבות בדם נצפו במלריה, טיפוס וחום חוזר, צרעת, ברוצלוזיס, דלקת ריאות, קדחת ארגמן, ניאופלזמות ממאירות, במהלך הווסת, שבועיים לפני הלידה ותוך 3 שבועות לאחר הלידה, לאחר שתיית אלכוהול, מאכלים שומניים, כמה תרופות, עם כרוני תהליכים מוגלתיים, מחלות כבד וכו'. הוכח כי עם העלייה בגיל החולים, מספר התוצאות החיוביות-שגויות הלא ספציפיות של תגובות סרוריאקציות סטנדרטיות עולה. כל זה גורם לנו להיות זהירים מאוד לגבי האינדיקטורים של בדיקה סרולוגית של חולים ולהתייחס ל-seroreactions כטכניקה חשובה אך מסייעת המאששת את הנתונים של התמונה הקלינית, תוצאות של אחרים. מחקר מעבדה(עבור טרפונמה חיוורת, נוזל מוחי), תוצאות העימות.

קשה להגדיר את תגובת וסרמן (RV). הוא מיוצר במעבדות סרולוגיות מיוחדות על ידי סרולוגים מומחים. הוא מבוסס על תופעת קיבוע המשלים. בניסוח התגובה משתמשים באנטיגנים ספציפיים מטרפונמה חיוורת וגם באנטיגנים לא ספציפיים (תמציות מאיברים של בעלי חיים בריאים, למשל, שרירי לב בקר). קשירת המשלים מיוצרת על ידי קומפלקס (אנטיגן ליפואיד ו-reagin של סרום הבדיקה). כדי לציין את הקומפלקס המתקבל, נעשה שימוש במערכת המוליטית (אריתרוציטים של כבשים וסרום המוליטי). כאשר מגדירים RV עם אנטיגן קרדיוליפין, הרגישות שלו עולה. כמו כן, השינוי של RS בקור (תגובת קולמר) התברר כרגיש יותר. תכונה של תגובת קולמר היא הדו-פאזית תנאי טמפרטורה(השלב ​​הראשון - בטמפרטורה של 18.20 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות, השני - במקרר בטמפרטורה של +4. + 6 מעלות צלזיוס למשך 16-20 שעות), שבו ממשיך קיבוע המשלים. תגובת קולמר לוכדת reagins באותם סמים, שבהם, בשל ריכוזם הנמוך, RV, הנמסר בשיטה הרגילה, נותן תוצאה שלילית. עם זאת, לפי רוב העגבתים, התגובה של קולמר ו-RV עם אנטיגן קרדיוליפין, עם רגישות גבוההנחות בספציפיות שלו משינויים אחרים של RV.

במקרה של קבלת תוצאות חיוביות חדות של תגובות וסרמן וקולמר, הם ממוקמים במינונים יורדים של סרום הבדיקה כדי לקבוע את טיטר הריאגינים (שיטת Boas כמותית). הקביעה הכמותית של ריאגינים עוזרת להבדיל עגבת סמויה מוקדמת ומאוחרת, וגם מקלה על הערכת יעילות הטיפול האנטי-עגבת: ירידה בטיטר של ריאגינים מעידה על יעילות הטיפול.

תגובות משקעים (קאנה וציטוכוליות זקס-ויטבסקי) הן הרבה יותר פשוטות בטכניקה בהשוואה ל-RV. לייצור שלהם, אנטיגנים מרוכזים יותר משמשים, המכילים מספר גדול שלכולסטרול. כאשר הם מתקבעים, נוצר משקעים הנראים בבירור לעין בלתי מזוינת (לעיתים משתמשים בזכוכית מגדלת או אגלוטינינוסקופ כדי להעריך את התוצאות).

מידת החיוביות של RV, התגובה של קולמר ותגובות המשקעים מסומנת על ידי מספר הפלוסים או הצלבות: 4+ (חיובי מאוד), 3+ (חיובי), 2+ או 1+ (חיובי חלש), ± (מוטל בספק), - (שלילי). בעת הגדרת תגובת וסרמן או קולמר כמותית, מצוין דילול הסרום, שבו עדיין מתקבלת תוצאה חיובית חדה (לדוגמה, 1:5, 1:10, 1:20 וכו'). תגובת קאהן, על פי נתונים רבים, נותנת את אותן תוצאות עם תגובת וסרמן ב-93-96% מהתצפיות (תוצאותיה הלא ספציפיות מתועדות ב-1.6%), ותגובת זקס-ויטבסקי - ב-95-99% ( התוצאות הלא ספציפיות שלו מתועדות ב-1.6% 3% מהתצפיות).

בשל הנפח הגדול בדיקות מונעותוהמורכבות של ביצוע CSR, שיטה מפורשת לסרודיאגנוזה של עגבת נמצאת כיום בשימוש נרחב, כאשר אין צורך לקחת דם מווריד. כל טכנאי מעבדה השואב דם לניתוח קליני ייקח דם גם לבדיקה מואצת לאיתור עגבת. בנוסף, הוא רק צריך להשתמש בנימי נפרד כדי לקבוע את ESR, ולרשום את התוצאות של מיקרו-תגובה זו.

שיטה מואצת לסרודיאגנוזה של עגבת. (הופק על בסיס מכתב מתודולוגי שנערך על ידי המחלקה המיקרוביולוגית של TsNIKVI. המחברים N.M. Ovchinnikov ו-T.I. Milonova.)

טכניקת הגדרת מיקרו-תגובה. דם נלקח מקצה האצבע, באותו אופן כמו לחקר ESR; זה רק הכרחי שעוזר המעבדה לחקר העגבת ייקח נימי אחד נוסף, ובהתאמה יגדיל את כמות הנתרן ציטראט. לשם כך, מרטיבים את הפיפטות הנימים של Panchenkov, שואבים תמיסה של 5% של נתרן ציטראט לסימן 75 ושופכים אותה למבחנה. ואז שלושה נימי דם נאספים ומוכנסים לאותה צינור, מעורבבים. דם נשאב לתוך נימי אחד עבור ESR, והדם שנותר בצינור בסוף הצריכה נשאר לעמוד במשך שעה אחת בשעה טמפרטורת חדרואחריו מחקר.

ציוד: פיפטות נימיות Panchenkov (מספרן תלוי בכמות העבודה), צלחות זכוכית אורגניות עם בארות ותחתית שטוחה בקוטר 1 ס"מ, פיפטות פסטר, מבחנות באורך 8-10 ס"מ ובקוטר 1-1.2 ס"מ, עטי ג'נר. .

רכיבים: אנטיגן קרדיוליפיןלמיקרו-תגובה, נתרן כלורי (טהור מבחינה כימית), כולין כלוריד, נתרן ציטראט, מרתיולט (אופציונלי; נדרש רק אם האנטיגן נשמר יותר מ-5 ימים).

פתרונות: תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית 0.85%; תמיסת כולין כלוריד 10%, מדוללת מי מלח איזוטונינתרן כלורי (בעת הכנת הפתרון, יש לזכור כי כולין הוא היגרוסקופי, ולכן יש צורך להמיס את כל האבקה מיד לאחר פתיחת הבקבוקון עם התרופה). אם הפתרון מוכן בתוספת של 0.01% תמיסת merthiolate, ניתן לאחסן אותה למשך שנה; תמיסה של 5% נתרן ציטראט.

הכנת אמולסיה של אנטיגן קרדיוליפין.

אבחון סרולוגי של עגבת

אבחון עגבת מבוסס על נתונים קליניים ומעבדתיים. האבחנה של עגבת נעשית רק לאחר אישור מעבדה, כלומר, זיהוי של טרפונמה חיוורת בהפרשת צ'אנקר קשה, פפולות שחיקות בראשי ו עגבת משניתונתוני סקר סרולוגי. תגובות סרולוגיות הן שיטה בעלת ערך רב לא רק לאישור האבחנה של עגבת, אלא גם לניטור הדינמיקה של מהלך שלה בהשפעת הטיפול וקביעת הריפוי של המחלה.

רכיבים סטנדרטיים של קומפלקס התגובות הסרולוגיות (CSR) לבירור זיהום עגבתכיום בתוספת תגובות טרפונמאליות: RIBT (תגובת אימוביליזציה של treponema pallidum), RIF (תגובה אימונופלואורסצנטית). תגובת וסרמן (RW, PB) מבוססת על התופעה של קיבוע משלים. לניסוח שלו, נעשה שימוש באנטיגן קרדיוליפין, שהוא תמצית אלכוהול עם כולסטרול משרירי לב בקר ובעל תכונות אנטיגניות דומות עם טרפונמה חיוורת.

תגובת וסרמן.המשלים נקשר על ידי קומפלקס (אנטיגן ליפואיד ו-reagin של סרום הבדיקה). כדי לציין את הקומפלקס שנוצר, נעשה שימוש במערכת המוליטית (אריתרוציטים של כבשים וסרום המוליטי).

בנוסף לתגובת קיבוע המשלים עם קרדיוליפין ואנטיגנים טרפונמאליים, קבוצת ה-CSR כללה תגובה על זכוכית (שיטת אקספרס). חומרת המוליזה ב-RV מסומנת על ידי פלוסים:

חיובי חד - 4 +; חיובי - 3 +; חיובי חלש - 2 + או 1 +; שלילי - -.

גם ניסוח התגובה בשיטה כמותית חשובה, כלומר עם דילולים שונים של סרום (1:10; 1:20 וכו' עד 1:320). ריבוי התגובות הסרולוגיות הסטנדרטיות מוסבר בפסיפס האנטיגני של טרפונמות חיוורות, ולכן מופיע ריבוי מקביל של נוגדנים (קושרים משלימים, אגלוטינינים, משקעים, אימוביליזינים, נוגדנים הגורמים לקרינה חיסונית וכו') בסרום הדם של החולים. . בכל שלב של עגבת, נוגדנים מסוימים עשויים לשלוט, ולכן, תגובות עם אנטיגנים מסוימים כבר עשויות להיות חיוביות, ועם אחרים עדיין שליליות. בנוסף, הספציפיות היחסית של תגובות סרולוגיות סטנדרטיות מחייבת להשתמש לא באחת מהן, אלא במכלול של תגובות, על מנת למנוע טעויות אבחון. אחריות חברתית הופכת חיובית בסוף השבוע השלישי או בשבוע הרביעי לאחר הופעת הצ'אנר הקשה. תגובות אלו חיוביות בצורה חדה ובדילול משמעותי של סרום כמעט בכל החולים עם טרי משני (98-99%), חוזר שניוני (100%), פעיל שלישוני (70-80%) ושלישוני סמוי (50-60%) עַגֶבֶת. עם זאת, CSR אינו תסביך תגובה ספציפי למהדרין עבור עגבת. הם עשויים להיות חיוביים בחולים עם צרעת, שחפת, ברוצלוזיס, מלריה, לופוס אריתמטוזוס, כמו גם דלקת ריאות, מחלות כבד, מחלות אונקולוגיות, לאחר נטילת אלכוהול, מזון שומני, במהלך ההריון, במיוחד במחצית השנייה, וגם במהלך השבועיים הראשונים. לאחר הלידה. עם הגיל, מספר התוצאות החיוביות-שגויות הלא ספציפיות של CSR עולה.

לאבחון סביר של עגבת, יחד עם נתוני ה-CSR, נתונים קליניים, תוצאות מחקר על טרפונמה חיוורת בביטויים של עגבת ראשונית ומשנית, נלקחים בחשבון נתונים מתגובות סרולוגיות אחרות - RIBT ו-RIF.

RIBTמבוסס על תופעת אימוביליזציה של טרפונמה חיוורת על ידי נוגדנים כגון אימוביליזינים הנמצאים בסרום הדם של חולי עגבת. כאנטיגן ל-RIBT, משתמשים בהשעיה של טרפונמה חיוורת המתקבלת מרקמות של דלקת עגבת של ארנב. טרפונמות חיוורות, לאחר הוספת סרום הדם של המטופל להן, מפסיקות לנוע, כלומר, הן משותקות. תוצאות התגובה מוערכות כאחוז: RIBT חיובי מזוהה במהלך immobilization מ-51 עד 100% של טרפונמה חיוורת, חיובי חלש - מ-31 עד 50%, ספק - מ-21 עד 30% ושלילי - מ-0 עד 20% . התגובה מועברת בתנאים של אנארוביוזיס. אימוביליזינים מופיעים בסרום הדם של חולים מאוחר יותר מנוגדנים אחרים, ולכן RIBT הופך חיובי מאוחר יותר מאשר CSR ו-RIF. RIBT הוא התגובות הספציפיות ביותר הקיימות לעגבת. מטרתו העיקרית היא לזהות תוצאות חיוביות שגויות בעת הגדרת CSR. הדבר חשוב במיוחד ביחס לחולים שאצלם עגבת מתרחשת באופן סמוי ללא ביטויים חיצוניים, אלא עם נגע. איברים פנימייםאוֹ מערכת עצבים. ל-RIBT יש חשיבות מיוחדת בזיהוי תוצאות חיוביות שגויות של CSR בנשים הרות. יש לזכור כי חיובי לא ספציפי תוצאות RIBTאפשרי בחולים עם סרקואידוזיס, לופוס אריתמטוזוס, שחפת, שחמת כבד וכו'. עם זאת, במחלות אלו, RIBT חיובי חלש (מ-30 עד 50%) ולעולם לא מגיע ל-100%). כאשר מטופלים באנטיביוטיקה, התוצאות של RIBT הופכות שליליות. לפיכך, מחקרים באמצעות RIBT מבוצעים רק לאחר 7 ימים, אם ניתנה אנטיביוטיקה מסיסת במים, ו-25 ימים לאחר סיום הטיפול באנטיביוטיקה דוראנטית.

שׁוּנִית- תגובה רגישה יותר, ולכן היא חיובית כבר בתקופה הסרונגטיבית הראשונית של עגבת ב-80% מהחולים. מבחינת הספציפיות, RIF נחות מ-RIBT, שאינו מאפשר להחליף בו RIBT, למרות שהטכניקה שלו פשוטה הרבה יותר. התגובה מוכנסת במספר שינויים: RIF-10, RIF-200 ו-RIF-abs. (ספג). RIF-10 רגיש יותר, בעוד RIF-200 ו-RIF-abs. יותר ספציפי. עיקרון התגובה הוא שאנטיגן ספציפי (treponema pallidum) משולב עם סרום הדם (נוגדנים) של החולה וסרום פלואורסצנטי אנטי-מינים (סרום גלובולין אנטי-אנושי של ארנב, בשילוב עם פלואורססאין, חומר שזוהר באור אולטרה סגול). . עם תגובה חיובית, ניתן לראות זוהר צהוב-ירוק של טרפונמות חיוורות במיקרוסקופ פלואורסצנטי, שכן הם מוקפים בנוגדנים פלואורסצנטיים הנדבקים אליהם. מידת הזוהר מוערכת לפי פלוסים, כמו עם CSR. תגובה חיובית 4+, 3+ ו-2.+ מצוינים. כאשר דרגת הארה היא 1+ ואין הארה, התגובה נחשבת שלילית. עם עגבת משנית, RIF חיובי בכמעט 100% מהמקרים. זה תמיד חיובי עבור עגבת סמויה(99-100%), ובצורות שלישוניות ועגבת מולדת היא חיובית ב-95-100%.

שיטת אקספרס (מיקרו-תגובה על זכוכית).בתגובה זו, כמו ב-CSR, משתמשים באנטיגן קרדיוליפין, טיפה אחת שלו מעורבבת עם 2-3 טיפות מסרום הדם של הנבדק בבארות של צלחת זכוכית מיוחדת. התגובה ממשיכה במנגנון המשקעים. משך התגובה הכולל הוא 10-40 דקות. התוצאה מוערכת לפי כמות המשקעים וגודל הפתיתים; חומרת התגובה מסומנת על ידי פלוסים: 4 +, 3 + וכו ', כמו גם CSR. המיקרו-תגובה על זכוכית היא פחות ספציפית עבור חולים עם עגבת מאשר RV, אך עדיפה במקצת ברגישות. שֶׁקֶר תוצאות חיוביותבשיטת האקספרס, הם מתקבלים לעתים קרובות יותר מאשר עם RV. לכן, שיטה זו מותרת לשימוש רק כתגובת סלקציה לבדיקות המוניות של האוכלוסייה, בדיקה קלינית ובדיקת חולים במעבדות האבחון הקליניות של בתי חולים סומטיים. האבחנה הסופית של עגבת על בסיס שיטה זו אסורה. לא ניתן להשתמש רק בשיטה המפורשת בעת בדיקת תורמים, נשים בהריון, וגם לניטור לאחר טיפול בחולי עגבת.

ניתן להשתמש בשיטות אחרות לאבחון עגבת: בדיקת אימונוסורבנט מקושרת(ELISA) עם תגובת מיקרו-משקעים (RPM) או תגובת hemagglutination פסיבית (RPHA) עם RMP (כולל אנלוגים זרים RMP - RPR או VDRL).

בעת ביצוע בקרה קלינית וסרולוגית לאחר טיפול ספציפי(כדי לקבוע את יעילות הטיפול) מותר מחקר כמותי של RMP (מחקר של טיטר התגובה בדינמיקה).

בדיקת אנזים חיסונית (ELISA,אלייזה).עקרון התגובה הוא לשלב את האנטיגן העגבת שנספג על פני השטח של נשא בפאזה מוצקה עם האנטיגן של סרום הדם הנבדק ולזהות קומפלקס אנטיגן-נוגדנים ספציפי באמצעות סרום חיסון אנטי-מינים מסומן באנזים. הרגישות והספציפיות של ELISA דומות ל-RIF.

התגובה של המאגלוטינציה פסיבית (RPHA).המאקרומודיפיקציה של תגובה זו נקראת TRHA, המיקרומודיפיקציה היא MHA-TR, והגרסה האוטומטית היא AMHA-TR.

סרולוגיה של IgM. IN בעשורים האחרוניםהדינמיקה של יצירת נוגדנים בגוף של חולים עם עגבת נחקרת רבות לפני, במהלך ואחרי סיום הטיפול. זאת בשל העובדה שבמטופלים המטופלים במלואו בעגבת נותרות תוצאות חיוביות של תגובות סרולוגיות ספציפיות לעגבת לאורך זמן, מה שמקשה על ההחלטה בנושא ריפוי חולים, כמו גם ביצוע אבחון מוקדם. עגבת מולדת. גם קשה אבחנה מבדלתהישנות המחלה והדבקה מחדש. כאשר חקרו יצירת נוגדנים בגוף של חולי עגבת, נמצא כי IgM ספציפיים הם הראשונים המיוצרים לאחר ההדבקה, שמתגלים כבר בשבוע השני לאחר ההדבקה ומגיעים לריכוז מקסימלי בדם ב-6-9 שבועות. לאחר 6 חודשים לאחר סיום הטיפול ברוב החולים בדם הם אינם נקבעים. בשבוע הרביעי לאחר ההדבקה, הגוף מתחיל לייצר IgG ספציפי. סוג זה של אימונוגלובולין רובנקבע 1-2 שנים לאחר ההדבקה. יש לציין כי IgM ספציפי מפסיק להיווצר כאשר האנטיגן נעלם מהגוף, והפרשת IgG ממשיכה על ידי שיבוטים של תאי זיכרון. בנוסף, מולקולות IgM גדולות אינן עוברות דרך השליה מהאם לעובר, ולכן, לפי נוכחותן בילד, הן שופטות את הזיהום שלו בטרפונמה חיוורת. לאור העובדה שריכוז ה-IgM הספציפי בדם יורד באופן טבעי עם הזמן, עלייה בטיטר של נוגדנים אלו יכולה לשמש סימן עזר להימצאות הישנות של המחלה או זיהום מחדש.

עגבת זה מסוכן מחלה מינית, אשר נגרמת על ידי טרפונמה חיוורת, מועברת מינית ויכולה להשפיע על כל האיברים והמערכות בגוף. כרגע ב אבחון בזמןוהטיפול שבוצע, אפשר היה לרפא לחלוטין עגבת.

אבחון מחלה זו מבוסס על נתונים מעבדתיים וקליניים.

סוגי תגובות סרולוגיות לעגבת

בין בדיקות המעבדה, מוערך במיוחד ניתוח סרולוגי, אשר נדרש לא רק כדי לאבחן את המחלה, אלא גם כדי ללמוד תמונה הכוללתלְהַשְׁפִּיעַ אמצעי מרפאעל המחלה, לימוד יעילות הטיפול.

בדיקה סרולוגית לעגבת הפכה לענף נפרד ברפואה. יש לציין כי נוצר סוגים שוניםאבחון כזה, המוכר רשמית במדינות רבות. עם זאת, חיוני שלרופא יהיה מומחיות מספקת בסרולוגיה, אשר נדרשת כדי לפרש נכון את התוצאות.

במרחב ארצנו, למחקר סרולוגי של עגבת, הם משתמשים בעקבות הוראה(אושר בשנת 1995):

1. CSR (מכלול של תגובות סרולוגיות). רשימה זו כוללת את התגובה המחייבת של אנטיגנים טרפונמל, קרדיוליפין עם משלים. גם microreaction של משקעים עם אנטיגן cardiolipin;

2. תגובות טרפונמאליות. בהרכב שלהם, התגובה של treponema חיוור, ואת התגובה של immunofluorescence משמשים.

רשימה קטנה זו של אמצעים שהם חובה עבור ניתוח סרולוגילעגבת "רגישות", ספציפיות שונה, ומומלצות אך ורק ביחס לכל מקרה ומטלה אינדיבידואלית. עכשיו בואו נסתכל מקרוב.

מיקרו תגובת משקעים. תכונות ותוצאות

הוא משמש לבדיקה המונית של האוכלוסייה לאיתור עגבת. ישנם סוגים - מיקרו-תגובה על סטלה, שיטה מפורשת לאבחון עגבת, שעבורה משתמשים גם בסרום הדם של הנבדקים וגם בפלזמה. תגובה זו מתרחשת במגע עם אנטיגן קרדיוליפין ספציפי.

ככלל, תוצאת הניתוח מוערכת באופן איכותי - 4+, 3+, 2+, שלילי. בתורו, השיטה המפורשת מאפשרת לך לקבל את התוצאה תוך חצי שעה, והמחקר ידרוש רק כמה טיפות של פלזמה דם, הנלקחת מאצבעו של המטופל.

כך גם נבדקים אותם אנשים הרשומים במחלקה וורנרולוגית. אם שיטת ניתוח זו מיושמת באופן מקומי, במנותק, אזי זו רק בדיקת סקר.

על בסיס בדיקה מפורשת, אי אפשר לומר בוודאות שהחולה חולה בעגבת, אבל עם תוצאה חיובית, הרופא יכול לכתוב הפניה לרופא עור. מומחה זה יבצע בדיקה נוספת באמצעות שיטות אחרות - RIF, USR, RIBT. ראוי גם לציין כי ניתוח אקספרס אינו נבדק בנשים בהריון, תורמים, שכן ברוב המקרים מתקבלת תוצאה שגויה וחיובית. לעתים קרובות, בדיקה מהירה יכולה להתבצע על ידי עובדים רפואיים שעברו הכשרה מיוחדת, אך עוזרי מעבדה מחויבים ללמוד את הניתוח ולקבוע את התוצאות.

תגובה מחייבת מחמאה או RSK

נדרשת תגובה עם קרדיוליפין ואנטיגנים טרפונמלים כדי לאשר את האבחנה הראשונית (אם הבדיקה המהירה וה-MP חיוביים). נכון, מומלץ להשתמש בהליך כזה אם יש ביטויים פעילים, או שלאנשים הנבדקים היה מגע מיני עם עגבת נגועה. בנוסף, אנשים החשודים כסובלים מעגבת סמויה (סמויה) נתונים לאבחון ב-RSK. מטבע הדברים, התגובה לקשירת מחמאה נקבעת גם על מנת לקבוע את יעילות הטיפול.

לבדיקה יש צורך ב-5-7 מיליליטר דם מהווריד הקוביטלי. אצל תינוקות, דם לניתוח נלקח מהווריד הטמפורלי, או מחתך בעקב.

דגימת דם מהמטופל חייבת להיעשות על "בטן ריקה". לאחר מכן, הרופא משאיר את הדגימה בצינור יבש ונקי למשך 2-3 שעות בטמפרטורת החדר (זה הכרחי לקרישה). ההגדרה של קומפלקס של תגובות סרולוגיות מתבצעת במעבדות שהוכנו במיוחד.

עקרון הפעולה של התגובה המתוארת מוסבר על ידי העובדה שהריאגינים המצויים בסרום הדם של חולי עגבת, ככל הנראה, יכולים להגיב עם אנטיגנים שונים. הקומפלקסים המתקבלים מסווגים את החומר שהוכנס לתגובה. מערכת המוליטית משמשת לאינדקס CSR (כלומר, נעשה שימוש בתערובת של אריתרוציטים של ראם עם סרום המוליטי).

אם מתרחש CSR, אז תאי הדם האדומים משקעים, ותהליך כזה מורגש בעין בלתי מזוינת. חומרת התגובה נקבעת על ידי הרופא לפי הסיווג הבא:

• 4+ חיובי מאוד.
• 3+ חיובי.
• 2+, 1+. חיובי חלש.
• שלילי.

יש לציין כי בנוסף להערכה איכותנית, נעשה שימוש בהערכה כמותית. מערכת הערכה כזו נדרשת על מנת לקבוע את שלב התפתחות העגבת ואת יעילות הטיפול.

בפעם הראשונה עיקרון מחקר כזה שימש בשנת 1906 על ידי נייסר, ברוק ווסרמן. ב"תפקיד" האנטיגן, הם השתמשו תמצית מימיתכָּבֵד. לאחר מכן, תגובה כזו החלה להחליף אנטיגנים אחרים, מה שהפך אותה לרגישה עוד יותר. נכון לעכשיו, האנטיגנים הבאים מומלצים להגדרת התגובה:

• אנטיגן קורדיליפיל (תמצית לב בקר עם עודף לציטין וכולסטרול).
• אנטיגן טרפונמל (תרחיף מטרפונמות מתורבתות אפתוגניות שטופלו בקרינה קולית).

תגובת הקישור של אנטיגנים אלה מגיעה לתוצאה חיובית תוך שבועיים עד ארבעה שבועות מרגע היישום, ועולה בהדרגה, ומגיעה למקסימום בטיטר, הנצפה כאשר מופיעה עגבת טרייה משנית. לאחר מכן, הטיטר של חומרים ספציפיים יורד בהדרגה, ועם צורה חוזרתעגבת, ככלל, אינה עולה על 1:180 - 1:120. בקרב הסובלים מביטוי שלישוני של עגבת, התגובה המתוארת חיובית ב-70 אחוז מהמקרים.

חשוב לציין כי קומפלקס של תגובות סרולוגיות אינו אינדיקטור בלעדי לעגבת בגוף האדם, ויכול לתת תוצאות לא ספציפיות (חיוביות שגויות). נכון, זה קורה אם המומחה עשה טעות בבדיקה - הליך דגימת דם באיכות ירודה, מבחנות מלוכלכות, כישורים נמוכים וכו'.

בנוסף, תוצאה חיובית כוזבת מתקבלת לרוב על ידי חולים הסובלים מצרעת, מלריה ומחלות מצב. גם לקבל אבחון שגויעשויים להיות אנשים עם שחפת, מחלת כבד, ואלה הנוטלים תרופות. בנשים, ניתן לקבוע אבחנה חיובית כוזבת אם המטופלת בהריון או שיש לה ימים קריטיים.

• בתינוקות ביום העשירי לחיים;
• עם תופעות חום בתוך שבועיים לאחר הלידה;
• אם למטופל יש פציעות לאחרונה, התערבות כירורגית, חיסון.

והכל בגלל שהתגובות הפיזיקוכימיות בסרום הדם במהלך תופעות כאלה יכולות להראות גם תוצאה חיובית שגויה עבור עגבת.

תגובת RIF

על מנת להבחין בין חיובי שגוי לתוצאות האמיתיות של סקר CSR, בארצנו נעשה שימוש בבדיקות סרולוגיות ספציפיות, כגון RIF ו-RIBT. כמו כן, שיטת מחקר זו מומלצת לאבחון צורת המחלה, ואם יש חשד לזיהום עגבת.

לצורך ביצוע הליך זה תזדקק לכמות דם בכמות של 5-10 מ"ל, אותה ניתן לקחת גם מהווריד הקוביטלי על "קיבה ריקה". הדם המתקבל נשפך למבחנה יבשה, משאירים זמן מה בחדר הקרישה, ובהמשך נשלח לבדיקה למעבדה מיוחדת, הזמינה במחלקות הדרמטונרולוגיות.

הבסיס לתגובת RIF הוא שיטה עקיפה לקביעת נוגדנים ניאון. אנטיגן להיקשר אליו מקרה זהמשמש כהשעיה של טרפונמה חיוורת שטופלה באולטרסאונד. כך, החומר מקובע על שקופיות זכוכית, בהן נחשף גם חומר הדם של המטופל יחד עם סרום פלואורסצנטי אנטי-מינים. כדי לקבוע את התוצאה, תזדקק למיקרוסקופ פלואורסצנטי, שבעזרתו יעריך מומחה את מידת זוהר הטרפונמה. הוא האמין כי עם תוצאה חיובית, treponemas יש גוון צהוב-ירוק של זוהר, ואת ה"כוח" של תהליך זה מוערך על ידי פלוסים (מאחד עד ארבע). תוצאה שלילית - טרפונמות לא זוהרות.

תגובת RIBT

תגובה נוספת המסייעת לאבחן עגבת היא RIBT, אשר שימש לראשונה בשנת 1949 על ידי נלסון ומאיר. הבסיס שלו הוא תופעת טרפונמות משופעות וחיוורות עם אנטיגן מסרום הדם של המטופל, שבהן קיים משלים.

כאנטיגן לתגובה משתמשים בטרפונמות חיות וחיוורות, המתקבלות מדם של ארנבות הנגועים בעגבת. טרפונמות שאיבדו את הניידות שלהם נספרים תחת מיקרוסקופ. תוצאת התגובה מוערכת כאחוז, כאשר:

• שלילי - 0-20%
• מפוקפק - 21-31%
• חיובי חלש - 31-50%
• חיובי - 51-100%.

התגובה עשויה להראות תוצאה חיובית בסוף השלב הראשוני של העגבת, וברוב המקרים התוצאה אינה משתנה לאורך כל שלבי המחלה. לפעמים RIBT חיובי גם עם החלמה מלאה. עם עגבת שלישונית, נגעים קרביים, עגבת מולדת, כאשר ה-CSR אינו מראה את התוצאות במדויק, תגובה זו נותנת תוצאות אמיתיות ב-98-100% מהמקרים. אגב, על מנת לאבחן צורה סמויה, סמויה של עגבת, נדרשת אבחון ל-RIBT.

RIBT יכול להראות תוצאה חיובית שגויה אם הדם הנבדק מכיל אלמנטים של חומרים טרפונמיים - אנטיביוטיקה, אשר מובילים לאי מוביליזציה לא ספציפית של טרפונמות חיוורות. לכן, נטילת דם ממטופל שנרשם לו אנטיביוטיקה מומלצת לא מוקדם משבועיים לאחר סיום הטיפול האנטיביוטי.

ניתוח של נוזל מוחי

לעתים קרובות, בדיקה סרולוגית משמשת גם כדי לקבוע במדויק את מידת הנזק למערכת העצבים על ידי עגבת. לשם כך, נעשה שימוש בניתוח המבוסס על נוזל מוחי השדרה של המטופל. כמו כן, מחקר זה יעזור לקבוע את החלבון, יסודות האנזים, המעידים על התפתחות הפתולוגיה, ו"יקל" על הרופא להבהיר את האבחנה. כפי שאולי ניחשתם, נוזל המוח השדרתי לא נלקח מהאצבע, אלא בעזרת ניקור מותני. הליך זה מחייב את הרופא להקפיד, להקפיד על כל התקנות ואמצעי הבטיחות, כדי לא להחמיר את מצבו של המטופל. ככלל, בדיקה כזו נקבעת במקרה של חשד לכל צורה של עגבת של מערכת העצבים המרכזית.

הניתוח לעגבת הוא אחד הנפוצים ביותר בקרב בדיקות מעבדה. בדיקות לעגבת נמצאות בשימוש נרחב במהלך בדיקות מניעתיות. בעזרת מיקרוסקופיה, הסוכן הסיבתי של עגבת מזוהה -. בעזרת תגובות סרולוגיות, האבחנה של עגבת מאושרת, האבחנה נקבעת עגבת סמויה, מעקב אחר יעילות הטיפול, קצב הריפוי של החולים נקבע.

האבחנה של עגבת נקבעת על בסיס נתונים קליניים, זיהוי גורמים סיבתיים של עגבת בדגימות חומר ואישור האבחנה בשיטות מחקר סרולוגיות. הביטויים של עגבת הם רבים ומגוונים, וזו הסיבה שהמחלה מתגלה על ידי רופאים בעלי התמחויות שונות. אבחון דיפרנציאלי עגבת ראשוניתמבוצע עם מגוון רחב של מחלות.

אורז. 1. בתמונה ביטוי ראשוניעגבת - צ'אנקר קשה.

נוגדנים לטרפונמה חיוורת ואבחון סרולוגי

כאשר נדבקים בעגבת, נוצרים נוגדנים בגוף החולה. אבחון סרולוגי עוזר לרופא ללמוד את הדינמיקה של יצירת נוגדנים בגופו של חולה עם עגבת ב בשלבים הראשוניםמחלה, במהלך תקופת הטיפול ולאחר סיומו, כדי לפתור את סוגיית הישנות המחלה בחולה או זיהום חוזר (הדבקה מחדש), לאבחון עגבת במצבים רפואיים המוניים.

נוגדנים לטרפונמה חיוורת IgM

נוגדני IgM הם הראשונים המיוצרים לאחר זיהום. הם מתחילים להתגלות באמצעות תגובות סרולוגיות מהשבוע השני לאחר ההדבקה. לאחר 6-9 שבועות של המחלה, מספרם הופך למקסימלי. אם החולה לא טופל, אז הנוגדנים נעלמים לאחר שישה חודשים. נוגדני IgM נעלמים לאחר 1-2 חודשים. לאחר, לאחר 3 - 6 חודשים. - לאחר טיפול בעגבת מאוחרת. אם הגידול שלהם נרשם, אז זה משרת או מעיד על זיהום חוזר. מולקולות IgM גדולות ואינן עוברות דרך השליה לעובר.

נוגדנים לטרפונמה חיוורת IgG

נוגדנים אימונוגלובולינים מסוג IgGמופיעים בסוף החודש הראשון (בשבוע הרביעי) מרגע ההדבקה. הטיטר שלהם גבוה מהטיטר IgM. IgG נמשך לאחר טיפול במשך זמן רב למדי.

נוגדנים לא ספציפיים

ישנן תגובות סרולוגיות רבות. זה נובע מהריבוי האנטיגני של טרפונמה חיוורת. בסרום הדם של אדם חולה, שלבים שוניםעגבת, בנוסף לספציפיות, נוצרים נוגדנים מסוימים לא ספציפיים - אגלוטינינים, קיבועי משלים, אימוביליזינים, נוגדנים הגורמים לקרינה חיסונית, משקעים וכו'. לתגובות סרולוגיות לזיהוי נוגדנים לא ספציפיים יש ספציפיות יחסית; תגובות (CSR ).

בדיקות חיוביות כוזבות לעגבת

תכונה ייחודיתבדיקות לא טרפונמאליות מקבלות תגובות חיוביות שגויות. נוגדני Reagin, המיוצרים בדם אנושי נגד אנטיגן הקרדיוליפין, רשומים לא רק בעגבת, אלא גם במחלות אחרות: קולגנוזיס, הפטיטיס, מחלת כליות, תירוטוקסיקוזיס, מחלות אונקולוגיות, מחלות מדבקות(צרעת, שחפת, ברוצלוזיס, מלריה, טִיפוּסקדחת ארגמן), במהלך ההריון והמחזור, בעת נטילת מזון שומני ואלכוהול. יצוין כי עם הגיל מספר התגובות החיוביות השגויות עולה.

אורז. 2. התמונה מציגה עגבת ראשונית בנשים.

אבחון מעבדה של עגבת באמצעות בדיקות סרולוגיות

בדיקות סרולוגיות לעגבת מחולקות לטרפונמל ולא-טרפונמל.

1. בדיקות לא טרפונמאליות

אנטיגן הקרדיוליפין משמש כאנטיגן בקבוצת בדיקות זו. האנטיגנים השומנים של הגורמים הגורמים לעגבת הם הרבים ביותר. הם מהווים 1/3 מהמסה היבשה של התא. בעזרת בדיקות שאינן טרפונמאליות, מתגלים נוגדני reagin המיוצרים כנגד אנטיגן הקרדיוליפין. קבוצה זו כוללת את תגובת קיבוע המשלים (RSKcard), תגובת המיקרו-משקעים (RMP), קביעה מהירה של פלזמה reagins (RPR) וכו'. באמצעות בדיקות שאינן טרפונמאליות, מתבצעת סקר ראשוני לאיתור עגבת (בדיקת קבוצות אוכלוסייה), והאפשרות להשיג תוצאות בגרסה כמותית מאפשרת לך להשתמש בבדיקות אלה כדי לפקח על יעילות הטיפול. יש לאשר תוצאות חיוביות בבדיקות שאינן טרפונמל באמצעות בדיקות טרפונמל. תכונה ייחודית של בדיקות שאינן טרפונמאליות היא ייצור של תגובות חיוביות שגויות.

2. בדיקות טרפונמל

בדיקות טרפונמל משתמשות באנטיגנים ממקור טרפונמל המבודדים מתרבית של טרפונמה פלידום. בעזרתם, תוצאות חיוביות של בדיקות לא-treponemal מאושרות. הקבוצה כוללת: RSKtrep - תגובת קיבוע משלים, RIF - תגובת אימונופלואורסצנציה ושינויים שלה, RIT, RIBT - ריאקציית אימוביליזציה של טרפונמה בהירה, RPHA - תגובת hemagglutination פסיבית, ELISA - אנזים אימונואסאי.

3. בדיקות לאיתור עגבת באמצעות אנטיגנים רקומביננטיים

אנטיגנים לקבוצת בדיקות זו מתקבלים בהנדסה גנטית ומשמשים בתגובות - TPHA ו-ELISA, בניתוחי אימונובלוטינג (IB) ובניתוח אימונוכרומטוגרפי.

אורז. 3. נעשה שימוש בסט בדיקות סרולוגיות לאבחון עגבת.

אבחון עגבת באמצעות בדיקות שאינן טרפונמל

כדי לזהות עגבת, משתמשים בבדיקות לא-טרפונמאליות או במכלול של תגובות סרולוגיות (CSR). אבחון סרולוגי יבוצע החל מהשבוע החמישי מרגע ההדבקה או מ-2-3 שבועות לאחר הופעתו. נוגדנים מתגלים כמעט בכל החולים עם ראשוני טרי,. תגובות סרולוגיות חיוביות ב-70-80% מהחולים עם, ב-50-60% מהמקרים בחולים עם עגבת סמויה שלישונית.

תגובות סרולוגיות באמצעות בדיקות שאינן טרפונמל עשויות לתת תוצאות חיוביות כוזבות.

אורז. 4. דגימת דם לבדיקת עגבת.

תגובת קיבוע משלים (כרטיס RSK, KSK עם KA, תגובת וסרמן)

תגובת וסרמן (RW, РВ), שהומצאה על ידי א. וסרמן לפני יותר מ-100 שנה, עברה היום שינויים רבים, אולם, כמחווה למסורת, היא שמרה על שמה עד היום. בדיקת קיבוע המשלים באמצעות אנטיגן הקרדיוליפין נועדה לא רק לאיתור נוגדנים, אלא מבוצעת גם בגרסה כמותית - עם דילולים שונים של סרום, המאפשרת להשתמש בו למעקב אחר יעילות הטיפול. רגישות וסגוליות נמוכה, השגת תוצאות חיוביות שגויות - צדדים שלילייםמחקר מסוג זה.

המהות של תגובת וסרמן היא כדלקמן: האנטיגנים המשמשים בניסוח תגובת וסרמן, במקרה של נוכחות של נוגדנים לגורמים הגורמים לעגבת בדם אנושי, באמצעות מחמאה, נקשרים אליהם. ומשקעים. עוצמת התגובה מסומנת על ידי הסימן (+). התגובה יכולה להיות שלילית (-) - ללא משקעים, ספק (משקע קטן או +), חיובית חלשה (++), חיובית (+++) וחיובית חדה (++++).

רגישה יותר היא תגובת וסרמן המתוקנת - תגובת קולמר. בעזרתו מתגלים נוגדנים בסרה, שם תגובת וסרמן נתנה תוצאה שלילית.

עם תגובות חיוביות חדות, כימות reagins, שעבורו נעשה שימוש בסרום בדילול מ-1:10 עד 1:320, המאפשר לך להשתמש המין הזהמחקרים לניטור יעילות הטיפול. לדוגמה, ירידה בטיטר של נוגדנים והסרונגטיביות שלהם לאחר מכן (השגת תוצאות שליליות), מדבר על טיפול מוצלחמחלות.

אורז. 5. בדיקת דם לאיתור עגבת - תגובת וסרמן.

מיקרו תגובת משקעים (MPR)

מיקרו תגובת משקעים משמשת לבדיקות המוניות קבוצות בודדותאוכלוסיה, אבחון עגבת ומעקב אחר יעילות הטיפול. כדי לבצע מחקר מסוג זה, נדרשת כמות קטנה מהחומר הנלמד. המיקרו-תגובה של משקעים מבוססת על התגובה האימונולוגית של אנטיגן-נוגדנים. במקרה של נוכחות של נוגדנים בסרום הדם של הנבדק, הקומפלקס של אנטיגן-נוגדנים משקע עם היווצרות פתיתים. התגובה מתבצעת בבארות של צלחת זכוכית מיוחדת. הוא מוערך לפי עוצמת המשקע המשקע וגודל הפתיתים ב-(+) כתגובת וסרמן. כאשר בודקים נשים בהריון, תורמים ולמעקב אחר יעילות הטיפול אינם משמשים. VDRL ו-RPR הם סוגים של מיקרו-תגובות.

אורז. 6. מבט על תגובת המשקעים בטיפה על זכוכית.

אורז. 7. בדיקת דם לאיתור עגבת - תגובת מיקרו-משקעים.

אורז. 8. ערכה לקביעה מהירה של פלזמה reagins (בדיקת עגבת RPR).

את כל בדיקות חיוביותהמתקבלים במהלך תגובות סרולוגיות לא ספציפיות דורשות אישור על ידי תגובות ספציפיות - בדיקות טרפונמל.

אבחון עגבת באמצעות בדיקות טרפונמל

בעת ביצוע בדיקות טרפונמל, משתמשים באנטיגנים ממקור טרפונמל. שֶׁלָהֶם צד שליליהוא חוסר היכולת להשתמש כדי לשלוט ביעילות הטיפול, השגת תוצאות חיוביות בספירוכטוזיס ובטרפונמטוזות לא מין וקבלת תוצאות חיוביות כוזבות ב מחלות אונקולוגיות, צרעת , כמה פתולוגיה אנדוקרינית. בדיקות כגון RPHA, ELISA ו-RIF נותרות חיוביות במשך שנים רבות לאחר התרופה לעגבת, ובמקרים מסוימים לכל החיים.

RIBT ו-RIF הן הבדיקות הסרולוגיות הספציפיות ביותר המשמשות לאבחון עגבת. הם מאפשרים לך להבחין בין תגובות חיוביות שגויות, לזהות צורות מאוחרות של עגבת המתרחשות עם תגובות שליליות. בעזרת RIBT, תגובות חיוביות כוזבות אצל נשים בהריון מזוהות כאשר יש צורך לפתור את נושא ההדבקה של הילד.

תגובת אימוביליזציה של Treponema pallidum (RIBT, RIT)

מהות התגובה היא שהנוגדנים בסרום הדם של המטופל משתקים טרפונמה חיוורת. תגובה עם אימוביליזציה של עד 20% מהפתוגנים נחשבת שלילית, חיובית חלשה - 21 - 50%, חיובית - 50 - 100%. RIBT לפעמים נותן תוצאות חיוביות שגויות. הבדיקה מורכבת וגוזלת זמן, עם זאת, היא הכרחית לאבחנה מבדלת. צורות נסתרותמחלות ותוצאות חיוביות כוזבות של תגובות סרולוגיות, כולל בנשים בהריון. RIBT נותן תוצאה חיובית של 100% בעגבת משנית, מוקדמת ומאוחרת, ב-94 - 100% מהמקרים - בצורות אחרות של עגבת.

תגובה אימונופלואורסצנטית (RIF)

מהות התגובה היא ש-treponemas (אנטיגנים) חיוורים, בשילוב עם נוגדנים המסומנים בפלואורכרומים, פולטים זוהר צהוב-ירוק במיקרוסקופ פלואורסצנטי. התוצאה מוערכת עם סימן (+). בעזרת RIF מתגלים אימונוגלובולינים מסוג A. התגובה האימונופלואורסצנטית הופכת חיובית מוקדם יותר מתגובת וסרמן. היא תמיד חיובית בעגבת משנית וסמויה, ב-95-100% מהמקרים היא חיובית בעגבת שלישונית ומולדת. הטכניקה לעריכת מחקר מסוג זה פשוטה יותר מזו של RIBT, אך אי אפשר להחליף את RIF ב-RIBT, שכן תגובה זו נחותה מ-RIBT בספציפיות. RIF-10 (שינוי RIF) רגיש יותר, RIF-200 ו-RIF-abs ספציפיים יותר.

אורז. 9. בדיקת דם לאיתור עגבת - תגובת אימונופלואורסצנציה (RIF).

בדיקת הידבקות חיסונית של Treponema pallidum (TRIPBT)

המהות של התגובה היא ש-treponemas חיוורות שעברו רגישות בסרום של המטופל בנוכחות משלים נצמדות לפני השטח של אריתרוציטים. הקומפלקסים שהתקבלו משקעים החוצה במהלך הצנטריפוגה. רְגִישׁוּת המבחן הזהוהספציפיות קרובים ל-RIF ול-RIBT.

בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים לעגבת (ELISA)

בעזרת ELISA נקבעים אימונוגלובולינים מסוג M ו- G. ניתן להשתמש בשיטת IgM - ELISA כבדיקת סקר ואישור. הרגישות והספציפיות של ELISA דומות ל-RIF. עם עגבת, ELISA נותן תוצאות חיוביות מהחודש השלישי של ההדבקה ונשאר חיובי במשך זמן רב למדי (לפעמים לכל החיים).

אורז. 10. מנתח ELISA.

התגובה של המאגלוטינציה פסיבית (עקיפה) (RPHA)

TPHA מבוסס על יכולתם של אריתרוציטים, עליהם נספגים אנטיגנים של treponema pallidum, להיצמד זה לזה (המגלוטינציה) בנוכחות הסרום של המטופל. RPHA משמש לאבחון כל צורות העגבת, כולל סמויה. כאשר מיושם איכות גבוההאנטיגן, סוג זה של תגובה סרולוגית עולה על כל הבדיקות האחרות בספציפיות וברגישות.

אורז. 11. RPHA משמש לאבחון כל צורות העגבת.

אורז. 12. ניתוח לעגבת - תגובה של המגלוטינציה פסיבית (עקיפה) (סכמה).

אורז. 13. הופעת מטריה הפוכה, התופסת את כל תחתית המבחנה, מעידה על תגובה חיובית. במקרה שבו האריתרוציטים מתיישבים בעמודה ("כפתור") במרכז החלק התחתון של המבחנה, הם מדברים על תגובה שלילית.

אורז. 14. בדיקת RPGA בתנאי מעבדה.

אבחון מיקרוביולוגי

ביחד עם אבחון סרולוגישיטה לזיהוי treponemas חיוור (אבחון מיקרוביולוגי) מחזות תפקיד חשוב, במיוחד בתקופה של עגבת סרונגטיבית, כאשר עדיין אין נוגדנים בדם, אבל יש כבר ביטויים ראשונים של עגבת ראשונית טריה (צ'נקר קשה).

החומר הביולוגי למחקר הוא הפרשות מפני השטח של כיבים קשים (צ'אנרים), תכולת עגבת פוסטולרית, פפולות בוכיות ושוחקות, נקודות של נגועים. בלוטות לימפה, נוזל מוחי ומי שפיר, עבור PCR - דם.

השיטה הטובה ביותר לאיתור גורמים סיבתיים של עגבת היא חקר חומר ביולוגי בשדה האפל של מיקרוסקופ. טכניקה זו מאפשרת לך לראות טרפונמה חיוורת במצב חי, ללמוד את תכונות המבנה והתנועה שלה, להבחין בין פתוגנים פתוגניים לבין ספרופיטים.

אורז. 15. ניתוח לעגבת - מיקרוסקופיה בשדה כהה.

אורז. 16. כאשר לומדים מריחות יבשות, משתמשים בצביעה של רומנובסקי-גימסה. כתם טרפונמה חיוור בו זמנית ב צבע ורוד, כל שאר סוגי הספירושטים - בסגול.

זיהוי של טרפונמות חיוורות על ידי מיקרוסקופ שדה כהה הוא קריטריון מוחלט לאבחנה הסופית של עגבת.

אורז. 17. לאיתור חיידקים משתמשים בתגובה אימונופלואורסצנטית (RIF) - בדיקת טרפונמל. מתחם ספציפי אנטיגן - נוגדןבשילוב עם סרום ספציפי המסומן עם פלואורכרום, לאור מיקרוסקופ פלואורסצנטי, זה נותן לחיידק זוהר ירקרק.

אורז. 18. הגורמים הגורמים לעגבת נראים בבירור במריחות שהוכנו בשיטת Levaditi (הספגת כסף). טרפונמות כהות חיוורות על רקע צבע צהוב של תאים של רקמות נגועות.

אורז. 19. הגורם הסיבתי של עגבת עם עליה מרובה.

אורז. 20. התמונה מציגה מושבה של טרפונמה חיוורת. קשה להשיג תרבית של חיידקים. הם כמעט אינם גדלים על חומרי הזנה מלאכותיים. על מדיה המכילה סרום של סוס וארנב, מושבות מופיעות ביום ה-3-9.

PCR עבור עגבת

יעילה ומבטיחה כיום היא הטכניקה של תגובת שרשרת פולימראז. PCR עבור עגבת מאפשר לך לקבל תוצאה בתוך כמה שעות, ולפחות כמה פתוגנים עשויים להיות נוכחים בחומר שנאסף לאבחון.

אורז. 21. PCR עבור עגבת מאפשר לך לזהות DNA או שברי טרפונמה חיוורת שלו.

הרגישות של שיטת מחקר זו תלויה בנוכחות של חומר ביולוגיטרפונמה חיוורת ומגיעה ל-98.6%. הספציפיות של בדיקה זו תלויה במידה רבה ב בחירה נכונהיעדים להגברה במהלך האבחון ומגיע ל-100%.

עם זאת, בשל לא מספיק למד מאפיינים השוואתייםרגישות וסגוליות של שיטות ישירות לאבחון עגבת ו-PCR, השיטה הזאתבדיקות בפדרציה הרוסית לאבחון המחלה עדיין אינן מותרות.

PCR עבור עגבת מותר רק במקרים מסוימים, כגון שיטה נוספתאבחון של עגבת מולדת, נוירוסיפיליס, עם קשיים באבחון עגבת באמצעות שיטות מחקר סרולוגיות בחולי HIV.

אבחון סרולוגי של עגבת

אבחון עגבת מבוסס על נתונים קליניים ומעבדתיים. האבחנה של עגבת נעשית רק לאחר אישור מעבדה, כלומר, זיהוי של טרפונמה חיוורת בהפרשת צ'אנקר קשה, פפולות שחיקות בעגבת ראשונית ומשנית ונתוני בדיקה סרולוגית. תגובות סרולוגיות הן שיטה בעלת ערך רב לא רק לאישור האבחנה של עגבת, אלא גם לניטור הדינמיקה של מהלך שלה בהשפעת הטיפול וקביעת הריפוי של המחלה.

הרכיבים הסטנדרטיים של קומפלקס התגובות הסרולוגיות (CSR) לבירור זיהום עגבת מתווספים כיום על ידי תגובות טרפונמאליות: RIBT (תגובת אימוביליזציה של טרפונמה חיוורת), RIF (תגובה אימונופלואורסצנטית). תגובת וסרמן (RW, PB) מבוססת על התופעה של קיבוע משלים. לניסוח שלו, נעשה שימוש באנטיגן קרדיוליפין, שהוא תמצית אלכוהול עם כולסטרול משרירי לב בקר ובעל תכונות אנטיגניות דומות עם טרפונמה חיוורת.

תגובת וסרמן.המשלים נקשר על ידי קומפלקס (אנטיגן ליפואיד ו-reagin של סרום הבדיקה). כדי לציין את הקומפלקס שנוצר, נעשה שימוש במערכת המוליטית (אריתרוציטים של כבשים וסרום המוליטי).

בנוסף לתגובת קיבוע המשלים עם קרדיוליפין ואנטיגנים טרפונמאליים, קבוצת ה-CSR כללה תגובה על זכוכית (שיטת אקספרס). חומרת המוליזה ב-RV מסומנת על ידי פלוסים:

חיובי חד - 4 +; חיובי - 3 +; חיובי חלש - 2 + או 1 +; שלילי - -.

גם ניסוח התגובה בשיטה כמותית חשובה, כלומר עם דילולים שונים של סרום (1:10; 1:20 וכו' עד 1:320). ריבוי התגובות הסרולוגיות הסטנדרטיות מוסבר בפסיפס האנטיגני של טרפונמות חיוורות, ולכן מופיע ריבוי מקביל של נוגדנים (קושרים משלימים, אגלוטינינים, משקעים, אימוביליזינים, נוגדנים הגורמים לקרינה חיסונית וכו') בסרום הדם של החולים. . בכל שלב של עגבת, נוגדנים מסוימים עשויים לשלוט, ולכן, תגובות עם אנטיגנים מסוימים כבר עשויות להיות חיוביות, ועם אחרים עדיין שליליות. בנוסף, הספציפיות היחסית של תגובות סרולוגיות סטנדרטיות מחייבת להשתמש לא באחת מהן, אלא במכלול של תגובות, על מנת למנוע טעויות אבחון. אחריות חברתית הופכת חיובית בסוף השבוע השלישי או בשבוע הרביעי לאחר הופעת הצ'אנר הקשה. תגובות אלו חיוביות בצורה חדה ובדילול משמעותי של סרום כמעט בכל החולים עם טרי משני (98-99%), חוזר שניוני (100%), פעיל שלישוני (70-80%) ושלישוני סמוי (50-60%) עַגֶבֶת. עם זאת, CSR אינו תסביך תגובה ספציפי למהדרין עבור עגבת. הם יכולים להיות חיוביים בחולים עם צרעת, שחפת, ברוצלוזיס, מלריה, לופוס אריתמטוזוס, כמו גם בדלקת ריאות, מחלות כבד, מחלות אונקולוגיות, לאחר נטילת אלכוהול, מזון שומני, במהלך ההריון, במיוחד במחצית השנייה שלו, גם כן. כמו במהלך השבועיים הראשונים לאחר הלידה. עם הגיל, מספר התוצאות החיוביות-שגויות הלא ספציפיות של CSR עולה.

לאבחון סביר של עגבת, יחד עם נתוני ה-CSR, נתונים קליניים, תוצאות מחקר על טרפונמה חיוורת בביטויים של עגבת ראשונית ומשנית, נלקחים בחשבון נתונים מתגובות סרולוגיות אחרות - RIBT ו-RIF.

RIBTמבוסס על תופעת אימוביליזציה של טרפונמה חיוורת על ידי נוגדנים כגון אימוביליזינים הנמצאים בסרום הדם של חולי עגבת. כאנטיגן ל-RIBT, משתמשים בהשעיה של טרפונמה חיוורת המתקבלת מרקמות של דלקת עגבת של ארנב. טרפונמות חיוורות, לאחר הוספת סרום הדם של המטופל להן, מפסיקות לנוע, כלומר, הן משותקות. תוצאות התגובה מוערכות כאחוז: RIBT חיובי מזוהה במהלך immobilization מ-51 עד 100% של טרפונמה חיוורת, חיובי חלש - מ-31 עד 50%, ספק - מ-21 עד 30% ושלילי - מ-0 עד 20% . התגובה מועברת בתנאים של אנארוביוזיס. אימוביליזינים מופיעים בסרום הדם של חולים מאוחר יותר מנוגדנים אחרים, ולכן RIBT הופך חיובי מאוחר יותר מאשר CSR ו-RIF. RIBT הוא התגובות הספציפיות ביותר הקיימות לעגבת. מטרתו העיקרית היא לזהות תוצאות חיוביות שגויות בעת הגדרת CSR. הדבר חשוב במיוחד עבור חולים בהם עגבת סמויה ללא ביטויים חיצוניים, אך עם פגיעה באיברים פנימיים או במערכת העצבים. ל-RIBT יש חשיבות מיוחדת בזיהוי תוצאות חיוביות שגויות של CSR בנשים הרות. יש לזכור שתוצאות חיוביות לא ספציפיות של RIBT אפשריות גם בחולים עם סרקואידוזיס, לופוס אריתמטוזוס, שחפת, שחמת כבד וכו'. עם זאת, במחלות אלו, RIBT חיובי חלש (מ-30 עד 50%) ולעולם לא מגיע ל-100% ). כאשר מטופלים באנטיביוטיקה, התוצאות של RIBT הופכות שליליות. לפיכך, מחקרים באמצעות RIBT מבוצעים רק לאחר 7 ימים, אם ניתנה אנטיביוטיקה מסיסת במים, ו-25 ימים לאחר סיום הטיפול באנטיביוטיקה דוראנטית.

שׁוּנִית- תגובה רגישה יותר, ולכן היא חיובית כבר בתקופה הסרונגטיבית הראשונית של עגבת ב-80% מהחולים. מבחינת הספציפיות, RIF נחות מ-RIBT, שאינו מאפשר להחליף בו RIBT, למרות שהטכניקה שלו פשוטה הרבה יותר. התגובה מוכנסת במספר שינויים: RIF-10, RIF-200 ו-RIF-abs. (ספג). RIF-10 רגיש יותר, בעוד RIF-200 ו-RIF-abs. יותר ספציפי. עיקרון התגובה הוא שאנטיגן ספציפי (treponema pallidum) משולב עם סרום הדם (נוגדנים) של החולה וסרום פלואורסצנטי אנטי-מינים (סרום גלובולין אנטי-אנושי של ארנב, בשילוב עם פלואורססאין, חומר שזוהר באור אולטרה סגול). . עם תגובה חיובית, ניתן לראות זוהר צהוב-ירוק של טרפונמות חיוורות במיקרוסקופ פלואורסצנטי, שכן הם מוקפים בנוגדנים פלואורסצנטיים הנדבקים אליהם. מידת הזוהר מוערכת לפי פלוסים, כמו עם CSR. תגובה חיובית היא 4 +, 3 + ו 2. +. כאשר דרגת הארה היא 1+ ואין הארה, התגובה נחשבת שלילית. עם עגבת משנית, RIF חיובי בכמעט 100% מהמקרים. היא תמיד חיובית בעגבת סמויה (99-100%), ובצורות שלישוניות ועגבת מולדת היא חיובית ב-95-100%.

שיטת אקספרס (מיקרו-תגובה על זכוכית).בתגובה זו, כמו ב-CSR, משתמשים באנטיגן קרדיוליפין, טיפה אחת שלו מעורבבת עם 2-3 טיפות מסרום הדם של הנבדק בבארות של צלחת זכוכית מיוחדת. התגובה ממשיכה במנגנון המשקעים. משך התגובה הכולל הוא 10-40 דקות. התוצאה מוערכת לפי כמות המשקעים וגודל הפתיתים; חומרת התגובה מסומנת על ידי פלוסים: 4 +, 3 + וכו ', כמו גם CSR. המיקרו-תגובה על זכוכית היא פחות ספציפית עבור חולים עם עגבת מאשר RV, אך עדיפה במקצת ברגישות. תוצאות חיוביות כוזבות בשיטת האקספרס שכיחות יותר מאשר עם RV. לכן, שיטה זו מותרת לשימוש רק כתגובת סלקציה לבדיקות המוניות של האוכלוסייה, בדיקה קלינית ובדיקת חולים במעבדות האבחון הקליניות של בתי חולים סומטיים. האבחנה הסופית של עגבת על בסיס שיטה זו אסורה. לא ניתן להשתמש רק בשיטה המפורשת בעת בדיקת תורמים, נשים בהריון, וגם לניטור לאחר טיפול בחולי עגבת.

ניתן להשתמש בשיטות אחרות לאבחון עגבת: בדיקת אימונוסורבנטית מקושרת אנזים (ELISA) עם תגובת מיקרו-משקעים (RPM) או תגובת hemagglutination פסיבית (RPHA) עם RMP (כולל אנלוגים זרים של RMP - RPR או VDRL).

בעת ביצוע בקרה קלינית וסרולוגית לאחר טיפול ספציפי (כדי לקבוע את יעילות הטיפול), מותר מחקר כמותי של RMP (מחקר של טיטר התגובה בדינמיקה).

בדיקת אנזים חיסונית (ELISA,אלייזה).עקרון התגובה הוא לשלב את האנטיגן העגבת שנספג על פני השטח של נשא בפאזה מוצקה עם האנטיגן של סרום הדם הנבדק ולזהות קומפלקס אנטיגן-נוגדנים ספציפי באמצעות סרום חיסון אנטי-מינים מסומן באנזים. הרגישות והספציפיות של ELISA דומות ל-RIF.

התגובה של המאגלוטינציה פסיבית (RPHA).המאקרומודיפיקציה של תגובה זו נקראת TRHA, המיקרומודיפיקציה היא MHA-TR, והגרסה האוטומטית היא AMHA-TR.

סרולוגיה של IgM.בעשורים האחרונים, הדינמיקה של יצירת נוגדנים בגוף של חולי עגבת נחקרה רבות לפני, במהלך ואחרי סיום הטיפול. זאת בשל העובדה כי בחולים המטופלים במלואו בעגבת, תוצאות חיוביות של תגובות סרולוגיות ספציפיות לעגבת נשארות לאורך זמן, מה שמקשה על ההחלטה בנושא הריפוי של החולים, כמו גם האבחנה של מחלה מולדת מוקדמת. עַגֶבֶת. קשה גם להבדיל בין הישנות לזיהום חוזר. כאשר חקרו יצירת נוגדנים בגוף של חולי עגבת, נמצא כי IgM ספציפיים הם הראשונים המיוצרים לאחר ההדבקה, שמתגלים כבר בשבוע השני לאחר ההדבקה ומגיעים לריכוז מקסימלי בדם ב-6-9 שבועות. לאחר 6 חודשים לאחר סיום הטיפול ברוב החולים בדם הם אינם נקבעים. בשבוע הרביעי לאחר ההדבקה, הגוף מתחיל לייצר IgG ספציפי. סוג זה של אימונוגלובולין בכמות הגדולה ביותר נקבע 1-2 שנים לאחר ההדבקה. יש לציין כי IgM ספציפי מפסיק להיווצר כאשר האנטיגן נעלם מהגוף, והפרשת IgG ממשיכה על ידי שיבוטים של תאי זיכרון. בנוסף, מולקולות IgM גדולות אינן עוברות דרך השליה מהאם לעובר, ולכן, לפי נוכחותן בילד, הן שופטות את הזיהום שלו בטרפונמה חיוורת. לאור העובדה שריכוז ה-IgM הספציפי בדם יורד באופן טבעי עם הזמן, עלייה בטיטר של נוגדנים אלו יכולה לשמש סימן עזר להימצאות הישנות של המחלה או זיהום מחדש.